ISOLASI DAN SELEKSI BAKTERI KANDIDAT PROBIOTIK DARI MEDIA PEMELIHARAAN DAN USUS IKAN LELE

Transkripsi

1 ISOLASI DAN SELEKSI BAKTERI KANDIDAT PROBIOTIK DARI MEDIA PEMELIHARAAN DAN USUS IKAN LELE Clris sp. UNTUK MENGHAMBAT INFEKSI BAKTERI Aeromons hydrophil RIDHANA DWI MEILITA DEPARTEMEN BUDIDAYA PERAIRAN FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2016

2

3 PERNYATAAN MENGENAI SKRIPSI DAN SUMBER INFORMASI SERTA PELIMPAHAN HAK CIPTA Dengn ini sy menytkn bhw skripsi berjudul Isolsi dn Seleksi Bkteri Kndidt Probiotik dri Medi Pemelihrn dn Usus Ikn Lele Clris sp. untuk Menghmbt Infeksi Bkteri Aeromons hydrophil dlh benr kry sy dengn rhn dri komisi pembimbing dn belum dijukn dlm bentuk p pun kepd pergurun tinggi mn pun. Sumber informsi yng bersl tu dikutip dri kry yng diterbitkn dn tidk diterbitkn dri penulis lin telh disebutkn dlm teks dn dicntumkn dlm Dftr Pustk di bgin khir Skripsi ini. Dengn ini sy melimphkn hk cipt dri kry tulis sy kepd Institut Pertnin Bogor. Bogor, Mei 2016 Ridhn Dwi Meilit NIM C

4

5 ABSTRAK RIDHANA DWI MEILITA. Isolsi dn Seleksi Bkteri Kndidt Probiotik dri Medi Pemelihrn dn Usus Ikn Lele Clris sp. untuk Menghmbt Infeksi Bkteri Aeromons hydrophil. Dibimbing oleh SUKENDA dn RAHMAN. Penelitin ini bertujun untuk mendptkn bkteri kndidt probiotik yng berpotensi untuk menghmbt infeksi bkteri A. hydrophil pd ikn lele dn mengevlusi pengruh penmbhn bkteri kndidt probiotik terhdp pertumbuhn dn sttus kesehtn ikn berdsrkn prmeter hemtologi. Kndidt bkteri probiotik yng digunkn untuk perlkun yitu isolt U, kren isolt tersebut memiliki ktivits milolitik dn proteolitik. Penelitin ini terdiri ts 5 perlkun, yitu: kontrol negtif, kontrol positif, perlkun 10 5 CFU/mL, perlkun 10 7 CFU/mL, dn perlkun 10 9 CFU/mL dengn msing-msing perlkun terdiri ts 3 ulngn. Penmbhn isolt bkteri pd pkn dilkukn dengn metode coting. Pkn diberikn secr t stition dengn frekuensi pemberin sebnyk 3 kli sehri. Uji tntng dilkukn pd hri ke-65 dengn penyuntikn A. hydrophil sebnyk 0,1 ml. Hsil penelitin ini menunjukkn bhw penmbhn bkteri kndidt probiotik dlm pkn tidk berbed nyt (P>0,05) terhdp prmeter pertumbuhn ikn lele. Akn tetpi mempengruhi totl eritrosit, kdr hemoglobin, dn tingkt kelngsungn hidup ikn lele pd pkn yng diberi probiotik 10 9 CFU/mL. Kt kunci: Ikn lele, bkteri probiotik, A. hydrophil.

6 ABSTRACT RIDHANA DWI MEILITA. Isoltion nd Selection of Cndidte Probiotic Bcteri from Culture Medi nd Intestine of Ctfish Clris sp. to Inhibit Bcteril infections Aeromons hydrophil. Supervised by SUKENDA nd RAHMAN. The purpose of this study ws to obtin bcteril isoltes s probiotic cndidte tht hve the potentil to inhibit of infection A. hydrophil in ctfish nd to evlute the effect of cndidte probiotic bcteri on fish growth nd helth sttus bsed on hemtologic prmeters. Cndidte probiotic bcteri used for tretment nmely U isolte, becuse this isolte hve mylolytic nd proteolytic ctivities. This study consisted of 5 tretments, nmely negtive control, positive control, tretment of 10 5 CFU/mL, tretment of 10 7 CFU/mL, nd tretment of 10 9 CFU/mL with ech tretment consisted of three replictions. The method of dding bcteri in feed mde by coting method. Probiotic coted feed given t stition with the frequency of dministrtion of 3 times dy. Chllenge test ws performed on dy 65 th with A. hydrophil injection of s much s 0.1 ml of 10 6 CFU/mL. The results of this study showed tht the ddition of cndidte probiotic bcteri in the diet ws not significntly different (P>0.05) on growth prmeters ctfish. But it ffected on the totl erythrocytes, hemoglobin levels, nd survivl rte t 10 9 CFU/mL of probiotic coted feed. Keywords: ctfish, probiotic bcteri, A. hydrophil.

7 ISOLASI DAN SELEKSI BAKTERI KANDIDAT PROBIOTIK DARI MEDIA PEMELIHARAAN DAN USUS IKAN LELE Clris sp. UNTUK MENGHAMBAT INFEKSI BAKTERI Aeromons hydrophil RIDHANA DWI MEILITA Skripsi sebgi slh stu syrt untuk memperoleh gelr Srjn Periknn pd Deprtemen Budidy Perirn DEPARTEMEN BUDIDAYA PERAIRAN FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2016

8

9

10

11 PRAKATA Puji dn syukur penulis pnjtkn kepd Allh SWT ts segl nikmt dn kruni-ny sehingg skripsi dengn judul Isolsi dn Seleksi Bkteri Kndidt Probiotik dri Medi Pemelihrn dn Usus Ikn Lele Clris sp. untuk Menghmbt Infeksi Bkteri Aeromons hydrophil berhsil diselesikn. Penelitin ini dilksnkn sejk buln Februri 2015-Jnuri 2016 bertempt di Lbortorium Kesehtn Ikn dn Lbortorium Lingkungn Akukultur, Deprtemen Budidy Perirn, Fkults Periknn dn Ilmu Kelutn, Institut Pertnin Bogor. Penulis mengucpkn terim ksih kepd semu pihk yng telh membntu dn proses penyusunn skripsi ini, terutm kepd: 1. Bpk Dr Ir Sukend, MSc dn Bpk Rhmn, SPi MSi selku dosen pembimbing yng telh bnyk memberikn bimbingn dn srn. 2. Bpk Dr Ir Kukuh Nirml, MSc selku dosen penguji tmu dn Bpk Dr Alimuddin, SPi MSc selku dosen komisi progrm studi ts kehdirn dn srnny kepd penulis. 3. Bpk Ddng Shfruddin, MS selku dosen pembimbing kdemik. 4. Bpk Mey Isynto dn mmh Sofih, sert kkk kecil Arin Rizki Apriynti ts do, ksih syng, perhtin dn dukungnny. 5. Bpk Rnt, Kk Dendi Hidytullh, Kk Windu Sukendr ts bntun dn srnny selm penelitin. 6. Temn-temn BDP 48, khususny LKI 48 (My Silvni Npitupulu, Hn Nfish, Andini Yudit Sri, Dyh Anggun Prmit Indrswri, Fdhiltun, Kiki Amli Prtiwi, Mulyti Hsnh, M. Mufthi Rfsynzni, Iqbl Wijy, Syif Afinti, Hesti Irissnti, Adel Christin P. Skeru, Fenti Nurul, Rism Suryni, Erminus Smley, dn Adhiet Yogi Utomo), Kk Din Novit Sri, Wuln N. Rkhmwti, Rhmni Abd, Hmzh M. Ihsn, Amnh Hqqul Azli, Kk Dind Jnuri Cipt, Kk Bermn Fernndo Sipyung, Kk Noberlin Solikhin, Fifin Bint Kuml ts dukungn dn bntunny selm penelitin. 7. Aniss Wuln Pertiwi, Sfir Mulidin, Ress Ysmine Herlmbng, Vlentine V.G Hutpe, Deo Grci Chydi, Rbitul Awliyh, Nesty Vviry Krtik Dewi, Ayu Fkhrin, Rizky Puji Lestri, dn Lin Suci Rmdhn yng sellu mendukung dn menyemngti. 8. Semu pihk yng tidk dpt disebutkn stu per stu yng telh memberikn dukungn kepd penulis dlm menyelesikn penelitin. Semog kry ilmih ini bermnft. Bogor, Mei 2016 Ridhn Dwi Meilit

12

13 DAFTAR ISI DAFTAR TABEL...xv DAFTAR GAMBAR...xv DAFTAR LAMPIRAN...xvi PENDAHULUAN...1 Ltr Belkng...1 Tujun Penelitin...2 METODE...2 Mteri Uji...2 Prosedur Penelitin...2 Rncngn Penelitin...5 Prmeter Penelitin...5 Anlisis Dt...7 HASIL DAN PEMBAHASAN...8 Hsil...8 Pembhsn...16 KESIMPULAN DAN SARAN...18 Kesimpuln...18 Srn...18 DAFTAR PUSTAKA...19 LAMPIRAN...21 RIWAYAT HIDUP...31

14

15 DAFTAR TABEL 1. Rncngn perlkun uji in vivo pd ikn lele Prmeter kulits ir dn stun selm pemelihrn Krkteristik mikroskopis isolt bkteri kndidt probiotik hsil pewrnn grm Hsil pengmtn bentuk morfologi koloni bkteri Hsil pengmtn pewrnn Grm dn uji biokimi Hsil identifiksi isolt bkteri Hsil pengmtn ktivits milolitik dn proteolitik DAFTAR GAMBAR 1. Hsil uji ktivits enzim () milse dn (b) proteolitik. Keterngn: (+) terdpt ktivits dn (-) tidk terdpt ktivits Tingkt kelngsungn hidup ikn lele pd uji ptogenits. Perlkun K (PBS), isolt M2 (Bcillus sp.), isolt M3 (Listeri sp.), dn isolt U (Bcillus sp.) Tingkt kelngsungn hidup ikn lele setelh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C) Jumlh konsumsi pkn ikn lele selm pemberin pkn uji dn setelh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C) Konversi pkn ikn lele selm pemberin pkn uji dn setelh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C) Lju pertumbuhn hrin ikn lele selm pemberin pkn uji dn setelh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C) Totl eritrosit ikn lele pd wl pemelihrn, sebelum uji tntng, dn sesudh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C) Totl leukosit ikn lele pd wl pemelihrn, sebelum uji tntng, dn sesudh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C) Kdr hemtokrit ikn lele pd wl pemelihrn, sebelum uji tntng, dn sesudh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C) Kdr hemoglobin ikn lele pd wl pemelihrn, sebelum uji tntng, dn sesudh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif

16 (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C) DAFTAR LAMPIRAN 1. Prosedur identifiksi tip bkteri dengn uji biokimi Hsil identifiksi dn krkteristik bkteri A. hydrophil Dt nlisis sttistik prmeter uji Prmeter dn prosedur penelitin... 29

17 PENDAHULUAN Ltr Belkng Ikn lele merupkn slh stu komodits ikn ir twr dengn peningktn permintn konsumsi dn produksi budidy yng terus meningkt di Indonesi. Pencpin peningktn produksi periknn budidy untuk ikn lele pd thun 2014 sebesr ton (LAKIP-KKP 2014). Peningktn produksi ikn lele didukung dengn sistem budidy intensif tu pdt penebrn tinggi. Nmun penerpn budidy intensif sering mengkibtkn ikn rentn terhdp serngn penykit. Penykit yng sering menyerng ikn lele yitu motile eromond septicemi (MAS) yng disebbkn oleh bkteri Aeromons hydrophil. Menurut Mngunwrdoyo et l. (2010) ikn-ikn yng terserng A. hydrophil pd umumny menglmi pendrhn yng melus pd permukn kulit (hemorrhgic septicemi), diikuti dengn timbulny luk terbuk (ulcer) pd permukn tubuh tu ke jringn. Upy pennggulngn yng bis dilkukn yitu dengn penggunn ntibiotik. Penggunn ntibiotik dlm kukultur dpt mempengruhi kesehtn hewn dn mnusi yng dpt mengkibtkn bkteri menjdi resisten terhdp ntibiotik yng digunkn (Cbello 2006), sehingg dilkukn upy lin untuk menghmbt infeksi bkteri A. hydrophil yitu dengn pemberin probiotik. Probiotik merupkn suplemen mknn yng berup mikrob hidup dn memberikn keuntungn pd inng khususny dlm keseimbngn mikroflor usus (Fuller 1989). Menurut Nyk (2010) dn Blcázr et l. (2006) probiotik dlh mikroorgnisme yng dpt bermnft pd kesehtn inng, digunkn untuk peningktn produksi kukultur sebgi suplemen mknn, peningktn resistensi terhdp penykit, dn peningktn kinerj pertumbuhn, sert meningktkn kesehtn orgnisme. Beberp penelitin sebelumny mengeni probiotik menunjukkn bhw pemberin probiotik Bcillus P4I1 dengn dosis 10 4 CFU/mL efektif menekn pertumbuhn A. hydrophil, mencegh penykit MAS dengn meningktkn respons imun dn tingkt kelngsungn hidup sert lju pertumbuhn hrin ikn lele dumbo Clris griepinus (Ulkhq 2014). Selin itu, menurut Utmi (2015) bhw pemberin kultur kering probiotik dpt berpengruh terhdp prmeter gmbrn drh. Isolsi bkteri probiotik sudh dilkukn oleh Firdus (2012) yng bersl dri ir kolm pemelihrn dn usus ikn nil sert dilkukn jug oleh Agustin (2007) dri lingkungn pemelihrn dn usus ikn lele dumbo yng mendptkn bkteri Pseudomons cepci dn Kurthi gibsonii yng bis digunkn sebgi kndidt probiotik dn meningktkn kesehtn ikn lele dumbo. Putr (2010) menjelskn bhw bkteri yng diisolsi dlm slurn pencernn ikn memiliki potensi cukup besr sebgi probiotik kren menghsilkn enzim exogenous dn dpt hidup bik di slurn pencernn sehingg dpt membntu predigestion. Selin itu, menurut Agustin (2007) mikroflor yng bersl dri lingkungn perirn dpt menghdpi serngn penykit.

18 2 Oleh kren itu, penelitin ini dilkukn dengn mengisolsi bkteri dri medi pemelihrn dn usus ikn lele untuk mendptkn bkteri kndidt probiotik dn dilkukn uji ktivits milolitik dn proteolitik gr dikethui kemmpun untuk menghidrolisis krbohidrt dn protein, sert pengruh perbedn kepdtn bkteri yng diberikn mellui pkn terhdp kelngsungn hidup, prmeter pertumbuhn dn hemtologi. Tujun Penelitin Penelitin ini bertujun untuk mendptkn bkteri kndidt probiotik yng berpotensi untuk menghmbt infeksi bkteri A. hydrophil pd ikn lele dn mengevlusi pengruh penmbhn bkteri kndidt probiotik dengn kepdtn bkteri yng berbed yng dicmpurkn ke pkn terhdp pertumbuhn dn sttus kesehtn ikn berdsrkn prmeter hemtologi. METODE Mteri Uji Mteri uji yng digunkn pd penelitin ini dlh bkteri kndidt probiotik yng diisolsi dri medi pemelihrn dn usus ikn lele di Des Cimpe, Bogor. Bkteri ptogen yng digunkn dlh bkteri A. hydrophil yng diperoleh dri Lbortorium Kesehtn Ikn. Ikn lele yng digunkn bersl dri Cimpe, Bogor, Jw Brt dengn bobot rt-rt wl 16,15 ± 0,07 g. Prosedur Penelitin Penelitin ini terdiri ts du thp penelitin. Thpn tersebut yitu (1) isolsi dn seleksi kndidt probiotik, dn (2) uji bkteri kndidt probiotik terpilih untuk penceghn penykit MAS. Berikut ini merupkn prosedur penelitin thp pertm. Isolsi Bkteri dri Medi Pemelihrn Air smpel dri medi pemelihrn sebgi lrutn stok diencerkn dengn phosphte buffer sline (PBS) hingg pengencern Smpel ir yng diencerkn pd 10-5, 10-6, dn 10-7 disebr sebnyk 50 µl pd cwn petri berisi medi trypticse soy gr (TSA) llu diinkubsi pd suhu o C selm 24 jm (Firdus 2012). Isolsi Bkteri dri Usus Ikn Lele Usus ikn lele dimbil dengn cr dibedh dn dipotong. Usus ditimbng sebnyk 0,1 g, dicmpurkn dengn 0,9 ml PBS dn dimsukkn dlm tbung mikro llu digerus hingg hlus. Hsil gerusn ini dijdikn stok inokulum, kemudin 0,1 ml stok diencerkn ke dlm 0,9 ml PBS hingg pengencern Suspensi smpel pd pengencern 10-5, 10-6, dn 10-7 disebr sebnyk 50 µl pd

19 cwn petri berisi medi TSA llu diinkubsi pd suhu o C selm 24 jm. Setelh diinkubsi, koloni tunggl yng tumbuh pd medi kultur dn memiliki bentuk berbed dimbil dengn menggunkn Ose llu digores pd cwn petri berisi medi TSA steril dengn metode gores kudrn. Isolt yng telh digores, diinkubsi kembli pd suhu o C selm 24 jm untuk mendptkn isolt murni berup koloni tunggl. Isolt murni dipindhkn ke tbung reksi berisi medi TSA steril untuk disimpn sebgi stok isolt bkteri kndidt probiotik dn digunkn untuk uji selnjutny (Firdus 2012). Identifiksi Tip Bkteri Identifiksi bkteri yng dilkukn dengn metode Cown yitu dengn melkukn uji pewrnn Grm, uji ktlse, uji oksidse, uji motilits, dn uji oksidtif/fermenttif (O/F). Prosedur yng dilkukn untuk identifiksi tip bkteri dpt diliht pd Lmpirn 1. Seleksi Bkteri Kndidt Probiotik Seleksi bkteri kndidt probiotik dilkukn untuk mendptkn bkteri yng berpotensi dipilih sebgi probiotik. Hsil dri isolsi bkteri tersebut diseleksi dengn melkukn uji milolitik dn proteolitik. Uji milolitik dn proteolitik Uji milolitik dn proteolitik dilkukn untuk mengethui ktivits enzim milse dn protese yng dihsilkn oleh msing-msing isolt, untuk menunjukkn kemmpun dlm menghidrolisis krbohidrt dn protein. Bkteri kndidt probiotik ditumbuhkn pd medi TSA. Medi TSA untuk uji milolitik ditmbhkn pti sebnyk 2%. Kemmpun menghidrolisis krbohidrt ditndi dengn terbentukny zon bening di sekitr koloni yng tumbuh setelh medi digenngi dengn regen KI 1%. Sedngkn medi TSA untuk uji proteolitik ditmbhkn dengn susu skim sebnyk 2%. Kemmpun menghidrolisis protein ditndi dengn terbentukny zon bening di sekitr koloni yng tumbuh. Isolt yng menunjukkn ktivits milolitik dn proteolitik dipilih untuk dilkukn uji ptogenits (Firdus 2012). Uji ptogenits Isolt yng pling potensil berdsrkn uji milolitik dn proteolitik diuji ptogenitsny pd benih lele untuk mengethui tingkt kemnn isolt bkteri. Pengujin ini dilkukn dengn cr suspensi isolt kndidt probiotik kepdtn 10 7 CFU/mL sebnyk 0,1 ml disuntikkn pd bgin intrmuskulr tubuh lele. Benih lele dipelihr dlm kurium yng diisi ir dengn volume 30 L dengn kepdtn 10 ekor/l dn diberi pkn komersil. Benih dipelihr selm 7 hri dn tingkt kelngsungn hidupny dimti setip hri dn dibndingkn dengn kontrol (penmbhn dengn PBS 0,1 ml). 3

20 4 Uji In Vivo Stu isolt bkteri kndidt probiotik yng pling potensil berdsrkn uji milolitik dn proteolitik sert uji ptogenits, selnjutny diuji keefektivitsny dlm menghmbt bkteri A. hydrophil pd ikn lele. Berikut ini merupkn prosedur penelitin thp kedu. Persipn Wdh Akurium dengn ukurn ( ) cm 3 dicuci dengn menggunkn sbun llu dibils dengn ir bersih. Setelh itu, dilkukn desinfeksi kurium dengn mengunkn klorin sebnyk 30 ppm dn dikeringkn selm 24 jm. Setelh itu, kurium diisi dengn ir yng bersl dri tndon hingg mencpi volume 30 L. Akurium yng telh diisi ir diberi ersi. Jumlh ersi yng digunkn sebnyk 15 buh tu terdpt 1 ersi per kurium. Persipn Ikn Lele Ikn lele terlebih dhulu dipelihr dlm kurium stok dengn ukurn (1 0,6 0,5) m 3 untuk proses dptsi selm 7 hri. Setelh itu, ikn dipindhkn ke dlm kurium perlkun dengn kepdtn 15 ekor per kurium. Selm proses dptsi ikn diberi pkn komersil dengn frekuensi pemberin sebnyk 3 kli sehri secr t stition. Persipn Pkn Uji Pkn yng digunkn pd penelitin ini dlh pkn komersil dengn kdr protein 30-32%. Pencmpurn probiotik dengn pkn dilkukn setip hri. Sebnyk 1 ml/100 g pkn (1%) kultur segr probiotik yng ditmbhkn 2 ml/100 g pkn (2%) putih telur sebgi binder dicmpurkn ke dlm pkn. Selnjutny pkn diduk hingg mert dn dikeringudrkn selm 15 menit (Brillint 2014). Pkn tersebut diletkkn pd wdh kedp udr kemudin dimsukkn ke dlm lemri pendingin. Pemelihrn Ikn Selm Perlkun Pengujin in vivo dilkukn untuk mengethui pengruh isolt probiotik yng dicmpurkn mellui pkn terhdp dy thn ikn lele. Pemberin kultur segr isolt probiotik yng diberikn mellui pkn selm pemelihrn ikn lele dengn metode penceghn yitu pemberin pkn uji sebelum diuji tntng dengn A. hydrophil. Frekuensi pemberin pkn sebnyk tig kli dlm sehri yitu pgi ( WIB), sing ( WIB), dn sore ( WIB) dengn metode pemberin pkn secr t stition. Kulits ir tetp dijg selm pemelihrn dengn pergntin ir sebnyk 80% setip 3 hri sekli. Prmeter kulits ir yng dimti pd penelitin ini yitu suhu, oksigen terlrut, ph, dn moni. Uji Tntng dengn Bkteri A. hydrophil Uji tntng dilkukn setelh 65 hri pemelihrn ikn lele yng diberikn pkn dengn penmbhn bkteri kndidt probiotik. Bkteri ptogen yng digunkn untuk uji tntng yitu bkteri A. hydrophil yng sudh dimurnikn pd medi TSA dn diinkubsi selm 24 jm. Identifiksi yng dilkukn yitu pewrnn Grm, uji ktlse, uji oksidse, uji motilits, uji oksidtif/fermenttif

21 (O/F) (Brrow dn Felthm 1993), dn uji krkteristik dengn menggunkn KIT API 20E. Hsil identifiksi dn krkteristik bkteri A. hydrophil dpt diliht pd Lmpirn 2. Rncngn Penelitin Penelitin ini terdiri ts 5 perlkun dn 3 ulngn. Rncngn perlkun uji in vivo pd ikn lele perlkun disjikn pd Tbel 1. Tbel 1 Rncngn perlkun uji in vivo pd ikn lele Simbol Perlkun Uji tntng PBS A. hydrophil K- Pkn komersil K+ Pkn komersil A Pkn komersil + bkteri 10 5 CFU/mL B Pkn komersil + bkteri 10 7 CFU/mL C Pkn komersil + bkteri 10 9 CFU/mL 5 Prmeter Penelitin Tingkt Kelngsungn Hidup (TKH) Tingkt kelngsungn hidup (TKH) merupkn persentse orgnisme yng hidup pd khir pemelihrn dri jumlh wl yng dipelihr dlm sutu wdh. Tingkt kelngsungn hidup dihitung pd khir pemelihrn dengn menggunkn rumus (Effendie 1979). Keterngn prmeter penelitin di Lmpirn 4. TKH (%) = Nt No 100 Jumlh Konsumsi Pkn (JKP) Jumlh konsumsi pkn (JKP) ditentukn berdsrkn jumlh pkn yng msuk ke dlm tubuh ikn lele. Perhitungn ini ditentukn dengn menimbng sis pkn yng tidk termkn oleh ikn lele. Keterngn prmeter penelitin di Lmpirn 4. JKP = pkn yng diberikn sis pkn Konversi Pkn (KP) Konversi pkn (KP) dihitung pd khir pemelihrn dengn menggunkn rumus (Zonneveld et l. 1991). Keterngn prmeter penelitin di Lmpirn 4. KP = F [Bt + Bm] Bo

22 6 Lju Pertumbuhn Hrin (LPH) Lju pertumbuhn hrin (LPH) menunjukkn persentse pertumbuhn bobot hrin ikn selm ms pemelihrn. LPH dpt dihitung dengn menggunkn rumus (Huismn 1987). Keterngn prmeter penelitin di Lmpirn 4. t LPH (%) = ( Wt 1) 100 Wo Prmeter Hemtologi Totl Eritrosit Totl eritrosit dihitung berdsrkn Blxhll dn Disley (1973). Prosedurny dpt diliht di Lmpirn 4. Rumus yng digunkn untuk perhitungn yitu: Totl Eritrosit (sel/mm 3 ) = Jumlh drh /fp Jumlh smpel kotk volume kotk Totl Leukosit Totl leukosit dihitung berdsrkn Blxhll dn Disley (1973). Prosedurny dpt diliht di Lmpirn 4. Rumus yng digunkn untuk perhitungn yitu: Totl Leukosit (sel/mm 3 ) = Σ sel terhitung 1 volume kotk 1/fktor pengencer Kdr Hemtokrit Kdr hemtokrit dihitung dengn rumus (Anderson dn Siwicki 1993). Prosedur dn keterngnny dpt diliht di Lmpirn 4. Kdr Hemtokrit (%) = 100 b Kdr Hemoglobin Kdr Hb dpt dimti dengn meliht skl kuning pd tbung Hb-meter (Wedemeyer dn Ysutke 1977). Prosedurny dpt diliht di Lmpirn 4. Kulits Air Prmeter kulits ir yng dimti pd pemelihrn ikn lele st uji ptogenits yitu suhu, ph, oksigen terlrut dn moni (Tbel 2). Pengukurn kulits ir dilkukn pd wl dn khir pemelihrn.

23 Tbel 2 Prmeter kulits ir dn stun selm pemelihrn Prmeter Perlkun Stndr K- K+ A B C Nili ph 6,5-8,5 6,95-7,17-7,20-7,18-7,11- SNI 01-7,55 7,55 7,55 7,55 7, (2000) Suhu ( C) SNI 01- Oksigen terlrut (mg/l) Amoni (mg/l) 4,3-6,4 4,2-6,4 5,4-6,4 4,6-6,4 4,2-6, (2000) 4,0 SNI (2000) 0,0009-0,0028 0,0009-0,0024 0,0009-0,0027 0,0009-0,0034 0,0009-0,0034 <0,2 Albster & Lloyd (1982) Keterngn: K- = kontrol negtif; K+ = kontrol positif; A = perlkun 10 5 CFU/mL; B = perlkun 10 7 CFU/mL, dn C = perlkun 10 9 CFU/mL. Anlisis Dt Penelitin ini menggunkn rncngn ck lengkp dengn 5 perlkun dn 3 kli ulngn. Dt dinlisis dengn menggunkn Microsoft Excel 2013 dn SPSS 22.0 sert uji lnjut Duncn. Prmeter yng dilkukn nlisis secr kuntittif dlh tingkt kelngsungn hidup, jumlh konsumsi pkn, konversi pkn, lju pertumbuhn hrin, totl eritrosit, totl leukosit, kdr hemtokrit, dn kdr hemoglobin. 7

24 8 HASIL DAN PEMBAHASAN Hsil Isolsi Bkteri Kndidt Probiotik Bkteri kndidt probiotik yng telh diisolsi dri medi pemelihrn ikn lele dn usus ikn lele berjumlh 10 isolt. Seluruh isolt tersebut diidentifiksi mellui pewrnn Grm dn uji biokimi. Hsil pewrnn Grm dengn krkteristik mikroskopis dpt diliht pd Tbel 3. Tbel 3 Krkteristik mikroskopis isolt bkteri kndidt probiotik hsil pewrnn grm Jenis Grm Morfologi sel Asl Isolt Loksi Positif Negtif Bsil Coccus (+) (-) Medi pemelihrn Des Cimpe, ikn lele Bogor Des Cimpe, Usus ikn lele Bogor Subtotl Totl Hsil isolsi bkteri didptkn 8 isolt bkteri bsil Grm positif dn 2 isolt bkteri kokus Grm negtif. Isolt tersebut dimurnikn dengn metode gores kudrn dn dilnjutkn dengn uji biokimi yng terdiri dri uji O/F, uji motilits, uji ktlse, dn uji oksidse. Isolt yng didptkn dimti bentuk morfologi koloni bkteri yng meliputi wrn, bentuk, elevsi, dn tepin. Hsil pengmtn bentuk morfologiny dpt diliht pd Tbel 4. Hsil pd Tbel 4 berdsrkn wrn, bentuk, elevsi, dn tepin menunjukkn bhw beberp isolt memiliki kesmn ntr lin isolt M1 dn M5; isolt M2, M4, M7 dn U. Tbel 4 Hsil pengmtn bentuk morfologi koloni bkteri Simbol Isolt Wrn Bentuk Elevsi Tepin M1 Kuning Bult Cembung Bult M2 Putih Bult Dtr Bult M3 Putih Tidk rt Dtr Bergelombng M4 Putih Bult Dtr Bult M5 Kuning Bult Cembung Bult M6 Putih Bult Cembung Bult M7 Putih (kecil) Bult Dtr Bult M8 Krem (mud) Filmen Dtr Berfili M9 Krem Bult Cembung Bult U Putih Bult Dtr Bult Keterngn: Isolt M1-M9 = isolt bersl dri medi pemelihrn dn isolt U = isolt bersl dri usus ikn lele.

25 Isolt yng didptkn dimti pewrnn Grm dn uji biokimi yng berup uji ktlse, uji oksidse, uji oksidtif/fermenttif (O/F), dn uji sulfide indol motil (SIM). Hsil pengmtn dpt diliht pd Tbel 5. Hsil pd Tbel 5 berdsrkn pewrnn grm, uji ktlse, uji oksidse, uji O/F, dn uji SIM menunjukkn bhw beberp isolt memiliki kesmn ntr lin isolt M3 dn M8. Tbel 5 Hsil pengmtn pewrnn Grm dn uji biokimi Simbol Isolt Pewrnn Grm Ktlse Oksidse O/F SIM M1 Coccus F + M2 Bsil O + M3 Bsil F + M4 Bsil F + M5 Coccus F + M6 Bsil F - M7 Bsil N + M8 Bsil F + M9 Bsil O + U Bsil N + 9 Identifiksi Tip Bkteri Hsil yng didptkn dri uji pewrnn Grm, uji ktlse, uji oksidse, uji motilits, dn uji O/F diidentifiksi dengn metode Cown. Hsil identifiksi bkteri dri isolt M1 smpi isolt U dpt diliht pd Tbel 6. Tbel 6 Hsil identifiksi isolt bkteri Simbol Isolt Identifiksi bkteri (Brrow dn Felthm 1993) M1 Stphylococcus sp. M2 Bcillus sp. M3 Listeri sp. M4 Bcillus sp. M5 Stphylococcus sp. M6 Actinobcillus sp. M7 Kurthi sp. M8 Listeri sp. M9 Pseudomons sp. U Bcillus sp. Hsil identifiksi bkteri pd Tbel 6 menunjukkn isolt M1 dn M5 bergenus Stphylococcus sp.; isolt M2, M4, dn U bergenus Bcillus sp.; isolt M3 dn M8 bergenus Listeri sp.; isolt M6 bergenus Actinobcillus sp.; isolt M7 bergenus Kurthi sp.; dn isolt M9 bergenus Pseudomons sp. Uji Aktivits Amilolitik dn Proteolitik Sebnyk 10 isolt dilkukn uji milolitik dn proteolitik. Isolt yng menunjukkn ktivits milolitik dn ktivits proteolitik msing-msing terdiri ts 5 isolt dn 4 isolt. Hsil tersebut dpt diliht pd Tbel 7.

26 10 Tbel 7 Hsil pengmtn ktivits milolitik dn proteolitik Simbol Isolt Zon ktivits milolitik Zon ktivits proteolitik M1 + - M2 + + M3 + + M4 - - M5 + + M6 - - M7 - - M8 - - M9 + - U + + Keterngn: (+) menunjukkn dny ktivits dn (-) tidk menunjukkn dny ktivits Hsil uji ktivits milolitik dpt diliht pd Gmbr 1(), koloni dengn tnd (+) memperlihtkn terbentukny zon bening dn koloni dengn tnd (-) tidk membentuk zon bening. Sedngkn hsil uji ktivits proteolitik diliht pd Gmbr 1(b). () (b) Gmbr 1 Hsil uji ktivits enzim () milse dn (b) proteolitik. Keterngn: (+) terdpt ktivits dn (-) tidk terdpt ktivits Uji Ptogenits Uji ptogenits dilkukn dengn menggunkn 3 isolt yng menunjukkn ktivits milolitik dn proteolitik, yitu isolt M2, M3, dn U. Uji ini dilkukn untuk memstikn bhw isolt yng digunkn tidk menyebbkn penykit. Hl tersebut dpt diliht dri nili tingkt kelngsungn hidup yng berkisr 86,67%- 96,67%. Hsil pengmtn tingkt tingkt kelngsungn hidup ikn lele pd uji ptogenits dpt diliht pd Gmbr 2.

27 11 100,00 86,67 96,67 96,67 93,33 Tingkt Kelngsungn Hidup (%) 80,00 60,00 40,00 20,00 0,00 K M2 M3 U Perlkun Gmbr 2 Tingkt kelngsungn hidup ikn lele pd uji ptogenits. Perlkun K (PBS), isolt M2 (Bcillus sp.), isolt M3 (Listeri sp.), dn isolt U (Bcillus sp.). Huruf yng berbed di dlm digrm menunjukkn hsil yng berbed nyt (P<0,05). Hsil yng didptkn ntr semu perlkun tidk berbed nyt, sehingg dpt dinytkn bhw isolt M2, M3, dn U mn untuk digunkn. Oleh kren itu, isolt yng dipilih untuk uji in vivo yitu isolt U (Bcillus sp.) dri usus ikn lele. Uji In Vivo Uji in vivo dilkukn dengn pemelihrn ikn lele selm 65 hri. Pkn yng diberikn berup pkn komersil dn ditmbhkn isolt U dengn kepdtn yng berbed. Tingkt Kelngsungn Hidup (TKH) Tingkt kelngsungn hidup (TKH) ikn lele setelh uji tntng berkisr ntr 23,33%-100,00%, untuk perlkun K- dn C berbed nyt (P<0,05) dengn K+, sedngkn perlkun A dn B tidk berbed nyt (P>0,05) dengn K+. Hsil tersebut dpt diliht pd Gmbr 3.

28 12 Tingkt Kelngsungn Hidup (%) 120,00 100,00 80,00 60,00 40,00 20,00 0,00 100,00 33,33 36,67 23,33 23,33 c bc c b K- K+ A B C Setelh uji tntng Gmbr 3 Tingkt kelngsungn hidup ikn lele setelh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C). Huruf yng berbed di dlm digrm menunjukkn hsil yng berbed nyt (P<0,05). Jumlh Konsumsi Pkn (JKP) Jumlh konsumsi pkn (JKP) ikn lele selm pemberin pkn uji berkisr ntr 1,39 kg-1,49 kg dn tidk berbed nyt (P>0,05) untuk tip perlkun. JKP tertinggi yitu pd perlkun K-, sedngkn yng terendh pd perlkun B. Hsil tersebut dpt diliht pd Gmbr 4. Jumlh Konsumsi Pkn (kg) 1,80 1,60 1,40 1,20 1,00 0,80 0,60 0,40 0,20 0,00 1,49 ± 0,07 1,38 ± 0,18 1,46 ± 0,08 1,39 ± 0,10 1,40 ± 0,13 K- K+ A B C Perlkun Gmbr 4 Jumlh konsumsi pkn ikn lele selm pemberin pkn uji dn setelh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C). Huruf yng berbed di dlm digrm menunjukkn hsil yng berbed nyt (P<0,05). Konversi Pkn (KP) Konversi pkn (KP) ikn lele selm pemberin pkn uji berkisr ntr 1,09-1,18 dn tidk berbed nyt (P>0,05) untuk tip perlkun. Nili KP tertinggi yitu pd perlkun K+, sedngkn yng terendh pd perlkun A. Hsil tersebut dpt diliht pd Gmbr 5.

29 13 Konversi Pkn 1,40 1,20 1,00 0,80 0,60 0,40 0,20 0,00 1,17 ± 0,04 1,18 ± 0,05 1,09 ± 0,08 1,12 ± 0,02 1,12 ± 0,07 K- K+ A B C Perlkun Gmbr 5 Konversi pkn ikn lele selm pemberin pkn uji dn setelh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C). Huruf yng berbed di dlm digrm menunjukkn hsil yng berbed nyt (P<0,05). Lju Pertumbuhn Hrin (LPH) Lju pertumbuhn hrin (LPH) ikn lele selm pemberin pkn uji berkisr ntr 2,79%-3,00% dn tidk berbed nyt (P>0,05) untuk tip perlkun. LPH tertinggi yitu pd perlkun A, sedngkn terendh pd perlkun K+. Hsil tersebut dpt diliht pd Gmbr 6. Lju Pertumbuhn Hrin (%) 3,50 3,00 2,50 2,00 1,50 1,00 0,50 0,00 2,89 ± 0,09 2,79 ± 0,22 3,00 ± 0,16 2,91 ± 0,22 2,88 ± 0,08 K- K+ A B C Perlkun Gmbr 6 Lju pertumbuhn hrin ikn lele selm pemberin pkn uji dn setelh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C). Huruf yng berbed di dlm digrm menunjukkn hsil yng berbed nyt (P<0,05). Totl Eritrosit Totl eritrosit ikn lele pd wl pemelihrn sebesr 1, sel/mm 3. Totl eritrosit menglmi peningktn selm pemelihrn pd semu perlkun dn totl eritrosit tertinggi pd perlkun B sebesr 2, sel/mm 3. Setelh uji tntng totl eritrosit menglmi penurunn pd semu perlkun dn berbed

30 14 nyt (P<0,05) dengn perlkun K+ sebesr 1, sel/mm 3. Perlkun A, B, dn C tidk berbed nyt. Hsil tersebut dpt diliht pd Gmbr 7. Totl Eritrosit ( 10 6 sel/mm 3 ) 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 1,04 1,04 1,04 1,04 1,04 1,73 1,67 b b 2,30 1,99 b 1,84 Awl sebelum uji tntng Setelh uji tntng b 1,52 b 1,19 c 1,89 1,98 1,89 K- K+ A B C Gmbr 7 Totl eritrosit ikn lele pd wl pemelihrn, sebelum uji tntng, dn sesudh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C). Huruf yng berbed di dlm digrm menunjukkn hsil yng berbed nyt (P<0,05). Totl Leukosit Totl leukosit ikn lele pd wl pemelihrn sebesr 8, sel/mm 3. Setelh uji tntng totl leukosit menglmi penurunn pd semu perlkun, perlkun A dn B berbed nyt dengn K+ sebesr 7, sel/mm 3. Hsil tersebut dpt diliht pd Gmbr 8. Totl Leukosit ( 10 4 sel/mm 3 ) 20,00 15,00 10,00 5,00 0,00 8,60 8,60 8,60 8,60 8,60 12,75 14,50 10,80 7,95 6,85 b bc d cd b bc c b 7,10 7,25 6,35 6,80 5,90 Awl Sebelum uji tntng Setelh uji tntng K- K+ A B C Gmbr 8 Totl leukosit ikn lele pd wl pemelihrn, sebelum uji tntng, dn sesudh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C). Huruf yng berbed di dlm digrm menunjukkn hsil yng berbed nyt (P<0,05). Kdr Hemtokrit Kdr hemtokrit ikn lele pd wl pemelihrn sebesr 32,71%. Kdr hemtokrit menglmi peningktn selm pemelihrn dn kdr hemtokrit

31 tertinggi pd perlkun A sebesr 39,25%. Nmun, setelh uji tntng kdr hemtokrit d yng meningkt dn d jug yng menurun. Perlkun K-, A, B berbed nyt dengn perlkun K+ sebesr 38,55%. Hsil tersebut dpt diliht pd Gmbr Kdr Hemtokrit (%) 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 32,71 32,71 32,71 32,71 32,71 36,28 39,25 35,45 35,13 33,97 b b b b 33,91 c 41,23 38,55 b 28,22 d 37,60 b 0,00 Awl Sebelum uji tntng Setelh uji tntng K- K+ A B C Gmbr 9 Kdr hemtokrit ikn lele pd wl pemelihrn, sebelum uji tntng, dn sesudh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C). Huruf yng berbed di dlm digrm menunjukkn hsil yng berbed nyt (P<0,05). Kdr Hemoglobin Kdr hemoglobin ikn lele pd wl pemelihrn sebesr 7,30 g%. Kdr hemoglobin menglmi peningktn selm pemelihrn dn kdr hemoglobin tertinggi pd perlkun C sebesr 9,10 g%. Setelh uji tntng kdr hemoglobin menglmi penurunn pd semu perlkun dn berbed nyt (P<0,05) dengn perlkun K+ sebesr 6,10 g%. Kdr hemoglobin tertinggi yitu pd perlkun B sebesr 8,30 g%. Hsil tersebut dpt diliht pd Gmbr 10.

32 16 Kdr Hemoglobin (g%) ,30 7,30 7,30 7,30 7,30 8,70 9,00 9,10 8,30 7,30 7,20 7,20 7,50 6,10 6,30 b b Awl Sebelum uji tntng Setelh uji tntng c c b b K- K+ A B C Gmbr 10 Kdr hemoglobin ikn lele pd wl pemelihrn, sebelum uji tntng, dn sesudh uji tntng pd kontrol negtif (K-), kontrol positif (K+), perlkun 10 5 CFU/mL (A), perlkun 10 7 CFU/mL (B), dn perlkun 10 9 CFU/mL (C). Huruf yng berbed di dlm digrm menunjukkn hsil yng berbed nyt (P<0,05). Pembhsn Hsil dri isolsi dri medi pemelihrn dn usus ikn lele didptkn 10 isolt kndidt probiotik. Isolt tersebut dimti bentuk morfologi koloni bkteriny (Tbel 4). Kemudin, dilkukn uji pewrnn grm dn uji biokimi (Tbel 5) dn dri hsil tersebut dilkukn identifiksi isolt bkteri. Selnjutny, dilkukn uji ktivits milolitik dn proteolitik untuk mengethui bhw isolt bkteri yng didptkn memiliki enzim yng dpt membntu mendegrdsi krbohidrt dn protein. Enzim merupkn ktlistor dlm hidrolisis protein, lemk dn krbohidrt menjdi bhn yng sederhn. Sekresi enzim dri sel digunkn untuk pencernn di lur sel tu dinding rongg slurn pencernn (Hndjni dn Widodo 2010). Bkteri berpengruh terhdp pencernn ikn dibuktikn dengn kemmpun memproduksi enzim proteolitik, milolitik, selulitik, dn lipolitik (Putr 2010). Hsil yng didptkn sesui dn ditunjukkn oleh beberp isolt yng memiliki ktivits milolitik dn proteolitik. Isolt M1, M2, M3, M5, M9, dn U menunjukkn hsil positif pd uji ktivits milolitik, sert isolt M2, M3, M5 dn U menunjukkn hsil positif pd uji ktivits proteolitik. Menurut Puspitsri et l. (2012), sebnyk kurng lebih 35% bkteri membntu proses degrdsi bhn orgnik dlm sistem pencernn. Bkteri proteolitik dpt mendegrdsi protein menjdi sm mino gr mmpu diserp tubuh. Gmbr 1 dn Tbel 7 menunjukkn contoh isolt terpilih yng memiliki ktivits milolitik dn proteolitik yng ditndi dny zon bening. Menurut Putr (2010), zon bening yng terbentuk menunjukkn bhw isolt tersebut mmpu menghidrolisis sumber krbon dn dimnftkn sebgi sumber energi oleh bkteri. Penmbhn bkteri kndidt probiotik yng digunkn pd penelitin ini bersl dri slurn pencernn ikn lele dn hsil seleksi dengn pengujin ktivits milolitik dn proteolitik. Menurut Putr (2010), enzim exogenous disekresikn oleh bkteri untuk mendegrdsi pkn, untuk memenuhi

33 kebutuhn krbon tu energi untuk kepentingn bkteri tersebut. Enzim exogenous yng disekresikn bkteri dpt meningktkn ktivits enzim slurn pencernn ikn uji. Nili tingkt kelngsungn hidup yng dimti dri uji ptogenits berkisr ntr 86,67%-96,67%. Isolt yng digunkn dlm uji in vivo yitu isolt U yng bersl dri usus ikn lele. Putr (2010) menjelskn bhw bkteri yng diisolsi dlm slurn pencernn ikn memiliki potensi cukup besr sebgi probiotik kren menghsilkn enzim exogenous dn dpt hidup bik di slurn pencernn sehingg dpt membntu predigestion. Setelh uji tntng tingkt kelngsungn hidup ikn lele berkisr ntr 23,33%-100,00%. Perlkun K- dn perlkun C berbed nyt (P<0,05) dengn perlkun K+. Jumlh konsumsi pkn (JKP) selm pemberin pkn yng diberi kndidt probiotik (pkn uji) berkisr ntr 1,39 kg-1,49 kg dn tidk berbed nyt (P>0,05) pd tip perlkun. Hl tersebut didug kren kndidt probiotik yng ditmbhkn ke dlm pkn tidk mempengruhi konsumsi pkn ikn lele. Konversi pkn dlh sutu ukurn yng menytkn rsio jumlh pkn yng dibutuhkn untuk menghsilkn 1 kg dging ikn kultur (Effendi 2004). Nili konversi pkn (KP) selm pemberin pkn uji berkisr ntr 1,09-1,18 dn tidk berbed nyt (P>0,05) pd tip perlkun. Nmun, nili konversi pkn terendh terdpt pd perlkun A yng didug kren kndidt probiotik tersebut dpt meningktkn efisiensi pkn yng digunkn. Menurut Putr (2010) bhw probiotik NP5 yng diberikn dpt meningktkn ktivits enzim milse dn protese dlm slurn pencernn ikn nil sehingg meningktkn efisiensi pkn. Pertumbuhn merupkn pertmbhn pnjng, bobot, dn volume dlm stun wktu tertentu. Lju pertumbuhn hrin (LPH) ikn lele selm pemberin pkn yng diberi tmbhn kndidt probiotik berkisr ntr 2,79%-3,00% dn tidk berbed nyt (P>0,05) pd tip perlkun. Menurut Arief et l. (2014) bhw bkteri pd probiotik dpt menyebbkn tingginy ktivits bkteri pd slurn pencernn dn perbedn jumlh bkteri probiotik yng terkndung dpt mempengruhi lju pertumbuhn, sert dpt berkitn dengn jenis probiotik dn spesies ikn. Nili totl eritrosit semu perlkun meningkt selm pemberin pkn yng ditmbhkn kndidt probiotik berkisr ntr (1,04-2,30) 10 6 sel/mm 3, sedngkn setelh uji tntng nili totl eritrosit menurun berkisr ntr (1,19-1,98) 10 6 sel/mm 3. Penurunn tersebut didug kren bkteri A. hydrophil yng diinfeksikn menyebbkn keruskn ginjl pd ikn lele. Menurut Nbib dn Psribu (1989) bhw jumlh eritrosit yng rendh menndkn ikn menderit nemi dn keruskn ginjl, kren ginjl merupkn orgn penghsil eritrosit. Setelh uji tntng nili totl eritrosit pd perlkun A, B, dn C berbed nyt (P<0,05) dengn perlkun K+ sebesr 1, sel/mm 3. Nili totl leukosit meningkt pd ms pemberin pkn yng ditmbhkn kndidt probiotik yitu berkisr ntr (6,85-14,50) 10 4 sel/mm 3, sedngkn setelh uji tntng totl leukosit menurun pd semu perlkun berkisr ntr (5,90-7,25) 10 4 sel/mm 3, dpt didug kren sudh terjdi proses pemulihn. Hl tersebut sesui dengn hsil penelitin Triyningsih et l. (2014) bhw ikn lele yng diinfeksi A. hydrophil menglmi penurunn nili totl leukosit muli hri ke-4 dn dpt dikrenkn dny gnggun pd fungsi orgn ginjl dn limp 17

34 18 dlm memproduksi leukosit. Setelh uji tntng nili totl leukosit pd perlkun A dn B berbed nyt (P<0,05) dengn perlkun K+ sebesr 7, sel/mm 3. Kdr hemtokrit ikn lele selm pemberin pkn yng diberi kndidt probiotik berkisr ntr 32,71%-39,25%. Kdr hemtokrit ikn lele tersebut msih termsuk golongn ikn yng seht, yng berkisr ntr 30%-44% (Affndi dn Tng 2002). Setelh uji tntng kdr hemtokrit berkisr ntr 28,22%- 41,23%. Menurut Nbib dn Psribu (1989) bhw peningktn kdr hemtokrit dpt didug kren dny eritrosit mud pd sel drh yng berukurn bundr dn lebih besr sehingg volume pdtn selny lebih tinggi dibndingkn sel drh norml. Setelh uji tntng kdr hemtokrit pd perlkun A dn B berbed nyt (P<0,05) dengn perlkun K+ sebesr 38,55%. Kdr hemoglobin ikn lele selm pemberin pkn yng diberi kndidt probiotik berkisr ntr 7,20 g%-9,10 g%. Setelh uji tntng kdr hemoglobin menglmi penurunn dn berkisr ntr 6,10 g%-8,30 g%. Kdr hemoglobin terkit dengn jumlh eritrosit, kn tetpi tidk sellu selrs dengn jumlh eritrosit dikrenkn kdr hemoglobin merupkn kndungn pigmen sel drh merh (Purwnti et l. 2014). Selin itu, menurut Hstuti dn Subndiyono (2011) bhw besr kecilny kdr hemoglobin yng terkndung dlm eritrosit menunjukkn kpsits pengngkutn oksigen oleh drh. Setelh uji tntng kdr hemoglobin pd perlkun A, B, dn C berbed nyt (P<0,05) dengn perlkun K+ sebesr 6,10 g%. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpuln Penelitin ini telh mendptkn bkteri yng berpotensi sebgi kndidt probiotik berdsrkn dny ktivits milolitik dn proteolitik yitu isolt M2, M3 dn U. Penmbhn bkteri kndidt probiotik isolt U dlm pkn tidk berbed nyt terhdp prmeter pertumbuhn ikn lele. Akn tetpi, pd perlkun yng diberikn pkn yng dilpisi probiotik 10 9 CFU/mL berbed nyt terhdp perlkun yng diberikn pkn tnp probiotik (K+) dri prmeter totl eritrosit, kdr hemoglobin, dn tingkt kelngsungn hidup setelh uji tntng. Srn Perlu dilkukn penelitin lebih lnjut dengn menggunkn dosis pemberin bkteri kndidt probiotik yng lebih tinggi dn jug dilkuknny totl plte count (TPC) untuk mengethui kepdtn bkteri yng msuk ke dlm usus ikn lele.

35 DAFTAR PUSTAKA 19 Affndi R, Tng UM Fisiologi Hewn Air. Riu (ID): Unri Press. Agustin Penpisn bkteri probiotik untuk pengendlin infeksi Aeromons hydrophil pd ikn lele dumbo Clris sp. Aqucultur Indonesin 8(3): Albster JS, Lloyd RS Wter Qulity Criteri for Fresh Wter Fish. Cmbridge: University Press. Anstiwn Isolsi dn krkterissi bkteri probiotik yng bersl dri usus itik pedging Ans domesticus. [skripsi]. Mkssr (ID): Universits Hsnuddin. Anderson DP, Siwicki AK Bsic hemtology nd serology for fish helth progrms. Pper presented in second symposium on diseses in Asin Aquculture Aqutic Animl Helth nd the Environment. Phuket, Thilnd th October Arief M, Fitrini N, Subekti S Pengruh pemberin probiotik berbed pd pkn komersil terhdp pertumbuhn dn efisiensi pkn ikn lele sngkuring Clris sp.. Jurnl Ilmih Periknn dn Kelutn 6(1): Blcázr JL, Bls ID, Ruiz-Zrzuel I, Cunninghm D, Vendrell D, nd Muzquiz JL The role of probiotics in quculture. Veterinry Microbiology 114: Brrow GI, Felthm RKA Cown nd steel s mnul for the identifiction of medicl bcteri-third edition. United Kingdom. Cmbridge University Press. Blxhll PC, Disley KW Routine hemtologicl methods for use with fish blood. Journl Fish Biology 5: Brillint A Efektivits Pemberin Probiotik Bcillus NP5 Segr dn Mikroenkpsulsi Mellui Pkn pd Ikn Ms Cyprinus crpio yng Diinfeksi Aeromons hydrophil. [skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertnin Bogor. Cbello FC Hevy use of prophylctic ntibiotics in quculture: growing problem for humn nd niml helth nd for the environment. Environmentl Microbiology 8(7): Effendi I Pengntr Akukultur. Depok (ID): Penebr Swdy. Effendie MI Metode Biologi Periknn. Bogor (ID): Yysn Dewi Sri Bogor. Firdus R Seleksi bkteri kndidt probiotik untuk penghmbtn ptogen Streptococcus glctie tipe non-hemolitik pd ikn nil Oreochromis niloticus secr in vitro dn in vivo. [skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertnin Bogor. Fuller R Probiotics in mn nd nimls. Journl of Applied Bcteriology (66): Hndjni H, Widodo W Nutrisi Ikn. Mlng (ID): UMM Press. Hstuti S, Subndiyono Perform hemtologis ikn lele dumbo Clris griepinus dn kulits ir medi pd sistim budidy dengn penerpn kolm biofiltrsi. Jurnl Sintek Periknn. 6: 1-5. Huismn EA Principles of Fish Production. Deprtement of Fish Culture nd Fisheries, Wgeningen Agriculturl University, Netherlnd.

36 20 [LAKIP-KKP] Direktort Jenderl Periknn Budidy Kementerin Kelutn dn Periknn Lporn Kinerj Kementerin Kelutn dn Periknn. [dicu 14 Mret 2016]. Tersedi dri: Mngunwrdoyo W, Ismysri R, Rini E Uji ptogenits dn virulensi Aeromons hydrophil stnier pd ikn nil Oreochromis niloticus L mellui postult Koch. Jurnl Riset Akukultur 5 (2): Nbib R, Psribu FH Ptologi dn Penykit Ikn. Bogor (ID): Institut Pertnin Bogor. Nyk SK Probiotic nd immunity: A fish perspective. Fish nd Shellfish Immunology. 29: Purwnti SC, Suminto, Sudryono A Gmbrn profil drh ikn lele dumbo Clris griepinus yng diberi pkn dengn kombinsi pkn butn dn ccing tnh Lumbricus rubellus. Journl of Aquculture Mngement nd Technology. 3(2): Puspitsri FD, Shovitri M, Kuswytsri Isolsi dn krkterissi bkteri erob proteolitik dri tngki septik. Jurnl Sins dn Seni ITS 1(1). Putr AN Kjin probiotik, prebiotik, dn sinbiotik untuk meningktkn kinerj pertumbuhn ikn nil Oreochromis niloticus. [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertnin Bogor. [SNI] Stndr Nsionl Indonesi Produksi benih ikn lele dumbo Clris griepinus x Clris fuscus kels benih sebr. Indonesi (ID): BSN. Triyningsih, Srjito, Pryitno SB Ptogenisits Aeromons hydrophil yng diisolsi dri lele dumbo Clris griepinus yng bersl dri Boyolli. Journl of Aquculture Mngement nd Technology 3(2): Ulkhq MF Pemberin probiotik Bcillus pd medi pemelihrn ikn lele dumbo Clris griepinus untuk penceghn penykit Motile Aeromonds Septicemi. [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertnin Bogor. Utmi DAS Apliksi Kultur Kering Probiotik untuk Pengendlin Streptococcosis pd Ikn Nil (Oreochromis sp.). [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertnin Bogor. Wedemeyer GA, Ysutke WT Clinicl methods for the ssessement of the effect enviromentl stress on fish helth. Technicl Ppers of the U.S. Fish nd Wildlife Service. U.S. Deprt. of the Interior 89: Yulvizr C Isolsi dn Identifiksi Bkteri Probotik pd Rstrelliger sp. Biospesies 6(2): 1-7. Zonneveld NEA, Huinsmn, Boon JH Prinsip-prinsip budidy ikn. Grmedi Pustk Utm. Jkrt. 318 hl.

37 LAMPIRAN 21 Lmpirn 1 Prosedur identifiksi tip bkteri dengn uji biokimi Pewrnn Grm Pengmtn morfologi koloni dilkukn dengn teknik pewrnn grm. Thp wl, ulsn bkteri dibut pd gels objek dn dilkukn fikssi. Kristl violet diteteskn pd koloni bkteri, dimkn selm 60 detik. Kemudin preprt dicuci dengn menggunkn ir menglir llu dikeringnginkn. Llu lrutn lugol diteteskn di ts preprt dn dibirkn selm 60 detik. Preprt dicuci dengn ir menglir llu dikeringnginkn. Selnjutny preprt ditetesi lrutn lkohol 96% dn dibirkn selm 60 detik llu dicuci kembli dn dikeringnginkn. Selnjutny preprt ditetesi dengn lrutn sfrnin sebnyk dn didimkn selm 60 detik, llu dicuci dn dikeringnginkn. Setelh itu dimti di bwh mikroskop dengn perbesrn (Anstiwn 2014). Uji ktlse Uji ktlse dilkukn untuk meliht d tidkny enzim ktlse yng dihsilkn oleh bkteri uji. Kc objek disipkn dn ditetesi dengn H2O2. Isolt murni bkteri dimbil dengn menggunkn jrum ose yng sudh dipijrkn llu dioleskn pd kc objek. Hsil positif ditndi dengn dny gelembung oksigen yng mengubh hidrogen peroksid menjdi ir dn oksigen (Yulvizr 2013). Uji oksidse Uji oksidse dilkukn untuk mengethui sift oksidse bkteri. Kerts sring steril disipkn dn diletkkn di ts kc objek. Kerts sring ditetesi dengn regen cytochrome oxidse sebnyk 1 tetes. Llu bkteri dimbil secr septik dn diletkkn di ts kerts sring tersebut. Bil kerts sring berubh menjdi ungu berrti reksi positif, bil tidk berwrn berrti negtif. Uji motilits Uji motilits dilkukn untuk meliht sift motilits bkteri. Medi sulfide indol motil (SIM) disipkn. Bkteri dimbil secr septik dn ditusukkn pd medi SIM sedlm ¾ bgin, dn diinkubsi selm 24 jm pd suhu kmr. Bil bkteri msih berd di sekitr beks tusukn mk bkteri tersebut bersift non motil, sedngkn bil bkteri bergerk ke permukn medi mk bkteri tersebut bersift motil. Uji O/F Uji O/F dilkukn dengn cr bkteri diinokulsikn pd 2 buh medi O/F sedlm 2/3 bgin. Slh stu ditmbhkn dengn prfin cir dn diinkubsi selm 24 jm (Putr 2010).

38 22 Lmpirn 2 Hsil identifiksi dn krkteristik bkteri A. hydrophil Krkteristik Hsil uji Brrow dn Felthm (1993) Pewrnn grm Negtif Negtif Bentuk sel Btng Btng O/F Fermenttif (F) Fermenttif (F) Ktlse + + Oksidse + + Motilits + +

39 Lmpirn 3 Dt nlisis sttistik prmeter uji 23 Lmpirn 3() Dt sttistik uji ANOVA dn uji Duncn tingkt kelngsungn hidup ikn lele pd uji ptogenits Uji ANOVA Jumlh kudrt db Kudrt tengh F P Perlkun 200, ,667,615,624 Glt 866, ,333 Totl 1066, Uji Duncn Perlkun N α= 0,05 1 K 3 86,6667 U 3 93,3333 M2 3 96,6667 M3 3 96,6667 Sig.,300 Lmpirn 3(b) Dt sttistik uji ANOVA dn uji Duncn tingkt kelngsungn hidup ikn lele setelh uji tntng ANOVA Jumlh db Kudrt tengh F P kudrt Setelh Perlkun 12466, ,667 66,786,000 uji Glt 466, ,667 tntng Totl 12933, Uji Duncn (Setelh uji tntng) Perlkun N α= 0, K+ 3 23,3333 B 3 23,3333 A 3 33, ,3333 C 3 36,6667 K ,0000 Sig.,117,563 1,000 Lmpirn 3(c) Dt sttistik uji ANOVA dn uji Duncn jumlh konsumsi pkn ikn lele selm 65 hri pemelihrn ANOVA Jumlh db Kudrt tengh F P kudrt Perlkun,026 4,006,468,758 Glt,139 10,014 Totl,165 14

40 24 Uji Duncn Perlkun N α= 0,05 1 K+ 3 1,3800 B 3 1,3900 C 3 1,4000 A 3 1,4567 K- 3 1,4867 Sig.,330 Lmpirn 3(d) Dt sttistik uji ANOVA dn uji Duncn konversi pkn ikn lele selm 65 hri pemelihrn ANOVA Jumlh db Kudrt tengh F P kudrt Perlkun,018 4,005 1,464,284 Glt,031 10,003 Totl, Uji Duncn Perlkun N α= 0,05 1 A 3 1,0900 B 3 1,1167 C 3 1,1200 K- 3 1,1733 K+ 3 1,1800 Sig.,099 Lmpirn 3(e) Dt sttistik uji ANOVA dn uji Duncn lju pertumbuhn hrin ikn lele selm 65 hri pemelihrn ANOVA Jumlh db Kudrt tengh F P kudrt Perlkun,068 4,017,617,660 Glt,274 10,027 Totl, Uji Duncn Perlkun N α= 0,05 1 K+ 3 2,7867 B 3 2,8767 K- 3 2,8933 C 3 2,9067 A 3 2,9967 Sig.,183

41 Lmpirn 3(f) Dt sttistik uji ANOVA dn uji Duncn totl eritrosit ikn lele pd wl pemelihrn, sebelum uji tntng, dn setelh uji tntng ANOVA Wktu Jumlh db Kudrt tengh F P kudrt Awl Perlkun, ,000 0,000 1,000 Glt,013 10,001 Totl, Sebelum Perlkun,734 4,183 3,817,039 uji Glt,481 10,048 tntng Totl 1, Setelh Perlkun 1,338 4,334 11,157,001 uji Glt,300 10,030 tntng Totl 1, Uji Duncn (Awl) Perlkun N α= 0,05 1 K- 3 1,0400 K+ 3 1,0400 A 3 1,0400 B 3 1,0400 C 3 1,0400 Sig. 1,000 Uji Duncn (Sebelum uji tntng) Perlkun N α= 0, K+ 3 1,6733 K- 3 1,7267 C 3 1,84 A 3 1,9867 1,9867 B 3 2,2900 Sig.,134,121 Uji Duncn (Setelh uji tntng) Perlkun N α= 0, K+ 3 1,1867 K- 3 1,5233 A 3 1,8933 C 3 1,8933 B 3 1,9767 Sig. 1,000 1,000,576 25

42 26 Lmpirn 3(g) Dt sttistik uji ANOVA dn uji Duncn totl leukosit ikn lele pd wl pemelihrn, sebelum uji tntng, dn setelh uji tntng ANOVA Wktu Jumlh db Kudrt tengh F P kudrt Awl Perlkun 0, ,000 0,000 1,000 Glt 6,400 10,640 Totl 6, Sebelum Perlkun 122, ,715 10,901,001 uji Glt 28, ,818 tntng Totl 151, Setelh Perlkun 3,699 4,925 5,109,017 uji Glt 1,810 10,181 tntng Totl 5, Uji Duncn (Awl) Perlkun N α= 0,05 1 K- 3 8,6000 K+ 3 8,6000 A 3 8,6000 B 3 8,6000 C 3 8,6000 Sig. 1,000 Uji Duncn (Sebelum uji tntng) Perlkun N α= 0, B 3 6,8500 C 3 7,9500 7,9500 A 3 10, ,8000 K- 3 12, ,7500 K+ 3 14,5000 Sig.,441,064,185,230 Uji Duncn (Setelh uji tntng) Perlkun N α= 0, B 3 5,9000 A 3 6,3500 6,3500 C 3 6,8000 6,8000 K- 3 7,1000 7,1000 K+ 3 7,2500 Sig.,224,066,244

43 Lmpirn 3(h) Dt sttistik uji ANOVA dn uji Duncn kdr hemtokrit ikn lele pd wl pemelihrn, sebelum uji tntng, dn setelh uji tntng ANOVA Wktu Jumlh db Kudrt F P kudrt tengh Awl Perlkun 0, ,000 0,000 1,000 Glt 83, ,323 Totl 83, Sebelum Perlkun 47, ,855 2,383,121 uji Glt 49, ,974 tntng Totl 97, Setelh Perlkun 303, , ,608,000 uji Glt 7,332 10,733 tntng Totl 311, Uji Duncn (Awl) Perlkun N α= 0,05 1 K- 3 32,7067 K+ 3 32,7067 A 3 32,7067 B 3 32,7067 C 3 32,7067 Sig. 1,000 Uji Duncn (Sebelum uji tntng) Perlkun N α= 0, C 3 33,9700 K+ 3 35, ,1267 B 3 35, ,4467 K- 3 36, ,2767 A 3 39,2467 Sig.,265,061 Uji Duncn (Setelh uji tntng) Perlkun N α= 0, B 3 28,2167 A 3 33,9067 C 3 37,6000 K- 3 38,5500 K+ 3 41,2267 Sig. 1,000 1,000,204 1,000 27

44 28 Lmpirn 3(i) Dt sttistik uji ANOVA dn uji Duncn kdr hemoglobin ikn lele pd wl pemelihrn, sebelum uji tntng, dn setelh uji tntng ANOVA Wktu Jumlh db Kudrt tengh F P kudrt Awl Perlkun 0, ,000 0,000 1,000 Glt,900 10,090 Totl, Sebelum Perlkun 10, ,619 37,414,000 uji Glt,700 10,070 tntng Totl 11, Setelh Perlkun 9, ,436 76,125,000 uji Glt,320 10,032 tntng Totl 10, Uji Duncn (Awl) Perlkun N α= 0,05 1 K- 3 7,3000 K+ 3 7,3000 A 3 7,3000 B 3 7,3000 C 3 7,3000 Sig. 1,000 Uji Duncn (Sebelum uji tntng) Perlkun N α= 0, C 3 7,2000 K+ 3 7,3000 B 3 8,7000 K- 3 9,0000 A 3 9,1000 Sig.,653,107 Uji Duncn (Setelh uji tntng) Perlkun N α= 0, K+ 3 6,1000 K- 3 6,3000 A 3 7,2000 C 3 7,5000 B 3 8,3000 Sig.,201,067 1,000