JUDUL 1 RESPON IMUN NONSPESIFIK DAN RESISTENSI UDANG VANAME (Litopenaeus vannamei) YANG DIBERI PAKAN BERSUPLEMEN NUKLEOTIDA

Transkripsi

1 19 JUDUL 1 RESPON IMUN NONSPESIFIK DAN RESISTENSI UDANG VANAME (Litopeneus vnnmei) YANG DIBERI PAKAN BERSUPLEMEN NUKLEOTIDA Abstrk Efiksi nukleotid yng ditmbhkn dlm pkn untuk meningktkn respon imun nonspesifik, resistensi dn pertumbuhn udng vnme(litopeneus vnnmei) telh diteliti. Juvenil udng berukurn rt-rt 6.0±0.5 g diberi pkn pelet komersil yng sebelumny telh ditmbhkn nukleotid dengn 6 dosis berbed ykni A: 0, B:100, C:200, D:300, E:400, dn F:500 mg.kg -1 pelet msingmsing dengn tig ulngn. Udng diberi pkn 3 kli per hri selm 4 minggu berturut-turut dengn tingkt pemberin 3%/bb/hri.Pd khir periode pemberin pkn, udng diuji tntng mellui injeksi intrmuskulr dengn Vibrio hrveyi 0.1x10 6 cfu.udng -1. Nukleotid yng ditmbhkn dlm pkn memperlihtkn pengruh signifikn pd udng setelh diberikn selm empt minggu. Jumlh totl hemosit(thc) udng pd perlkun D (300 mg nukleotid) meningkt 76% lebih tinggi dibndingkn dengn kontrol. Aktivits PO udng pd perlkun D (300 mg nukleotid) jug berbed nyt (p=0.005) dibndingkn dengn kontrol nmun tidk berbed dibndingkn dengn perlkun E (400 mg nukleotid) dn F (500 mg nukleotid). Resistensi yng diukur berdsrkn sintsn rt-rt (83.33±7.21%) pd perlkun E(400 mg nukleotid) empt bels hri setelh uji tntng berbed nyt (p=0.005) dibndingkn dengn kontrol, nmun tidk berbed nyt jik dibndingkn dengn perlkun D (300 mg nukleotid).pertumbuhn udng yng dimti smpi khir periode pemberin pkn pd perlkun E (400 mg nukleotid) berbed nyt (p=0.001) dibndingkn dengn kontrol mupun dengn perlkun linny. Sebgi kesimpuln, penmbhn nukleotid pd dosis300 mg.kg -1 pelet selm 4 minggu dpt meningktkn jumlh hemosit dn ktivits PO, sedngkn resistensi dn pertumbuhn terbik dicpi pd dosis 400 mg.kg -1 pkn. Kt kunci: Aktivits PO, Litopeneus vnnmei, nukleotid, resistensi, totl hemocyte count TOPIC 1 NONSPECIFIC IMMUNE RESPONSE AND RESISTANCE OF WHITELEG SHRIMP (Litopeneus vnnmei) FED NUCLEOTIDE- SUPPLEMENTED DIET Abstrct The efficcy of nucleotides diet in enhncing nonspecific immune response, disese resistnce nd growth of Litopeneus vnnmei ws investigted. Shrimp juveniles (men weight 6.0±0.5 g) were fed commercil pellet previously supplemented with nucleotides with six different doses (A:0, B:100, C:200, D:300, E:400, F:500 mg.kg -1 pellet), ech with three repliction. Shrimps were fed three times dy for four consecutive weeks t feeding rte of 3%/bw.dy -1. At the end of feeding, ech shrimp ws chllenged intrmusculrly

2 20 with 0.1 mlvibrio hrveyi solution contining 1x10 6 cfu. Nucleotides diet showed significnt effect on shrimp fter four weeks of feeding. Men THC per ml of hemolymph in tretment D(300 mg nucleotides) incresed up to 76% higher thn control. PO ctivity of shrimp in tretment D (300 mg nucleotides) ws lso significntly different (p=0.005) compred to control shrimp, but not different s compred to those of tretments E (400 mg nucleotides) nd F (500 mg nucleotides). Resistncemesured s survivl rte (83.33±7.21%) of shrimp in tretment E (400 mg nucleotides) fourteen dys post-chllenge with V. hrveyi ws significntly different (p=0.005) from tht of control, but not different compred to tretment D (300 mg nucleotides). Shrimp growth observed in tretment E (400 mg nucleotides) ws significntly higher (p=0.001) thn those of other tretments. As conclusion, orl dministrtion of nucleotides t 300 mg.kg -1 pellet for four weeks enhnced totl hemocyte count dn PO ctivity while the highest disese resistnce nd growth were obtined t 400 mg.kg -1 diet. Keywords: resistnce, Litopeneus vnnmei, nucleotides, totl hemocyte count, PO ctivity PENDAHULUAN Budidy udng muli berkembng dengn pest di Indonesi sejk thun 1980 setelh pemerinth mengelurkn lrngn terhdp pengopersin lt tngkp trwler di beberp derh di Indonesi, sekligus mencnngkn Progrm Budidy Udng Nsionl. Nmun sejk wl thun 1990, budidy udng menghdpi keggln produksi kibt munculny serngn penykit terutm virus (MBV) dn vibriosis. Kondisi ini lebih diperburuk lgi dengn mewbhny WSSV di Indonesi sejk thun 1992/1993. Sejk ditemukn pd thun 1992, WSSV telh menyebbkn mslh penykit yng serius dn telh menyebbkn kerugin ekonomi yng signifikn bgi industri budidy udng dengn mortlits kumultif mencpi 100% (Wng et l. 1999; Witteveldt et l. 2003). Mslh ini terjdi bukn hny di Indonesi tetpi jug di negr-negr produsen lin seperti di Thilnd dn Filipin. Pd thun 2006, penykit virus yng bru, infectious myonecrosis virus (IMNV), terdeteksi menyerng budidy udng vnme di Indonesi (Tukhid dn Nurini 2008). Sejumlh pendektn telh diterpkn dlm upy mengtsi mslh penykit. Belkngn ini, berbgi bhn kimi, poliskrid, ekstrk tumbuhn dn beberp nutrien semkin mendpt perhtin untuk digunkn dlm pkn

3 21 sebgi imunostimuln (Misr et l. 2006;Pis et l. 2008). Nukleotid merupkn nutrient semi esensil yng muli mendpt perhtin serius untuk dikembngkn penggunnny sebgi imunostimuln dlm budidy ikn dn krustse dlm beberp thun terkhir ini. Nukleotid memiliki fungsi penting dlm fisiologi dn biokimi seperti penndn (encoding) dn penerusn informsi genetik, memedisi energi metbolisme dn cell signlling mupun sebgi koensim, llosteric effectors, dn cellulr gonist (Gltin& Li 2007). Evlusi terhdp penggunn nukleotid sebgi suplemen pkn ikn telh muli dilkukn sejk wl thun 1970-n. Penelitin-penelitin pd st itu terutm bertujun untuk mengevlusi kemungkinn penggunn nukleotid sebgi trktn pkn (Li & Gltin 2006). Pd hewn ternk, nukleotid sudh lm dimnftkn sebgi trktn pkn. Beberp produk nukleotid komersil untuk ternk telh tersedi di psrn dengn merek dgng scogen dn optimun (Chemoform, Switzerlnd). Beberp lporn penelitin yng sudh d menunjukkn bhw selin terlibt dlm pltbilits pkn dn biosintes sm mino non esensil, eksogenous nukleotid dpt meningktkn respon imun dn resistensi ikn terhdp sejumlh ptogen secr simultn (Burrels et l. 2001). Selin itu, pemberin nukleotid jug dpt meningktkn efiksi vksinsi, meningktkn pertumbuhn, meningktkn kulits lrv, sert meningktkn tolernsi terhdp stres. Hsil pengmtn Leonrdi et l. (2003) menunjukkn bhw pemberin nukleotid (optimun) pd tlntik slmon menurunkn level serum cortisol dn menghsilkn peningktn resistensi terhdp penykit. Pd udng, lporn-lporn penelitin tentng penggunn nukleotid msih belum tersedi, tu jik d, msih sngt terbts. Disisi lin, nukleotid sngt mn digunkn dlm kontrol penykit sebb bhn ini selin tidk meningglkn residu dlm tubuh, jug tidk mengkibtkn terjdiny keruskn lingkungn. Penelitin tentng penggunn nukleotid dlm budidy udng jug dirs sngt diperlukn untuk menyedikn solusi prktis gun mengurngi resiko terjdiny serngn penykit infeksius mupun keruskn lingkungn perirn. Penelitin ini bertujun untuk mengevlusi pengruh penmbhn

4 22 nukleotid dengn dosis berbed dlm pkn terhdp jumlh hemosit, ktivits PO, resistensi terhdp infeksi Vibrio hrveyidn pertumbuhn udng vnme. BAHAN DAN METODE Tempt dn Wktu Penelitin Penelitin dilksnkn di lbortorium Kesehtn Ikn, Deprtemen Budidy Perirn, Fkults Periknn dn Ilmu Kelutn, Institut Pertnin Bogor. Penelitin dilksnkn pd buln Jnuri Mret Hewn Uji Hewn uji dlh juvenil udng vnme yng diperoleh dri fsilits pembesrn udng vnme di rel pertmbkn Bkuheni, Lmpung Seltn.Udng yng dikumpulkn dimsukkn dlm kotk styrofom yng dilengkpi ertor bterei kemudin dingkut ke Lbortorium Kesehtn Ikn Institut Pertnin Bogor menggunkn mobil. Nukleotid Nukleotid yng digunkn dlh nukleotid murni (Sigm-Aldrich) yng terdiri ts denosine monophosphte (AMP), gunosine monophosphte (GMP), cytidine monophosphte (CMP), uridinemonophosphte (UMP), dn inosinemonophosphte (IMP). Persipn Pkn Uji Sebelum dicmpurkn ke dlm pkn, kelim jenis nukleotid dlm jumlh yng sm (1:1:1:1:1) dicmpur terlebih dhulu secr mert. Selnjutny cmpurn nukleotid ditimbng sesui dosis yng dibutuhkn (perlkun), dilrutkn dlm sedikit ir, dn dicmpurkn ke dlm pkn komersilsecr mert. Pkn kemudin dikering-nginkn dlm tempertur rung. Setelh kering, putih telur (sebgi coter) dicmpurkn secr mert ke dlm cmpurn pkn-nukleotid, dn dikering-nginkn kembli. Pelet selnjutny dimsukkn dlm kntong plstik kemudin disimpn dlm lemri pendingin smpi st kn digunkn. Pkn pelet komersil yng digunkn

5 23 memiliki komposisi: protein 38%, lemk 6%, sert ksr 3%, bu 13% dn kdr ir 11%. Sebelum pkn yng telh ditmbhkn nukleotid ini digunkn dlm percobn mk dilkukn uji kethnn dlm ir (wter stbility). Uji ini dilkukn dengn cr memsukkn 5 g pkn ke dlm sebuh kotk berukurn 10x10x10 cm. Rngk kotk terbut dri kwt sedngkn dindingny berup kin sring berdimeter 0.5 mm. Pkn yng telh ditmbhkn nukleotid dimsukkn ke dlm kotk, kemudin kotk dimsukkn dlm kurium dlm posisi menggntung dekt dsr. Akurium berisi 50 l ir, diberi ersi dn menggunkn resirkulsi ir sehingg kotk kn bergerk-gerk mengikuti gerkn ir. Kondisi ini dibut sm seperti pd kurium percobn. Setelh 3 jm, kotk dikelurkn, pkn sis dikeringkn pd 60 o C selm 4 jm, kemudin ditimbng. Wter stbility(kethnn dlm ir) merupkn rtio ntr bert kering pkn sis setelh direndm dlm ir dlm wktu tertentu dn bert kering pkn sebelum direndm di kli 100%. Wter stbility yng diperoleh dlh 77.4% (3096 g/4 g x 100). Rncngn Percobn Penelitin dikerjkn dengn menggunkn rncngn ck lengkp (RAL) dengn enm perlkun dimn msing-msing perlkun memiliki 3 ulngn. Penemptn perlkun ke dlm unit-unit percobn dilkukn secr ck. Perlkun yng digunkn dlh sebgi berikut: A: Nukleotid 0 mg.kg -1 pkn (pkn stndr) B: Nukleotid 100 mg.kg -1 pkn C: Nukleotid 200 mg.kg -1 pkn D: Nukleotid 300 mg.kg -1 pkn E: Nukleotid 400 mg.kg -1 pkn F: Nukleotid 500 mg.kg -1 pkn

6 24 Prosedur Penelitin dn Pengmbiln Dt Juvenil udng vnme sebnyk 270 ekor dipelihr selm du minggu dlm bk fibergls berkpsits 1000 l yng dilengkpi dengn ertor untuk proses klimtissi. Selm periode klimtissi, udng diberi pkn stndr sebnyk 3%/bb/hri dn diberikn tig kli sehri ykni pd pukul 09.00, 13.00, dn Kulits ir diperthnkn stbil dn penggntin ir dilkukn setip 3-4 hri sekli. Selnjutny udng (bert rt-rt 6.0±0.5 g) didistribusikn ke dlm 18 unit kurium percobn msing-msing berukurn 60x30x30 cm. Setip kurium berisi 50 l ir dengn 15 ekor udng, dilengkpi dengn ersi dengn irlift system sert menggunkn sistem resirkulsi ir. Kulits ir medi pemelihrn dlh tempertur ir o C, Slinits ppt, Oksigen mg/l, ph Pkn perlkun diberikn selm 4 minggu berturut-turut dengn tingkt pemberin 3%/bb/hri dn frekuensi pemberin 3 kli sehri ykni pukul 09.00, 13.00, dn Selm ms percobn, kulits ir dimonitor setip hri untuk menjmin gr kondisi lingkungn tetp stbil. Kotorn dn sis pkn yng terkumulsi dlm kurium dikelurkn mellui penyiponn. Pengmbiln smpel hemolim untuk pengukurn prmeter imunits udng dilkukn seminggu sekli smpi khir periode pemberin nukleotid. Pengmbiln hemolim dikerjkn berdsrkn prosedur Liu & Chen(2004). Secr singkt, sekitr 0.1 mlhemolim dimbil dri ventrl sinus pd pngkl rus tubuh pertm dengn menggunkn lt suntik 1-ml setelh sebelumny dimsukkn 0.1 ml ntikoguln(30 mm trisodium citrte, 0.34 M sodium chloride, 10 mm EDTA, ph 7.5). Selnjutny tmbhkn ntikoguln sehingg perbndingn hemolim : ntikoguln menjdi 1 : 9. Prmeter Imun Prmeter imun udng yng diukur terdiri ts totl hemocyte count (THC, sel.ml -1 ), dn ktivits phenoloxidse (PO). Prosedur pengukurn prmeter imun sebgi berikut:

7 25 Penghitungn THC Sebnyk 50 µlcmpurn hemolim-ntikoguln dimsukkn dlm neutrl buffered formlin (10%) selm 30 menit. Selnjutny, THC dihitung dengn menggunkn hemsitometer di bwh mikroskop chy dengn pembesrn 40x. AktivitsPhenoloxidse (PO) Aktivits PO hemosit diukur berdsrkn formsi dopchrome yng dihsilkn oleh L-DOPA. Pengukurn ktivits PO dikerjkn berdsrkn prosedur yng dikemukkn oleh Liu & Chen (2004). Pertm-tm, 1 ml cmpurn hemolim-ntikoguln disentrifuse pd 700 g selm 20 menit pd tempertur 4 o C. Superntn dikelurkn dn pelet disuspensikn kembli secr perlhn-lhn ke dlm lrutn ccodylte-citrte buffer (0.01 M sodium ccodylte, 0.45 M sodium chloride, 0.10 M trisodium citrte, ph 7) dn disentrifuse kembli. Pelet kemudin dimbil dn disuspensikn dlm 200 µl ccodylte buffer (0.01 M sodium ccodylte, 0.45 M sodium chloride, 0.01 M clsium chloride, 0.26 M mgnesium chloride, ph 7). Aliquot sebnyk 100 µl diinkubsi dengn 50 µl tripsin (1 mg.ml ccodylte buffer) sebgi ktivtor selm 10 menit pd tempertur o C. Selnjutny tmbhkn 50 µl L-DOPA (3 mg.ml -1 ccodylte buffer), setelh 5 menit, tmbhkn 800 µl ccodylte buffer.densits optikl (OD) 490 nm diukur dengn menggunkn Spectrophotometer. Lrutn stndr mengndung 100 µl suspensi hemosit, 50 µl ccodylte buffer (penggnti tripsin), dn 50 µl L-DOPA digunkn untuk mengukur bckground ktivits PO pd semu lrutn uji. Densits optikl (OD) dri ktivits PO pdsemu kondisi uji dinytkn sebgi formsi dopchrome dlm 50 µl hemolim. Resistensi Uji-tntng dilkukn pd khir periode pemberin pkn perlkun. Sebelum dilkukn uji-tntng, ertor dn resirkulsi ir dimtikn terlebih -1

8 26 dhulu selm kurng lebih 30 menit, kemudin semu udng (8 ekor/kurium) diuji tntng mellui injeksi intrmuskulr 0.1 ml lrutn bkteri Vibrio hrveyi 1x10 6 cfu.udng -1 pd bgin punggung rus bdn ke 3. Setelh disuntik, udng dimsukkn kembli ke dlm kurium. Selm periode uji-tntng, resirkulsi ir dimtikn. Udng diberi pkn stndr 3%/bb/hri dn diberikn tig kli sehri ykni pukul 09.00, 13.00, dn Kulits ir dimonitor gr berd dlm kondisi stbil, kotorn dn sis pkn dikelurkn mellui penyiponn, dn ir yng terbung dignti dengn ir yng bru. Udng mti dikelurkn setip hri dn jringn udng dimbil untuk isolsi bkteri gun mengkonfirmsi bhw penyebb kemtin dlh V. hrveyi. Pengmtn mortlits dilkukn setip hri selm 14 hri setelh uji tntng. Prmeter yng diukur untuk penentun resistensi udng dlh tingkt sintsn (SR) yng dicpi smpi pd khir periode pengmtn. Tingkt sintsn dihitung dengn formul berikut: Dimn: SR (%) = Nt/No x 100 SR = Sintsn Nt = jumlh udng hidup pd wktu t No = jumlh udng hidup wktu tebr Pertumbuhn Pertumbuhn udng diukur setip du minggu sekli ykni pd hri ke 14 dn 28.Pertumbuhn udng dinytkn sebgi selisih ntr bert udng yng diukur pd khir percobn dengn bert udng pd wl percobn: G = Wt Wo dimn: G= pertumbuhn (g) Wt = bert udng pd wktu t (g); Wo = bert udng pd wl percobn (g) Anlisis Dt Dt hsil pengukurn dinytkn dlm nili rt-rt±sdv. Evlusi perbedn respon imun udng (THC,ktivitsPO), resistensi dn pertumbuhn kibt pemberin perlkun nukleotid dilkukn mellui nlisis rgm. Apbil

9 27 terdpt perbedn ntr nili-rt-rt perlkun mk nlisis dt dilnjutkn dengn Uji Wilyh Bergnd Duncn dengn menggunkn progrm SPSS 17 untuk windows. Nmun pbil tidk terdpt perbedn pengruh ntr perlkun mk nlisis hny dilkukn secr deskriptif dengn menggunkn ngk mutlk. HASIL DAN PEMBAHASAN Totl Hemocyte Count Hemosit meminkn pernn penting dlm sistem imun krustse. Hemosit berpern dlm fgositosis, enkpsulsi, degrnulsi dn gregsi nodulr terhdp ptogen tu prtikel sing, sert produksi dn pelepsn propo(shoo et l. 2008). Hsil penelitin ini menunjukkn bhw nukleotid yng ditmbhkn ke dlm pkn dpt meningktkn THC udng vnme setelh diberikn selm 4 minggu. THC udng setelh diberi pkn dengn suplementsi nukleotid dpt diliht pd Tbel 1 (Lmpirn 1 dn 2). Hsil nlisis rgm memperlihtkn bhw tidk terdpt perbedn pd nili THC rt-rt setelh udng diberi pkn yng ditmbhkn nukleotid selm 1 minggu, 2 minggu dn 3 minggu. Setelh diberikn selm 4 minggu, penmbhn nukleotid dlm pkn udng secr nyt (p=0.005) meningktkn THC (Lmpirn 3). THC rt-rt yng diukur pd perlkun C (200 mg nukleotid), D (300 mg nukleotid), E (400 mg nukleotid), dn F (500 mg nukleotid) pd minggu ke 4 berbed nyt (p=0.005) jik dibndingkn dengn THC pd perlkun A (0 mg nukleotid) dn perlkun B (100 mg nukleotid), nmun ntr perlkun C, D, E, dn F, THC tidk berbed nyt(lmpirn 4). Pd perlkun D (300 mg nukleotid) dn E (400 mg nukleotid), THC mencpi 76% (2.137±0.252 sel/ml) dn 73% (2.109±0.553sel/ml) lebih tinggi dibndingkn dengn kontrol (1.216±0.158sel/ml).Temun ini sm seperti yng dilporkn oleh Hill et l. (2006) dimn juvenil udng windu yng diberi pkn yng ditmbhkn nukleotid komersil (ekstrk yest, Vnngen 0.2%) selm 6 minggu memiliki THC 100% yng lebih tinggi dibndingkn dengn udng yng diberi pkn tnp

10 28 penmbhn nukleotid dn pd udng yng lebih besr, THC mencpi 30% lebih tinggi dibndingkn dengn kontrol. Belum dikethui dengn jels bgimn kerj nukleotid dlm meningktkn THC pd udng. Menurut Brnes (2006), nukleotid merupkn nutrien semi esensil yng dibutuhkn untuk pertumbuhn dn perbnykn sel. Sjeevn et l. (2006) jug menytkn bhw nukleotid yng ditmbhkn dlm pkndpt mengoptimlkn fungsi pembelhn sel termsuk sel-sel imum.hl yng sm didug terjdi pd udng vnme dimn nukleotid yng ditmbhkn dlm pkn kn digunkn untuk pertumbuhn dn perbnykn sel-sel hemosit.nukleotid kn diuri oleh nukleotidseuntuk melepskn molekul fosft dn menghsilkn nukleosid. Nukleosid selnjutny diuri oleh nukleosidse tu nucleoside phosphorylseuntuk melepskn molekul gul dn menghsilkn bs purin dn pirimidin. Nukleosid dn bs nitrogen kn diserp oleh usus untuk selnjutny di sintes kembli membentuk nukleotid yng dibutuhkn untuk repliksi DNA dn sintes RNA dlm pembelhn sel (Devlin, 2002). Tbel 1 THC rt-rt L.vnnmeiyng diberi pkn yng ditmbhkn nukleotid dengn dosis berbed selm 4 minggu Perlkun THC (x 10 7 sel.ml -1 ) Hri-7 Hri-14 Hri-21 Hri-28 A 0.421± ±0, ± ±0.158 B 0.422± ± ± ±0.132 C 0.427± ± ± ±0.069 D 0.435± ± ± ±0.252 E 0.481± ± ± ±0.553 F 0.489± ± ± ±0.120 Superskrip berbed pd kolom yng sm menunjukkn berbed sngt nyt (p=0.005) b b b b Aktivits PO Phenoloxidse (PO) merupkn sutu enzim yng bertnggung jwb terhdp proses melnissi pd krustse sebgi respon terhdp penyerng sing (Vrgs-Albores & Yepiz-Plscenci 2000; Sritunylucksn & Söderhäll 2000;

11 29 Rodriquez & Le Moullc 2000). Enzim PO mengktlis hidroksilsi monophenol dn oksidsi phenol menjdi quinones. Quinone selnjutny diubh mellui sutu reksi non-enzymtic menjdi melnin dn sering dideposit pd bend yng dienkpsulsi, dlm nodulhemosit, dn pd derh kulit yng terinfeksi jmur. Dlm proses melnissi yitu selm pembentukn quonoid terjdi produksi rective oxygen spesies seperti superoxide nion dn hydroxyl rdicl yng meminkn pernn penting sebgi ntimikrob. Reksi fgositosis, enkpsulsi dn nodulsi jug diktifkn. Pengruh pemberin nukleotid terhdp ktivits PO cenderung sm seperti pengruhny terhdp THC udng. Nili ktivits PO udng setelh diberi suplementsi nukleotid selm 4 minggu disjikn pd Tbel 2 (Lmpirn 5 dn 6). Hsil nlisis rgm memperlihtkn bhw pemberin pkn dengn suplementsi nukleotid selm 1, 2 dn 3 minggu tidk berpengruh terhdp ktivits PO udng. Penmbhn nukleotid dlm pkn memperlihtkn pengruh sngt nyt (p=0.005)terhdp ktivits PO setelh diberikn selm 4 minggu (Lmpirn 7). Tbel 2 Aktivits PO L.vnnmei yng diberi pkn yng ditmbhkn nukleotid dengn dosis berbed selm 4 minggu Perlkun Hri-7 Hri-14 Hri-21 Hri-28 A 0.172±0, ±0.022 B 0.178±0, ±0.037 C 0.196±0, ±0.043 D 0.209±0, ±0.021 E 0.188±0, ±0.003 F 0.184±0, ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±0.031 Superskrip berbed pd kolom yng sm menunjukkn berbed sngt nyt (p=0.005) Nili ktivits PO udng yng diberi pkn dengn penmbhn nukleotid 300 mg.kg -1 pkn (perlkun D) berbed nyt dibndingkn dengn kontrol nmun tidk berbed nyt jik dibndingkn perlkun E (400 mg nukleotid) dn F (500 mg nukleotid). Aktivits PO udng pd perlkun E dn F jug berbed nyt jik dibndingkn dengn kontrol (Lmpirn 8). b c bc bc

12 30 Nili ktivits PO tertinggi termti pd perlkun D (300 mg nukleotid), kemudin E (400 mg nukleotid) dn F (500 mg nukleotid). Menurut Gullin et l. (2004), nili ktivits PO sebesr diktegorikn memiliki ktivits tinggi. Hsil penelitin ini menunjukkn bhwpemberinorl nukleotid mg.kg -1 pkn dpt meningktkn ktivits PO. Aktivits PO yng tinggi berkitn dengn jumlh totl hemosityng tinggi (Tbel 1). Sebb, hemosit udng berfungsi dlm produksi dn pelepsn PO ke dlm hemolim dlm bentuk inctive pro-enzyme yng disebut propo. Dlm kedn norml, semkin bnyk jumlh hemosit semkin tinggi pul produksi propo. Bgimn meknisme eksogenous nukleotid dlm merngsng tu meningktkn fungsi imun belum dikethui. Berdsrkn hsil-hsil penelitin pd hewn, nukleotid berfungsi dlm berbgi proses selulr ykni sebgi sumber energi kimi (ATP) dn berfungsi dlm cellulr communiction (Field et l. 2002). Li & Gltin (2006) jug menytkn bhw nukleotid yng ditmbhkn dlm pkn ikn selin digunkn sebgi nutrien untuk prosesproses biosintes, jug kn terlibt dlm cell signling pthwy.proses yng sm didug terjdi pul pd krustse. Pd krustse, propo berfungsi dlm sistem pengenln bend sing dn melnissi (Morles et l. 2007; Sritunylucksn &Söderhäll 2000). Resistensi Mortlits udng muli terliht pd 24 jm setelh udng diuji tntng dengn bkteri Vibrio hrveyi. Kemtin terus berlnjut hingg hri ke empt (96 jm) terutm pd perlkun A (0 mg nukleotid), B (200 mg nukleotid), dn F (500 mg nukleotid). Pd semu perlkun, kemtin udng tidk lgi terjdi pd hri ke lim (120 jm) dn seterusny smpi khir pengmtn pd hri ke 14 setelh uji-tntng. Sintsn kumultif udng setelh diuji-tntng dengn V.hrveyi dpt diliht pd Gmbr 5 (Lmpirn 9)

13 31 Sintsn Kumultif (%) Hri setelh uji tntng A B C D E F Gmbr 5 Sintsn kumultif udng vnmeyng diberi pkn yng ditmbhkn nukleotid selm 4 minggu dn diuji tntng dengn Vibrio hrveyi Resistensi udng diukur berdsrkn tingkt sintsn yng dicpi smpi pd khir pengmtn. Hsil nlisis rgm menunjukkn bhw terdpt perbedn nili rt-rt sintsn (p=0.005) yng dicpi smpi khir periode pengmtn (Lmpirn 11).Sintsn udng pd perlkun E (400 mg nukelotid)mencpi 83.33%±7.21. Angk ini berbed nyt dibndingkn dengn kontrol, nmun tidk berbed nyt jik dibndingkn dengn perlkun D (300 mg nukleotid) ykni sebesr 66.66±7.21% (Lmpirn 12). Tingkt sintsnudng pd perlkun D (300 mg nukleotid) jug berbed nyt dibndingkn dengn kontrol. Tbel 3(Lmpirn 10) memperlihtkn resistensi udng vnme setelh diuji-tntng dengn bkteri V. hrveyi. Tbel 3Resistensi L.vnnmeiyng diberi pkn yng ditmbhkn nukleotid dengn dosis berbed dn diuji-tntng dengn V. hrveyi Perlkun Sintsn (%) A 41.66±7.21 b B 50.00±12.5 b C 62.50±12.5 bc D 66.66±7.21 c E 83.33±7.21 F 62.50±12.5 b Superskrip berbed menunjukkn berbed sngt nyt (p=0.005)

14 32 Beberp imunostimuln seperti β-glukn, LPS dn peptidoglikn telh dikethui dpt meningktkn resistensi udng terhdp bkteri dn virus (Chng et l. 2003; Shoo et l. 2008; Song et l. 2003; Sung et l. 2001; Tkhshi et l. 2000). Seblikny, lporn tentng pengruh eksogenous nukleotid terhdp resistensi udng msih sngt terbts. Dlm penelitin ini ditemukn bhw suplementsi nukleotid pd dosis 300 dn 400 mg.kg -1 pkn (perlkun D dn E) dpt meningktkn jumlh hemosit dn ktivits PO. Meningktny kedu prmeter imun ini selnjutny kn menghsilkn peningktn resistensi udng setelh diuji tntng dengn bkteri ptogen.pd ikn, beberp lporn penelitin memperlihtkn bhw suplementsi nukleotid dlm pkn pelet dpt meningktkn resistensi ikn terhdp berbgi ptogen. Hsil penelitin Li et l. (2004) menunjukkn bhw setelh diberi pkn nukleotid selm 6-7 minggu dn diuji-tntng dengn Streptococcus inie, produksi oxidtive rdicl neutrofil drh hybrid striped bss ( g) meningkt dn sintsn ikn yng diberi pkn nukleotid (80%) lebih tinggi dib&ingkn dengn ikn yng diberi pkn tnp suplemen nukleotid (60%). Ski et l. (2001) melporkn pemberin nukleotid yng diisolsi dri RNA yest sebnyk 15 mg/ikn selm 3 hri pd Cyprinus crpio100 g meningktkn ktivitsfgositosis, respirtory burst, serum complement dn ktivits lisozyme sert meningktkn resistensi terhdp infeksi A. hydrophil. Dlm pengmtn yng dilkukn oleh Burrells et l. (2001), rinbow trout yng berukurn g dn diberi pkn nukleotid dengn suplementsi nukleotid komersil (Optimûn, 2 g/kg pkn) selm 2 minggu memiliki mortlits 35.7% sedngkn ikn yng diberi pkn tnp suplementsi nukleotid menglmi mortlits 48% setelh 53 hri diperhdpkn dengn ikn yng sebelumny telh disuntik dengn ISAV (Infectious Slmon Anemi Virus). Burgents et l. (2004) jug melporkn bhw resistensi udng vnme terhdp infeksi butn Vibriosp meningkt jik udng diberi pkn mengndung Scchromyces cerevisie. Hsil penelitin ini membuktikn bhw penmbhn nukleotid dlm pkn udng dpt meningktkn resistensi udng vnme terhdp ptogen dn berpotensi untuk diterpkn dlm mnjemen kesehtn budidy udng. Dlm

15 33 penelitin ini, dt sintsn udng setelh uji tntng digunkn sebgi ukurn resistensi penykit. Sebb, metodologi untuk secr komprehensif menetpkn imunits dn resistensi ikn msih terbts sehingg biomrker tentng resistensi msih sulit ditentukn (Li & Gltin 2006). Pertumbuhn Dt pertumbuhn udng setelh diberi pkn bersuplemen nukleotid dengn dosis berbed disjikn pd Tbel4 (Lmpirn 13 dn 14). Hsil nlisis rgm memperlihtkn bhw tidk terdpt perbedn pd nili rt-rt pertumbuhn udng yng diberi pkn yng ditmbhkn nukleotid selm 2 minggu pertm. Setelh 4 minggu pemberin, nukleotid secr nyt (p=0.001) mempengruhi pertumbuhn udng (Lmpirn 15). Pertumbuhn rt-rt udng pd perlkun E (400 mg nukleotid)berbed nyt jik dibndingkn dengn pertumbuhn udng kontrol, mupun dengn pertumbuhn udng pd semu perlkun uji linny (Lmpirn 16). Tbel 4 Pertumbuhn L.vnnmei yng diberi pkn yng ditmbhkn nukleotid dengn dosisberbed selm 4 minggu Perlkun Bert Awl (g) Bert Akhir (g) A 6.0± ± ±0.38 B 6.0±0.5 b 7.55± ±0.58 C 6.0±0.5 b 7.86±0.07 b 9.67±0.12 D 6.0±0.5 b 8.21± ±0.54 E 6.0±0.5 b 8.65± ±0.40 F 6.0±0.5 b 8.25± ±0.34 Perolehn Bert (g) Hri-14 Hri-28 Hri-14 Hri-28 b c 1.36± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±0.33 Superskrip berbed pd kolom yng sm menunjukkn berbed nyt (p<0.01) Hsil penelitin menunjukkn bhw udng yng diberi nukleotid 400 mg.kg -1 pellet (perlkun E) memiliki bert khir yng lebih besr (11.05g±0.40 g) jik dibndingkn dengn bert khir yng dicpi pd semu perlkun linny (Tbel 4). Perolehn bert udng mencpi 5.05 g tu 50.75% lebih tinggi dri perolehn bert udng kontrol (3.35 g). Hsil yng sm jug

16 34 dilporkn oleh Li et l. (2007) dimn penmbhn cmpurn nukleotid murni 0.04% tu 400 mg.kg -1 pkn dn diberikn selm 5 minggu secr signifikn meningktkn bert khir udng vnme dibndingkn dengn udng yng diberi pkn tnp suplementsi nukleotid. Lin et t. (2009) jug menemukn bhw ikn kerpu (Epinephelus mlbricus) yng diberi pkn dengn penmbhn nukleotid murni selm 8 minggu memiliki perolehn bert yng lebih besr dibndingkn dengn ikn yng diberi pkn tnp suplementsi nukleotid. Selnjutny, Burrells et l. (2001) melporkn bhw pertumbuhn ikn slmon meningkt setelh 8 minggu diberi pkn yng ditmbhkn nukleotid komersil (Optimun) pd dosis 2 g.kg -1 pkn. Menurut Burrells et l. (2001), nukleotid yng ditmbhkn dlm pkn kn meningktkn npsu mkn ikn sehingg pengmbiln pkn meningkt. Dlm penelitin yng dilkukn oleh Rumsey et l. (1992) ditemukn bhw penmbhn gunine 1.85% dlm pkn secr nyt meningktkn npsu mkn ikn rinbow trout sehingg meningktkn pengmbiln pkn setelh diberikn selm 12 minggu. Pd ikn grouper, pemberin denosine monophosphte (AMP) dpt meningktkn pertumbuhn dn respon imun lebih bik dibndingkn dengn nukleotid linny (Lin et l. 2009). Kubitz et l. (1997) jug melporkn bhw pemberin nukleotid pd ikn lrgemouth bss meningktkn pengmbiln pkn sebesr 46% lebih bnyk dibndingkn dengn ikn yng diberi pkn tnp suplementsi nukleotid. Suplementsi inosine monophosphte (IMP) dlm pkn kn meningktkn pengmbiln pkn ikn sebesr 23% lebih bnyk dibndingkn dengn ikn kontrol. Jdi dptlh didug bhw nukleotid yng ditmbhkn dlm pkn kn meningktkn npsu mkn udng sehingg meningktkn pengmbiln pkn yng selnjutny menghsilkn peningktn pertumbuhn udng. Nmun demikin, hsil-hsil penelitin pd ikn memperlihtkn bhw pengruh nukleotid terhdp respon mkn ikn berbed-bed menurut spesis ikn (spesies specific). Hl yng sm mungkin terjdi pd udng dn oleh kren itu mk jenis nukleotid mn yng potensil meningktkn npsu mkn udng msih perlu diteliti.

17 35 Pd udng yng diberi nukleotid 500 mg.kg -1 pelet (perlkun F), pertumbuhn meningkt smpi pd minggu ke 2. Selnjutny pertumbuhn nmpk menurun pd khir minggu ke 4 dn bhkn lebih rendh jik dibndingkn dengn pertumbuhn udng kontrol (tnp nukleotid). Hsil penelitin yng dilkukn oleh Admek et l. (1996) dicu dlm Gltin & Li (2007) menunjukkn bhw pemberin nukleotid komersil (scogen) 5 g/kg pkn (setr 750 mg nukleotid) menekn pertumbuhn rinbouw trout dn goldfish setelh 37 hri pemberin, sedngkn pemberin 0.62 g (setr 93 mg nukleotid) dn 2.5 g scogen/kg pkn (setr 375 mg nukleotid) meningktkn pertumbuhn dn efisiensi pkn rinbouw trout. Dlm lporn penelitin oleh Li et l. (2004), hybrid striped bss yng diberi pkn yng ditmbhkn nukleotid (scogen) selm 8 minggu menglmi peningktn respon imun nonspesifik dn pertumbuhn nmun jik diberi selm 16 minggu tidk terjdi peningktn. Rumsey et l. (1992) melporkn bhw suplementsi 4.1% ekstrk RNA bkteri dlm pkn tidk menekn pertumbuhn rinbow trout nmun penmbhn 10% ekstrk RNA bkteri seblikny kn menekn pertumbuhn. Menurunny pertumbuhn berkitn dengn meningktny serum ure yng bersl dri metbolisme nukleotid. Jdi, dosis dn lm wktu pemberin perlu dipertimbngkn dlm pliksi nukleotid sebb dosis yng berlebihn dn diberikn dlm wktu berkepnjngn mungkin tidk kn mendorong pertumbuhn tetpi justru kn menekn pertumbuhn. Menurut Li & Gltin (2006), penmbhn nukleotid yng seimbng dlm pkn dpt memcu pertumbuhn dn pemnftn pkn ikn. KESIMPULAN Penmbhn nukleotid dengn dosis 300 mg.kg -1 pkn menghsilkn peningktn jumlh hemosit dn ktivits PO tertinggi sedngkn resistensi dn pertumbuhn udng terbik dicpi pd dosis 400 mg.kg -1 pkn.