Lampiran 1: Skema Pembuatan Stok Kultur Agar Miring. Lactobacillus plantarum pada MRS agar miring

Transkripsi

1 85 Lmpirn 1: Skem Pembutn Stok Kultur Agr Miring Lctobcillus plntrum pd MRS gr miring Di mbil stu ose llu dicelupkn ke dlm MRS broth 10 ml Dihomogenissi dengn vortex Di inkubsi pd suhu 30 0 C selm 48 jm Isolt Lctobcillus plntrum dlm MRS broth Dihomogenissi dengn vortex Di celupkn ujung oose steril pd lrutn kultur cir Digoreskn pd MRS gr miring Stok kultur gr miring Lctobcillus plntrum

2 86 Lmpirn 2: Skem Uji Kethnn Lctobcillus plntrum Terhdp ph Asm Dilkukn kurv pertumbuhn bkteri Lctobcillus plntrum sebelum perlkun terhdp uji probiotik Hsil Kultur stok cir Lctobcillus plntrum yng tumbuh pd MRS broth (30 0 C, 24 jm) Dihomogenissi dengn vortex Diinokulsikn sebnyk 1 ml ke dlm 10 ml MRS broth bru Diinkubsi pd 30 0 C selm 18 jm Diinokulsikn sebnyk 1 ml ke dlm 9 ml MRS broth bru (ph ditur menjdi 2, 3, dn 4 dengn menmbhkn HCl 1 N Ditumbuhkn dlm MRS gr Diinkubsi pd suhu 30 0 C selm 24 jm Dihitung jumlh koloni yng tumbuh

3 87 Lmpirn 3: Skem Uji Kethnn Lctobcillus plntrum Terhdp Grm Empedu 0,3 % (b/v) Kultur stok cir bkteri sm lkttyng tumbuh pd MRS broth (30 0 C, 24 jm) Dihomogenissi dengn vortex Diinokulsikn sebnyk 1 ml ke dlm 10 ml MRSB bru Diinkubsi pd suhu 30 0 C selm 18 jm Diinokulsikn sebnyk 1 ml ke dlm 9 ml MRSB bru yng mengndung Oxgll 0,3% (b/v) grm empedu Ditumbuhkn dlm MRSA Diinkubsi pd suhu 30 0 C selm 24 jm Dihitung jumlh koloni yng tumbuh

4 88 Lmpirn 4: Skem Uji Kethnn Lctobcillus plntrum Terhdp Bkteri Ptogen ) Lngkh ke-1 Msing-msing kultur bkteri ptogen (Escherichi coli, Stphylococcus ureus dn Slmonell typhi) Dinokulsikn sebnyk 1 oose ke dlm 10 ml NB Diinkubsi pd suhu 30 0 C selm 24 jm b) Lngkh ke-2 Kultur stok cir Lctobcillus plntrum hsil isolsi dri usus itik Mojosri yng tumbuh pd MRS broth (30 0 C, 24 jm) Diinokulsikn sebnyk 1 ml ke dlm 10 ml MRS broth bru Diinkubsi pd suhu 30 0 C selm 18 jm c) Lngkh ke-3 Bkteri ptogen (Escherichi coli, Stphylococcus ureus dn Slmonell typhi) yng tumbuh dlm NB (30 0 C, 24 jm) Diinokulsikn ke dlm NA sebnyk 25 µl secr pour plte Ditung medi NA dn dibirkn smpi pdt d) Lngkh ke-4 Dibut sumurn (dimeter 6 mm) dlm medi NA Dinokulsikn sebnyk 50 µl di dlm lubng sumurn tersebut Diinkubsi pd suhu 30 0 C selm 24 jm Diukur zon hmbt yng terbentuk

5 89 Lmpirn 5: Skem Uji Interksi Lctobcillus plntrum Terhdp Bkteri Non-Ptogen ) Lngkh ke-1 Kultur bkteri non-ptogen (Lctobcillus prcsei) Dinokulsikn sebnyk 1 oose ke dlm 10 ml MRS broth Diinkubsi pd suhu 30 0 C selm 24 jm b) Lngkh ke-2 Kultur stok cir Lctobcillus plntrum hsil isolsi dri usus itik Mojosri yng tumbuh pd MRS broth (30 0 C, 24 jm) Diinokulsikn sebnyk 1 ml ke dlm 10 ml MRS broth bru Diinkubsi pd suhu 30 0 C selm 18 jm c) Lngkh ke-3 Bkteri non-ptogen (Lctobcillus prcsei) yng tumbuh dlm MRS broth (30 0 C, 24 jm) Lctobcillus prcsei diinokulsikn ke dlm cwn petri sebnyk 50µl secr pour plte Ditung MRS gr dn dibirkn smpi pdt

6 90 d) Lngkh ke-4 Dibut sumurn (dimeter 6 mm) dlm medi MRSA Diinokulsikn sebnyk 50 µl kultur Lctobcillus plntrum didlm lubng sumurn tersebut Diinkubsi pd suhu 30 0 C selm 24 jm Dimti dengn hsil kedu koloni bkteri menytu

7 91 Lmpirn 6: Dt Hsil Uji Probiotik 6.1 Dt wl jumlh sel bkteri Lctobcillus plntrum sebelum perlkun Jm ke- OD (opticl density) fp sel bkteri (sel/ml) 0 0,14 1 1, , , , , , , , , , , , ,14 1 5, ,75 1 5, ,6 1 7, Dt Uji Kethnn Terhdp ph sm ph Jumlh wl sel bkteri (CFU/ml) Jumlh sel bkteri (CFU/ml) , , , Dt Uji Kethnn Terhdp Grm Empedu 0,3 % (b/v) Perlkun Jumlh wl sel bkteri Jumlh sel bkteri (CFU/ml) (CFU/ml) 0,3 % , Kontrol 1, CFU/ml 2.3 Dt Uji Kethnn Terhdp Bkteri Ptogen Perlkun Bkteri Dimeter zon hmbt (mm) Rt-rt ptogen Ulngn 1 Ulngn 2 Ulngn 3 Escherichi coli ,7 Stphylococcus ureus ,3 Slmonell typhi ,3

8 92 Lmpirn 7: Gmbr Hsil Pengmtn 7.1 Gmbr uji interksi Lctobcillus plntrum dengn Lctobcillus prcsei b Koloni ntr L. plntrum () dengn L. prcsei (b) menytu 7.2 Gmbr sel bkteri Lctobcillus plntrum (nk pnh) yng diisolsi dri usus hlus itik Mojosri (Ans plthyrinchos) berbentuk btng 7.3 Gmbr uji kethnn Lctobcillus plntrum terhdp ph 2, 3 dn 4 Uji kethnn L. plntrum terhdp ph 2 sebelum inkubsi Uji kethnn L. plntrum terhdp ph 2 setelh inkubsi

9 93 Uji kethnn L. plntrum terhdp ph 3 sebelum inkubsi Uji kethnn L. plntrum terhdp ph 3 setelh inkubsi Uji kethnn L. plntrum terhdp ph 4 sebelum inkubsi Uji kethnn L. plntrum terhdp ph 4 setelh inkubsi 7.4 Gmbr uji kethnn Lctobcillus plntrum terhdp grm empedu 0,3% (b/v) Uji kethnn L. plntrum terhdp grm empedu sebelum inkubsi Uji kethnn L. plntrum terhdp grm empedu setelh inkubsi

10 Gmbr uji kethnn Lctobcillus plntrum terhdp bkteri ptogen Uji Kethnn Terhdp Escherichi coli (tnd nk pnh menunjukkn zon hmbt Lctobcillus plntrum terhdp bkteri uji) Ulngn 1 Ulngn 2 Ulngn Uji Kethnn Terhdp Stphylococcus ureus (tnd nk pnh menunjukkn zon hmbt Lctobcillus plntrum terhdp bkteri uji) Ulngn 1 Ulngn 2 Ulngn Uji Kethnn Terhdp Slmonell typhi (tnd nk pnh menunjukkn zon hmbt Lctobcillus plntrum terhdp bkteri uji) Ulngn 1 Ulngn 2 Ulngn 3

11 95 Lmpirn 8: Komposisi Medi No Medi Komposisi gr/l 1 MRSB (demn Rogos Shrpe Broth) Merck GA, Germny 100 ml 20 g/l dektros 10 g/l pepton 8 g/l beef extrct 5 g/l N-sett 4 g/l yest extrct 2 g/l dipotsium fosft 1 g/l tween 80 2 g/l dimonium sitrt 0,2 g/l mgnesium sulft dn 0,05 g/l mngn sulft 2 MRSA (demn Rogos Shrpe Agr) Merck GA, Germny 100 ml 20 g/l dektros 10 g/l pepton 8 g/l beef extrct 5 g/l N-sett 4 g/l yest extrct 2 g/l dipotsium fosft 1 g/l tween 80 2 g/l dimonium sitrt 0,2 g/l mgnesium sulft dn 0,05 g/l mngn sulft 14 g/lagr 3 NB (Nutrient Broth) 1 g/l beef extrct 2 g/l yest extrct 5 g/l pepton 5 g/l NCl ph 7,4±0,2 4 NA (Nutrient Agr) 1 g/l beef extrct 2 g/l yest extrct 5 g/l pepton 5 g/l NCl ph 7,4±0,2 sert 0,85% gr

12 96 Lmpirn 9: Alt dn Bhn Penelitin Autoclve Hot plte Lminr Air Flow Shker incubtor Timbngn nlitik Vortex mixer b c b c d e f d f g h e i 5) Perltn gels (. Gels ukur, b. Erlenmeyer, c. Beker glss, d. Corong, e. Tbung reksi, f. Cwn petri) 6) ). Rk tbung reksi, b. Blue tip, c. Sendok, d. Gunting, e. Sptul, f. Penggris, g. Stirer, h. Jrum oose, i. Pipet tetes Mikropipet 1000 µl dn 200µL

13 97 Colony counter Kulks penyimpn bhn Isolt Bkteri sm lktt Bor (sumurn) Spektrofotometer Medi MRSA dn MRSB