4. HASIL DAN PEMBAHASAN

Transkripsi

1 17 Pengmtn gejl klinis dilkukn secr visul selm 7 hri ms uji tntng ko-infeksi IMNV dn V.hrveyi. Gejl-gejl klinis terseut dimti untuk mengthui gejl normlits dn perkemngn mkro ntomi udng vnme setelh ko-infeksi IMNV dn V. hrveyi. Udng vnme yng telh menunjukkn gejl normlits kit ko-infeksi, dilkukn uji konfirmsi. Konfirmsi IMNV dn V. hrveyi ditujukn untuk memstikn penye kemtin pd udng. Konfirmsi keerdn virus IMNV di tuuh udng uji dilkukn dengn nlisis PCR (Kit komersil Nugen-IMNV) di Lortorium Uji Lok Pemeriksn Penykit Ikn dn Lingkungn, Serng. Sementr itu, konfirmsi kteri V. hrveyi dilkukn dengn metode gores kudrn (Mdign et l. 2003) pd medi spesifik TCBS-Rif 50 µg/ml. Pengujin dilkukn pd pengmtn hri ke tujuh ykni pd khir periode uji tntng ko-infeksi IMNV dn V. hrveyi. Anlisis Sttistik Anlisis dt dilkukn dengn du metode yitu nlisis deskriptif dn nlisis sttistik pd selng kepercyn 95% (lph=0,05). Rncngn yng digunkn dlh Rncngn Ack Lengkp (RAL) dengn stu fktor dengn menggunkn sttisticl softwre IBM SPSS sttistics version Apil ered nyt kn dilnjutkn dengn Duncn s Multiple Rnge Test (DMRT). Anlisis deskriptif digunkn untuk dt kndungn oligoskrid dri preiotik dn kelimphn kteri pd usus. Sedngkn nlisis sttistik digunkn untuk nlisis dt perform pertumuhn, respon imun, dn sintsn (Lmpirn 11-13). 4. HASIL DAN PEMBAHASAN Anlisis Kndungn Oligoskrid Komposisi ui jlr dipengruhi oleh wktu pnen, vriets dn proses pengolhn (Mrlis 2008). Ui jlr mengndung krohidrt tinggi yng terdiri dri monoskrid, oligoskrid, dn poliskrid. Oligoskrid dri tepung kukus ui jlr vriets sukuh diindiksikn erpotensi segi preiotik kren mengndung rfinos dn sukros (Mrlis 2008; Putr 2010). Pd penelitin ini, dilkukn pengujin terhdp kndungn oligoskrid fruktooligoskrid (FOS), glktooligoskrid (GOS), dn inulin. Oligskrid ini merupkn jenis preiotik yng umum dipeljri pd mnusi dn hewn drt. Kndungn ketig jenis oligoskrid ini dihrpkn dpt memerikn mnft gi kesehtn inng dn mmpu menstimulir pertumuhn kteri proiotik. Berikut ini dlh konsentrsi FOS, GOS, dn inulin dri ekstrk ui jlr vriets sukuh pd totl pdtn terlrut (TPT) 5% (Tel 4). Tel 4. Anlis kndungn FOS, GOS, dn inulin dri ekstrk ui jlr vriets sukuh (TPT 5%)

2 18 Prmeter Unit Hsil Alt FOS g / 100 g 1,015 HPLC GOS g / 100 g 1,488 HPLC Inulin g / 100 g 1,115 HPLC Berdsrkn hsil pd Tel 4, dikethui GOS merupkn jenis oligoskrid dengn persentse tertinggi (1,488%), diikuti dengn inulin (1,115%) dn FOS (1,0155%). GOS dlh oligoskrid yng terdiri dri molekul glktos dn glukos yng diproduksi secr enzimtis oleh lktos. Pd penelitin Hoseinifr et l. (2013), dikethui pemerin GOS dengn dosis 2% dlm pkn dpt meningktkn perform pertumuhn, kelngsungn hidup, dn resistensi terhdp stress slinits, sert memodulsi mikroiot pd usus Cspin roch (Rutilus rutilus). Sedngkn FOS merupkn slh stu jenis preiotik yng dpt difermentsi oleh kteri tertentu seperti kelompok Lctocilli dn Bifidocteri (Mnning nd Gison 2004). Pemerin FOS pd pkn didug secr selektif dpt mendukung pertumuhn dn kelngsungn kteri yng menguntungkn pd slurn pencernn inng (Ringo et l. 2010). Pd penelitin Grisdle-Hellnd et l. (2008), dikethui pemerin FOS pd pkn seesr 1% pd ikn slmon Atlntik selm 4 uln, menunjukkn efisiensi pkn dn retensi energi, msing-msing 5% dn 6% leih tinggi dindingkn dengn ikn yng dieri pkn kontrol. Adpun inulin merupkn kelompok oligoskrid yng ersl dri sukros yng diisolsi dri sumer nti lmi. Inulin dpt dimnftkn segi sumer preiotik yng diindiksikn mmpu merngsng kteri menguntungkn pd usus, menekn jumlh ptogen, dn meningktkn respon imun pd inng (Delgdo 2010). Kelimphn Bkteri Usus Hsil penghitungn kelimphn kteri pd usus udng meliputi Totl Vile Bcteril Count (TBC), Totl Presumtive Virio Count (TVC), dn Totl SKT- R Count setelh 30 hri perlkun siniotik dengn dosis ered dpt diliht pd Gmr 4. Berdsrkn hsil penghitungn kteri pd usus udng, dikethui hw perlkun siniotik dosis B menunjukkn jumlh kteri SKT- R tertinggi yitu seesr 3,01 LOG CFU/g; kemudin diikuti oleh perlkun siniotik dosis C seesr 2,88 LOG CFU/g dn perlkun siniotik dosis A seesr 2,74 LOG CFU/g. Sementr itu pd kontrol tidk ditemukn kteri SKT- R. Hl ini mengindiksikn hw proiotik SKT- R yng dierikn ersm dengn preiotik memiliki kemmpun erthn dn memnftkn preiotik pd usus udng. Dengn demikin dri kteri TVC yng diperoleh pd perlkun siniotik, didug 57,20 %, 59,60%, dn 62,74% dri msingmsing perlkun A, B, dn C dlh kelompok kteri Virio dri kteri proiotik SKT- yng dierikn.

3 19 Jumlh Bkteri Usus LOG CFU/g K(-) K(+) A B C TBC TVC SKT- keterngn: * K- (kontrol -), K+ (kontrol +), A (pro 0,5%+pre 1%), B (pro 1%+pre 2%), dn C (pro 2%+pre 4%). Gmr 4. Totl Vile Bcteril Count (TBC), Totl Presumtive Virio Count (TVC), dn Totl SKT- R Count pd usus udng vnme (Litopeneus vnnmei) yng dieri perlkun siniotik dengn dosis ered. Hsil penelitin menunjukkn hw jumlh TBC pd pd perlkun C menghsilkn jumlh tertinggi yitu 7,30 LOG CFU/g, kemudin diikuti oleh perlkun B seesr 6,89 LOG CFU/g; perlkun A seesr 6,44 LOG CFU/g; dn jumlh TBC terkecil terdpt pd perlkun kontrol yitu seesr 5,32 LOG CFU/g dn 5,75 LOG CFU/g. Penmhn preiotik pd pkn didug telh menstimulir pertumuhn kteri menguntungkn linny tu mikroflor norml di dlm slurn pencernn udng vnme selin dri kteri proiotik yng dierikn, sehingg jumlh populsi kteri pd perlkun siniotik leih tinggi dripd perlkun kontrol. Hsil yng sm jug diperoleh Mhious et l. (2006), penmhn FOS dlm pkn telh meningktkn komposisi kteri proiotik dlm slurn pencernn lrv ikn turot. Li et l. (2007) jug menemukn hw FOS secr selektif dpt mendukung pertumuhn kteri spesies tertentu di dlm slurn pencernn udng vnme. Menurut Delgdo et l. (2010), preiotik dpt menghsilkn sm lemk rnti pendek (SCFA) yng menyekn ph usus menurun sehingg dpt menghmt pertumuhn kteri ptogen dn menstimulsi populsi kteri fkulttif nero seperti kelompok kteri Bifidocteri dn Lctocilli. Perform Pertumuhn Prmeter produksi udidy selm ms pemelihrn dengn perlkun siniotik dosis ered dpt diliht erdsrkn lju pertumuhn hrin (LPH) dn rsio konversi pkn (FCR) (Gmr 5). LPH dri udng vnme setelh pemerin perlkun siniotik ergi dosis (A (pro 0,5% + pre 1%), B (pro 1%

4 20 + Pre 2%), C (pro 2% + pre 4%)) selm 30 hri menunjukkn hw perlkun siniotik dosis B menghsilkn nili LPH tertinggi seesr 7,45±0,16 dn memerikn hsil yng ered nyt (P<0,05) dindingkn dengn kontrol, nmun tidk ered nyt terhdp perlkun siniotik dosis A dn dosis C (P>0,05). Sementr itu, FCR kontrol tnp pemerin siniotik menghsilkn nili seesr 1,74±0,23 dn 1,75±0,55, leih tinggi dri semu perlkun dn menunjukkn nili yng ered nyt terhdp perlkun siniotik dosis B yitu seesr 1,14 ±0,05 (P<0,05). A LPH (%) B K (-) K (+) A B C FCR K(-) K (+) A B C keterngn: * Huruf superscript yng ered menunjukkn hsil yng ered nyt (P <0,05) ** K- (kontrol -), K+ (kontrol +), A (pro 0,5%+pre 1%), B (pro 1%+pre 2%), dn C (pro 2%+pre 4%). Gmr 5. Perform pertumuhn, lju pertumuhn hrin (LPH) (A), rsio konversi pkn (FCR) (B), udng vnme (Litopeneus vnnmei) selm 30 hri perlkun siniotik dosis ered (Duncn; P=0,05). Hl ini menunjukkn hw perlkun pemerin siniotik pd pkn memerikn hsil kinerj pertumuhn leih ik dindingkn dengn kontrol. Hsil serup jug terjdi pd penelitin penmhn siniotik pd pkn dpt memperiki pertmhn oot tuuh, lju pertumuhn hrin (LPH), dn rsio

5 21 konversi pkn (FCR) pd Europen loster (Homrus gmmrus L) (Dniels et l. 2010), Onchorhyncus mykiss (Mehri et l. 2011) dn Sierin sturgeon (Acipenser erii) (Gerylou et l. 2013). Merrifield (2010) menytkn hw penmhn siniotik mmpu meningktkn mikroflor norml di dlm usus sehingg pkn dpt dimnftkn dengn ik untuk pertumuhn. Penmhn proiotik dn preiotik dlm pliksi siniotik mellui pkn ertujun untuk meningktkn populsi proiotik di dlm slurn pencernn udng vnme sehingg meknisme ksi dri proiotik semkin meningkt. Keerdn kteri proiotik dlm slurn pencernn sngt menguntungkn gi inng kren kteri terseut dpt menyumngkn enzim exogenous seperti milse, lipse, dn protese pd sistem pencernn ikn. Proiotik yng digunkn pd penelitin ini dlh kteri SKT- yng telh dikethui mmpu menghsilkn enzim protese dn milse (Widnrni et l. 2003). Brdsrkn dt Totl SKT- R Count pd Gmr 4, dikethui hw jumlh kteri SKT- R tertinggi terdpt pd perlkun B. Dengn demikin, didug pemerin siniotik dosis B pd pkn selm 30 hri dpt memerikn hsil yng optiml pd perform pertumuhn. Pd penelitin lin telh menunjukkn hw kteri SKT- dlm pliksi siniotik pd udng dpt meningktkn ktivits enzim protese dn milse udng dindingkn dengn kontrol (Lesmnwti 2013). Meningktny ktivits enzim pencernn dpt memntu inng dlm mendegdrsi nutrien, meningktkn kecernn, dn memperiki efisiensi pkn (Cerezuel et l. 2011). Peningktn pertumuhn pd perlkun siniotik jug didug disekn oleh pengruh dri preiotik yng dierikn. Preiotik dlh hn mknn tidk tercern, yng ersift menguntungkn gi inng dn erhuungn dengn modulsi mikroiot. Preiotik dpt secr selektif difermentsi oleh kteri spesifik yng terdpt pd usus, dn memodulsi pertumuhn sert ktivits dri kteri terseut (Ai et l. 2011). Preiotik yng diekstrk dri ui jlr vriets sukuh (Ipomoe tts L) secr efektif dpt mendukung pertumuhn kteri proiotik (Putr 2010). Selin itu, pd penelitin lin jug telh dikethui hw pemerin pkn preiotik pd Litopeneus vnnmei dpt meningktkn pnjng mikrovili usus (Zhng et l. 2012). Pnjng mikrivili usus dpt memntu meningktkn penyerpn nutrien sehingg dpt memperiki perform pertumuhn pd inng (Cerezuel et l. 2011). Respon Imun Penghitungn prmeter respon imun digi menjdi du thp. Thp pertm dilkukn setelh 30 hri perlkun siniotik, sedngkn thp kedu dilkukn pd khir uji tntng ko-infeksi IMNV dn V. hrveyi. Totl Hemocyte Count (THC) Nili totl hemosit udng vnme yng diperoleh dpt diliht pd Gmr 6. Berdsrkn dt yng diperoleh dikethui nili THC dri udng vnme setelh pemerin perlkun siniotik ergi dosis (A (pro 0,5% + pre 1%), B (pro 1% + Pre 2%), C (pro 2% + pre 4%)) selm 30 hri menunjukkn

6 22 hw perlkun siniotik dosis C menghsilkn nili THC tertinggi seesr 9,43±1,53 x10 6 ml -1 dn memerikn hsil yng ered nyt (P<0,05) dindingkn dengn kontrol, nmun tidk ered nyt terhdp perlkun siniotik dosis A dn dosis B (P>0,05). Totl Hemosit (x 10 6 ml -1 ) c K (-) K(+) A B C Seelum Uji Tntng Setelh Uji Tntng keterngn: * Huruf superscript yng ered menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) ** K- (kontrol -), K+ (kontrol +), A (pro 0,5%+pre 1%), B (pro 1%+pre 2%), dn C (pro 2%+pre 4%), Gmr 6. Totl Hemocyte Count udng vnme (Litopeneus vnnmei) pd perlkun siniotik dengn dosis ered (Duncn; P=0,05). Peningktn nili THC pd udng seiring dengn meningktny dosis siniotik yng dierikn menunjukkn hw pemerin siniotik pd pkn dpt meningktkn sistem kekeln tuuh dn sttus kesehtn pd udng vnme. Hemosit meminkn pern sentrl dlm perthnn kekeln tuuh pd krustse. Hemosit erpern dlm mengelurkn prtikel sing dlm hemocoel mellui fgositosis, enkpsulsi dn ggregsi nodulr. Selin itu, hemosit jug erpern dlm penyemuhn luk mellui cellulr clumping sert memw dn melepskn prophenoloxydse system (propo). Hemosit jug erpern dlm sintes dn pelepsn molekul penting hemolim seperti α 2 - mcrogluulin (α 2 M), gglutinin, dn peptid ntikteri (Rodriquez nd Le Moullc 2000). Menurut Munoz et l. (2000), jumlh sel hemosit pd udng dpt distimulsi oleh Phorol Myristte Acette (PMA), zymosn, lipopoliskrid, dn lminrin. Setelh dierikn uji tntng ko-infeksi IMNV dn V. hrveyi, nili THC kontrol (+) dn semu perlkun menunjukkn pol penurunn. Nili THC terendh terjdi pd kontrol (+) dn ered nyt terhdp seluruh perlkun siniotik dosis A, B, dn C. Selikny Nili THC pd kontrol (-) menglmi peningktn. Penurunn nili THC pd kontrol (+) dn seluruh perlkun siniotik dosis A, B, dn C merupkn efek dri ko-infeksi IMNV dn V. hrveyi. Dlm kondisi tidk terinfeksi (under non-chllenge), fktor-fktor imun-rektif (peroxinectin, peptid ntikteri, komponen pemeku) pd udng kn disimpn oleh tuuh dlm jringn hemtopoetic dengn kondisi tidk ktif dn dirilis pd st terjdiny infeksi (Smith et l. 2003). Penurunn jumlh sel

7 23 hemosit setelh uji tntng merupkn efek dri erjlnny meknisme perthnn tuuh seperti ktivits fgositosis, enkpsulsi, pementukn nodul, sert terjdiny proses degrnulsi untuk ktivsi sistem prophenoloxydse (propo), dn meknisme perthnn tuuh linny (Smith et l. 2003). Menurut Yeh et l. (2009), menurunny THC pd udng yng diinfeksi oleh virus didug disekn oleh kumulsi sel hemosit pd situs infeksi dn poptosis sel kit dri infeksi virus. Aktivits Phenoloxidse (PO) Hsil pengukurn ktivits phenoloxidse yng diperoleh dri udng vnme dpt diliht pd Gmr 7. Berdsrkn dt yng diperoleh dikethui nili PO dri udng vnme setelh pemerin perlkun siniotik ergi dosis (A (pro 0,5% + pre 1%), B (pro 1% + Pre 2%), C (pro 2% + pre 4%)) selm 30 hri menunjukkn hw perlkun siniotik dosis C menghsilkn nili PO tertinggi seesr 1,12±0,58 dn memerikn hsil yng ered nyt (P<0,05) terhdp kontrol (0,23±0,09 dn 0,22±0,10) dn perlkun siniotik dosis A (0,44±0,30), nmun tidk ered nyt (P>0,05) terhdp perlkun siniotik dosis B (1,07±0,15). Aktivits PO (unit) K(-) K(+) A B C Seelum Uji Tntng Setelh Uji Tntng keterngn: * Huruf superscript yng ered menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) ** K- (kontrol -), K+ (kontrol +), A (pro 0,5%+pre 1%), B (pro 1%+pre 2%), dn C (pro 2%+pre 4%), Gmr 7. Aktivits Phenoloxidse udng vnme (Litopeneus vnnmei) pd perlkun siniotik dengn dosis ered (Duncn; P=0,05). Nili ktivits PO seelum uji tntng dikethui erkorelsi positif dengn nili THC. Hsil penelitin ini menunjukkn hw perlkun siniotik dosis C menghsilkn nili PO tertinggi dn ered nyt dengn kontrol dn perlkun A. Hemosit udng erfungsi dlm produksi dn pelepsn PO ke dlm hemolim dlm entuk inctive pro-enzyme yng diseut propo (Smith et l. 2003). Dlm kedn norml, semkin nyk jumlh hemosit semkin tinggi pul produksi propo. Setelh dierikn uji tntng ko-infeksi IMNV dn V. hrveyi, nili PO kontrol (-), kontrol(+) dn semu perlkun menunjukkn pol peningktn. Nili

8 24 PO terendh terjdi pd kontrol (-) (0,44±0,12) dn kontrol (+) (0,59±0,26), sert ered nyt (P<0,05) terhdp seluruh perlkun A (1,18±0,06), B (1,28±0,18), dn C (1,22±0,38). Selikny nili PO pd kontrol (+) dn seluruh perlkun, tidk menunjukkn hsil yng ered nyt (P>0,05). Peningktn ktivits PO mengindiksikn tingginy respon imun dri udng. Pd penelitin Lesmnwti (2013), peningktn ktivits PO terjdi pd hri ke lim psc infeksi IMNV dn udng pd perlkun siniotik menghsilkn peningktn PO yng leih tinggi dinding kontrol. Respirtory Burst (RB) Fgositosis dlh reksi yng pling umum dlm sistem perthnn seluler ikn dn udng. Selm fgositosis, prtikel tu mikroorgnisme diinternlissikn ke dlm sel yng kemudin mementuk pencernn vkuol yng diseut fgosom. Sel fgosit memiliki ergi meknisme dlm memunuh ptogen. Respirtory Burst (RB) merupkn meknisme penghpusn prtikel oleh sel fgosit yng melitkn pelepsn enzim degrdtif ke phgosome (oxygen dependent killing mechnism). Reksi pertm yng dihsilkn pd proses RB dlh nion superoksid (O - 2 ). Reksi selnjutny kn menghsilkn hidrogen peroksid (H 2 O 2 ), rdikl hidroksil (OH - ), dn singlet oksigen ( 1 O 2 ). Hidrogen peroksid dpt diruh menjdi sm hipoklorit (HOCl - ) mellui sistem myeloperoxidse (MPO-H 2 O 2 -Cl) sehingg mementuk sistem ntikteri yng mpuh (Rodriquez nd Le Moullc 2000). Menurut Rodriquez nd Le Moullc (2000), nion superoksid (O - 2 ) pd ktivits RB yng ersl dri sel hilin dengn menggunkn PMA segi elicitor Hsil pengukurn ktivits RB yng diperoleh dri udng vnme dpt diliht pd Gmr 8. Berdsrkn dt yng diperoleh dikethui nili ktivits RB dri udng vnme setelh pemerin perlkun siniotik ergi dosis (A (pro 0,5% + pre 1%), B (pro 1% + Pre 2%), C (pro 2% + pre 4%)) selm 30 hri tidk menunjukkn pengruh yng ered nyt (P>0,05) pd seluruh perlkun. Nili ktivits RB pd kontrol dn perlkun siniotik dengn dosis ered secr erturut-turut dlh K (-) (0,08 ± 0,01), K (+) (0,08 ± 0,00), A (0,08 ± 0,04), B (0,08 ± 0,02), dn C (0,08 ± 0,00). Beerp penelitin menunjukkn hw pliksi siniotik tidk memerikn pengruh yng signifikn terhdp ktivits RB (Ai et l. 2011), sementr pd eerp penelitin lin, siniotik secr signifikn menunjukkn ktivits RB leih tinggi pd ergi orgnisme perirn seperti gilth hed serem (Cerezuel et l. 2012) dn koi (Cyprinus crpio) (Lin et l. 2012). Nmun demikin, setelh dierikn uji tntng koinfeksi IMNV dn V. hrveyi, ktivits RB pd kontrol (+) dn semu perlkun menunjukkn pol peningktn. Nili RB terendh terjdi pd kontrol (+) (0,10±0,05) dn ered nyt (P<0,05) terhdp seluruh perlkun A (0,59±0,15), B (0,41±0,03), dn C (0,46±0,10). Sementr itu ktivits RB pd kontrol (-) menunjukkn nili yng tetp yitu 0,08±0,03. Hl ini menunjukkn hw ktivits RB tidk menglmi peningktn oleh perlkun kteri SKT-, tetpi menglmi peningktn disekn dny ko-infeksi IMNV dn V. hrveyi. Selikny, pd penelitin Munoz et l. (2000) nion superoksid (O - 2 ) pd udng vnme dpt menglmi peningktn pd st distimulsi oleh kteri V. lginolyticus strin Ili dn kteri linny seperti Escherichi coli,

9 25 nmun tidk menglmi peningktn pd st distimulsi oleh Virio vulnicus segi elicitor. Hl ini menunjukkn hw ktivits RB dipengruhi oleh jenis mikroorgnisme tertentu. Respirtory Burst 10μl c c K(-) K(+) A B C Seelum Uji Tntng Setelh Uji Tntng keterngn: * Huruf superscript yng ered menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) ** K- (kontrol -), K+ (kontrol +), A (pro 0,5%+pre 1%), B (pro 1%+pre 2%), dn C (pro 2%+pre 4%), Gmr 8. Respirtory Burst udng vnme (Litopeneus vnnmei) pd perlkun siniotik dengn dosis ered (Duncn; P=0,05). Hemosit, PO, dn RB meminkn pern sentrl dlm perthnn kekeln tuuh pd krustse (Rodriquez dn Le Moullc 2000; Smith et l. 2003). Peningktn nili THC, PO, dn RB seiring dengn meningktny dosis siniotik yng dierikn menunjukkn hw pemerin siniotik mellui pkn dpt meningktkn sistem kekeln tuuh dn sttus kesehtn pd udng vnme. Hsil ini sejln dengn penelitin Li et l. (2009), penmhn siniotik dengn kominsi proiotik PB dn preiotik IMO ergi dosis dpt meningktkn respon imun udng diliht dri peningktn ktivits fgositosis pd sel hemosit, ktivits phenoloxidse (PO), ktivits respirtory urst (RB), dn ktivits phosphtse (ACP) pd serum. Aktivits PO tertinggi dlm serum terdpt pd siniotik dengn kominsi proiotik PB 10 8 CFU/g pkn + preiotik 0,2% IMO dn ered secr signifikn (P<0,05) dinding kontrol (Li et l. 2009). Peningktn respon imun pd pliksi siniotik jug terjdi pd ikn. Menurut Lin et l. (2012), pliksi siniotik dengn kominsi Chitosn Oligoscchrides (COS) dn Bcillus cogulns pd ikn koi (Cyprinus crpio) dpt meningktkn sistem imun: ktivits respirtory urst, ktivits fgositosis, ktivits lisozim, ktivits SOD, dn kethnn tuuh terhdp penykit Aeromons veronii (P<0,05). Siniotik merupkn kominsi seimng dri proiotik dn preiotik yng dihrpkn dpt memerikn pengruh menguntungkn terhdp respon imun inng. Ad ergi meknisme dri siniotik dlm meningktkn respon imun pd inng. Preiotik dlm pliksi siniotik ertindk segi fktor pemcu pertumuhn kteri proiotik yng dpt menghmt ptogen dlm usus dengn ersing pd glyco yng sm pd permukn sel epitel, menguh

10 26 ph kolon, meningktkn produksi mukus, memproduksi sm lemk rnti pendek dn merngsng produksi sitokin (Korzenik nd Podolsky 2006; Delgdo et l. 2011). Secr tidk lngsung, mellui kontk ntr proiotik dengn sel epitel usus (Gut Associted Lymphoid Tissue [GALT]) yng kn mengktifkn sitokin sehingg memungkinkn terjdiny komuniksi ntr sel untuk mengktifkn respon imun (imunoregultor). Menurut Delgdo et l. (2011), jringn limfoid yng ersosisi pd usus (GALT) merupkn gin teresr (60%) dri jringn sistem imun tuuh. Differentil Hemocyte (DH) Menurut Smith et l. (2003), terdpt tig kels pemgin hemosit pd krustse erdsrkn keerdn cytoplsmic grnules, yitu: sel hilin (HCS), hemosit semigrnulr (SGHs) dn hemosit grnulr (GHS). Pd penelitin ini, pengmtn jenis sel hemosit dilkukn erdsrkn du jenis yitu sel hilin dn sel grnulr (hemosit SGHs dn hemosit GHS). Hsil perhitungn perndingn jumlh sel hilin dn grnulr dpt diliht pd Gmr 9. Perndingn jumlh sel hilin dn sel grnulr pd sel hemosit udng dipengruhi oleh kondisi udng dn pengruh lingkungn. Berdsrkn pengmtn dn penghitungn yng dilkukn, jumlh sel hilin terendh terdpt pd perlkun siniotik B, pd seelum uji tntng menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) dindingkn dengn perlkun kontrol dn perlkun siniotik A dn C. Sedngkn persentse sel grnulr pd perlkun siniotik B menunjukkn nili tertinggi dn ered nyt (P<0,05) dindingkn dengn perlkun siniotik A dn C nmun tidk ered nyt (P>0,05) dengn kontrol. Setelh dierikn uji tntng dengn ko-infeksi IMNV dn V. hrveyi, jumlh sel hilin perlkun siniotik B menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) terhdp perlkun A. Nmun tidk menunjukkn hsil yng ered nyt dengn perlkun linny (P>0,05). Sedngkn jumlh sel grnulr pd kontrol (-), kontrol (+) dn semu perlkun menunjukkn pol peningktn. Jumlh sel grnulr tertinggi dlh pd perlkun siniotik B dn menunjukkn nili yng ered nyt (P<0,05) dengn kontrol (-), kontrol (+) dn perlkun siniotik A, nmun tidk ered nyt dengn perlkun siniotik dosis C. Tingginy jumlh sel grnulr menunjukkn tingginy ktivits sel ini. Konsentrsi sel grnulr yng tinggi dlm hemolim erhuungn dengn ktivits phenoloxidse yng tinggi dn resistensi terhdp viriosis. Sel grnulr memiliki pern dlm fgositosis, enkpsulsi, pengenln wl, melnistion dn kogulsi di segin kelompok, menghsilkn dn mengelurkn peptide ntimikro, sert terlit dlm reksi sitotoksik (Smith et l. 2003; Huton 2012).

11 27 A 100 Sel Hilin (%) K (-) K (+) A B C Seelum Uji Tntng Setelh Uji Tntng B Sel Grnulr (%) K (-) K (+) A B C Seelum Uji Tntng Setelh Uji Tntng keterngn: * Huruf superscript yng ered menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) ** K- (kontrol -), K+ (kontrol +), A (pro 0,5%+pre 1%), B (pro 1%+pre 2%), dn C (pro 2%+pre 4%) Gmr 9. Differentil Hemocyte (DH), Sel Hilin (A), Sel Grnulr (B), udng vnme (Litopeneus vnnmei) pd perlkun siniotik dengn dosis ered (Duncn; P=0,05). Sintsn Penghitungn nili sintsn digi menjdi du thp. Thp pertm dilkukn setelh 30 hri perlkun siniotik, sedngkn thp kedu dilkukn pd khir penelitin psc ko-infeksi IMNV dn V. hrveyi. Nili sintsn yng diperoleh dpt diliht pd Gmr 10.

12 28 Sintsn (%) c 0 K(-) K (+) A B C Seelum Uji Tntng Setelh Uji Tntng * Huruf superscript yng ered menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) ** K- (kontrol -), K+ (kontrol +), A (pro 0,5%+pre 1%), B (pro 1%+pre 2%), dn C (pro 2%+pre 4%) Gmr 10. Sintsn udng vnme (Litopeneus vnnmei) pd perlkun siniotik dengn dosis ered (Duncn; P=0,05). Berdsrkn hsil pengmtn sintsn udng vnme selm 30 hri perlkun siniotik dosis ered, dikethui seluruh perlkun tidk menunjukkn pengruh yng ered nyt. Sementr itu, setelh ms uji tntng ko-infeksi IMNV dn V. hrveyi mellui injeksi menyekn terjdiny penurunn sintsn udng. Sintsn terendh terjdi pd kontrol (+) yitu seesr 43,33% ered nyt dindingkn dengn kontrol (-) seesr 100% dn seluruh perlkun siniotik A, B, dn C yitu 80%, 96,67%, dn 93,33%. Siniotik yng dierikn secr signifikn dpt mengurngi kemtin udng yng telh diuji tntng dengn ko-infeksi IMNV dn V. hrveyi. Pd penelitin seelumny, telh dilporkn hw proiotik SKT- dlm pliksi siniotik dpt meningktkn resistensi udng terhdp V. hrveyi (Aris 2011) dn IMNV (Lesmnwti 2013) yng diinfeksi secr tunggl. Sintsn yng leih tinggi dindingkn dengn kontrol pd seluruh perlkun mengindiksikn dny pengruh siniotik terhdp peningktn resistensi udng terhdp ko-infeksi IMNV dn V. hrveyi. Hsil penelitin Li et l. (2009) menunjukkn hw pliksi siniotik dengn kominsi preiotik 0,2% isomltooligoskrid dn 10 8 CFU proiotik PB/g pkn secr signifikn (P<0,05) menghsilkn efek sinergis positif terhdp sistem kekeln udng terhdp infeksi WSSV. Tingginy resistensi udng terhdp ko-infeksi disekn oleh meningktny prmeter respon imun pd udng erup THC, PO, dn RB. Kemmpun erthn hidup dri udng dipengruhi oleh kesipn imunits udng terhdp dny infeksi. Menurut Gullin et l. (2004), komponen dinding sel dri kteri proiotik seperti β-glucn dn lipopoliskrid erpengruh terhdp meningktny sistem imun pd inng.

13 29 Gejl Klinis Pengmtn gejl klinis dilkukn untuk mengethui perkemngn koinfeksi V. hrveyi dn IMNV terhdp udng uji (Gmr 11). Berdsrkn pengmtn yng dilkukn dikethui hw terjdi peruhn mkro ntomi udng uji psc ko-infeksi IMNV dn V. hrveyi. Peruhn wl yng terjdi dlh munculny gejl klinis erup lesi (nekrosis) dn keputih-putihn pd otot gin elkng. Pd thp lnjut dri infeksi, nekrosis kemudin melus ke seluruh gin otot domen, yng menyekn wrn otot menjdi putih (tidk trnsprn) dn kemudin erlnjut ke peruhn wrn ekor menjdi kemerhn. Hl ini menunjukkn hw gejl klinis yng muncul pd udng uji psc koinfeksi IMNV dn V. hrveyi dlh gejl penykit IMN. Gejl-gejl penykit yng khs disekn oleh IMNV menckup hilngny volume heptopnkres, hilngny trnsprnsi dn peruhn wrn di sekitr ekor, nekrosis pd gin domen dn cephlothorx (Teixeir-Lopes et l. 2011). (A) (B) (C) Keterngn: udng norml (A), nekrosis pd rus tuuh (B) dn wrn kemerhn pd ekor (C) Gmr 11. Peruhn mkro ntomi udng vnme setelh ko-infeksi V. hrveyi dn IMNV Konfirmsi IMNV dn V. hrveyi Konfirmsi keerdn virus IMNV di tuuh udng uji dilkukn dengn nlisis PCR. Pengujin PCR dn V. hrveyi dilkukn pd 3 smpel udng yng menunjukkn gejl klinis terinfeksi IMNV (smpel A, B, dn C). Pengujin dilkukn pd pengmtn hri ke-7 ykni pd khir periode uji tntng koinfeksi IMNV dn V. hrveyi. Hsil uji PCR menunjukkn hw pd smpel A, B, dn C positif terinfeksi IMNV (Gmr 12). Sedngkn konfirmsi V. hrveyi, dilkukn dengn menggores kudrn gin heptopnkres pd medi TCBS-