LAMPIRAN 15
16 Lampiran 1 Diagram alir kerja Kadar Air Sampel kering daun Kumis kucing Uji Fitokoimia Maserasi Maserasi kloroform Maserasi etanol Analisis dengan KLT dan KCKT Pelarut Terpilih RAL Perancangan Percobaan dengan 3 k-1 Desain Fraksional Faktorial (9 kombinasi yang mewakili dari 27 kombinasi yang ada) Rendemen Ekstrak Kering dan Kadar Sinensetin pada Sembilan Pengamatan Yang Terwakili Analisis Regresi Kondisi Optimum Ekstraksi
17 Lampiran 2 Rancangan percobaan ekstraksi Sinensetin untuk seluruh kombinasi perlakuan Pelarut Terpilih 2 jam 2 kali 0.5g/100ml 4 jam 2 kali 8 jam 2 kali 2 jam 2 kali Pelarut 1g/100ml 4 jam 2 kali 8 jam 2 kali 2 jam 2 kali 1.5g/100ml 4 jam 2 kali 8 jam 2 kali
18 Lampiran 3 Kadar air daun kumis kucing Ulangan Bobot (g) Sebelum Pengeringan Setelah Pengeringan Kadar Air (%) 1 3.0045 2.7187 9.51 2 3.0068 2.7107 9.85 3 3.0010 2.7230 9.26 Rerata 9.54 Contoh perhitungan Penentuan kadar air ulangan 1 a - b Kadar air = 100% a 3.0045 2.7187 = 100% 3.0045 = 9.51% Lampiran 4 Rendemen ekstrak Rendemen ekstrak kloroform Ulangan Bobot (g) Contoh yang ditimbang Ekstrak kering Rendemen (%) 1 0.5017 0.0176 3.88 2 0.5014 0.0246 5.42 3 0.5023 0.0249 5.48 Rendemen ekstrak etanol Ulangan Rerata 4.93 Bobot (g) Contoh yang ditimbang Ekstrak kering Rendemen (%) 1 0.5007 0.0285 6.29 2 0.5022 0.0267 5.88 3 0.5005 0.0297 6.56 Rerata 6.24 Contoh perhitungan Penentuan rendemen ekstrak kloroform ulangan 1 bobot kering (g) Rendemen = 100% (1 kadar air) bobot contoh (g) 0.0176 g = 100% (1 9.54%) 0.5017 g = 3.88%
19 Lampiran 5 Hasil analisis dengan kromatografi lapis tipis menggunakan fase gerak etil asetat:metanol (9:1) Contoh Ulangan Jumlah bercak yang dihasilkan Rf Rerata Standar 1 1 0.76 0.78 2 1 0.80 3 1 0.78 Ekstrak Kloroform 1 1 0.91 0.92 2 0.93 3 0.91 1 2 0.76 0.78* 2 0.79 3 0.78 Ekstrak Etanol 1 1 0.91 0.92 2 0.93 3 0.91 1 2 0.76 0.78* 2 0.80 3 0.78 Ket = Rf yang mendekati Rf standar sinensetin Lampiran 6 Penentuan konsentrasi sinensetin dan kadar sinensetin berdasarkan area dibawah puncak yang terbentuk hasil analisis dengan metode KCKT Observasi Bobot contoh yang ditimbang (g) Waktu retensi (menit) Area di bawah puncak Volume larutan (ml) Fp Konsentrasi sinensetin (ppm) Kadar sinensetin (mg/g) Standar 9.253 8221344 - - 20.0000 - CHCl 3 1 0.0172 9.263 49880 100 5 0.6067 3.53 CHCl 3 2 0.0175 9.300 22116 10 50 2.6901 1.54 CHCl 3 3 0.0168 9.227 12130 10 50 1.4754 0.88 EtOH 1 0.0191 9.133 730578 10 5 8.8864 4.65 EtOH 2 0.0256 9.127 794597 10 5 9.6650 3.78 EtOH 3 0.0214 9.113 800508 10 5 9.7369 4.55 Rerata (mg/g) 1.98 4.33 Contoh perhitungan Penentuan konsentrasi sinensetin dalam contoh (observasi CHCl 3 2) Konsentrasi contoh = Area di bawah puncak contoh konsentrasi standar fp Area di bawah puncak standar 22116 10 ml 5 ml = 20 ppm 8221344 1ml 1ml = 2.6901ppm
20 Lampiran 7 Hasil analisis rancangan acak lengkap One-way ANOVA: kadar versus perlakuan Source DF SS MS F P perlakuan 1 8.24 8.24 7.74 0.050 Error 4 4.26 1.06 Total 5 12.50 S = 1.032 R-Sq = 65.91% R-Sq(adj) = 57.39% Lampiran 8 Hasil perolehan rendemen ekstrak kering hasil ekstraksi dari sembilan kombinasi perlakuan Obsv Nisbah Waktu Jumlah Ulangan Contoh yang Ekstrak Rendemen ditimbang kering (%) 1 0.5 2 1 1 0.5006 0.0382 8.44 2 0.5006 0.0392 8.66 2 0.5 4 3 1 0.5003 0.0559 12.35 2 0.5004 0.0522 11.53 3 0.5 8 2 1 0.5000 0.0479 10.59 2 0.5001 0.0490 10.83 4 1.0 2 3 1 1.0001 0.0732 8.09 2 1.0001 0.0730 8.07 5 1.0 4 2 1 1.0004 0.0772 8.53 2 1.0002 0.0771 8.52 6 1.0 8 1 1 1.0008 0.0744 8.22 2 1.0007 0.0758 8.37 7 1.5 2 2 1 1.5003 0.0954 7.03 2 1.5005 0.1000 7.37 8 1.5 4 1 1 1.5004 0.1000 7.37 2 1.5008 0.0983 7.24 9 1.5 8 3 1 1.5003 0.1191 8.78 2 1.5003 0.1233 9.09 Rerata (%) 8.55 11.94 10.71 8.08 8.53 8.30 7.20 7.30 8.93 Contoh perhitungan observasi 1 bobot kering (g) Rendemen = 100% (1 kadar air) bobot contoh (g) 0.0382 g = 100% (1 9.54%) 0.5006 g = 8.44%
21 Lampiran 9 Kromatogram standar sinensetin (d) (e) Kromatogram standar 0.5 ppm 1 ppm 2.5 ppm (d) 5 ppm (e)10 ppm (f) 21.58 ppm. (f)
22 Lampiran 10 Area di bawah puncak standar sinensetin Konsentrasi (ppm) Area di bawah puncak 0.50 175079 1.00 302997 2.50 691883 5.00 1310047 10.00 2858776 21.58 6207707 Lampiran 11 Kromatogram sinensetin pada contoh dengan KCKT Kromatogram sinensetin dengan nisbah:pelarut 0.5 g:100 ml, waktu 2 jam, dan jumlah ekstraksi 1x ulangan 1 ulangan 2 ulangan 3.
23 Lanjutan Lampiran 11 Kromatogram sinensetin dengan nisbah:pelarut 0.5 g:100 ml, waktu 4 jam, dan jumlah ekstraksi 3x ulangan 1 ulangan 2 ulangan 3. Kromatogram sinensetin dengan nisbah:pelarut 0.5 g:100 ml, waktu 8 jam, dan jumlah ekstraksi 2x ulangan 1 ulangan 2 ulangan 3.
24 Lanjutan Lampiran 11 Kromatogram sinensetin dengan nisbah:pelarut 1 g:100 ml, waktu 2 jam, dan jumlah ekstraksi 3x ulangan 1 ulangan 2 ulangan 3. Kromatogram sinensetin dengan nisbah:pelarut 1 g:100 ml, waktu 4 jam, dan jumlah ekstraksi 2x ulangan 1 ulangan 2 ulangan 3.
25 Lanjutan Lampiran 11 Kromatogram sinensetin dengan nisbah:pelarut 1 g:100 ml, waktu 8 jam, dan jumlah ekstraksi 1x ulangan 1 ulangan 2 ulangan 3. Kromatogram sinensetin dengan nisbah:pelarut 1.5 g:100 ml, waktu 2 jam, dan jumlah ekstraksi 2x ulangan 1 ulangan 2 ulangan 3.
26 Lanjutan Lampiran 11 Kromatogram sinensetin dengan nisbah:pelarut 1.5 g:100 ml, waktu 4 jam, dan jumlah ekstraksi 1x ulangan 1 ulangan 2 ulangan 3. Kromatogram sinensetin dengan nisbah:pelarut 1.5 g:100 ml, waktu 8 jam, dan jumlah ekstraksi 3x ulangan 1 ulangan 2 ulangan 3.
27 Lampiran 12 Hasil perolehan % SBR dan Q-hitung Obsv Nisbah Waktu Jumlah Ulangan Kadar SB %SBR Q-hitung 1 0.5 2 1 1 3.5 2 4.06 0.29 7.57 0.7857 3 3.94 2 0.5 4 3 1 3.51 2 3.22 0.22 6.36 0.6591 3 3.66 3 0.5 8 2 1 3.69 2 5.98 1.28 28.38 0.9301 3 3.85 4 1.0 2 3 1 4.91 2 5.23 0.22 4.26 0.7442 3 5.34 5 1.0 4 2 1 4.54 2 4.88 0.77 14.98 0.7687 3 6.01 6 1.0 8 1 1 4.3 2 4.53 0.96 19.32 0.8701 3 6.07 7 1.5 2 2 1 5.28 2 4.96 0.75 15.95 0.7762 3 3.85 8 1.5 4 1 1 4.7 2 5.05 0.21 4.36 0.9720 3 4.69 9 1.5 8 3 1 4.56 2 4.56 5.77x10-3 0.13 3 4.55 Contoh perhitungan observasi 1 Simpangan baku = n i = 1 2 ( xi X ) n 1 2 = (3.50 3.83) + (4.06 3.83) + (3.94 3.83) = 0. 29 3 1 Simpangan baku %SBR = 100% X 0.29 = 100% 3.83 = 7.57% 2 2
28 Lanjutan Lampiran 12 Q-hitung = X 2 X X n X 1 1 atau Q-hitung = X n X X n X n 1 1 Q-hitung = 3.94 3.50 = 0. 7857 4.06 3.50 Q-tabel (0,05;3) = 0.970 Q-hitung < Q-tabel (0.05;3), maka data yang dicurigai sebagai pencilan dapat diterima Lampiran 13 Penentuan konsentrasi sinensetin dan kadar sinensetin dari sembilan kombinasi perlakuan dengan volume 10 ml dan faktor pengenceran 5 kali Obsv Ulangan Bobot contoh yang ditimbang (g) Area dibawah puncak Konsentrasi sinensetin (ppm) Kadar sinensetin (mg/g) 1 1 0.0382 870679 15.5011 4.06 2 0.0392 867982 15.4543 3.94 2 1 0.0559 1108689 19.6381 3.51 2 0.0522 1078724 19.1173 3.66 3 1 0.0479 995092 17.6636 3.69 2 0.0490 1063298 18.8492 3.85 4 1 0.0732 2180063 38.2602 5.23 2 0.0730 2222766 39.0025 5.34 5 1 0.0772 1994532 35.0354 4.54 2 0.0771 2144176 37.6364 4.88 6 1 0.0744 1821055 32.0201 4.30 2 0.0758 1956522 34.3747 4.53 7 1 0.0954 2875987 50.3564 5.28 2 0.1000 2833573 49.6192 4.96 8 1 0.1000 2683422 47.0094 4.70 2 0.0983 2630239 46.0850 4.69 9 1 0.1191 3100145 54.2526 4.56 2 0.1233 3215063 56.2501 4.56 Rerata (mg/g) 4.00 3.59 3.77 5.28 4.71 4.42 5.12 4.69 4.56 Contoh perhitungan Penentuan konsentrasi sinensetin dalam contoh observasi 1 Konsentrasi contoh = Area di bawah puncak ± intersep faktor pengenceran slope 870679+ 21139 5 ml = 287662 1ml = 15.5011ppm
29 Lanjutan Lampiran 13 Penentuan kadar sinensetin dalam contoh observasi 1 Konsentrasi contoh volume larutan (ml) Kadar contoh = Bobot contoh yang ditimbang (g) 15.5011 mg 10 ml = 1000 ml 0.0382 g = 4.06 mg/g
2