Olek TIEAI TIER TAMOJO F FAKULTAS TEKNOLOGI PERTAM14M BOGQR. INSTlTUT PERTANIAN

Transkripsi

1 Olek TIEAI TIER TAMOJO F FAKULTAS TEKNOLOGI PERTAM14M INSTlTUT PERTANIAN B O G O R BOGQR

2 Tien Tien Tanojo. F Analisis protease Aspergillus oryzae dengan elektroforesis gel poliakrilamid. Di bawah bimbingan : Maggy T. Suhartono. RINGKASAN Penelitian ini terdiri dari 4 tahap yang meliputi isolasi kapang proteolitik, produksi, dan pemurnian protease yang dihasilkan, serta analisis berat molekul protease tersebut. Kapang diisolasi dari tahap ke 2 dalam fermentasi kecap Zebra, Bogor, yaitu fermentasi garam/ fase moromi. Dari hasil identifikasi yang dilakukan, yang dikonfirmasikan dengari Laboratorium Mikologi, Jurusan Biologi, IPB, kapang yang diisolasi adalah Aspergillus oryzae. Isolat A. oryzae tersebut terbukti bersifat proteolitik baik pada media SMA ataupun media fermentasi yang dipergunakan. Protease diproduksi pada media campuran dedak dan tepung kedelai (7 : 3, w/w) yang disuplementasikan dengan KH2P04. Ekstrak protease kasar diperoleh dari media fermentasi dengan larutan Tween 80. Aktivitas protease kasar tersebut adalah 0,2 IU/mg protein. Uji aktivitas protease dilakukan berdasarkan hidrolisis kasein (Bergmeyer, 1983). Jumlah protein didasarkan pada

3 pengikatan zat pewarna (Bradford, 1976). Pemurnian yang dilakukan adalah berturut-turut pengendapan dengan ammonium sulfat (70%, w/v) dan pengendapan dengan 100% aseton (v/v), yang masing-masing meningkatkan aktivitas protease menjadi 0,5 IU/mg protein, dan 1,2 IU/mg protein. Pemisahan protease dengan kromatografi filtrasi gel pada kolom Sephadex G-100 menghasilkan 2 puncak protein dan 2 puncak protease. Kedua jenis protease tersebut mempunyai aktivitas 1,5 IU/mg protein dan 2,4 IU/mg protein, dengan kemurnian 7,8 dan 12,3 kali enzim kasar. Elektroforesis dilakukan sesuai dengan metode yang dipergunakan Laemmli (1970), dengan konsentrasi akrilamid 10%. Jumlah sampel yang diaplikasikan pg. Pada konsentrasi tersebut protease A. oryzae dapat diwarnai dengan pewarnaan Coomassie dan pewarnaan Ag, tetapi tidak dengan pewarnaan Cu. Berat molekul protease diestimasi dengan SDS-PAGE, dengan pewarnaan Coomassie. ~ntuk menentukan pita protease dilakukan pewarnaan spesifik berdasarkan hidrolisis kasein. Hasil yang diperoleh adalah 2 macam protease yang mempunyai BM Da dan Da, yang diduga adalah protease netral dan protease asam.

4 ANALISIS PRWEASE Aspergillus oryzue DENGAN ELEKTROFORE'IS GEL POLIAKRILAMKD Oleh TIEN TIEN TANOJO F SKRKI'SI Sehagai salah salu syarat unluk rncmperolch gclar SARJANA TEKNOLOGI PEIUANIAN pada JURIJSAN TEKNOLOGI I'ANCiAN DAN CilZI FAKULTAS TEKNOLOGI PEKI'ANIAN KNSTITOT I'EKI'ANIAN BOGOR 1992 FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR

5 INSTITUT PERTANIAN BOGOR IZAKIJLTAS TEKNOLOGI PERTANIAN ANALISIS PROTEASE Aspergilluv oryzue DENGAN ELEKTROFORESIS GEL 1'OLIAKIIILAMID SKRIPSI Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN pada JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR Oleh TIEN TIEN TANOJO F Dilahirkan pada tanggal 6 Desember 1969 di Surabaya Tiriggal lulus : 8 Desernber 1992 Disetujui, Boeor. 18 Desernber 1992

6 KATA PENGANTAR Puji, hormat dan kemuliaan bagi Tuhan, Allah yang luar biasa. Karena hanya oleh kasih dan penyertaan-nya, penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi ini. Tulisan ini disusun berdasarkan hasil penelitian tentang "~nalisis protease Aspergillus oryzae dengan gel poliakrilamid", yang telah dilakukan di Lab. Teknologi Mikroba dan ~iokimia, PAU Bioteknologi IPB, dari bulan ~pril sampai dengan bulan Oktober ~enulis mengucapkan terima kasih yang tulus kepada : 1. Dr. Ir. Maggy T. Suhartono, yang telah membimbing penulis selama penelitian dan penyusunan skripsi. 2. Dr. Ir. Srikandi Fardiaz dan Ir. Sutrisno Koswara, yang berkenan menjadi dosen penguji dan membantu menyempurnakan tu1i:;an ini. 3. Pimpinan Perusahaan Kecap Zebra, Bogor, yang mengijinkan penulis mengambil sampel. 4. Veralin, Witono, Wirjanto, Daniel, Lily, Handi, Filosa, Eni, Ika, dan Ujang, yang banyak membantu penulis selama berlangsungnya penelitian. 5. Saudara-saudara penulis di Kopelkhu pada khususnya dan PMK pada umumnya, serta di "MUSASHI", doa dan bantuan yang diberikan. atas dukungan

7 Penulis menyadari bahwa tulisan ini masih jauh dari sempurna, tetapi penulis berharap tulisan ini dapat dimanfaatkan oleh semua pihak' yang membutuhkannya. IMMANUEL! Bogor, 14 Desember 1992 Penulis

8 DAFTAR IS1 Halaman Kata Pengantar... i Daftar Gambar.... vi Daftar Tabel... vii Daftar Lampiran... viii I. PENDAHULUAN... 1 A. LATAR BELAKANG... 1 B. TUJUAN... 4 I1. TINJAUAN PUSTAKA... 5 A. PROTEASE Definisi dan Klasifikasi Sumber dan Peranan... 6 B. PROTEASE Aspergillus oryzae... 7 C. PEMURNIAN ENZIM D. PEMURNIAN PROTEASE DARI ASPERGILLUS E. TEXNIK ELEKTROFORESIS DI DALAM ANALISIS ENZIM Elektroforesis Elektroforasis Gel Poliakrilamid PAGE dengan Sodium Dodesil Sulfat Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Pewarnaan Protein Pewarnaaan Coomassie ~ewarnaan Cu... 24

9 Xalaman 5.3. Pewarnaan Ag Pewarnaan ~pesifik ~nalisis Xasil Elektroforesis I11. METODE PENELITIAN A. BAHAN DAN ALAT Bahan Alat B. METODE PENELITIAN ISOLASI XAPANG PROTEOLITIK PRODUXSI PlZOTEASE a. Penyiapiin Media Fermentasi b. Pembuatan Inokulum dan Inokulasi c. Ekstraksi d. Pengukuran Jumlah Protein e. Pengujinn Aktivitas Protease PEMURNIAN PROTEASE a. Pengendapan dengan Ammonium Sulfat b. Dialisis c. Pengendapan dengan Aseton d. Pemisahan dengan Sephadex G-lo ELEKTROFORESIS PROTEASE Pewarnaan Coomassie Pewarnaan cu Pewarnaan Ag... 40

10 Halaman IV. HASIL DAN PEMBAHAGAN A. ISOLASI KAPANG PROTEOLITIK B. PEMURNIAN PROTEASE Aspergillus oryzae C. ELEKTROFORESIS PROTEASE Aspergillus oryzae Uji Metode Pewarnaan Uji Aktifitas Proteolitik Estimasi Berat Molekul Protease V. KESIMPULAN DAN SARAN A. KESIMPULAN B. SARAN VI. DAFTAR PUSTAKA... 70