IV. HASIL DAN PEMBAHASAN. Pengujiaan Aktifitas Enzim-enzim Hidrolisis pada Ekstrak Enzim Cairan Rumen Domba

Transkripsi

1 31 IV. HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1. Thp 1. Pengujin Aktifits Enzim-enzim Hidrolisis pd Ekstrk Enzim Cirn Rumen Domb Hsil pengukurn ktifits milse, protese, lipse, selulse dn fitse pd cirn rumen domb disjikn pd Gmbr 5. Dt pengukurn ktifits enzim dri du puluh stu smpel eksrk enzim ksr cirn rumen domb terdpt pd Lmpirn 15. Aktifits selulse lebih besr dri ktifits enzim linny dengn urutn dri nili ktivits terbesr berturut-turut dlh selulse (1,66 ± 0,19 IU/ml/menit); milse (1,32± 0,02 IU/ml/menit); fitse (0,27 ± 0,13 IU/ ml/menit); protese (0,26 ± 0,07 IU/ml/menit); lipse (0,01 ± 0,00 IU/ml/menit). Ket. Subsrt yng digunkn: uji selulos (kerts sring); uji milse (pti); uji protese (ksein); uji lipse (minyk zitun); uji fitse (sm fitt) Gmbr 5. Aktifits enzim selulse, milse, protese, lipse dn fitse ekstrk cirn rumen domb.

2 32 Pembhsn Mohrrery dn Ds (2002) melporkn bhw cirn rumen domb yng berisi selsel bkteri mempunyi ktivits enzim selulse, milse, protese dn lipse yng lebih tinggi dri cirn rumen tnp protozo dn tnp sel-sel mikrob. Pd cirn rumen domb bebs sel mikrob didptkn ktifits enzim selulse sebesr 0,03 (IU/ml/menit), milse dlh sebesr 1,16 IU/ml/menit; protese 0,22 IU/ml/menit; dn lipse 1,22 IU/ml/jm. Dibndingkn dengn nili kyifits enzim yng dilporkn oleh Mohrrey dn Ds (2002) mk nili ktifits enzim rumen domb yng didptkn pd penelitin ini menghsilkn ktifits selulse yng juh lebih tinggi yitu sebesr 1,66 IU/ml/menit sedngkn ktivits protese tidk terllu berbed sebesr 0,26 IU/ml/menit tetpi ktifits lipse 0,01 IU/menit/ml (setr dengn 0,044 IU/jm/ml) yng juh lebih kecil. Perbedn nili ktifits ini didug disebbkn jenis mknn yng dikonsumsi oleh domb selm ms pemelihrn. Domb pd penelitin ini dikondisikn hny dengn memkn lmtoro dicmpur dengn jenis hijun linny sedngkn pkn domb penelitin Mohrrey dn Ds (2002) mendptkn pkn konsentrt yng ky sumber krbohidrt dn pkn domb penelitin Agrwl et l. (2002) dlh ir susu smpi domb umur 8 minggu dn diteruskn dengn 50 persen konsentrt dn 50 persen rumput smpi umur 24 minggu. Dilporkn pul oleh Budinsyh (2010), spi lokl yng mendptkn pkn sert kn menghsilkn ktifits enzim selulse tinggi. Sedngkn pd spi impor yng lebih bnyk mendptkn krbohidrt dri pkn konsentrt, kn menghsilkn lebih bnyk enzim-enzim xilnse, mnnnse dn milse. Secr lebih terperinci Lee et l. (2002) memetkn enzim-enzim dlm rumen spi. Enzim-enzim yng terdpt dlm cirn rumen domb ntr lin dlh enzim-enzim selulolitik terdiri ts bet-dendogluknse, bet-d-exogluknse, bet-d-glukosidse, dn bet-d-fucosid fucohydrolse, enzim-enzim xylnolitik terdiri ts bet-d-xylnse, bet-d-xylosidse, cetyl esterse, dn lf-l-rbinofurnosidse, enzim-enzim pektinolitik terdiri ts polyglcturonse, pectte lyse dn pectin lyse, dn enzim-enzim lin yng terdiri ts

3 33 bet-milse, endo-rbilse, bet-d-glunse (lminrinse), bet-d-glucnse (Lichense), bet-d-glucnse (Pechimnse) dn protese. Mrtin et l. (1999) mendptkn bhw enzim-enzim pencern krbohidrt dlm cirn rumen ntr lin dlh milse, xylnse, vicelse, lph-d-glukosidse, lph-lrbinofurnosidse, bet-d-glukosidse dn bet-d-xylosidse. Mrtin et l. (1999) jug melporkn bhw terdpt perbedn ktivits enzim-enzim pencernn dlm cirn rumen pd bgin perut (ventrl) dn bgin punggung (dorsl). Hl ini disebbkn oleh kergmn oleh protozo dn bkteri yng berbed dlm rumen. Aktivits enzim-enzim fibrolitik (xylnse, vicelse, lph-l-rbinofurnosidse, bet-d-glukosidse dn bet-d-xylosidse) yng bersl dri mikrob protozo bgin punggung (dorsl) lebih besr/lebih tinggi sekitr 40 persen dri bgin perut (ventrl), seblikny ktivits enzim-enzim fibrolitik yng bersl dri bkteri lebih besr dibgin perut (ventrl) dri pd bgin punggung (dorsl), secr keseluruhn ktivits enzim yng bersl dri bkteri lebih tinggi dri pd yng bersl dri protozo. Kmr (2005) mengemukkn bhw jenis mikrob rumen yng bnyk mensekresikn enzim selulse dintrny dlh Fibrobcter succinogenes, Ruminococcus lbus, R. flvefciens, Clostrodium lochhedii, C. longisporum dn Eubcterium cellulosolvens. Sedngkn jenis mikrob yng bnyk menghsilkn enzim milse dlh Streptococcus bovis, Ruminococcus mylophylus, Prevotell ruminicol, Streptococcus ruminntium dn Lchnospor multiprius. Selm ini jenis monoenzim fitse umum digunkn untuk mengurngi kndungn sm fitt dri bungkil kedeli yng digunkn dlm komposisi pkn. Jenis multi enzim yng pernh dicobkn pd pkn ikn dlh enzim komersil produksi Altech dengn merek dgng Allzyme. Budinsyh (2010) melporkn bhw Allzyme mengndung ktifits selulse sebesr 2,93 IU/ml/menit; milse 67,5 IU/ml/menit dn protese 1,90 IU/ml/menit. Nili ktifits enzim komersil ini untuk selulse tidk terllu berbed bhkn ktifits protese cirn rumen domb lebih tinggi, sedngkn ktifits milse pd Allzyme juh lebih tinggi. Kelebihn yng dimiliki enzim cirn rumen domb pd penelitin ini dlh terdptny ktifits

4 34 fitse yng dpt menghidrolisis sm fitt yng bnyk terdpt dlm bungkil kedeli dn TDL. Aktifits enzim fitse cirn rumen domb dlm penelitin ini dlh sebesr 0,27 IU/menit/ml. Dilporkn bhw ktifits enzim dlm rumen sngt ert hubungnny dengn kergmn mikroorgnisme dlm rumen. Dimn ktifits enzim fitse ini didpt dri kerj mikrob-mikrob rumen yng mensekresikn enzim fitse ke dlm cirn rumen untuk membntu mendegrdsi prtikel mknn yng mengndung sm fitt. Jenis bkteri yng dilporkn memproduksi fitse dlh Selenomon ruminntium (Ynke et l. 1998) dn yng terbru dlh Mitsuokell jlludinii (Ln et l. 2002). Selin itu Budinsyh (2010) melporkn bhw enzim selulse, fitse, milse dn protese sl cirn rumen spi lokl mempunyi kisrn suhu dn ph yng lus untuk bekerj yitu suhu 29 smpi 70 o C dn ph dri 4 smpi 9. Enzim yng mempunyi suhu dn kisrn ph yng lus kn mempermudh pliksi penggunny di lpngn, kren dlm pembutn pkn berbentuk pellet digunkn suhu dn teknn yng tinggi, sehingg enzim yng mempunyi kisrn suhu yng lus msih dpt bekerj menghidrolisis substrt. Aktifits multi enzim cirn rumen domb sert kemmpun enzim rumen untuk berthn pd kisrn suhu dn ph yng lus dihrpkn menjdi pilihn untuk terobosn penggunn enzim yng lebih efisien dlm pkn ikn. Pelung pliksi enzim rumen domb untuk meningktkn kulits TDL semkin besr dengn kndungn multi enzim cirn sert kisrn kerj enzim pd suhu dn ph yng lus. Didukung pul dengn potensi rumen domb rumh pemotongn hewn yng terdpt di sebgin besr derh di Indonesi. Dlm pliksi di lpngn penyringn cirn rumen domb dpt dilkukn dengn lt sederhn yitu lt pengering yng digunkn pd mesin cuci, sehingg cirn yng didpt dpt digunkn sebgi sumber enzim. Berkitn dengn penggunn tepung dun lmtoro (TDL) yng mengndung krbohidrt dengn frksi sert, selulos dn krbohidrt bukn pti (NSP) yng tinggi (Kle, 1987) mk enzim-enzim cirn rumen domb yng berpernn dlh selulse

5 35 dn milse. Sedngkn kndungn sm fitt pd TDL dpt dihidrolisis dengn enzim fitse yng terkndung pd cirn rumen domb. Proses hidrolisis ini kn dikji pd penelitin thp kedu Thp Kedu Pengruh Hidrolisis (predigestion) Tepung Dun Lmtoro dengn Ekstrk Enzim dri Cirn Rumen Domb Secr in vitro Penelitin thp kedu ini bertujun untuk mendptkn jumlh ekstrk enzim dn wktu inkubsi yng pling efektif untuk menghidrolisis substrt TDL. Berdsrkn uji ktifits enzim pd thp sebelumny, nili ktifits enzim yng terkndung pd setip perlkun penmbhn enzim cirn rumen dengn volume berbed disjikn pd Tbel 10. Dri Tbel 10 dpt terliht bhw peningktn penmbhn eksrk enzim cirn rumen kn meningktkn pul kndungn enzim hidrolisis. Setip peningktn penmbhn 0,2 ml/10g ekstrk enzim rumen kn meningktkn kndungn enzim selulse sekitr 0,33 IU/ml/menit, enzim milse 0,27 IU/ml/menit, enzim protese meningkt 0,05 IU/ml/menit, enzim fitse meningkt 0,51 dn enzim lipse meningkt 0,002 IU/ml/menit. Perlkun kontrol hny ditmbhkn ir sebnyk volume enzim tertinggi yng diberikn. Tbel 10. Kndungn ktifits enzim pd setip perlkun Perlkun Aktifits enzim(iu/ml/menit) (ml enzim* / Selulse Amilse Fitse Protese Lipse g TDL) A (0,2 ml/10g) 0,33 0,26 0,05 0,05 0,001 B (0,4 ml/10g) 0,66 0,53 0,11 0,10 0,003 C (0,6 ml/10g) 0,99 0,79 0,16 0,15 0,004 D (0,8 ml/10g) 1,33 1,05 0,22 0,20 0,006 E (1,0 ml/10g) 1,66 1,32 0,27 0,26 0,007 *ekstrk enzim cirn rumen domb

6 Glukos Terlrut Hsil pengukurn kdr glukos terlrut pd inkubsi 2 jm dn 24 jm disjikn pd Gmbr 6. Dt ulngn per perlkun disjikn pd Lmpirn 16 dn 17. Penmbhn ekstrk enzim cirn rumen domb nyt (P < 0,05) mempengruhi kdr glukos terlrut TDL dengn periode inkubsi 2 dn 24 jm. Pd periode inkubsi 2 jm kdr glukos terlrut pd perlkun kontrol tnp penmbhn enzim lebih rendh dn nyt berbed dengn perlkun yng mendpt penmbhn enzim. Nili tertinggi glukos terlrut dicpi pd penmbhn enzim 100ml/kg TDL sebesr 0,132%, dimn terjdi peningktn kdr glukos terlrut sebesr 501,40 % dibndingkn perlkun kontrol dengn nili kdr glukos terlrut sebesr 0,009%. Hsil pengukurn kdr glukos terlrut pd inkubsi 24 jm menunjukkn pol yng berbed. Kdr glukos terlrut pd perlkun kontrol (tnp penmbhn enzim) nyt lebih rendh dibndingkn dengn semu perlkun yng mendpt penmbhn enzim. Sedngkn dintr perlkun yng mendpt penmbhn enzim 20ml/kg dn 40ml/kg didpt kdr glukos terlrut yng nyt lebih rendh dibndingkn dengn perlkun 60ml/kg; 80ml/kg dn 100ml/kg. Nili yng tertinggi yitu 0,490% dicpi pd perlkun 100ml/kgTDL dimn terdpt peningktn sebesr 2127,45 %, dri nili terendh yitu 0,022% yng dicpi pd perlkun kontrol tnp penmbhn enzim.

7 37 d cd c b b b b b b c Ket : huruf yng sm pd digrm btng yng berwrn sm menunjukkn nili tidk berbed nyt (P >0,05) (liht Lmpirn 18 dn 20). Gmbr 6. Nili rt-rt kdr glukos terlrut (%) periode inkubsi 2 jm dn 24 jm Pd periode inkubsi 2 dn 24 jm pengukurn kdr glukos terlrut memperlihtkn hsil yng semkin meningkt dengn bertmbhny jumlh cirn enzim ksr yng digunkn untuk menginkubsi TDL. Seluruh perlkun pd periode inkubsi 24 jm memperlihtkn nili glukos terlrut yng lebih tinggi dibndingkn dengn perlkun yng sm pd periode inkubsi 2 jm. Peningktn nili glukos terlrut pd wktu inkubsi berbed dengn perlkun yng sm disjikn pd Gmbr 7. Semkin bnyk volume ekstrk enzim yng ditmbhkn dengn ms inkubsi yng semkin meningkt mk peningktn nili glukos terlrut kn semkin besr. Nili persentse peningktn kdr glukos terlrut dibndingkn kontrol perlkun 20; 40; 60; 80 dn 100 ml enzim/kg TDL pd wktu inkubsi 2 jm secr berurutn dlh sebesr 357,86; 363,66; 408,14; 433,93 dn 501,40 %. Sedngkn dengn inkubsi 24 jm peningktn nili glukos terlrut yng terjdi sngtlh tinggi yitu sebesr 576,13: 927,69; 1.412,76; 1756,42 dn 2127,45%.

8 38 Gmbr 7 Persentse peningktn glukos terlrut perlkun dibndingkn kontrol pd inkubsi 2 jm dn 24 jm. Respon kdr glukos terlrut pd periode inkubsi 2 jm dn 24 jm membentuk pol persmn gris linier (Gmbr 8 dn 9). Pol respon tersebut menggmbrkn semkin bnyk ekstrk enzim rumen yng ditmbhkn dn semkin lm periode inkubsi mk kdr glukos terlrut kn semkin meningkt. Gmbr 8. Kurv respon kdr glukos terlrutinkubsi 2 jm dengn jumlh ekstrk enzim rumen berbed Gmbr 9. Kurv respon kdr glukos terlrut inkubsi 24 jm dengn jumlh ekstrk enzim rumen berbed

9 Protein Terlrut Kdr protein terlrut merupkn produk ntr pd hidrolisis protein oleh ekstrk enzim protese yng terkndung dlm ekstrk enzim ksr dri cirn rumen domb. Hsil pengukurn kdr protein terlrut pd inkubsi 2 jm dn 24 jm disjikn pd Gmbr 10. Dt selengkpny setip pelkun dpt diliht pd Lmpirn 22 dn 23. Kdr protein terlrut yng dihsilkn pd periode inkubsi 2 dn 24 jm nyt (P<0,05) dipengruhi oleh jumlh enzim yng ditmbhkn ke dlm tepung dun lmtoro gung. Kdr protein terlrut meningkt dengn peningktn jumlh enzim ksr yng diberikn. Pd ms inkubsi 2 jm kdr protein terlrut semu perlkun yng mendpt penmbhn enzim sm tetpi semuny lebih tinggi dn berbed nyt dengn kdr protein terlrut pd perlkun tnp penmbhn enzim. b b b b b c b bc b b Ket : huruf yng sm pd digrm btng yng berwrn sm menunjukkn tidk berbed nyt (P >0,05) (liht Lmpirn 24 dn 26). Gmbr 10. Nili rt-rt kdr protein terlrut setip perlkun dengn ms inkubsi 2 jm dn 24 jm Pd inkubsi 24 jm TDL dengn ekstrk enzim ksr dri cirn rumen domb, nili kdr protein terlrut menghsilkn nili yng juh lebih tinggi dri perlkun 2 jm. Nili kdr protein terlrut dintr perlkun 20, 40, 60, 80 dn

10 ml enzim/kg TDL tidk menunjukkn perbedn yng nyt (P > 0,05) tetpi lebih tinggi dn nyt berbed perlkun tnp penmbhn enzim. Persentse peningktn nili protein terlrut dibndingkn kontrol pd wktu inkubsi berbed dengn perlkun yng sm disjikn pd Gmbr 11. Dimn semkin bnyk volume ekstrk enzim yng ditmbhkn dengn ms inkubsi yng semkin meningkt mk peningktn kdr protein terlrut kn semkin besr. Besrny peningktn kdr protein terlrut dengn pemberin enzim cirn rumen domb sebnyk 20; 40; 60; 80 dn 100 ml/kg TDL dengn wktu inkubsi 2 jm secr berurutn dlh sebnyk 126,72; 92,10; 101,21; 72,18 dn 77,04%. Sedngkn pd wktu inkubsi 24 jm peningktn kdr protein terlrut mencpi mencpi 3448,49; 3429,52; 3535,02; 3518,94 dn 3538,23%. Gmbr 11. Persentse peningktn protein terlrut perlkun dibndingkn kontrol pd inkubsi 2 jm dn 24 jm Respon kdr protein terlrut membentuk pol kudrtik (Gmbr 12). Kdr protein terlrut pd 2 jm inkubsi kn mencpi mksimum pd pemberin eksrk rumen sebesr 58,22 ml.

11 41 Gmbr 12. Kurv respon kdr protein terlrut inkubsi 2 jm Kndungn Nutrien Tepung Dun Lmtoro Sert Ksr Hsil pengukurn kdr sert TDL yng dihsilkn pd khir periode inkubsi 24 jm disjikn Gmbr 13. Dt selengkpny setip pelkun dpt diliht pd Lmpirn 28. Kndungn sert ksr nyt dipengruhi oleh penmbhn enzim rumen, dimn kndungn sert ksr menglmi penurunn dengn peningktn penmbhn jumlh enzim (P< 0,05). Nili sert ksr tertinggi yitu 16,77% dicpi pd perlkun tnp penmbhn enzim yng berbed nyt dengn semu perlkun dengn penmbhn enzim. Nili sert ksr yng terendh yitu 7,774% dicpi oleh perlkun pemberin enzim 100ml/kg. Nili 7,774% ini berbed nyt dengn perlkun linny yitu pemberin enzim 20, 40, 60, dn 80 ml/kg TDL yng menghsilkn nili kdr sert berturut-turut dlh 12,94; 12,06; 10,55 dn 9,85%. Perlkun dengn penmbhn enzim 20; 40; 60 dn 80 ml/kg TDL menglmi penurunn kdr sert berturut-turut sebnyk, 22,818 ; 28,098; 37,112 ; 41,238 % pbil dibndingkn perlkun kontrol (Gmbr 14). Penurunn kdr sert tertinggi sebesr 53,640% terdpt pd perlkun penmbhn ekstrk enzim sebnyk 100ml/kg TDL.

12 42 d Gmbr 13. Kndungn sert ksr setip perlkun dengn ms inkubsi 24 jm Gmbr 14. Persentse penurunn sert ksr perlkun dibndingkn kontrol pd inkubsi 24 jm Ket : huruf yng sm pd digrm btng Menunjukkn nili tidk berbed nyt (P >0,05) (lit Lmpirn 29) NDF dn ADF Hsil pengukurn kdr NDF dn ADF tepung dun lmtoro gung yng telh mendpt penmbhn eksrk enzim ksr cirn rumen disjikn Gmbr 15 dn 16. Dt selengkpny setip pelkun dpt diliht pd Lmpirn 31 dn 32. Nili NDF tepung dun lmtoro gung nyt (P < 0,05) dipengruhi oleh penmbhn ekstrk enzim rumen domb. Terdpt perbedn yng nyt ntr nili NDF perlkun tnp penmbhn enzim dengn nili NDF perlkun yng mendpt penmbhn enzim 40ml/kg TDL. Nili NDF tertinggi yitu 46,32% dicpi pd perlkun tnp penmbhn enzim yng tidk berbed nyt dengn nili NDF perlkun yng mendpt penmbhn enzim 20 dn 40ml/kg TDL. Sedngkn nili NDF terendh yitu 42,54 % dicpi pd perlkun 100 ml/kg TDL yng tidk berbed nyt dengn nili NDF dengn penmbhn enzim 80 ml/kg TDL (44,31%) dn 60 ml/kg TDL (44,42%). Semkin bnyk enzim yng ditmbhkn, nili NDF menglmi penurunn. Perlkun dengn penmbhn enzim sebnyk 20; 40; 60; 80 dn 100 ml/kg dibndingkn dengn kontrol, menghsilkn penurunn nili NDF berturut-turut sebnyk 3,66; 6,29; 10,14; 10,36 dn 13,92%.

13 43 Penmbhn ekstrk enzim rumen domb nyt (P < 0,05) mempengruhi nili ADF tepung dun lmtoro. Nili ADF perlkun tnp penmbhn enzim lebih tinggi dri nili ADF seluruh perlkun yng mendpt penmbhn enzim. Perlkun penmbhn enzim pd trf trf 20, 40, 60, 80 dn 100 ml/kg tidk menghsilkn nili ADF yng berbed tetpi lebih rendh dn nyt berbed dengn perlkun tnp penmbhn enzim. Peningktn jumlh enzim yng ditmbhkn cenderung kn menurunkn nili ADF. Secr berturut-turut penmbhn enzim sebnyk 20; 40; 60; 80 dn 100 ml/kg kn menurunkn nili ADF sebnyk 18,70; 14,63; 15,83 ; 13,43 dn 13,46%. Gmbr 15. Kdr NDF setip perlkun dengn ms inkubsi 24 jm Gmbr 16. Kdr ADF setip perlkun dengn ms inkubsi 24 jm Ket : huruf yng sm pd digrm btng menunjukkn nili tidk berbed nyt (P >0,05) (liht Lmpirn 33 dn 35) Kdr Protein dn Lemk Hsil pengukurn kdr protein dn lemk TDL percobn ini disjikn pd Gmbr 17 dn 18. Dt selengkpny setip pelkun dpt diliht pd Lmpirn 37 dn 38. Kdr protein dn kdr lemk percobn semu perlkun dengn penmbhn enzim dn tnp penmbhn enzim menunjukkn perbedn yng tidk nyt (Lmpirn 38). Pd pengujin in vitro hny digunkn substrt 10 grm sehingg jumlh enzim yng ditmbhkn dlh sepersepuluhny sj. Pengukurn

14 44 kdr protein cirn enzim rumen dengn metode Kjedhl, menunjukkn bhw setip ml enzim cirn rumen domb mengndung protein sebesr 0,067 grm/ml cirn enzim. Nili ini setr dengn kndungn protein enzim pd perlkun 20; 40 60; 80 dn 100 ml/kg TDL berturut-turut dlh sebesr 0,013; 0,02; 0,04; 0,05 dn 0,067 grm. Gmbr 17. Nili rt-rt kdr protein setip perlkun uji in vitro Gmbr 18. Nili rt-rt kdr lemk setip perlkun uji in vit Ket : huruf yng sm pd digrm btng menunjukkn nili tidk berbed nyt (P >0,05) (liht Lmpirn 39 dn 40) Kdr Asm Fitt Hsil pengukurn kdr sm fitt tepung dun lmtoro gung yng telh mendpt penmbhn eksrk enzim ksr cirn rumen disjikn Gmbr 19. Dt selengkpny setip pelkun dpt diliht pd Lmpirn 41. Kndungn sm fitt nyt (P<0,05) dipengruhi oleh penmbhn ekstrk enzim rumen domb. Kdr sm fitt pd perlkun penmbhn ekstrk enzim rumen sebnyk 20, 40, 60 dn 80 ml/kg nyt lebih rendh dibndingn dengn perlkun kontrol dn nyt lebih tinggi dibndingkn dengn penmbhn eksrk enzim rumen sebnyk 100ml/kg TDL. Nili sm fitt tertinggi yitu 7,84% dicpi pd perlkun tnp penmbhn enzim dn perlkun terendh yitu 2,50% dicpi pd pelkun yng menggunkn enzim sebnyk 100ml/kg TDL.

15 45 Gmbr 19. Nili rt-rt kdr sm fitt setip perlkun uji in vitro Gmbr 20. Persentse penurunn kdr sm fitt setip perlkun dibndingkn kontrol Ket : huruf yng sm pd digrm btng menunjukkn nili tidk berbed nyt (P >0,05) (liht Lmpirn 42) Persentse penurunn kdr sm fitt (Gmbr 20) pd semu perlkun yng mendpt penmbhn enzim 20; 40; 60; 80 ml/kg TDL secr berurutn dlh 15,15; 19,53; 19,62 dn 19,77 %. Penurunn kdr fitt sm terbesr dibndingkn kontrol yitu sebesr 68,09% terdpt pd perlkun penmbhn enzim sebesr 100ml/kg TDL Uji Respon Prmeter Kulits Nutrien Pol respon kdr sert (Gmbr 21) termsuk NDF dn ADF ( Gmbr 23 dn 24) sert sm fitt (Gmbr 22) perlkun penmbhn enzim cirn rumen domb membentuk pol respon linier negtif yng mengmbrkn semkin bnyk ekstrk enzim rumen yng ditmbhkn mk nili kdr sert, NDF, ADF dn sm fitt kn menurun.

16 46 Gmbr 21. Kurv respon kdr sm fitt perlkun uji in vitro Gmbr 22. Kurv respon kdr sert perlkun uji in vitro Gmbr 23. Kurv respon kdr NDF perlkun uji in vitro Gmbr 24. Kurv respon kdr ADF perlkun uji in vitro Profil Asm Amino TDL Seluruh jenis sm mino yng terdeteksi didptkn kenikn kndungn sm mino yng sngt kecil (Tbel 11). Didptkn pul du jenis sm mino pd TDL terhidrolisis dengn penmbhn enzim cirn rumen yitu sisten (0,001 µmol ) dn norleusin sebesr 0,0231 µmol yng pd TDL tnp perlkun enzimtis tidk terdeteksi.

17 47 Tbel 11. Komposisi sm mino tepung dun lmtoro sebelum dn sesudh inkubsi 24 jm dengn enzim rumen domb sebnyk 100 ml enzim/kg TDL. No. Jenis sm mino Kndungn sm mino TDL 1 (µmol) Kndungn sm mino TDLt 2 (µmol) Peningktn kndungn sm mino (µmol) Asm mino liftik sederhn 1 * Glisin (Gly, G) 0,01280 ± 0, ,01875 ± 0, , * Alnin (Al, A) 0,01355 ± 0, ,02080 ± 0, , * Vlin (Vl, V) 0,01225 ± 0, ,01690 ± 0, , * Leusin (Leu, L) 0,01410 ± 0, ,02095 ± 0, , * Isoleusin (Ile, I) *Norleusin Asm mino hidroksi-liftik 0,00870 ± 0,00042 (tidk terdeteksi) 0,01415 ± 0, ,02310 ± 0, , * Serin (Ser, S) 0,0061 ± 0, ,0107 ± 0, , * Treonin (Thr, T) 0,00385 ± 0,0000 0,0108 ± 0, ,00310 Asm mino dikrboksilt 1 * Asm sprtt (Asp, D) 0,01245 ±0, ,02005 ± 0, , * Asm glutmt (Glu, E) 0,01225 ±0, ,02750 ± 0, ,01525 Asm mino bs 1 * Lisin (Lys, K) 0,02335 ±0, ,03140 ± 0, , * Arginin (Arg, R) 0,01560 ± 0, ,01880 ± 0, , * Histidin (His, H) 0,01440 ±0, ,01565 ± 0, ,00125 Prolin (Gugus siklik) 1 * Prolin (Pro, P) 0,00440 ±0, ,01770 ± 0, ,00730 Asm mino romtik 1 * Fenillnin (Phe, F) 0,00930 ±0, ,01655 ± 0, , * Tirosin (Tyr, Y) 0,00555 ±0, ,00895 ± 0, ,00340 Asm mino mengndung sulfur 1 * sistein (Cys) (tidk terdeteksi) 0,001 ±0, Ket; 1 TDL tnp hidrolisis; 2 TDLt terhidrolisis

18 48 Pembhsn Hsil percobn in vitro menunjukkn bhw eksrk enzim cirn rumen domb efektif menghidrolisis TDL untuk bhn pkn ikn nil. Nili glukos dn protein terlrut sngt dipengruhi oleh jumlh enzim yng ditmbhkn sert wktu inkubsi. Periode inkubsi 24 jm memberikn hsil nili glukos terlrut sert protein terlrut yng lebih tinggi dibndingkn dengn periode inkubsi 2 jm, sert semkin bnyk enzim yng ditmbhkn ke dlm TDL nili-nili prmeter hidrolisis jug cenderung semkin meningkt dibndingkn dengn perlkun kontrol. Seperti pd perlkun 100 ml enzim/kg TDL dibndingkn dengn nili perlkun kontrol, inkubsi 24 jm kn meningktkn glukos terlrut 20 kli lipt dn protein terlrut 35 kli lipt. Sedngkn pd trf yng sm periode inkubsi 2 jm hny meningktkn glukos terlrut 5 kli lipt dn protein terlrut 1 kli lipt (Gmbr 25). Hl ini disebbkn kren semkin lm proses hidrolisis/inkubsi berlngsung menyebbkn substrt yng terdegrdsi semkin bnyk dn produk yng dihsilkn kn semkin meningkt. Ket : K=kontrol; PT= Protein terlrut; GT= Glukos terlrut Gmbr 25. Perbndingn peningktn kdr glukos terlrut dn protein terlrut perlkun dengn penmbhn 100 ml enzim/kg TDL dengn perlkun tnp enzim pd wktu inkubsi 2 dn 24 jm.

19 49 Prmeter glukos terlrut yng dihsilkn dlh pol respon kerj enzim milse dn enzim pemotong sert Meningktny prmeter glukos dn protein terlrut yng diukur dengn bertmbhny jumlh ekstrk enzim cirn rumen yng ditmbhkn, terjdi kren pelung substrt untuk bertemu dengn ktlistor biologis dlm proses hidrolisis protein dn krbohidrt semkin besr. Lm proses hidrolisis berlngsung menyebbkn substrt yng terdegrdsi semkin bnyk dn produk yng dihsilkn kn semkin meningkt. Abu et l. (2005) melporkn bhw peningktn konsentrsi enzim secr umum kn memberikn pengruh yng lebih besr pd wktu hidrolisis dibndingkn dengn peningktn tempertur. Vijy et l. (2002) mengindiksi dny peningktn derjt hidrolisis dengn peningktn wktu inkubsi. Hsil pengukurn kndungn gul pereduksi pd berbgi wktu inkubsi enzim rumen pd whet pollrd mendptkn pol hubungn kudrtik dengn wktu optiml 10 jm dn suhu optiml 38 o C. Nili gul pereduksi muli menurun setelh 10 jm (Pnty et l. 2005). Kurv respon kdr glukos terlrut memperlihtkn hubungn linier positif, dimn semkin besr jumlh eksrk cirn enzim rumen domb yng ditmbhkn pd substrt TDL kn terjdi peningktn jumlh glukos terlrut dengn nili kdr glukos terlrut pd inkubsi 24 jm lebih tinggi dri periode inkubsi 2 jm (Gmbr 23 dn 24). Tingkt penmbhn yng semkin tinggi kn efektif dibndingkn penmbhn yng lebih rendh. Hl ini berhubungn dengn kesedin substrt yng dpt dirombk oleh enzim yng ditmbhkn. Menurut Kle (1987) tepung dun lmtoro mengndung totl krbohidrt (18,6%) dengn komponen gul pereduksi (4,2%), totl oligoskrid (2,8%), sukros (1,2%), rfinos (0,6%), stchios (1,0%), dn poliskrid strch (1,0%). Sedngkn komponen sert tediri dri 39,5% neutrl detergent fiber (NDF) dn 35,10% cid detergent fiber (ADF) (Grci et l. 1996). Ekstrk enzim rumen domb mempunyi ktifits selulse sebesr 1,66 ± 0,19 IU/ml/menit; milse 1,32 ± 0,02 IU/ml/menit. Tingginy ktifits enzim ini kn merombk komponen

20 50 krbohidrt komplek yng bnyk terdpt pd TDL. Fkt ini dpt diliht pd penelitin ini dimn peningktn penmbhn volume ekstrk cirn enzim rumen meningktkn nili glukos terlrut (Gmbr 6). Hl ini mengindiksikn bhw subsrt poliskrid pd TDL msih cukup untuk dirombk sehingg kn meningktkn pul nili poliskrid yng dpt disederhnkn menjdi monoskrid yng dpt diliht dri semkin meningktny nili glukos terlrut. Pnty et l. (2005) melporkn bhw perlkun penmbhn enzim rumen sebesr 3,44 dn 6,89 IU/kg pd whet pollrd menurunkn kdr poliskrid sebesr 4 dn 3,9%. Lebih juh dinytkn bhw hidrolisis enzim dengn konsentrsi 6,89 IU/kg terhdp komponen poliskrid whet pollrd jug kn meningktkn kndungn oligoskrid dn monoskrid sebesr 5,5% dibndingkn pd perlkun tnp penmbhn enzim. Enzim milse kn menghidrolisis iktn α-1,4 pd TDL menjdi D- glukos, mltos dn sejumlh kecil destrin (Gmbr 26). Proses penghidrolisisn ini merupkn kerj kelompok endo milse dn eksomilse. Endo milse yitu enzim milse yng bekerj dengn memech iktn pd bgin tengh substrt dengn ph optimum 5-7 dn suhu optimum o C. Gmbr 26. Meknisme kerj enzim milse memotong iktn α-1,4 (Stryer 2000)

21 51 Endo milse bnyk ditemukn pd tnmn dn mikroorgnisme, terutm Bcillus sterothermophilus, B-subtilus, Apergilus niger dn A.oryze. Sedngkn kelompok ekso milse dlh menghidrolisis unit-unit dri ujung non reduksi substrt menjdi mltos dn mltotrios dengn ph 4,5 5,5 dn suhu o C. Ekso milse bnyk ditemukn pd tnmn dn mikroorgnisme, terutm Bcillus sterothermophilus, B-subtilus, Apergilus niger dn A.oryze. Jenis mikroorgnisme ini sngt bnyk didptkn di rumen sehingg ketik cirn enzim dieksrksi untuk mendptkn enzim ksr, jenis enzim milse dn selulse jug dpt terdeteksi ktifitsny. Hsil nlis kulits nutrien TDL dengn periode inkubsi 24 jm menghsilkn penurunn nili kndungn sert ksr dn perubhn komponen sert. Nili Acid Detergent Fiber (ADF) dn Neutrl Detergent Fiber (NDF) dlh nili yng dihsilkn untuk mengmbrkn komponen dri sert ksr dimn kedu metode ini hny dpt menentukn kdr totl sert yng tk lrut dlm lrutn deterjen. ADF hny dpt untuk menentukn kdr totl selulos dn lignin, sedngkn dengn NDF dpt ditentukn kdr totl dri selulos, hemiselulos dn lignin. Selisih jumlh sert dri nlisis NDF dn ADF dinggp jumlh kndungn hemiselulos, meski sebenrny terdpt jug komponenkomponen linny selin selulos, hemiselulos dn lignin. Pd penelitin ini nili NDF dn ADF perlkun kontrol tnp penmbhn enzim memperlihtkn nili kndungn NDF yng lebih tinggi dibndingkn dengn perlkun 20, 40, 60 dn 100 ml enzim/kg TDL. Penurunn nili NDF dn ADF ini dpt mengmbrkn meningktny bgin bhn pkn yng dpt dicern. Penmbhn 100 ml enzim/kg TDL dpt menurunkn kdr sert mencpi 53,40% (Gmbr 9 dn 10). Penurunn kdr sert ini merupkn hsil dri kerj enzim selulse yng bersl dri enzim selulitik yng disekresikn mikrob rumen. Selulos dlh polimer tk bercbng dri glukos yng dihubungkn mellui iktn 1,4-β glikosid. Molekul lurus dengn unit glukos rt-rt sebnyk 5000 ini bergregsi membentuk fibril yng terikt mellui

22 52 iktn hidrogen di ntr gugus hidroksil pd rnti di sebelhny. Sert selulos yng mempunyi kekutn fisik yng tinggi terbentuk dri fibril-fibril ini tergulung seperti spirl dengn rh-rh yng berlwnn menurut stu sumbu (Hrt 1983). Kim et l mengemukkn bhw kompleks enzim selulse mempunyi tig komponen utm yng bekerj bersm-sm tu berthp dlm mengurikn selulos menjdi unit glukos, yitu 1. Endo-selulse yng memotong iktn bgin dlm struktur kristl dri selulos dn mengelurkn unit selulos dri rnti poliskrid. 2. Ekso-selulse yng memotong 2-4 unit selulos dri rnti khir hsil produksi endo-selulse dn menghsilkn tetrskrid tu diskrid seperti selobios. 3. Selobiose tu β-glukosidse yng menghidrolisis produk dri ekso-selulse menjdi monoskrid. Pd Gmbr 27 dijelskn tentng tig jenis reksi yng diktlisis oleh selulse yitu memotong interksi nonkovlen dlm bentuk iktn hidrogen yng d dlm struktur kristl selulos oleh enzim endo-selulse; menghidrolisis sert selulos menjdi skrid yng lebih sederhn oleh ekso-selulse sert menghidrolisis diskrid dn tetrskrid menjdi glukos oleh enzim β- glukosidse. Gmbr 27. Tig tipe reksi yng diktlissi oleh enzim selulse

23 53 Penelitin yng dilkukn Mlthi dn Devegowd (2002) pd pkn wl untuk broiler mendptkn bhw penggunn multi enzim meningktkn nili totl gul sunflower mel, soyben mel, deoiled rice brn, yng lebih besr dibndingkn dengn penggunn enzim tunggl. Kndungn multi enzim ini jug menjdi kelebihn yng dimiliki oleh ekstrk enzim rumen domb. Kdr protein terlrut merupkn produk ntr pd hidrolisis protein oleh ekstrk enzim protese yng terkndung dlm ekstrk enzim ksr dri cirn rumen domb. Kdr protein terlrut meningkt dengn peningktn jumlh enzim ksr yng diberikn Hl ini dimungkinkn dengn dengn dny ktivits enzim protese pd cirn rumen domb yitu sebesr 0,26 ± 0,07 IU/ml/menit. Enzim protese dlh enzim pemech protein menjdi komponen penyusunny yitu sm mino yng kn diserp tubuh. Pd penelitin ini terjdi peningktn derjt hidrolisis protein dengn didptknny nili protein terlrut yng semkin meningkt dengn meningktny wktu inkubsi TDL dengn enzim rumen. Peningktn derjt hidrolisis ini disebbkn oleh peningktn pemutusn iktn peptide dengn meningktny solubilits peptide di dlm Trikloro Asett Acid tu TCA (Monteclvo et l. 1984) dn didukung oleh lporn Jin et l. (2007). Wong (1995) menjelskn bhw berdsrkn cr pemotongn iktn peptid, enzim peptidse dpt dibgi menjdi eksopeptidse dn endopeptidse. Eksopeptidse bekerj pd kedu ujung molekul protein, yng terdiri dri du jenis enzim yitu krboksipeptidse dn mino peptidse. Krboksipeptidse dpt melepskn sm mino yng memiliki gugus COOH bebs pd ujung molekul protein sedngkn mino peptidse dpt melepskn sm mino pd ujung linny yng memiliki gugus NH2 bebs. Sedngkn enzim endopeptidse memech protein pd tempt-tempt tertentu dlm molekul protein dn bisny tidk mempengruhi gugus yng terletk di ujung molekul protein. Endopeptidse bekerj spesifik memutuskn iktn peptid pd sm mino tertentu dlm molekul protein, seperti : tripsin yng memutuskn iktn

24 54 peptid setelh sm mino rginin dn lisin dn bekerj optimum pd ph 8 sert kimotripsin yng memutuskn iktn peptid setelh sm mino fenillnin, triptofn, tirosin dn bekerj lmbt pemutusn iktn peptid setelh sm mino sprgin, histidin, metionin dn lesin dn bekerj optimum pd ph 8. O H O O HO C C R NH C... HN C C R NH 2 mino peptidse krboksi peptidse Gmbr 28. Hidrolisis protein oleh enzim eksopeptidse (Wong 1995). Pol respon nili protein terlrut memperlihtkn respon yng bersift kudrtik dn bukn linier. Dimn peningktn penmbhn jumlh enzim cirn rumen (dri ml/kg) tidk mempengruhi kdr protein terlrut TDL terhidrolisis. Hl ini dpt dijelskn bhw TDL dlh substrt yng sesui dengn ktlistor enzim protese rumen, tetpi kren kdr protein substrt TDL tidk menglmi peningktn dengn penmbhn enzim mk penyederhnn nutrien protein yng terkndung dlm TDL jug tidk berbed. Kohn dn Alien (1994) menggunkn enzim protese dri ekstrk cirn rumen spi untuk mengukur lju degrdsi protein dri bungkil kedeli dn hy lucerne. Enzim protese hsil ekstrksi dengn butnol dn seton hny tersis 62 persen ktivitsny dibnding cirn rumen wl. Tidk d perbedn ntr trf enzim 3, 5 tu 10 ml dlm mendegrdsi protein pkn. Dilporkn pul oleh Kohn dn Alien (1994) pol respon kudrtik dri enzim protese dimn protein bungkil kedeli terdegrdsi dengn keceptn 0,15 mg per grm per jm pd 2 jm pertm dn turun menjdi 0,01 mg per grm per jm dri 8 smpi 24 jm berikutny. Kejdin yng sm jug terjdi pd protein hy lucerne, didpt degrdsi protein dengn keceptn 0,06 mg per grm per jm pd 2 jm pertm dn turun menjdi 0,01

25 55 mg per grm per jm dri 8 smpi 24 jm berikutny. Pol respon dri kerj enzim protese pd penelitin ini jug menunjukkn pol kudrtik dimn dengn pemberin enzim cirn rumen sebnyk 100ml/kg TDL mk protein TDL terdegrdsi dengn keceptn d 0,017 mg per jm. Kemmpun bkteri rumen untuk meningktkn kulits bhn bku pkn telh dibuktikn oleh Purnomohdi (2006). Dimn fermentsi jermi pdi selm 7 hri dengn bkteri selulitik rumen menghsilkn penurunn bhn kering 10,6%, kdr sert 15,98% sert meningktkn kndungn protein 54,50%. Pd penelitin ini tidk terjdi peningktn kdr protein kren enzim rumen yng ditmbhkn dlh enzim yng didpt dri proses pengendpn dn setrifugsi rpm, dengn kdr protein enzim cirn enzim yng sngt kecil 0,067g/ml. Sedngkn jumlh enzim yng ditmbhkn pd 10 grm TDL perlkun in vitro hny 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 dn 1 ml/kg TDL. Hl ini bersesuin dengn meknisme kerj dri enzim yng hny mektlissi sutu reksi tnp mempengruhi hsil reksi tersebut (Wong 1995). Peningktn kdr protein terlrut yng tidk berbed nyt ntr semu perlkun dengn penmbhn enzim jug menjelskn bhw tidk terdpt perbedn kdr protein dri substrt TDL yng didegrdsi oleh enzim protese. Peningktn kdr protein terlrut kn mempermudh ikn untuk memnftkn sm-sm mino penyusun protein untuk pertumbuhn. Hidrolisis sm fitt oleh enzim fitse enzim rumen domb dihrpkn kn meningktkn kemmpun ikn untuk memnftkn TDL dlm pkn. Asm fitt merupkn zt ntinutrien yng secr lmih terdpt pd tnmn leguminos dn kcng-kcngn. Mio-inositol hekskisfosft (C 6 H 18 O 24 P 6 ) dlh rumus kimi dri sm fitt dengn struktur cincin yng mirip dengn glukos, yng beriktn dengn fosfor unruk membentuk struktur sm fitt. Selin fosfor unsur-unsur lin jug ditemukn terikt dlm sm fitt (Rvindr et l. 2000) seperti minerl bervlensi du (C, Zn, Fe dn Mg) yng kn membentuk fitt minerl yng tidk lrut (Cole, 2001). Fitt bersm ktion

26 56 multivlent dpt membentuk iktn kompleks pd ph netrl. Iktn ini resistnt terhdp proses bsorbsi di dlm slurn percernn sehingg ketersedin minerl yng dpt digunkn kn menurun (Bedford dn Prtridge 2001). Asm fitt tidk lrut dlm ph netrl dn menurunkn ktifits enzim protese dengn protein yng mengikt fitt, sehingg kn menurunkn pul biovilbility dri protein di dlm pkn (Rvindr et l. 2000). Dilporkn pul bhw ktivits enzim protese dlm slurn pencernn kn rendh dengn dny protein terikt fitt. Fitt mengikt protein dn minerl di dlm digest, sngt potensil untuk menghmbt ktivits enzim-enzim pencernn. Conrd et l. (1996), menytkn bhw fitt menghmbt ktivits enzim tripsin. Ikn mempunyi keterbtsn dlm menyerp fosfor dri ir kren konsentrsi fosfor dlm ir sngt kecil, sehingg kebutuhn fosfor ikn sebgin besr dipenuhi dri pkn (NRC, 1993). Minerl fosfor penting sebgi komponen dri fosfolipid, smsm nuklet, senyw berenergi tinggi (ATP). Fosfor berpernn penting dlm metbolism krbohidrt, lemk dn sm mino, sedngkn dlm otot dn jringn syrf berpern dlm menjg teknn osmotic cirn tubuh (Lll 2002). Keseimbngn fosfor dlm tubuh dijg dengn jln pertukrn ntr senyw fosfor dlm tulng dn fosfor yng d dlm mknn (Djodjosubgio dn Piling, 1990). Kdr sm fitt TDL terhidrolisis memperlihtkn pol respon linier, dimn peningktn jumlh ekstrk enzim cirn rumen yng ditmbhkn kn menurunkn kdr sm fitt secr linier. Penurunn kdr sm fitt merupkn hsil kerj dri enzim fitse yng terkndung dlm ekstrk enzim cirn rumen domb. Enzim fitse membntu melepskn minerl yng terikt pd gugus tertentu menjdi minerl terlrut seperti P, C, Zn, Mg dn Fe yng dpt dimnftkn oleh ikn. Enzim rumen domb penelitin ini mengndung enzim fitse sebesr 0,27 ± 0,13 IU/ ml/menit. Fitse dpt menghidrolisis sm fitt secr berthp menjdi senyw turunnny, yng dpt lrut dn terserp dlm sistem pencernn. Fitse (mio-inositol hekskisfosft fosfohidrolse, E.C. 3.1.

27 57 3.8) merupkn sutu fosfomonoesterse yng mmpu menghidrolisis sm fitt menjdi ortofosft norgnik dn ester-ester fosft dri mio-inositol yng lebih rendh. Cole (2001) mengemukkn bhw terdpt 2 jenis enzim fitse yitu 3- fitse yng diperoleh dri fungi dn 6-fitse yng diperoleh dri tumbuhn. Perbedn khs dri kedu jenis ini dlh tempt hidrolisis pertm molekul fitt, 3-fitse pertm memotong sm fitt pd posisi 3 dn 6-fitse pertm memotong sm fitt pd posisi 6 (Gmbr 3). Hl ini sejln pul dengn nlis sm fitt yng terkndung pd perlkun inkubsi TDL dengn 80ml/kg TDL yng menglmi penurunn 19,776% dibndingkn perlkun kontrol. Penurunn kdr sm fitt yng terbesr didptkn pd perlkun penmbhn ekstrk cirn rumen domb sebnyk 100 ml/kg TDL yitu sebesr 68,088 % dibndingkn perlkun kontrol dengn kdr fitt 7,839%. Penurunn kdr sm fitt ini dihrpkn dpt meningktkn kulits TDL terhidrolisis. Sehingg kinerj pertumbuhn ikn dihrpkn kn semkin bik dengn penggunn TDL terhidrolisis kren bhn pkn ikn nil tidk dibtsi lgi oleh bhn ntinutisi fitt. Armini dn Refild (2005) melporkn bhw penmbhn enzim fitse pd gndum, bektul dn kedeli dpt meningktkn ketersedin minerl C, Mg, Fe dn Zn. Minerl C, Mg, Fe dn Zn yng dibebskn dri gndum, berturut-tuurut 70 %, 7,1 %, 17,5 % dn 89,6 %; pd bektul berturut-turut mencpi 60 %, 17,5 %, 7,7 % dn 86,8 % dn pd Kedeli berturut-turut mencpi 77 %, 7,7 %, 12,1 % dn 88,9 %. Penmbhn fitse pd bhn pkn dilporkn kn meningktkn nili rsio P terlrut/p totl dri 19,5% pd pkn tnp penmbhn enzim fitse menjdi 44,1% pd pkn dengn penmbhn enzim fitse sebesr 50 mg/100g setr dengn 250 unit enzim fitse pd bhn nbti bungkil kedeli dn pollrd (Amin 2007). Hl ini send dengn yng dismpikn oleh Msumoto et l. (2001) bhw bhw proses inkubsi pkn dengn enzim fitse 50mg/100 g bhn nbti pd suhu 37 o C selm 2 jm kn memberikn nili P terlrut/p totl sebesr 58,7% dn nili kecernn P sebesr 95%. Peningktn nili P

28 58 terlrut ini kn meningktkn nili kecernn P pkn. Ikn lele yng mendpt pkn dengn penmbhn enzim fitse, memperlihtkn kecernn P sebesr 86,10 % dimn nili ini yng lebih tinggi dibndingkn ikn yng tidk diberi penmbhn fitse yng hny mencern P sebesr 68,55% (Amin, 2007). Ikn dengn pkn yng mengndung bhn nbti dengn penmbhn enzim fitse dpt meningktkn kecernn P dri 68% menjdi 79,8% ikn sebss (Dicentrcus lbrks) ukurn juvenile (Teles et l. 1999); 59% menjdi 87% pd ikn striped bss (Sores, 2001); 80% menjdi 89,1 pd ikn rinbow trout ukurn 20 g (Hrdy 2002), 63,84 menjdi 74,06% pd ikn Slmon ukurn 100g dn 64,5 % menjdi 74,06% pd ikn bung ukurn 6,9g (Yulismn, 2006). Ketidn enzim fitse pd pkn berbsis nbti kn menyebbkn fosfor yng terdpt dlm bhn nbti msih terikt sm fitt sehingg kecernn fosfor menjdi rendh. Smpel perlkun 100 ml enzim/kg TDL dri hsil nlis profil sm mino memperlihtkn peningktn komposisi sm mino dibndingkn TDL tnp hidrolisis. Hl ini membuk pelung dri enzim rumen domb sebgi sumber sm mino. Hl ini dpt diliht dri jenis sm mino sistein dn norleusin yng hny didptkn pd TDL dengn penmbhn enzim. Asm mino ini didug didptkn dri proses pengendpn enzim dengn mmonium sulft yng kn merusk mntel protein dn menrik molekul ir dri sekitr permukn molekul protein cirn rumen. Proses ini didug menrik pul sebgin kecil sm mino yng terdpt pd endpn rumen. Dugn ini didukung dengn dt dri Budinsyh (2010) yng melporkn bhw endpn rumen spi lokl mengndung 66,8% protein yng berup sm mino. Selin itu sift khs yng hny dimiliki oleh enzim protese dlh sift utokllisis. Dimn ketik seluruh subsrt sudh terdegrdsi sedngkn msih d ktifits enzim yng tersis mk enzim protese kn mendegrdsi protein enzim itu sendiri menjdi sm-sm mino sederhn sehingg dpt menjdi sumber sm mino TDL yng sudh d sert menjdi sumber untuk jenis sm mino

29 59 yng sebelumny tidk terdpt di TDL. Sebb inilh yng didug memberikn kontribusi peningktn dlm jumlh yng kecil profil sm mino TDL terhidrolisis dn didptknny jenis sm mino sistein dn norleusin yng sebelumny tidk didptkn pd TDL tnp hidrolisis. Perlkun penmbhn enzim rumen 100 ml enzim/kg TDL menghsilkn penurunn kdr sert tertinggi 53,46%, sm fitt 68,088% sert peningktn komposisi sm mino. Perlkun ini kn digunkn untuk thpn uji in vivo pd penelitin thp ke tig.

30 Thp ketig Hsil penelitin thp ke-3 menckup du eksperimen dengn perlkun yng sm tetpi menggunkn bhn bku TDL yng berbed yitu TDL terhidroilis dengn enzim cirn rumen dn TDL tnp perlkun hidrolisis. 1. Efektifits pemnftn TDL terhidrolisis dlm pkn formulsi untuk ikn nil 2. Efektifits pemnftn TDL tnp hidrolisis dlm pkn formulsi untuk ikn nil Lju Pertumbuhn Hrin. Lju pertumbuhn hrin rt-rt ikn uji setip perlkun dengn penggunn TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis disjikn pd Gmbr 29. Dt selengkpny setip perlkun terdpt pd Lmpirn 44 dn 45. Nili lju pertumbuhn hrin perlkun TDL terhidrolisis nyt (P<0,05) dipengruhi oleh perbedn persentse penggunn TDL terhidrolisis di dlm pkn. Nili rt-rt lju pertumbuhn hrin (LPH) tertinggi yitu 2,77 % dicpi oleh perlkun tnp pemkin TDL terhidrolisis yng tidk berbed nyt dengn nili LPH pd pemkin TDL terhidrolisis 10 dn 15% dlm pkn. Sedngkn nili LPH perlkun dengn pemkin TDL terhidrolisis 20, 25 dn 30% dlm pkn nyt lebih rendh dri perlkun kontrol dn perlkun dengn penggunn 10 dn 15 % TDL terhidrolisis dlm pkn. Nili terendh yitu 1,47% dicpi oleh perlkun dengn penggunn TDL terhidrolisis terbnyk yitu sebesr 30%. Nili lju pertumbuhn hrin perlkun TDL tnp hidrolisis nyt (P<0,05) dipengruhi oleh perbedn persentse penggunn TDL terhidrolisis di dlm pkn dimn nili lju pertumbuhn hrin cenderung meningkt dengn meningktny penggunn TDL terhidrolisis di dlm pkn. Perlkun 30, 25 dn 20 % TDL terhidrolisis dengn nili lju pertumbuhn hrin 1,97; 1,86; 1,83% menghsilkn nili LPH lebih tinggi dn nyt berbed (P<0,05) dibndingkn dengn perlkun 15 dn 10 % TDL terhidrolisis dlm pkn dengn nili LPH 1,50; 1,32 %.

31 61 b b b b b Ket: LPH TDLt (LPH TDL terhidrolisis); LPH TDLth (LPH TDL tnp hidrolisis); Huruf yng sm pd digrm btng yng berwrn sm menunjukkn nili tidk berbed nyt (P>0,05) (liht Lmpirn 46 dn 48). Gmbr 29. Nili Lju pertumbuhn hrin perlkun TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis Nili LPH rt-rt perlkun TDL terhidrolisis smpi pd trf penggunn 15% TDL terhidrolisis dlm pkn msih memperlihtkn nili yng bik dibndingkn TDL terhidrolisis, tetpi nili LPH muli menurun pd perlkun 20 dn 25 % dibndingkn dengn nili yng didpt pd perlkun TDL terhidrolisis pd trf yng sm. Perlkun 30 % TDL terhidrolisis memperlihtkn nili LPH yng menurun drstis dri 1,80% pd penggunn 25 % TDL terhidrolisis dlm pkn menjdi hny 1,47%, dimn nili ini juh lebih rendh pd perlkun dengn TDL terhidrolisis dengn trf yng sm dengn nili LPH rt-rt sebesr 1,97% Jumlh Konsumsi Pkn Jumlh konsumsi pkn rt-rt ikn uji setip perlkun dengn penggunn TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis disjikn pd Gmbr 30. Dt selengkpny setip perlkun terdpt pd Lmpirn 50 dn 51. Persentse penggunn TDL terhidrolisis (TDL terhidrolisis) dn TDL tnp hidrolisis (TDL terhidrolisis) dlm pkn nyt (P>0,05) tidk berpengruh

32 62 pd jumlh pkn yng dikonsumsi ikn uji. Pd Gmbr 30 secr deskriftif dpt terliht bhw smpi dengn trf 30% jumlh pkn yng dikonsumsi pd perlkun dengn TDL terhidrolisis dibndingkn dengn perlkun yng sm pd TDL terhidrolisis. Ket: JKP TDLt (JKP TDL terhidrolisis); JKP TDLth (JKP TDL tnp hidrolisis); Huruf yng sm pd digrm btng yng berwrn sm menunjukkn nili tidk berbed nyt (P>0,05) (liht Lmpirn 52 dn 53). Gmbr 30. Nili jumlh konsumsi pkn perlkun TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis Efisiensi Pkn Nili rt-rt efisiensi pkn ikn uji setip perlkun dengn penggunn TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis disjikn pd Gmbr 31. Dt selengkpny setip perlkun dpt diliht pd Lmpirn 50 dn 51. Persentse penggunn TDL terhidrolisis (TDL terhidrolisis) dlm pkn nyt (P<0,05) berpengruh pd nili efisiensi pkn. Perlkun TDL terhidrolisis menunjukkn nili efisiensi pkn tertinggi yitu 70,52% dicpi oleh perlkun 10% TDL terhidrolisis. Nili efisiensi pkn tertinggi ini tidk berbed nyt dengn yng dicpi perlkun 15% TDL terhidrolisis yitu 60,10%. Nili efisiensi pkn terendh yitu 30,71 dicpi oleh perlkun 25% TDL terhidrolisis, dimn nili ini tidk berbed nyt dengn nili efisiensi pkn perlkun kontrol, 20 % dn 30 % TDL terhidrolisis dengn nili efisiensi pkn berturut-turut sebesr 47,65, 31,05 dn 43,90%.

33 63 Pd perlkun TDL tnp hidrolisis, penggunn TDL terhidrolisis dengn persentse yng berbed dlm pkn tidk mempengruhi nili efisiensi pkn (P>0,05). Pd Gmbr 31 terliht nili efesiensi pkn TDL terhidrolisis smpi trf 15 % dlm pkn lebih tinggi dri TDL terhidrolisis dengn trf yng sm. c b bc b Ket: EP TDLt (EP TDL terhidrolisis); EP TDLth (EP TDL tnp hidrolisis); Huruf yng sm pd digrm btng yng berwrn sm menunjukkn nili tidk berbed nyt (P>0,05) (liht Lmpirn 54 dn 56). Gmbr 31. Nili efisiensi pkn perlkun TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis Retensi Protein dn Lemk Nili retensi protein rt-rt ikn uji setip perlkun dengn penggunn TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis disjikn pd Gmbr 32. Dt setip ulngn selengkpny dpt diliht pd Lmpirn 58 dn 59. Persentse penggunn TDL terhidrolisis dlm pkn nyt (P<0,05) berpengruh pd nili retensi protein. Nili retensi protein tertinggi sebesr 40,70% pd perlkun 15% TDL terhidrolisis dlm pkn berbed nyt dengn semu perlkun linny. Perlkun 25% TDL terhidrolisis menghsilkn nili retensi protein terendh sebesr 16,7% yng tidk berbed nyt dengn perlkun kontrol, 10, 20 dn 30 % TDL dlm pkn. Penggunn persentse TDL tnp hidrolisis yng berbed dlm pkn nyt (P<0,05) berpengruh pd retensi protein. Retensi protein tertinggi yitu 24,68% terdpt pd perlkun dengn penggunn 30 % TDL terhidrolisis

34 64 dlm pkn. Nili retensi protein tertinggi ini tidk berbed nyt dengn perlkun 25 % TDL terhidrolisis dlm pkn dengn nili retensi protein sebesr 20,57%. Perlkun dengn 10 % TDL dlm pkn menghsilkn nili retensi protein terendh sebesr 14,3% yng tidk berbed nyt dengn perlkun 20 % TDL dlm pkn dengn nili retensi protein sebesr 17,38 %. Pd Gmbr 32 terliht bhw nili retensi protein 10, 15 dn 20 % TDL terhidrolisis dlm pkn lebih tinggi dri nili retensi protein pd trf yng sm dengn TDL tnp hidrolisis. c b b bc b b bc b c Ket: RP TDLt (RP TDL terhidrolisis); RP TDLth (RP TDL tnp hidrolisis) Huruf yng sm pd digrm btng yng berwrn sm menunjukkn nili tidk berbed nyt (P>0,05) (lit Lmpirn 60 dn 62) Gmbr 32. Nili retensi protein perlkun TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis Nili retensi lemk rt-rt ikn uji setip perlkun dengn penggunn TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis disjikn pd Gmbr 33. Dt setip ulngn selengkpny dpt diliht pd Lmpirn 57 dn 58. Persentse penggunn TDL terhidrolisis dlm pkn nyt (P<0,05) berpengruh pd retensi lemk. Perlkun kontrol (tnp penggunn TDL terhidrolisis) menghsilkn nili retensi lemk yng tertinggi yitu 33,73% yng tidk berbed nyt dengn perlkun dengn penggunn 10 % TDL terhidrolisis dlm pkn dengn nili retensi lemk sebesr 33,15 %. Sedngkn nili retensi lemk terendh terdpt pd perlkun 30 % TDL terhidrolisis yitu sebesr 14,40 % yng tidk berbed nyt dengn perlkun 20 % TDL terhidrolisis

35 65 dlm pkn dengn nili retensi lemk sebesr 14,95%. Nili retensi lemk pd perlkun yng menggunkn TDL terhidrolisis menghsilkn nili yng cenderung menurun dengn meningktny kndungn TDL di dlm pkn. Persentse penggunn TDL tnp hidrolisis dlm pkn nyt (P<0,05) berpengruh pd retensi lemk. Peningktn penggunn TDL terhidrolisis cenderung meningktkn nili retensi lemk. Perlkun 30 % TDL terhidrolisis menghsilkn nili retensi lemk yng rendh dn nyt berbed dengn semu perlkun linny. Dimn pd perlkun 10 % TDL terhidrolisis nili retensi lemk hny 8,33% dn secr perlhn kn nik menjdi 10,55%, 9,75%, 11,13% dn 20,46% dengn meningktny persentse TDL terhidrolisis dlm pkn. Keculi pd perlkun 30% TDL terhidrolisis dlm pkn, terliht pd Gmbr 33 bhw TDL terhidrolisis menghsilkn nili retensi lemk sebesr 14,40% yng juh lebih kecil dri perlkun dengn TDLtnp hidrolisis dengn nili 20,46%. c c b b b Ket: RL TDLt (RL TDL terhidrolisis); RL TDLth (RL TDL tnp hidrolisis); Huruf yng sm pd digrm btng yng berwrn sm menunjukkn nili tidk berbed nyt (P>0,05) (lit Lmpirn 64 dn 66). Gmbr 33. Nili retensi lemk perlkun TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis Heptosomtik Indeks dn Kdr Glikogen Hti Berdsrkn dt bobot tubuh dn bobot hti dilkukn perhitungn nili heptosomtik indeks (HIS). Hti yng telh dihitung nili HIS kn digunkn untuk bhn pengujin kndungn glikogen dlm hti. Nili HIS rt-rt ikn

36 66 uji setip perlkun dengn penggunn TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis disjikn pd Gmbr 34. Dt setip ulngn selengkpny dpt diliht pd Lmpirn 68 dn 69. Pd perlkun pkn menggunkn TDL terhidrolisis tidk terdpt perbedn nyt nili HIS dintr semu perlkun. Dengn urutn nili HIS dri rendh ke tinggi dlh 1,03 (15%TDL); 1,07 (10% TDL); 1,11 (tnp TDL); 1,21 (25%TDL); 1,23 (30%TDL) dn 1,27 (20% TDL). Persentse penggunn TDL terhidrolisis dlm pkn nyt (P<0,05) berpengruh pd kdr glikogen dlm hti ikn uji. Kdr glikogen dlm hti terliht meningkt dengn meningktny pemkin TDL dlm pkn. Perlkun penggunn 10% TDL terhidrolisis dlm pkn menghsilkn kdr glikogen hti terendh sebesr 0,116 mg/100ml yng nyt berbed dengn perlkun yng menggunkn TDL terhidrolisis 15, 20, 25 dn 30% dengn kdr glikogen hti secr berurutn sebesr 0,151; 0,209; 0,224 dn 0,226 mg/100ml. b b b b Ket: HIS TDLt (HIS TDL terhidrolisis); HIS TDL (HIS TDL tnp hidrolisis); Huruf yng sm pd digrm btng yng berwrn sm menunjukkn nili tidk berbed nyt (P>0,05) (lit Lmpirn 70 dn 71). Gmbr 34. Nili heptosomtik indeks (HIS) perlkun TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis Penggunn persentse TDL tnp hidrolisis dlm pkn nyt (P<0,05) berpengruh pdt nili HIS dn jumlh glikogen di hti. Nili HIS perlkun 15 % TDL tnp hidrolisis dlm pkn lebih tinggi dn nyt berbed dengn perlkun 25 dn 30 % TDL terhidrolisis dlm pkn. Sedngkn perlkun 10

37 67 % TDL terhidrolisis menghsilkn nili HIS yng tertinggi tetpi tidk nyt berbed dengn semu perlkun TDL terhidrolisis yng lin. Nili glikogen hti tertinggi sebesr 0, (mg/100ml) dicpi pd perlkun 25% TDL yng berbed nyt dengn nili glikogen hti pd semu perlkun yng linny sert terdpt perbedn yng nyt ntr perlkun linny tersebut Aktifits enzim slurn pencernn Pd khir pengmtn, dilkukn pengukurn ktifits selulse, milse dn protese (IU/g/menit) pd slurn pencernn ikn nil yng mendpt perlkun pkn formulsi yng mengndung TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis dlm pkn ikn nil. Dt selengkpny ktifits enzim selulse, milse dn protese setip perlkun disjikn pd Lmpirn 77 dn Aktifits Enzim Selulse Aktifits selulse nyt (P<0,05) dipengruhi oleh perbedn persentse penggunn TDL terhidrolisis dlm pkn. Nili ktifits selulse dlh nili yng terendh dibndingkn dengn jenis enzim yng lin. Perlkun tnp penggunn TDL terhidrolisis menghsilkn ktifits enzim selulse terendh (0,0176 IU/ml/menit) yng nyt (P<0,05) berbed dengn nili ktifits enzim selulse pd perlkun penggunn 30% TDL terhidrolisis dengn nili ktifits selulse sebesr 0,0393 IU/ml/menit. Nili ktifits enzim selulse semkin meningkt dengn meningktny penggunn TDL terhidrolisis di dlm pkn. Secr berurutn nili ktifits selulse pd perlkun 10, 15, 20, % TDL terhidrolisis dlh 0,0293; 0,0329 dn 0,0311 IU/ml/menit, dn ke-empt perlkun ini tidk nyt berbed dengn perlkun 25% TDL terhidrolisis dengn ktifits selulse sebesr 0, IU/ml/menit. Pd perlkun dengn menggunkn TDL tnp hidrolisiss didptkn fkt bhw peningktn persentse penggunn TDL terhidrolisis dlm pkn tidk mempengruhi ktifits selulse dlm slurn pencernn ikn. Pd Gmbr 33 secr deskriptif dpt diliht bhw ktifits selulse pd slurn pencernn ikn dengn pkn mengndung TDL tnp hidrolisis mempunyi

38 68 ktifits selulse yng lebih tinggi dri perlkun dengn TDL terhidrolisis pd trf yng sm. bc bc bc b c Ket: Selulse TDLt (Aktifits selulse TDL terhidrolisis); Selulse TDLth (Aktifits selulsetdl tnp hidrolisis). Huruf yng sm pd digrm btng yng berwrn sm menunjukkn nili tidk berbed nyt (P>0,05) (liht Lmpirn 79 dn 81). Gmbr 35. Aktifits enzim selulse (IU/ml.menit) TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis Aktifits enzim milse Aktifits enzim milse tidk dipengruhi oleh perbedn persentse penggunn TDL terhidrolisis dlm pkn. Pd perlkun dengn penggunn TDL terhidrolisis nili ktifits enzim milse pd slurn pencernn berd pd kisrn nili 0,0758 0,2148 (IU/ml/menit) sedngkn perlkun kontrol tnp TDL didpt nili ktifits milse mencpi 0,2341 IU/ml/menit. Aktifits enzim milse nyt (P<0,05) dipengruhi oleh perbedn persentse penggunn TDL tnp hidrolisis dlm pkn. Aktifits enzim milse pd slurn pencernn ikn yng diberi pkn dengn cmpurn TDL terhidrolisis berd pd kisrn nili (0, ,2924 IU/ml/menit). Perlkun dengn penggunn 10% TDL tnp hidrolisis dlm pkn mencpi nili ktifits enzim milse tertinggi yitu 0,2924 IU/ml/menit yng nyt berbed dengn perlkun 15, dn 30 % TDl yitu berturut-turut sebesr 0,1466; 0,0620; 0,2099 dn 0,1181 IU/ml/menit. Pd Gmbr 34 terliht secr deskriftif bhw ktifits enzim milse pd slurn pencernn ikn dengn

39 69 TDL terhidrolisis pd trf 10, 15 dn 25 % lebih tinggi dri ktifits enzim milse pd trf yng sm dengn TDL terhidrolisis. b c b b b b b b Ket: milse TDLt (ktifits milsetdl terhidrolisis); milse TDLth (ktifits milse TDL tnp hidrolisis). Huruf yng sm pd digrm btng yng berwrn sm menunjukkn nili tidk berbed nyt (P>0,05) (liht Lmpirn 82 dn 84). Gmbr 36. Aktifits enzim milse (IU/ml.menit) TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis Aktifits enzim protese Nili rt-rt ktifits protese slurn pencernn ikn uji dengn pkn mengndung TDL terhidrolisis dn TDL terhidrolisis disjikn pd Gmbr 35. Aktifits protese pd slurn pencernn ikn uji nyt (P<0,05) dipengruhi oleh perbedn persentse penggunn TDL terhidrolisis dlm pkn. Nili ktifits tertinggi yitu 0,790 IU/ml/menit dicpi pd perlkun penggunn 15% TDL terhidrolisis dlm pkn yng tidk berbed nyt dengn ktifits protese pd slurn pencernn ikn dengn perlkun 20%TDL/kg pkn. Sedngkn nili terendh 0,411 IU/ml/menit dicpi pd penggunn 30% TDL terhidrolisis dlm pkn yng tidk berbed dengn perlkun kontrol dn perlkun 10% TDL terhidrolisis dlm pkn tetpi berbed dengn perlkun linny. Aktifits enzim protese slurn pencernn ikn pd perlkun kontrol (tnp penggunn TDL terhidrolisis) dlh sebesr 0,425 IU/ml/menit dn dengn penggunn TDL terhidrolisis 10, 15 dn 20% dlm pkn ktifits

40 70 protese menjdi meningkt tetpi pd penggunn 25 dn 30% TDL terhidrolisis dlm pkn ktifits enzim protese terliht muli menurun. Aktifits enzim protese nyt (P<0,05) dipengruhi oleh perbedn persentse penggunn TDL tnp hidrolisis dlm pkn. Nili ktifits tertinggi yitu dicpi pd perlkun penggunn 15% TDL dlm pkn yng nyt berbed dengn semu perlkun yng lin. Sedngkn ktifits protese terendh sebesr 0,0604 IU/ml/menit dicpi pd penggunn 25% TDL tnp hidrolisis yng tidk berbed dengn perlkun 20% TDL tnp hidrolisis dlm pkn. Pd Gmbr 35 dpt terliht bhw ktifits protese pd slurn pencernn ikn dengn TDL terhidrolisis lebih tinggi dri ktifits protese pd perlkun TDL terhidrolisis trf yng sm. c c b b c d b Ket: protese TDLt (ktifits protesetdl terhidrolisis); protese TDLth (ktifits protese TDL tnp hidrolisis). Huruf yng sm pd digrm btng yng berwrn sm menunjukkn nili tidk berbed nyt (P>0,05) (liht Lmpirn 85 dn 87). Gmbr 37. Aktifits enzim protese (IU/ml.menit) TDL terhidrolisis dn TDL tnp hidrolisis Kdr Glukos drh ikn uji perlkun TDL terhidrolisis Pengmtn kdr glukos drh dilkukn pd ikn uji dengn perlkun kontrol tnp menggunkn TDL sert perlkun dengn trf TDL terhidrolisis yng berbed dlm pkn. Sebelum pengmbiln contoh drh dilkukn, ikn dipuskn terlebih dhulu selm 48 jm. Selnjutny pengmbiln drh dimuli pd jm ke 0 (sebelum pemberin pkn) dn jm ke 4, 8 dn 24 jm setelh ikn diberi mkn stu kli smpi kenyng (post