ISOLASI DAN KULTUR PROTOPLAS RUMPUT LAUT Kappaphycus alvarezii DI LABORATORIUM

Transkripsi

1 Iolai dan kultu potopla umput laut di laboatoium (Emma Suyati) ISOLASI DAN KULTUR PROTOPLAS RUMPUT LAUT Kappaphycu alvazii DI LABORATORIUM Emma Suyati *), Andi Tniulo *), dan Si Rjki Hti Mulyaninum *) ABSTRAK Iolai potopla umput laut K. alvazii, tlah dilakukan dalam anka pnyiapan potopla untuk pnyilanan mlalui fui potopla. Mtod yan diunakan antaa lain mlalui caa kimia dnan mlii tallu umput laut dnan campuan nzim komial, kmudian nzim yan baal dai vica kon ma baik yan a maupun yan bku, dnan mdia kultu yan diunakan pada pmlihaaan mako ala antaa lain Conwy, PES, dan ai laut til. Tallu umput laut yan diunakan baal dai baian pankal, tnah dan ujun. Potopla yan hidup diuji mnunakan van blu 0,1%, homon panan tumbuh yan diunakan pada mdia ptumbuhan antaa lain auxin, IAA, dan Kintin. Pnamatan dilakukan thadap jumlah potopla hidup, ptumbuhan, dan intaan. Hail pcobaan mmplihatkan bahwa nzim yan palin baik diunakan adalah campuan nzim komial dnan mdia kultu Conwy dnan jumlah potopla mncapai 19,8 x 10 6 l/ml, baian tallu yan palin baik adalah baian pankal bkia antaa 8,1x10 6 hina 18,8 x 10 6 l/ ml. Panan tumbuh yan palin baik adalah auxin. Filamn tbntuk tlah 5 hai dnan fotopiod L:D=12:12. ABSTRACT: Iolation and potoplat cultu of awd Kappaphycu alvazii in laboatoy. By: Emma Suyati, Andi Tniulo, and Si Rdjki Hti Mulyaninum Iolation of awd potoplat Kappaphycu alvazii had bn don to povid potoplat fo cobdin pupo by potoplat fuion. Th mthod wa chmically don by ly of tallu ud commcial nzym mixtu, nzym fom vica of nail both fh and fozn, cultu mdia w Conwy (CW), PES, and til a wat (SSW) which w ud to maintain th maco ala. Pat of ud tallu w upp, middl and tip of tallu. Th viabl potoplat wa xamind by uin 0.1% van blu and th owth-timulatin homon w auxin, IAA, and Kintin. Obvation wa concnd to th amount of viabl potoplat, th owth, and th lon liv. Rult howd that th bt nzym wa commcial nzym mixtu with Conwy a th bt cultu mdia, povidd potoplat until 19.8 x 10 6 cll/ml. Th att potoplat contnt wa in upp pat of tallu, it could povid potoplat about 8.1 x 10 6 cll/ml until 18.8 x 10 6 cll/ml, and th bt owth-timulatin homon wa auxin. Filamnt wa fomd aft 5 day with photopiod L: D=12:12. KEYWORDS: iolation, cultu, potoplat, Kappaphycu alvazii PENDAHULUAN Budi daya umput laut (Kappaphycu alvazii) khuunya di Sulawi Slatan tlah mnjadi puat phatian dalam dkad takhi ini. Pmintaan bahan baku kaainan makin tini dan jua didukun olh ktdiaan pabik pnolahan umput laut yan mmadai. Dnan mlihat potni budi daya umput laut yan tini tbut, Sulawi Slatan dittapkan baai nta poduki umput laut di Indonia. Pnydiaan bnih umput laut dapat baal dai alam, budi daya, dan pbnihan baik caa vtatif maupun *) Pnliti pada Balai Rit Pikanan Budidaya Ai Payau, Mao 399

2 J. Ri. Akuakultu Vol. 2 No.3 Tahun 2007: natif (Panni t al., 2007). Namun kndala yan dihadapi antaa lain mootnya mutu bnih pada budi daya. Hal ini antaa lain dibabkan pnunaan bnih dai alam caa bulan dapat mnakibatkan pnuunan baik kualita maupun kuantitanya ta anat ntan thadap pnyakit. Tknik kultu jainan mnjanjikan pbanyakan bnih caa bkinambunan dan bkualita tini, namun untuk mndapatkan alu yan baik plu ada pilanan anta pi. Hal ini dapat dilakukan mlalui kultu potopla yan nantinya dapat diilankan mlalui fui potopla bdaakan vaiai ntik yan tlah diktahui blumnya. Bdaakan hail pnlitian yan tlah dilakukan bbapa tahun takhi yaitu kultu jainan umput laut dan analii ntik umput laut, dipolh bbapa infomai mnnai mdia yan baik pada pbanyakan caa in vito (Amini t al., 1995; Suyati t al., 2002) ta kaakt ntik dai bbapa vaita umput laut (K. alvaizii) yan ada di Indonia pada umumnya (Panni t al., 2006). Dalam anka pbaikan mutu ntik dai K. alvazii, tidak hanya dilakukan dnan kultu jainan dai tallu aja, ttapi plu adanya pnyilanan anta pi aa dipolh bibit dnan mutu yan lbih tini baik ndmn kaainannya maupun ptumbuhan dan ktahanannya thadap pnyakit. Pnyilanan mlalui fui potopla poa dai Gacillaia p. tlah dilakukan olh Chny (1999) dilanjutkan olh Salvado & Sano (2005), yan tlah bhail mniolai potopla mnunakan nzim dai ktak nzim abalon a dnan kpadatan bkia antaa 2,8 x 10 3 ampai 8,2 x Bdaakan kbhailan paa ahli yan tdahulu, maka iolai potopla K. alvazii dilakukan untuk piapan kultu dan fui potopla mnunakan bbapa macam nzim, mdia kultu dan homon panan tumbuh yan bbda. Dai pnlitian tbut dihaapkan dapat mmpolh bibit umput laut (K. alvazii) yan mmiliki ifat ntik yan unul, kandunan kaainan tini, tahan thadap pnyakit ta dapat diaplikaikan olh mayaakat lua. BAHAN DAN METODE Rumput laut yan diiolai potoplanya dipilih bdaakan kunulan-kunulan kaaktitik ntik yan dipolh blumnya, ta mnunakan kplan hail kultu jainan dnan ptumbuhan yan makimal. Pnlitian yan dilakukan tutama diaahkan untuk mndapatkan potopla umput laut K. alvazii yan iap untuk ilankan mlalui fui potopla, pada tahap awal adalah mmilih nzim yan palin baik untuk mlii l umput laut, ta mdia kultu yan tpat pada iolai dan kultu potopla umput laut (K. alvaizii) di laboatoium. Piapan Induk dan Tallu Rumput Laut Rumput laut K. alvazii dipolh dai bbapa daah di Sulawi Slatan antaa lain dai Kab. Takala dan Jnponto. Rumput laut dipilih yan a dan bih dai kotoan yan mlkat pada aat pann, diankut dnan tofom ditambah dnan aaum hidup, dicuci dnan ai laut til, diikat dnan ikat lmbut untuk mnhilankan paait yan mnmpl pada tallu, kmudian ditilkan mnunakan dinfktan dan campuan antibiotik. Aklimatiai dilakukan pada tanki yan bii ai laut til dan diaai. Tallu umput laut yan tlah diaklimatiai, dibihkan, dan dilap mnunakan tiu, kmudian dipoton kuan lbih 2 5 cm, dimaukkan kdalam botol kultu yan bii 75 ml ai laut til dan 25 ml campuan antibiotik (OTC, vancomycin, dan nalidixic acid dalam ai laut main-main 10 m/l), lama 30 mnit ampai 1 jam, timban dnan hati-hati 0,1 bobot a dai tallu tbut. Main-main tallu diii dnan ktbalan 1 mm mnunakan calpl til dimaukkan kdalam botol vial. Pnydiaan Enzim Komial dan Enzim Sa dai Kon Ma Lautan nzim dibuat dnan kondii tmpatu ndah (0 C 4 C), dilautkan caa tpiah mnunakan plaut campuan dai: 40% mdia kultu PES (Uchida t al., 1991), Conwy (Liao t al., 1983), dan SSW dan 60% buff fofat 0,1 M. Dai lautan tadi dibuat kombinai nzim dan ditambahkan lautan mannitol (1,0 M) dan CaCl 2 (5 mm) di atu pada ph= 6,0 6,1 diain mnunakan milipo 0,2 μm (cllulo nitat). Kon ma (Pila polita) diambil baian vicanya, diimpan pada uhu 4 C. Kuan lbih vica kon ma, ditambah buff fofat 50 mm, dnan pbandinan 1 400

3 Iolai dan kultu potopla umput laut di laboatoium (Emma Suyati) vica di dalam 20 ml buff, dihomonkan mnunakan tiu homoniz, diain dnan kta ain 2 μm. Mannitol (0,6 M) dan CaCl2 (5 mm) ditambahkan dnan volum yan ama. ph lautan diatu pada 6,1. Lautan nzim yan dihailkan diain dnan kta ain Whatman 42, lanjutnya tiliai dinin mlalui pnyainan mnunakan mmban filt dnan pooita 0,2 μm (llula nitat). Iolai Potopla Tallu umput laut yan tlah ditimban kuan lbih 0,1 diii kuan lbih 1 mm dimaukkan kdalam vial (10 ml), tambahkan lautan nzim yan tlah diiapkan dnan bbapa vaiai baik nzim komial maupun nzim a yan baal dai kon ma. Tmpatkan pada hak dnan kondii lap diinkubai lama 24 jam pada uhu 30 C. Stlah diinkubai kmudian di ain mnunakan filt may cloth dnan pooita 100 mikon, dan ditampun pada tabun cntifu. Kmudian dintifu lama 5 mnit dnan kcpatan 100 pm/ mnit untuk mmiahkan caian pada potopla tbut. Stnah dai lautan tbut dipiahkan mnunakan miko pipt, kmudian ulani dan takhi tambahkan 2 ml wahin mdium kdalam potopla tbut. Uji Viabilita dan Ptumbuhan Potopla Untuk mntahui potopla yan hidup dan yan mati, dilakukan t dnan pnambahan zat wana antaa lain van blu atau mthyln blu dnan konntai 0,05% yan dilautkan di dalam ai laut til. Potopla hidup dan mati dapat dibdakan dnan wana di mana potopla hidup dapat mnyap wana dan mnapun, dankan yan mati tidak dapat mnyap wana, potopla yan hidup dapat dihitun mnunakan SRC. Untuk mntahui ptumbuhan potopla pada mdia tumbuh dilakukan dnan mltakkan 0,5 ml potopla hidup yan tlah diiolai kdalam tabun kultu yan tlah bii mdia kultu yan dipkaya dnan pupuk Conwy, PES, dan ai laut til mainmain banyak 10 ml dnan pnambahan zat panan tumbuh antaa lain IAA, kintin, dan auxin dnan konntai mainmain 4 m/l, pbandinan LD=12:12, ptumbuhan dai potopla diamati dnan intval waktu 24 jam di bawah mikokop. HASIL DAN BAHASAN Iolai dan Kultu Potopla di Laboatoium Hail iolai potopla mnunakan nzim komial (macozym dan nzim llula) dan ktak vica kon ma mmplihatkan pbdaan pada jumlah potopla viabl yan tiolai dnan mdia kultu yan diunakan. Jumlah potopla yan palin tini dipolh dai nzim komial mncapai 19,8 x 10 6 l/ml, kmudian ktak vica kon ma bku dan a mainmain pada mdia kultu yan dipkaya dnan pupuk Conwy. Sdankan yan palin ndah adalah dai vica kon ma bku pada mdia kultu SSW dnan jumlah potopla 3,7 x 10 6 l/ml (Gamba 1). Jumlah potopla ini lbih tini dai polhan yan dikjakan olh Salvado & Sano (2005) yan mmpolh potopla hidup bkia antaa 2,8 x 10 3 ampai 8,2 x 10 3 mnunakan nzim yan baal dai ktak nzim abalon a. Mdia kultu yan palin baik diunakan adalah mdia kultu yan dipkaya dnan pupuk Conwy dnan nzim komial mmplihatkan polhan potopla yan palin tini hal ini anat at hubunannya dnan aktivita nzim ta kondii linkunan pada aat mlii. Aktivita nzim dai vica kon ma lbih ndah bila dibandinkan dnan nzim komial, lain itu nzim dai vica kon ma anat ntan dan mudah tkontaminai hina plu plakuan yan anat hati-hati, namun lbih konomi apabila dibandinkan dnan nzim komial, hina dapat dikomndai untuk pnunaan lanjutnya. Pnunaan baian tallu pada umput laut (pankal, tnah, dan ujun) mmbikan hail potopla yan bbda, dan anat tantun dai umput laut yan diiolai. Hail yan dipolh mmplihatkan bahwa jumlah potopla yan palin tini pada baian pankal bkia antaa 8,1 x 10 6 hina 18,8 x 10 6 l/ml, kmudian pada baian tnah bkia antaa 1,9 3,9 x 10 6 l/ml, dan takhi adalah pada baian ujun bkia pada 5,2 11,3 x 10 6 l/ml (Gamba 2). Hal ini antaa lain dibabkan kana potopla dipolh mlalui intaki nzim dnan l umput laut. Untuk mmudahkan intaki, maka blum pnambahan nzim, tallu umput laut diii mlintan untuk 401

4 J. Ri. Akuakultu Vol. 2 No.3 Tahun 2007: n a u j ain i t,1 0.1 L / / 0 L m m l/ l/ h la ld m Yi Ju l l ia ia c m m o m K o C u k b lita o p. P lita o p. P z F SSW PES CW a lita o p P. lita o h p. P F Gamba 1. Jumlah potopla hidup dai jainan (K. alvazii) yan dibi plakuan nzim komial, vica kon ma (P. polita) bku dan a Fiu 1. J ni nzim (Enzym typ) Yild of viabl potoplat fom tiu K. alvazii tatd with commcial nzym, fz and fh P. polita n a in ja,1 0 / u t i.1 / 0 L L m l/ m l/ h la ld m i Y Ju pankal upp tnah middl SSW PES CW ujun tip Baian tallu (Pat of tallu) Gamba 2. Jumlah potopla umput laut (K. alvazi) hidup dai baian jainan yan bbda mnunakan nzim komial Fiu 2. Yild of viabl potoplat fom tiu obtaind fom diffnt tallu mnt tatd with commcial nzym mmudahkan nzim kontak dnan dindin l hina dnan ndiinya potopla klua dai dalam l. Pmukaan iian umput laut pada baian pankal lbih lua dibandinkan dnan baian tnah maupun ujun, hina potopla yan dipolh lbih banyak dibandinkan baian lainnya. Sdankan pada baian tnah walaupun lua pmukaannya aak lbih lua dibandinkan dnan ujun, namun l dan potopla pada baian ini maih dalam taaf pmblahan dan pbanyakan l hina pada aat dilii potopla hidup yan tiolai banyak yan uak. Dmikian jua pada baian ujun pmukaannya aak kcil namun l dan potoplanya lbih lnkap dibandinkan dnan tallu baian tnah hina potopla yan dipolh mmplihatkan jumlah yan lbih banyak dibandinkan pada tallu baian tnah. 402

5 Iolai dan kultu potopla umput laut di laboatoium (Emma Suyati) Hail uji viabilita dai potopla yan tiolai mmplihatkan pnyapan wana dai potopla yan hidup dnan zat pwana mthyln blu, mnyba dan mnapun pada lautan mdia dankan potopla yan mati tidak dapat mnyap wana dan mnndap pada daa tabun dmikian jua potopla yan tidak mpuna. Potopla yan hidup dapat dipiahkan dnan miko pipt caa hati-hati dipindahkan kdalam wadah dan mdia kultu yan bau kmudian diamati dan dihitun jumlahnya dnan hamocytomt mnunakan mikokop. Hail pcobaan pnunaan homon panan tumbuh pada mdia kultu yan dipkaya dnan pupuk Conwy mmplihat zat panan tumbuh yan palin baik adalah auxin (Gamba 3). Auxin dnan konntai 4 m/l mmplihatkan ptambahan hina 40 um, dankan untuk IAA dan kintin hanya mncapai 23 um dan 27 um pada hai k dlapan (Gamba 4). Zat pnatu tumbuh pada tanaman umumnya diplukan baai komponn mdium dan ptumbuhan difniai kalu. Tanpa pnambahan zat pnatu tumbuh daam mdium ptumbuhan akan thambat bahkan munkin tidak tumbuh ama kali, pnauh ananan auxin thadap ptumbuhan potopla mnunjukkan adanya indikai adanya tkanan omotik, mninkatkan inta potin, mninkatkan pmiabilita l thadap ai, dan mlunakkan dindin l yan diikuti dnan mnuunnya tkanan pada dindin hina ai dapat mauk kdalam l dan mninkatkan volum l, maka dnan dmikian dapat diunakan baai umb tnaa dalam ptumbuhan (Hndayono & Wijayani, 1994). ) m ) (u m n (u a t h u u o b m t h w tu o P G Auxin IAA Kintin Waktu pnamatan (hai) / Obvation tim (day) Gamba 3. Ptumbuhan potopla umput laut (K. alvazii) yan dibi plakuan zaat panan tumbuh pada mdia kultu Fiu 3. Potoplat owth out tatd with owth ulato homon in cultu mdium (A) Gamba 4. Ptumbuhan potopla umput laut (K. Alvazii) hai 1 ampai hai k-8. (A) hai k 1, (B) hai k-2, (C) hai k-4, (D) hai k-6, (E) hai k-8 Fiu 4. (B) (C) K. alvazii potoplat owth out, 1 day until 8 day (A) 1 day, (B) 2 day, (C) 4 day, (E) 8 day (D) (E) 403

6 J. Ri. Akuakultu Vol. 2 No.3 Tahun 2007: Budi daya potopla umput laut K. alvazii dilakukan dnan mdia kultu yan dipkaya dnan pupuk Conwy pada uhu 25 C dnan fotopiod tan: lap 12:12. Ptumbuhan potopla umput laut (K. alvazii) pada hai 1 hina hai k-8 dapat dilihat pada Gamba 4. Pmblahan l dai potopla mmplihatkan pmblahan yan imti, l mmblah pada 24 jam ptama dilanjutkan hina 48 jam, kmudian mmanjan mmbntuk l ya panjan dan pmblahan dilanjutkan tu mnu mmbntuk abut pmbntukan jainan akan dilakukan caa difnial dnan pmblahan l caa tu-mnu. Potopla adalah l hidup yan tlah dihilankan dindin lnya hina in dibut dnan l tlanjan. Dindin l mupakan baian l mati yan bfuni mlinduni luuh baian l yan bada di dalamnya thadap fakto-fakto lua baik fiik maupun kimiawi yan bpnauh thadap intaan dai l tbut, lain itu jua bfuni untuk mnatu tanpotai nutin yan dibutuhkan olh l baik yan mauk maupun yan klua mlalui dindin l (Chny, 1999). Potopla tdii ata itoplama dan vacuola, plama daa, oanla, dan itm mmban tdapat pada itoplama yan mmpunyai ubtani daa tdii ata potin, lmak, aam nuklat, dan nyawanyawa yan laut dalam ai, dankan pada oanla tdapat nuklu, platida antaa lain kloopla, komopla dan lukopla, mitokondia dan oanla lainnya yan anat pntin dalam ptumbuhan potopla maupun l individu yan tlah dwaa (Zablacki t al., 1993). KESIMPULAN DAN SARAN Bdaakan hail yan dipolh pada iolai potopla umput laut (K. alvazii) antaa lain dapat diimpulkan bahwa: 1. Enzim yan palin baik diunakan untuk mlii l K. alvazii adalah nzim komial. 2. Mdia kultu yan palin baik untuk budi daya potopla umput laut adalah mdia Conwy. 3. Baian tallu umput laut yan mnhailkan potopla palin banyak adalah pada baian pankal. 4. Zat panan tumbuh yan uai adalah auxin dnan konntai 4 m/l. 5. Fui potopla dapat dilakukan dnan kondii tbut di ata. DAFTAR PUSTAKA Amini, S., M. Amin, dan A. Panni Pnlitian kultu jainan umput laut, Euchuma p. caa vtatif. Lapoan hail pnlitian ARMP Balitkandita, Mao. 16 pp. Chny, D.P Stain impovmnt of awd thouh ntic manipulation: cunt tatu. Wold Aquacultu. 30: 55 56, dan 65. Hndayono, D.P.S dan A. Wijayani Tknik Kultu Jainan Pnnalan dan Ptunjuk Pbanyakan Tanaman caa Vtatif- Modn. Kaniiu. 138 pp. Liao, I.C., H.M. Su, and J.H. Lin Laval food fo pnaid pawn. In Mc Vy, J.P. and J.R. Moo (Ed.). CRC Handbook of Maicultu, Cutacan Aquacultu volum I, CRC P Inc., Boca Raton, Floida. p Panni, A., Sulaman, E. Suyati, dan A. Tniulo Kaaktiai ntik umput laut Kappaphycu alvazii yan dibudidayakan di Sulawi Slatan. Junal Rit Akuakultu. 1(1): Panni, A., E. Suyati, dan Rachmanyah Pnydian bnih dalam mnunjan kbun bibit dan budidaya umput laut, Kappaphycu alvazii. Makalah diampaikan pada Simpoium Naional Rit Klautan dan Pikanan, 7 Autu 2007 di Jakata. 12 pp. Salvado, R.C. and A.E. Sano Iolation of Potoplat fom Tiu Famnt of Philippin cultiva of Kappaphycu alvazii (Soliinca, Rhodophyta). J. of Applid Phycoloy. 17: Suyati, Sulaman, A. Dalfiah, dan R. Paand Tknik Kultu Jainan Rumput Laut Euchuma p. dalam Ranka Pnydiaan Bnih pada Budidaya. Smina Naioanal Rumput Laut dan Mini Simpoium Mikoala dan Kon Ikatan Fikoloi Indonia. 8 pp. Uchida, T., K. Yohikawa, A. Aay, and S. Aay Lif cycl and it contol of Saaum muticum (Phaoohyta) in bath cultu. Bulltin of th Japan Socity of Scintific Fihi. 57(12): 2,249 2,255. Uynco, F.R., L.S. Sanil, and G.S. Jacinto Th Ic-ic Poblm in Sawd Fam- 404

7 Iolai dan kultu potopla umput laut di laboatoium (Emma Suyati) in. 10 th Intnational Sawd Sympoium. Walt d Guyt, Nw Yok. p Zablacki, E. Vland V., and B. Kloa Iolation of potoplat fom Kappaphycu alvazii va Tambalan (Rhodophyta) and ction of Iota caanan famnt by cultud cll. J. Exp. Bot. 44(266): 1,515 1,