Lampiran 1. Sampel Pulna Forte Tablet

Transkripsi

1 Lampiran 1. Sampel Pulna Forte Tablet 50

2 Lampiran 2. Komposisi Tablet Pulna Forte Daftar Spesifikasi Sampel 1. Pulna Forte No. Reg : DKL A1 ExpireDate :Agustus 2017 Komposisi : Ethambutol HCL mg Pyridoxin HCL mg Isoniazid mg 51

3 Lampiran 3. Gambar Alat Spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu 1800) Neraca analitik (MettlerToledo) Sonikator (Branson 1510) 52

4 Lampiran 4. Perhitungan Pembuatan HCl 0,1N HCl pekat = 37% setara dengan 12 N V 1 x N 1 = V 2 x N 2 V 1 x 12 N = 1000 ml x 0,1 N V 1 = 1000 ml x12 N 0,1 N = 8,3 ml 53

5 Lampiran 5. Bagan Alir Prosedur Penelitian 2. Pembuatan Larutan Induk Baku Isonizid Baku Isoniazid LIB I Isoniazid 1000 dipipet12,5 μg/ml m dipipet 12,5 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 25 ml LIB II Isoniazid 100 μg/ml ditimbang sebanyak 50 mg dimasukkan kedalamlabu tentukur 50 ml dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N Isoniazid 11 μg/ml Dipipet 5,5 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 50 ml dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N λ Isoniazid= 266 nm diukur serapan maksimum pada λ nm 54

6 Lampiran 5. (Lanjutan) 1. Pembuatan Larutan Induk Baku Vitamin B 6 Baku Vitamin B 6 LIB I Vitamin B μg/ml ditimbangsebanyak 50 mg dimasukkan kedalam labu tentukur 50mL dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N dipipet12,5 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 25 ml dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N LIB II Vitamin B μg/ml dipipet 4 ml dimasukkankedalamlabutentukur 50 ml dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N Vitamin B 6 8 μg/ml λ Vitamin B 6 = 290 nm diukur serapan maksimum pada λ nm 55

7 Lampiran 5. (Lanjutan) 3. Pembuatan Larutan StandarIsoniazid dan Vitamin B 6 LIB II Isoniazid 100 μg/ml Standar 1 8 μg/ml Dipipet 0,8 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml dicukupkan dengan HCl 0,1 N Standar 3 12 μg/ml Dipipet 1,2 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml dicukupkan dengan HCl 0,1 N Standar 5 16 μg/ml Dipipet 1,6 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml dicukupkan dengan HCl 0,1 N Standar 2 10 μg/ml Dipipet 1 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml dicukupkan dengan HCl 0,1 N Standar 4 14 μg/ml Dipipet 1,4 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml dicukupkan dengan HCl 0,1 N LIB II Vitamin B μg/ml Standar 1 4 μg/ml dipipet 0,4 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml dicukupkan dengan HCl 0,1 N Standar 3 8 μg/ml Dipipet 0,8 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml dicukupkan dengan HCl 0,1 N Standar 5 12μg/mL Dipipet 1,2 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml dicukupkan dengan HCl 0,1 N Standar 2 6 μg/ml Dipipet 0,6 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml dicukupkan dengan HCl 0,1 N Standar 4 10 μg/ml Dipipet 10 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml dicukupkan dengan HCl 0,1 N 56

8 Lampiran5. (Lanjutan) 4. Pembuatan dan Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi Isoniazid dan Vitamin B 6 Larutan Isoniazid (8; 10; 12; 14; 16 μg/ml) diukur serapan maksimum pada λ nm ditransformasikan ke serapan derivat kedua ditentukanzero crossing ditentukan panjang gelombang analisis λ Isoniazid = 227,40 nm dibuat kurva kalibrasi Persamaan Regresi Larutan StandarVitamin B 6 (4; 6; 8; 10; 12 μg/ml) diukur serapan maksimum pada λ nm ditransformasikan ke serapan derivat kedua ditentukanzero crossing ditentukan panjang gelombang analisis λvitamin B 6 =222,0 nm dibuat kurva kalibrasi Persamaan Regresi 57

9 Lampiran 5. (Lanjutan) 5. Penentuan Kadar Sediaan Tablet 20 tablet ditimbang digerus dalam lumpang sampai halus dan homogen Serbuk ditimbangsetara0,2320 gram isoniazid dihitung kesetaraan isoniazid yang terkandung didalamnya(penimbangan dilakukan sebanyak 6 kali pengulangan) dimasukkan kedalam labu tentukur 50 ml dilarutkan dengan HCl 0,1 N dihomogenkan dengan sonikator selama 15 menit ditcukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda dihomogenkan disaring dibuang± 10 ml filtrat pertama filtrat selanjutnya ditampung dipipet 1,6 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml dicukupkan dengan Hcl 0,1 N sampai garis tanda diukur pada λ 227,40 nm dan 222,0 nm Nilai Absorbansi Kadar dihitung 58

10 Lampiran 6. Spektrum Serapan Isoniazid Baku dan Vitamin B 6 Baku a. Isoniazid 0, , ,40000 Abs. 0, , , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan Isoniazid konsentrasi 8 μg/ml Spektrum serapan Isoniazid konsentrasi 10 μg/ml Spektrum serapan Isoniazid konsentrasi 12 μg/ml 59

11 Lampiran 6. (Lanjutan) 1,00000 Abs. 0, , , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan Isoniazid konsentrasi 14 μg/ml Spektrum serapan Isoniazid konsentrasi 16 μg/ml 60

12 Lampiran 6. (Lanjutan) b. Vitamin B 6 0, , ,40000 Abs. 0, , , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan Vitamin B 6 konsentrasi 4 μg/ml Spektrum serapan Vitamin B 6 konsentrasi 6 μg/ml Spektrum serapan Vitamin B 6 konsentrasi 8 μg/ml 61

13 Lampiran 6. (Lanjutan) 1, ,00000 Abs. 0, , , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan Vitamin B 6 konsentrasi 10 μg/ml Spektrum serapan Vitamin B 6 konsentrasi 12 μg/ml 62

14 Lampiran 7. Spektrum Serapan Derivat Pertama Isoniazid dan Vitamin B 6 a. Isoniazid 0, ,00000 Abs. -0, , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan derivat pertama Isoniazid konsentrasi 8 μg/ml Spektrum serapan derivat pertama Isoniazid konsentrasi 10 μg/ml Spektrum serapan derivat pertama Isoniazid konsentrasi 12 μg/ml 63

15 Lampiran 7. (Lanjutan) 0, ,00000 Abs. -0, , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan derivat pertama Isoniazid konsentrasi 14 μg/ml Spektrum serapan derivat pertama Isoniazid konsentrasi 16 μg/ml 64

16 Lampiran 7. (Lanjutan) b. Vitamin B 6 0, ,00000 Abs. -0, , , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan derivat Vitamin B 6 konsentrasi 4 μg/ml Spektrum serapan derivat pertama Vitamin B 6 konsentrasi 6 μg/ml Spektrum serapan derivat pertama Vitamin B 6 konsentrasi 8 μg/ml 65

17 Lampiran 7. (Lanjutan) 0, ,00000 Abs. -0, , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan derivat pertama Vitamin B 6 konsentrasi 10 μg/ml Spektrum serapan derivat pertama Vitamin B 6 konsentrasi 12 μg/m 66

18 Lampiran 8. Spektrum Serapan Derivat Kedua Isoniazid dan Vitamin B 6 a. Isoniazid 0, , ,00000 Abs. -0, , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan derivat kedua Isoniazid konsentrasi 8 μg/ml Spektrum serapan derivat kedua Isoniazid konsentrasi 10 μg/ml Spektrum serapan derivat kedua Isoniazid konsentrasi 12 μg/ml 67

19 Lampiran 8. (Lanjutan) 0, ,01000 Abs. 0, , , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan derivat kedua Isoniazid konsentrasi 14 μg/ml Spektrum serapan derivat kedua Isoniazid konsentrasi 16 μg/ml 68

20 Lampiran 8. (Lanjutan) b. Vitamin B 6 0, , ,00000 Abs. -0, , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan derivat kedua Vitamin B 6 konsentrasi 4 μg/ml Spektrum serapan derivat kedua Vitamin B 6 konsentrasi 6 μg/ml Spektrum serapan derivat kedua Vitamin B 6 konsentrasi 8 μg/ml 69

21 Lampiran 8. (Lanjutan) 0, ,01000 Abs. 0, , , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan derivat kedua Vitamin B 6 konsentrasi 10 μg/ml Spektrum serapan derivat kedua Vitamin B 6 konsentrasi 12 μg/ml 70

22 Lampiran 9. Spektrum Serapan Panjang Gelombang Analisis Isoniazid dan Vitamin B 6 0, ,00000 Abs. -0, , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan derivat kedua Isoniazid konsentrasi 11 μg/ml pada λ=227,4nm Spektrum serapan derivat kedua Vitamin B 6 konsentrasi 8 μg/mlpada λ=222,0 nm Spektrum serapan derivat kedua campuran Isoniazid konsentrasi11 μg/ml dan Vitamin B 6 konsentrasi 8 μg/ml 71

23 Lampiran 10. Data Kalibrasi Isoniazid BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi Kalibrasi serapan derivat kedua Isoniazid pada panjang gelombang 227,40 nm No. Konsentrasi (μg/ml) Absorbansi (X) (Y) , , , , , ,00413 No X Y (10-3 ) XY (10-3 ) X 2 Y 2 (10-7 ) ,93 7, , ,50 15, , ,96 23, , ,56 35, , ,13 49, ,05 Σn=6 ΣX =60 X=10 ΣX= Y= 2, ΣXY=13, ΣX 2 =360 ΣY 2 = ( XY) ( X)( Y)/n (0,13156) (60)(0,01508)/6 a = = = 2, ( X 2 ( X)2 ) (360) (60)²/6 n Y = ax + b b = Y ax = (2, ) (2, )(10) = 5, Maka, persamaan garis regresinya adalah Y = (2,61X 5,1)

24 Perhitungan Koefisien Korelasi ( ) = ( XY) ( X)( Y)/n ( X 2 ) ( X) 2 /n ( Y 2 ) ( Y) 2 /n = (0,13156) (60)(0,01508) /6 [(360) (60) 2 /6][(48, ) (0,01508) 2 /6] = 0, ,78016 = 0,99824 Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua Isoniazid pada panjang gelombang 227,40 nm adalah 0,

25 Lampiran 11. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ) Isoniazid Persamaan garis regresinya adalahy = (2,6X 5,1) No. X Y(10-3 ) Yi (10-5 ) Y-Yi (10-5 ) (Y-Yi) 2 ( ) ,3 20, ,0 25, ,6 30, ,6 36, ,3 41,1 2 4 Σ (Y-Yi) SB = (Y Yi)2 n 2 = 359x = 9, LOD = 3 SB slope = 3 9, , = 1,0931 μg/ml LOQ = 10 SB slope = 10 9, , = 3,6437 μg/ml 74

26 Lampiran 12. Data Kalibrasi Baku Vitamin B 6, Persamaan Regresi Dan Koefisien Korelasi Kalibrasi serapan derivat kedua Isoniazid pada panjang gelombang 227,40 nm No. Konsentrasi (μg/ml) (X) Absorbansi (Y) , , , , , ,00416 No. X Y (10-3 ) XY (10-2 ) X 2 Y ,47 5, , ,30 13, , ,79 22, , ,48 24, , ,16 49, Σn=6 ΣX= 40 X = 6,66 ΣY= 1, Y =2, ΣX 2 =0,11672 ΣY 2 =360 ΣXY=38, ( XY) ( X)( Y)/n (0,11672) (40)(0,0132)/6 a = = = 34, ( X 2 ( X)2 ) (360) (40)²/6 n Y = ax + b b = Y ax = (0,002211) (34, )(6,66) = 8, Maka, persamaan garis regresinya adalah Y = (34,2X + 8,2)

27 Perhitungan Koefisien Korelasi ( ) = ( XY) ( X)( Y)/n ( X 2 ) ( X) 2 /n ( Y 2 ) ( Y) 2 /n = (0,11672) (40)(0,0132) /6 [(360) (40) 2 /6][( ) (0,0132) 2 /6] = 0, ,03001 = 0,99671 Maka,koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua Isoniazid pada panjang gelombang 270,40 nm adalah 0,

28 Lampiran 13. Perhitungan Batas Deteksi(LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ) Vitamin B 6 Persamaangaris regresinya adalah Y = (34,2X + 8,2) No. X Y(10-3 ) Yi (10-3 ) Y-Yi (10-5 ) (Y-Yi) 2 ( ) , ,47 1, ,30 2, ,79 2, ,48 3, ,16 4, Σ (Y-Yi) SB = (Y Yi)2 n 2 = =9, LOD = 3 SB slope LOQ = 10 SB slope = 3 9, , = 0,8801 μg/ml = 10 9, , = 2,9337 μg/ml 77

29 Lampiran 14. Spektrum Serapan Derivat Kedua Pada Sampel 0, ,00000 Abs. -0, , , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan sampel P pengukuran pertama Spektrum serapan sampel P pengukuran kedua Spektrum serapan sampel P pengkuran ketiga 78

30 Lampiran 14. (Lanjutan) 0, , ,00000 Abs. -0, , , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan sampel P pengukuran keempat Spektrum serapan sampel P pengukuran kelima Spektrum serapan sampel P pengukuran keenam 79

31 Lampiran 15. Perbandingan Spektrum Serapan Derivat Kedua Campuran Isoniazid Konsentrasi 11 μg/ml Dan Vitamin B 6 Konsentrasi 8 μg/ml Dengan Spektrum Serapan Derivat Kedua Sampel 0, , ,00000 Abs. -0, , , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. 80

32 Lampiran 16. Hasil Analisis Kadar Isoniazid dan Vitamin B 6 dalam Sampel 1. Kadar Isoniazid dalam Sediaan tablet Nama Sediaan Penimban gan(g) Setara (mg) Absorbans ipada λ=227,40 nm Konsentra siteoritis (μg/ml) Konsent rasi praktek(μg/ ml) Kadar % 0, ,9892 0, , , ,02 0, ,7845 0, , , ,07 0, ,0754 0, , , ,63 Tablet P 0, ,0538 0, , , ,96 0, ,0538 0, , , ,53 0, ,9892 0, , , ,80 2. Kadar Vitamin B 6 dalam sediaan tablet Nama Sediaan Penimban gan(g) Setara (mg) Absorba nsipada λ=249,6nm Konsentr asi teoritis (μg/ml) Konsentr asi praktek (μg/ml) Kadar % 0,2320 2, , ,9982 8, ,54 0,2322 2,5016 0, ,0051 8, ,45 0,2324 2,5037 0, ,0120 8, ,46 Tablet P 0,2323 2,5026 0, ,0086 8, ,57 0,2323 2,5026 0, ,0086 8, ,51 0,2320 2,4994 0, ,9982 8, ,07 81

33 Lampiran 17. Contoh Perhitungan Penetapan Kadar Isoniazid dan Vitamin B 6 dalam Sampel Berat 20 tablet = 18,5640 gram Ditimbang sampel setara dengan 50 mg Isoniazid, maka jumlah sampel yang ditimbang adalah; x 1 = = 0,2320 g 50 mg (20 x 200 mg) x 18,5640 g Kemudian dihitung kesetaraan Isoniazid yang terkandung dalam 0,2320 g sampel ini. x 2 = 0,2320 g x (20x 10 mg) (18,5640 g) = 2,4995mg Dilarutkan denganhcl 0,1 N dengan kuantitatif dalam labu tentukur 50 ml sampai garis tanda. Larutan kemudian dihomogenkan dengan pengaduk ultrasonik selama 15 menit. Larutan tersebut kemudian disaring, lebih kurang 10 ml filtrat pertama dibuang. filtrat selanjutnya ditampung. Konsentrasi Isoniazid = 50 mg x1000μg = 1000 μg/ml (50 ml) Konsentrasi Vitamin B 6 = 2,4995 mg x1000μg = 50 μg/ml (50 ml) Kemudian dari larutan filtrat ini, dipipet 0,11 ml dan dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml dan diencer kandengan HCl 0,1 N hingga garis tanda. Konsentrasi Isoniazid = 1000 µg/ml x 0,11 ml (10 ml) =11μg/mL 82

34 50 µg/ml x 0,11 ml Konsentrasi Vitamin B 6 = = 0,55μg/mL (10 ml) Konsentrasi Vitamin B 6 = 8-0,55 = 7,45 μg/ml (adisi) Konsentrasi Isoniazid dari LIB = 50µg/mL x 1,49 ml (10 ml) = 7,45μg/mL Maka Volume analisis Isoniazid adalah = (Isoniazid awal + Isoniazid yang ditambahkan) = 0,11 ml + 1,49 ml = 1,6 ml Jadi = 1,6 µg/ml x 50 ml (10 ml) = 8 μg/ml 83

35 Misalnya berat yang ditimbang adalah 0,2322g, maka terlebih dahulu dihitung kesetaraan dengan Isoniazid danvitamin B 6. Kesetaraan dengan Isoniazid = 0,2322 g x ( 20 x 200 mg ) = 50,0323mg 18,5640 g 50,0323 mg Konsentrasi= x 1000 μg = 1000,64 μg/ml 50 ml Konsentrasi akhir teoritis Isoniazid = 1000,64 µg/ml x 0,11 ml = 11,0071 μg/ml 10 ml Kesetaraan dengan Vitamin B 6 = 0,2322 g 18,5640 g x (20 x 10 mg) = 2,5016 mg 2,5016 mg Konsentrasi = 50 ml x 1000 μg = 50,032 μg/ml 50,032 µg/ml Konsentrasi teoritis Vitamin B 6 = x 1,6 ml = 8,0051 μg/ml 10 ml Absorbansi Isoniazid pada derivat kedua pada panjang gelombang 227,40 nm adalah 0, Kadar dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis Isoniazid Y= (26,1 x 10-4 )X - (5,2 x 10-5 ) Konsentrasi praktek: Y = (26,1 x 10-4 )X - (5,2 x 10-5 ) 0,00279 = (26,1 x 10-4 )X - (5,2 x 10-5 ) 0, , = (26,1 x 10-4 )X X = 284x ,1 x 10 4 X = 10,9230μg/mL Kadar Isoniazid = 10,9230µg/mL 11,0071 µg/ml x 101,85 % = 101,07 % 84

36 Absorbansi Vitamin B 6 pada derivat kedua pada panjang gelombang 222 nm adalah 0, Kadar dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis Vitamin B 6 Y = (34,1 x 10-4 )X + (8,2 x 10-5 ) Konsentrasi praktek: Y = (34,1 x 10-4 )X + (8,2 x 10-5 ) 0,00287 = (34,1 x 10-4 )X + (8,2 x 10-5 ) 0, , = (34,1 x 10-5 )X X = 279x ,1 x 10 5 X = 8,2058μg/mL 8,2058 µg/ml Kadar Vitamin B 6 = 8,0051 µg/ml x 99,95 % = 102,45% Absorbansi Vitamin B 6 pada derivate kedua pada panjang gelombang 222 nm adalah 0, Kadar dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis Vitamin B 6 Y = (34,1 x 10-4 )X + (8,2 x 10-5 ) Konsentrasi praktek: Y = (34,1 x 10-4 )X + (8,2 x 10-5 ) 0,00287 = (34,1 x 10-4 )X + (8,2 x 10-5 ) 0, , = (34,1 x 10-5 )X X = 279x ,1 x 10 5 X = 8,2058μg/mL 8,2058 µg/ml Kadar Vitamin B 6 = 8,0051 µg/ml x 99,95 % = 102,45% 85

37 Lampiran 18. Perhitungan Statistik Isoniazid pada sediaan Tablet P SD = X X 2 n 1 = 5, = 5, = 1,0215 Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1= 5, maka t (α/2,dk) = 4,0321 Data diterima jika t hitung < t tabel t hitung 1 t hitung 2 t hitung 3 = X X SD n = X X SD n = X X SD n = = = 0,99 = 2, , ,06 = 2,5431 1, ,62 = 1,4875 1,

38 t hitung 4 t hitung 5 t hitung 6 = X X SD n = X X SD n = X X SD n = = = 0,05 = 0,1199 1, ,45 = 3,4788 1, ,79 = 1,8953 1, Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima. Kadar Isoniazid dalam tablet: μ =X ± (t α/2, dk ) x SD/ n) = 100,01 ± (4,0321 x 1,0215/ 6) = (100,01 ± 1,6815) % 87

39 Lampiran 19. Perhitungan Statistik Vitamin B 6 pada Tablet P No. X Kadar (%) (X X) (X X) ,54 0,28 0, ,45 0,19 0, ,46 1,2 1, ,57-1,69 2, ,51 1,25 1, ,07-1,19 1,4161 X = 102,26 Σ(X X) 2 = 7,3892 SD = X X 2 n 1 = 7, = 7, = 1,2156 Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1= 5, maka t (α/2,dk) = 4,0321 Data diterima jika t hitung < t tabel t hitung 1 t hitung 2 t hitung 3 = X X SD n = X X SD n = X X SD n = = = 0,28 = 0,5642 1, ,19 = 0,3829 1, ,2 = 2,4183 1,

40 t hitung 4 t hitung 5 t hitung 6 = X X SD n = X X SD n = X X SD n = = = 1,69 = 3,4058 1, ,25 = 2, , ,19 = 2,3982 1, Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima Kadar Vitamin B 6 dalam Tablet Pulna Forte: μ =X ± (t α/2, dk) x SD/ n) = 102,26 ± (4,0321 x 1,2156/ 6) = (102,26 ± 2,0010) % 89

41 Lampiran 20. Spektrum Serapan Tablet P pada Uji Perolehan Kembali Spektrum serapan perolehan kembali 80% pengkuran pertama pada tablet P Spektrum serapan perolehan kembali 80% pengukuran kedua pada tablet P Spektrum serapan perolehan kembali 80% pengukuran ketiga pada tablet P 90

42 Lampiran 20. (Lanjutan) Spektrum serapan perolehan kembali 100 % pengukuran pertama pada tablet P Spektrum serapan perolehan kembali100 % pengukuran kedua pada tablet P Spektrum serapan perolehan kembali 100 % pengukuran ketiga pada tablet P 91

43 Lampiran 20. (Lanjutan) 0, ,00000 Abs. -0, , , ,00 250,00 300,00 350,00 400,00 nm. Spektrum serapan perolehan kembali 120% pengukuran pertama pada tablet P Spektrum serapan perolehan kembali 120% pengukuran kedua pada tablet P Spektrum serapan perolehan kembali 120% pengukuran ketiga pada tablet P 92

44 Lampiran 21. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Isoniazid pada Tablet tersebut dengan Metode Penambahan Baku (Standard Addition Method) No Konsentrasi % Absorbansi padaλ= 227,40n m Setelah penambahan baku mg Konsentrasi Sebelum penambahan baku mg Baku yang ditambahkan mg Persen perolehan kembali (%) 1. 0, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ,29 Rata-rata (%recovery) 101,22 Standard Deviation (SD) 1,88 Relative Standard Deviation (RSD)(%) 1,86 93

45 Lampiran 22. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Vitamin B 6 pada Tablet P dengan Metode Penambahan Baku (Standard AdditionMethod) No Konsentrasi % Absorbansi padaλ= 222 nm Setelah penambahan baku mg Konsentrasi Sebelum penambahan baku mg Baku yang ditambahkan mg Persen perolehan kembali (%) 1. 0, ,0221 1,43 0, , , ,0312 1,43 0, , , ,0221 1,43 0, , , ,5184 1,7491 0, , , ,5184 1,7491 0, , , ,5184 1,7501 0, , , ,0055 2,0988 0, , , ,0055 2,1020 0, , , ,0055 2,1031 0, ,45 Rata-rata (%recover) 99,51 Standard Deviation (SD) 1,01 Relative Standard Deviation (RSD) (%) 1,02 94

46 Lampiran 23.Contoh Perhitungan Persentase Perolehan Kembali (%recovery) Sampel yang digunakan adalah tablet P Berat 20 tablet P = 18,5640g Berat kesetaraan penimbangan sampel pada penetapan kadar = 50 mg Perolehan 80% Isoniazid 80% = x 50 mg = 40 mg Analit Isoniazid 70% = x 40 mg = 28 mg Penimbangan serbuk sampel setara 28 mg Isoniazid Sampel yang ditimbang = 28 mg 20 x 200 mg x 18,5640 g = 0,1299 g 30 Baku Isoniazid 30% = 100 x 40 mg = 12 mg Jumlah Vitamin B 6 dalam serbuk analit yang ditimbang : = 0,1299 g x (20x 10 mg)= 1,3995 mg 18,5640 g Baku Vitamin B 6 yang ditambahkan : 30 40mg = 10mgx = 0,6 mg mg Perolehan100% Vitamin B 6 100% = 100 x 50 mg = 50 mg 100 sampel Vitamin B 6 70% = 70 x 50 mg = 35 mg 100 Penimbangan serbuk sampel setara 35 mg Isoniazid 95

47 35 mg Sampel yang ditimbang = x 18,5640 g = 0,1624 g 20 x 200 mg Baku Isoniazid 30% = 30 x 50 mg = 15 mg 100 Vitamin B 6 dalam serbuk sampel yang ditimbang : = 0,1624 g x (20x 10 mg)= 1,75 mg 18,5640 g Baku Vitamin B 6 yang ditambahkan : = mg 10mgx 200 mg = 0,75 mg Perolehan 120% Isoniazid 120% = 120 x 50 mg = 60 mg 100 sampel Isoniazid 70% = 70 x 60 mg =42 mg 100 Penimbangan serbuk analit setara 42 mg Isoniazid 42 mg Sampel yang ditimbang = x 18,5640 g = 0,1949 g 20 x 200 mg Baku Isoniazid 30% = 30 x 60 mg = 18 mg 100 Jumlah Vitamin B 6 dalam serbuk sampel yang ditimbang : = 0,1949 g x (20x 10 mg) = 2,0997 mg 18,5640 g Baku Vitamin B 6 yang ditambahkan : = mg 10mgx 200 mg = 0,9 mg 96

48 Misalnya absorbansi analisis (Y) pada perolehan 80% Isoniazid (227,40 nm) = 0,00226 Vitamin B 6 (222 nm) = 0,00228 Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis Isoniazid (λ=227,40 nm): Y = (26,1 x 10-4 )X - (5,2 x 10-5 ) Konsentrasi Isoniazid: Y = (26,1 x 10-4 )X - (5,2 x 10-5 ) 0,00226 = (26,1 x 10-4 )X - (5,2 x 10-5 ) 0, ,00005 = (26,1 x 10-5 )X X 23,1 x 10 3 = 26,1 x 10 4 X = 8,8846 μg/ml Konsentrasi awal setelah penambahan bahan baku (C F ): Konsentrasi Isoniazid (µg/ml) = x faktor pengenceran ,8846 µg/ml = x 4545,4545 ml 1000 = 40,3846 mg Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (C A ): = sampel Isoniazid 70% x kadar rata-rata sampel =27,9784 mg x 100,01 % = 27,98 mg Jumlah baku yang ditambahkan (C * A): = Baku Isoniazid 30% (yang ditambahkan) x% kadar baku Isoniazid = 12mg x 101,85% = 12,222 97

49 Maka % perolehan kembali Isoniazid: % perolehan kembali = C F C A C A x 100 % Keterangan: C F = Konsentrasi awal setelah penambahan bahan baku C A = Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku C * A = Jumlah baku yang ditambahkan 40,3846 mg 27,9812 mg % perolehan kembali = 12,222 mg x 100% = 101,48% Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis Vitamin B 6 (λ= 222 nm): Y =(34,1 x 10-4 )X +(8,2 x 10-5 ) Konsentrasi betametason : Y = (34,1 x 10-4 )X +(8,2x 10-5 ) 0,00228 = (34,1 x 10-4 )X +(8,2 x 10-5 ) 0, ,00008 = (34,1 x 10-4 )X X = 22 x ,1 x 10 4 X = 6,4706 μg/ml Konsentrasi awal setelah penambahan bahan baku (C F ): Konsentrasi Vitamin B6 (µg/ml) = x faktor pengenceran ,4706 µg/ml = x 312,5 ml 1000 = 2,0221 mg 98

50 Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (C A ): = Jumlah Vitamin B 6 dalam serbuk analit yang ditimbang x % kadar rata-rata sampel = 0,3991 mg x102,26% = 1,43mg Jumlah baku yang ditambahkan (C * A): = Baku vitamin B6 yang ditambahkan x % kadar bakuvitamin B6 = 0,6 mg x 99,95% = 0,5997 mg Maka % perolehan kembali Vitamin B 6 % perolehan kembali = C F C A C A x 100 % Dimana : C F = Konsentrasi awal setelah penambahan bahan baku C A = Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku C * A= Jumlah baku yang ditambahkan 2,0221 mg 1,43 mg % perolehan kembali = 0,5997mg x 100% = 98,73% 99

51 Lampiran 24. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi Perolehan Kembali Isoniazid pada Tablet P No Kadar Perolehan Kembali [X] (%) Xi-X (Xi X) ,48-0,26 0, ,05 1,17 1, ,48-0,26 0, ,47 1,75 3, ,61 0,61 0, ,15 3,07 9, ,85-1,63 2, ,62-1,4 1, ,29-3,67 9,4249 X= 101,22 Ʃ=28,4054 SD = (Xi X ) 2 n 1 = 28, = 1,88 RSD= SD X x 100% = 1,88 101,22 x 100% =1,86% 100

52 Lampiran 25. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi perolehan kembali Vitamin B 6 pada Tablet P No Kadar Perolehan Kembali [X] (%) Xi-X (Xi X) ,73 0,78 0, ,25-0,74 0, ,73 0,78 0, ,72-1,21 1, ,72-1,21 1, ,58-1,07 1, ,92 0,59 0, ,57 0,94 0, ,45 1,06 1,1236 X =99,51 Ʃ=8,1928 SD = (Xi X ) 2 n 1 = 8, = 1,01 RSD = SD X x 100% = 1,01 99,51 x 100% = 1,02 % 101

53 Lampiran 26. Data hasil pengukuran derivat kedua Isoniazid 11 μg/ml, Vitamin B 6 8 μg/ml dan Campuran Isoniazid 11 μg/ml dan Vitamin B 6 8 μg/ml. 102

54 Lampiran 27. Daftar Nilai Distribusi t 103

55 Lampiran 28. Sertifikat Pengujian Isoniazid 104

56 Lampiran 29. Sertifikat Pengujian Vitamin B 6 105