Lampiran 1 Lateks alergen yang terdaftar dalam WHO-IUIS (International Union of Immunological Societies)

Transkripsi

1 LAMPIRAN

2 Lampiran Lateks alergen yang terdaftar dalam WHO-IUIS (International Union of Immunological Societies) Nama Nama trivial Fungsi PI a&b molekul Bobot (KDa) a&b No. Protein No. DNA a Sifat allergen Hev b Rubber elongation factor Rubber biosynthesis.-.,.0,.., P X Major Rubber particle Hev b β-,-glucanases Defense related protein.,., - P0 U Major B serum Hev b Small rubber particle Rubber Rubber biosynthesis.- - O0 - protein particle Hev b Microhelix component Defense related protein. 0- P - B serum Hev b Acidic latex protein -.-. Q U U0 Major C-serum Hev b.0 Prohavein hevein.,., 0 M Major B serum Defense related protein P0, (latex coagulation).,.. P0 M Hev b.0 Hev b.0 Hev b.0=hev b (renamed) Hev b.0 Prohevein C Terminal fragment Patatin homologue from B serum & C serum Defense related protein Inhibitor of rubber synthesis.0-..,.,.0? Hev b Latex profilin Structural protein..,.0,?.,., Hev b Latex enolase Glycolitic enzyme.,.,.0, Hev b Mn superoxide dismutase Destructions of radicals.,,.,.,, Hev b Class I endochitinase Defense related protein Basic.0,. O000, O, O, QSEM0 O, QSTB QMN0, QMM QLEJ0 QLEI P0 QSTB QH AJ (gene) M U0 AJ0 Hev b Lipid transfer protein Defense related protein. QRYA Hev b = Hev b.0 Latex esterase Defense related protein P major Data diperoleh dari Siswanto (00) Major Major Minor Tempat B serum B serum C serum C serum C serum B serum

3 Lampiran Pembuatan larutan Pereaksi Lowry Pereaksi A Sebanyak gram Na CO ditambahkan dengan gram NaOH lalu dilarutkan dengan akuades dan ditera dalam labu takar 0 ml. Pereaksi B Sebanyak 0. gram CuSO ditambah dengan 0. gram Natrium Sitrat lalu dilarutkan dalam ml akuades. Pereaksi C Pereaksi A:Pereaksi B = 0: Pereaksi D Folin Ceocalteus:akuades = :. Pereaksi SDS-PAGE Akrilamida/bis (0% r,.% C) 0 ml Larutan : Sebanyak. gram akrilamida dilarutkan dalam ml akuades Larutan : Sebanyak 0. gram N, N - metilena-bis- akrilamidaa dilarutkan dalam ml akuades. Larutan perlahan-lahan ditambahkan ke dalam larutan lalu ditera sampai 0 ml dengan menggunakan akuades. Setelah ditera, larutan tersebut disaring Bufer tris HCl 0. M ph. Disiapkan HCl N. Sebanyak gram Tris dilarutkan dalam 0 ml akuades. ph larutan tersebut diukur lalu ditentukan sampai menjadi. dengan menambahkan larutan HCl N sedikit demi sedikit. Setelah ph menjadi., larutan ditera sampai 0 ml. Bufer tris HCl. M ph. Sebanyak.0 gram tris dilarutkan dalam ml akuades kemudian ph diatur menjadi. dengan menambahkan larutan HCl N. Lalu larutan ditera sampai 0 ml SDS % Sebanyak gram SDS dilarutkan dalam akuades lalu ditera sampai 0 ml. Bufer elektroda ph. Sebanyak gram tris,. gram glisin dan gram SDS dilarutkan dan dihomogenkan dengan 00 ml akuades. Lalu ph larutan diukur tanpa harus menambahkan asam atau basa ke dalam larutan. Sampel buffer Sebanyak ml 0. tris HCl ph., 0. ml gliserol %,. ml SDS %, 0. ml β-markaptoetanol,. ml 0.0% Bromphenol blue dan. ml akuades dihomogenkan dan disimpan dalam botol gelap. Pewarna perak nitrat Larutan : Sebanyak 0. gram AgNO dilarutkan dalam ml akuades.

4 Larutan : Sebanyak ml NaOH 0.% ditambah dengan. ml NH OH % lalu dihomogenkan. Larutan ditambahkan sedikit demi sedikit ke dalam larutan sambil terus diaduk. Jika larutan menjadi keruh, pembuatan larutan harus diulangi dari awal. Setelah semua larutan dimasukkan ke dalam larutan, lalu larutan ditera sampai 0 ml dengan akuades. Larutan penampak Sebanyak. ml asam sitrat % ditambah dengan 0. ml formaldehida dan 00 ml akuades lalu dihomogenkan.. Pereaksi Immunoblotting Transfer buffer Sebanyak.0 gram tris ditambah. gram glisin dan 00 ml metanol lalu ditera sampai L dengan akuades. PBS Sebanyak gram NaCl ditambah 0. gram KH PO,. gram Na HPO.H O dan 0. gram KCl lalu dilarutkan dan ditera sampai 0 ml dengan akuades. Dari larutan tersebut diambil 0 ml lalu ditera sampai 00 ml dengan akuades. PBS 0.0% Sebanyak 0 ml larutan PBS ditambah 0. ml Tween 0, lalu ditera hingga 00 ml. Larutan ini harus selalu baru. bufer Western Sebanyak. gram Trisma base ditambah 0.0 gram EDTA,. gram NaCl, 0. gram susu nonfat dry milk dan µl Tween TC lalu ditera dengan akuades sampai 0 ml. Pembuatan substrat DAB : tablet DAB dilarutkan dalam ml PBS ditambah µl H O 0%. Pereaksi elektroeluter Bufer elusi Sebanyak gram trisma base ditambah. gram glisin dan.0 gram SDS lalu ditera sampai L dengan akuades.

5 Lampiran Bagan alat elektroeluter Banana plags Gromet Tabung kaca Adaptor silikon Membran Lampiran Standar protein Lowry No. Konsentrasi (µg/ml) OD Absorbans Kurva standar protein Lowry y = 0.00x R = Konsentrasi Lampiran Standar protein SDS-PAGE dengan pewarna AgNO No. BM log BM Panjang gel Jarak pita Rf

6 Kurva standar protein gel Log BM y = -.x +.0 R = Rf Lampiran Pita protein SDS-PAGE dengan pewarna AgNO No. Sampel Pita ke-. Lutoid. Serum C 0 Panjang gel Jarak pita Rf Log BM BM

7 Lanjutan lampiran Pita protein SDS-PAGE dengan pewarna AgNO No. Sampel Pita ke- Panjang gel Jarak pita Rf Log BM BM DPNR Komersial

8 0 Lampiran Standar protein pada membran nitroselulosa No. BM log BM Panjang gel Jarak pita Rf Kurva Standar Protein Membran Log BM y = -.x +.0 R = Rf Lampiran Pita protein membran nitroselulosa No. Sampel Pita ke-. Lutoid. Serum C 0 Panjang gel Jarak pita Rf Log BM BM

9 Lanjutan lampiran Pita protein membran nitroselusa No. Sampel Pita ke-. DPNR 0 Panjang gel Jarak pita Rf Log BM BM Komersial Lampiran Kromatogram protein antigen

10 Lampira Kromatogram protein non-antigen

11 Lampiran Bagan alir penelitian Ekstraksi sampel metode RRIM Penentuan kadar protein metode Lowry SDS-PAGE Western Blotting Elusi Protein HPLC