Lampiran 1. Surat Keterangan Identifikasi Spons

Transkripsi

1 Lampiran 1. Surat Keterangan Identifikasi Spons 96

2 97

3 98 Lampiran 2. Pembuatan Larutan untuk Uji Toksisitas terhadap Larva Artemia salina Leach A. Membuat Larutan Stok Diambil 20 mg sampel kemudian dilarutkan dalam pelarut hingga volumnya 2 ml untuk membuat larutan stok (induk). Perhitungan: M stok = 20 mg 2 ml = 20 mg L = 10 mg L = mg/l = ppm Jadi larutan stok yang tersedia mempunyai konsentrasi ppm dalam volum 2 ml = 2000 µl B. Membuat Larutan 1000 ppm Digunakan rumus pengenceran: V larutan x M larutan = V stok x M stok V stok = V larutan x M larutan M stok

4 99 Dibuat larutan 1000 ppm dalam volum 5 ml, sehingga: V stok = 5 ml x 1000 ppm ppm = 0,5 ml = 500 µl Jadi, larutan stok yang diambil sebanyak 500 µl C. Membuat Larutan 100 ppm Dibuat larutan 100 ppm dalam volum 5 ml, sehingga: V stok = 5 ml x 100 ppm ppm = 0,05 ml = 50 µl Jadi, larutan stok yang diambil sebanyak 50 µl D. Membuat Larutan 10 ppm Dibuat larutan 10 ppm dalam volum 5 ml, sehingga: V stok = 5 ml x 10 ppm ppm = 0,005 ml = 5 µl Jadi, larutan stok yang diambil sebanyak 5 µl

5 100 Lampiran 3. Perhitungan LC 50 Ekstrak Etanol dan Metanol Spons Genus Haliclona Grant, 1836 A. Ekstrak Etanol 1) Hasil Uji Larva Ekstrak Ekstrak kasar etanol Jumlah Larva yang Mati 0 ppm 10 ppm 100 ppm 1000 ppm Ulangan Persen mortalitas Keterangan : Jumlah larva tiap konsentrasi 10 ekor (total larva pada tiga konsentrasi adalah 30 ekor) 2) Tabel Pembantu Perhitungan LC 50 Konsentrasi Log C % Mortalitas (ppm) (x) (y) x 2 y 2 xy Jumlah Keterangan : % Mortalitas adalah tingkat kematian larva Artemia salina L. yang dihitung dengan cara menjumlahkan larva yang mati pada tiap konsentrasi dibagi total larva dikalikan 100 % 3) Perhitungan gradien (m) m = xy 1 n ( x y ) x 2 1 n ( x)2 m = m = (6 190) (6) m = 80 2 = 40

6 % Mortalitas 101 4) Perhitungan konstanta (b) b = 1 ( y m x) n b = 1 ( ) 3 b = b = b = 16, 66 5) Persamaan garis lurus Persamaan garis lurus menjadi: y = 40x 16,66 6) Grafik garis lurus, y = 40x 16, Grafik Log Konsentrasi Ekstrak Etanol vs % Mortalitas Larva y = 40x R² = Log Konsentrasi Ekstrak

7 102 7) Menghitung LC 50 Nilai LC 50 diperoleh dari anti log x, dengan x merupakan logaritma konsentrasi bahan toksik pada y = 50, sehingga menjadi: 50 b m 50 ( 16,66) ,66 40 = 66,66 40 = 1,67 LC 50 = inv log 1,67 = 10 1,67 = 46,77 (Ekstrak etanol spons genus Haliclona Grant, 1836 tergolong toksik) B. Ekstrak Metanol 1) Hasil Uji Larva Ekstrak Ekstrak kasar metanol Jumlah Larva yang Mati 0 ppm 10 ppm 100 ppm 1000 ppm Ulangan Persen mortalitas 0 23,33 83, Keterangan : Jumlah larva tiap konsentrasi 10 ekor (total larva pada tiga konsentrasi adalah 30 ekor) 2) Tabel Pembantu Perhitungan LC 50 Konsentrasi Log C % mortalitas (C) (x) (y) x 2 y 2 xy , ,29 23, , ,89 166, Jumlah 6 206, ,18 489,99 Keterangan : % Mortalitas adalah tingkat kematian larva Artemia salina L. yang dihitung dengan cara menjumlahkan larva yang mati pada tiap konsentrasi dibagi total larva dikalikan 100 %

8 103 3) Perhitungan gradien (m) m = xy 1 n ( x y ) x 2 1 n ( x)2 m = 489, m = (6 206,66) (6)2 489,99 413,32 m = 76, = 38,34 4) Perhitungan konstanta (b) b = 1 ( y m x) n b = 1 (206,66 38,34 6) 3 b = ,66 230,04 b = ,38 b = 7, 79 5) Persamaan garis lurus Persamaan garis lurus menjadi: y = 38,34x 7,79

9 % Mortalitas 104 6) Grafik garis lurus, y = 38,34x 7,79 Grafik Log Konsentrasi Ekstrak Metanol vs % Mortalitas Larva y = 38.34x R² = Log Konsentrasi Ekstrak Metanol 7) Menghitung LC 50 Nilai LC 50 diperoleh dari anti log x, dengan x merupakan logaritma konsentrasi bahan toksik pada y = 50, sehingga menjadi: 50 b m 50 ( 7,79) 38, ,79 38,34 = 57,79 38,34 = 1,51 LC 50 = inv log 1,51 = 10 1,51 = 32,36 (Ekstrak metanol spons genus Haliclona Grant, 1836 tergolong toksik)

10 105 Lampiran 4. Perhitungan LC 50 Hasil Partisi Ekstrak Metanol Spons Genus Haliclona Grant, 1836 A. Ekstrak n-heksana 1) Hasil Uji Larva Ekstrak Ekstrak n-heksana Jumlah Larva yang Mati 0 ppm 10 ppm 100 ppm 1000 ppm Ulangan Persen mortalitas 0 3,33 13,33 70 Keterangan : Jumlah larva tiap konsentrasi 10 ekor (total larva pada tiga konsentrasi adalah 30 ekor) 2) Tabel Pembantu Perhitungan LC 50 Konsentrasi Log C % Mortalitas (ppm) (x) (y) x 2 y 2 xy , ,09 3, , ,69 26, Jumlah 6 86, ,99 Keterangan : % Mortalitas adalah tingkat kematian larva Artemia salina L. yang dihitung dengan cara menjumlahkan larva yang mati pada tiap konsentrasi dibagi total larva dikalikan 100 % 3) Perhitungan gradien (m) m = xy 1 n ( x y ) x 2 1 n ( x)2 m = 239, (6)2 (6 86,66) m = 239,99 173,32 m = 66, = 33,34

11 % Mortalitas 106 4) Perhitungan konstanta (b) b = 1 ( y m x) n b = 1 (86,66 33,34 6) 3 b = ,66 200,04 b = ,38 b = 37,79 5) Persamaan garis lurus Persamaan garis lurus menjadi: y = 33,34x 37,79 Grafik garis lurus, y = 33,34x 37, Grafik Log Konsentrasi Ekstrak Partisi n-heksana vs % Mortalitas Larva y = 33.34x R² = Log Konsentrasi Ekstrak n-heksana

12 107 6) Menghitung LC 50 Nilai LC 50 diperoleh dari anti log x, dengan x merupakan logaritma konsentrasi bahan toksik pada y = 50, sehingga menjadi: 50 b m 50 ( 37,79) 33, ,79 33,34 = 87,79 = 2, 63 33,34 LC 50 = inv log 2,63 = 10 2,63 = 426,58 ppm (Ekstrak partisi n-heksana spons genus Haliclona Grant, 1836 tergolong toksik) B. Ekstrak kloroform 1) Hasil Uji Larva Ekstrak Ekstrak kloroform Jumlah Larva yang Mati 0 ppm 10 ppm 100 ppm 1000 ppm Ulangan Persen mortalitas 0 6,67 76,67 90 Keterangan : Jumlah larva tiap konsentrasi 10 ekor (total larva pada tiga konsentrasi adalah 30 ekor)

13 108 2) Tabel Pembantu Perhitungan LC 50 Konsentrasi Log C % Mortalitas (ppm) (x) (y) x 2 y 2 xy , ,49 6, , ,29 153, Jumlah 6 173, ,78 430,01 Keterangan : % Mortalitas adalah tingkat kematian larva Artemia salina L. yang dihitung dengan cara menjumlahkan larva yang mati pada tiap konsentrasi dibagi total larva dikalikan 100 % 3) Perhitungan gradien (m) m = xy 1 n ( x y ) x 2 1 n ( x)2 m = 430, (6 173,34) (6)2 m = 430,01 346,68 m = 83, = 41,67 4) Perhitungan konstanta (b) b = 1 ( y m x) n b = 1 (173,34 41,67 6) 3 b = ,34 250,02 b = ,68 b = 25,56

14 % Mortalitas 109 5) Persamaan garis lurus Persamaan garis lurus menjadi: y = 41,67x 25,56 6) Grafik garis lurus, y = 41,67x 25,56 Grafik Log Konsentrasi Ekstrak Partisi Kloroform vs % Mortalitas Larva y = 41.67x R² = Log Konsentrasi Ekstrak Kloroform 7) Menghitung LC 50 Nilai LC 50 diperoleh dari anti log x, dengan x merupakan logaritma konsentrasi bahan toksik pada y = 50, sehingga menjadi: 50 b m 50 ( 25,56) 41, ,56 41,67 = 75,56 41,67 = 1,81 LC 50 = inv log 1,81 = 10 1,81 = 64,57 (Ekstrak partisi kloroform spons genus Haliclona Grant, 1836 tergolong toksik)

15 110 C. Ekstrak air 1) Hasil Uji Larva Ekstrak Ekstrak air Jumlah Larva yang Mati 0 ppm 10 ppm 100 ppm 1000 ppm Ulangan Persen mortalitas 0 6,67 46,67 90 Keterangan : Jumlah larva tiap konsentrasi 10 ekor (total larva pada tiga konsentrasi adalah 30 ekor) 2) Tabel Pembantu Perhitungan LC 50 Konsentrasi Log C % Mortalitas (ppm) (x) (y) x 2 y 2 xy , ,49 6, , ,09 93, Jumlah 6 143, ,58 370,01 Keterangan : % Mortalitas adalah tingkat kematian larva Artemia salina L. yang dihitung dengan cara menjumlahkan larva yang mati pada tiap konsentrasi dibagi total larva dikalikan 100 % 3) Perhitungan gradien (m) m = xy 1 n ( x y ) x 2 1 n ( x)2 m = 370, (6 143,34) (6)2 m = 370,01 286,68 m = 83, = 41,67

16 % Mortalitas 111 4) Perhitungan konstanta (b) b = 1 ( y m x) n b = 1 (143,34 41,67 6) 3 b = ,34 250,02 b = ,68 b = 35,56 5) Persamaan garis lurus Persamaan garis lurus menjadi: y = 41,67x 35,56 6) Grafik garis lurus, y = 41,67x 35, Grafik Log Konsentrasi Ekstrak Partisi Air vs % Mortalitas Larva y = 41.67x R² = Log Konsentrasi Ekstrak Air

17 112 7) Menghitung LC 50 Nilai LC 50 diperoleh dari anti log x, dengan x merupakan logaritma konsentrasi bahan toksik pada y = 50, sehingga menjadi: 50 b m 50 ( 35,56) 41, ,56 41,67 = 85,56 41,67 = 2,05 LC 50 = inv log 2,05 = 10 2,05 = 112,20 (Ekstrak partisi air spons genus Haliclona Grant, 1836 tergolong toksik)

18 113 Lampiran 5. Kromatogram Hasil Kromatografi Lapis Tipis dengan Berbagai Fase Gerak A. Eluen etil asetat : n-heksana B. Eluen etanol : etil asetat Keterangan: Keterangan: (1) Etil asetat : n-heksana (1 : 9) (1) Etanol : etil asetat (7 : 3) (2) Etil asetat : n-heksana (2 : 8) (2) Etanol : etil asetat (8 : 2) (3) Etil asetat : n-heksana (3 : 7) (4) Etil asetat : n-heksana (8 : 2) (5) Etil asetat : n-heksana (9 : 1)

19 114 C. Eluen etil asetat : kloroform Keterangan: (1) Etil asetat : kloroform (2 : 8) (2) Etil asetat : kloroform (3 : 7) (3) Etil asetat : kloroform (5 : 5) (4) Etil asetat : kloroform (6 : 4) (5) Etil asetat : kloroform (7 : 3) (6) Etil asetat : kloroform (8 : 2) (7) Etil asetat : kloroform (9 : 1) D. Eluen Kloroform : n-heksana Keterangan: (1) Kloroform : n-heksana (5 : 5) (2) Kloroform : n-heksana (6 : 4) (3) Kloroform : n-heksana (7 : 3) (4) Kloroform : n-heksana (8 : 2) (5) Kloroform : n-heksana (9 : 1) Etil asetat : kloroform (7 : 3)

20 115 Lampiran 6. Perhitungan Harga Rf Hasil KLT Ekstrak Kental Kloroform dengan Berbagai Campuran Eluen Retardation Faktor (Rf) Rf = Jarak yang ditempuh oleh masing masing komponen Jarak yang ditempuh oleh fase gerak A. Perhitungan Rf dengan eluen etil asetat : n-heksana 1) Perbandingan 1 : 9 (4 noda) 2) Perbandingan 2 : 8 (4 noda) Noda 1: Rf = 0,3 2 = 0,035 Noda 1: Rf = = 0,235 8,5 8,5 Noda 2: Rf = 0,5 3,8 = 0,059 Noda 2: Rf = = 0,447 8,5 8,5 Noda 3: Rf = 0,8 4,4 = 0,094 Noda 3: Rf = = 0,518 8,5 8,5 Noda 4: Rf = 1,3 4,9 = 0,153 Noda 4: Rf = = 0,576 8,5 8,5 3) Perbandingan 3 : 7 (4 noda) 4) Perbandingan 8 : 2 (2 noda) Noda 1: Rf = 0,4 7,2 = 0,047 Noda 1: Rf = = 0,847 8,5 8,5 Noda 2: Rf = 3,7 8,1 = 0,435 Noda 2: Rf = = 0,953 8,5 8,5 Noda 3: Rf = 4,8 8,5 = 0,565 Noda 4: Rf = 5,6 8,5 = 0,659 5) Perbandingan 9 : 1 (2 noda) Noda 1: Rf = 7,6 8,5 = 0,894 Noda 2: Rf = 8,2 8,5 = 0,965

21 116 B. Perhitungan Rf dengan eluen etanol : etil asetat 1) Perbandingan 7 : 3 (1 noda) 2) Perbandingan 8 : 2 (1 noda) Noda 1: Rf = 8,0 7,7 = 0,941 Noda 1: Rf = = 0,906 8,5 8,5 C. Perhitungan Rf dengan eluen etil asetat : kloroform 1) Perbandingan 2 : 8 (3 noda) 2) Perbandingan 3 : 7 (2 noda) Noda 1: Rf = 1,5 1,5 = 0,176 Noda 1: Rf = = 0,176 8,5 8,5 Noda 2: Rf = 5,2 5,5 = 0,612 Noda 2: Rf = = 0,647 8,5 8,5 Noda 3: Rf = 5,7 8,5 = 0,671 3) Perbandingan 5 : 5 (2 noda) 4) Perbandingan 6 : 4 (2 noda) Noda 1: Rf = 7,2 5,3 = 0,847 Noda 1: Rf = = 0,624 8,5 8,5 Noda 2: Rf = 8,2 7,9 = 0,965 Noda 2: Rf = = 0,929 8,5 8,5 5) Perbandingan 7 : 3 (3 noda) 6) Perbandingan 8 : 2 (2 noda) Noda 1: Rf = 5,2 0,9 = 0,612 Noda 1: Rf = = 0,106 8,5 8,5 Noda 2: Rf = 6,2 8,3 = 0,729 Noda 2: Rf = = 0,946 8,5 8,5 Noda 3: Rf = 8 8,5 = 0,941 7) Perbandingan 9 : 1 (2 noda) Noda 1: Rf = 6,5 8,5 = 0,765 Noda 2: Rf = 8,0 8,5 = 0,941

22 117 D. Perhitungan Rf dengan eluen kloroform : n-heksana 1) Perbandingan 5 : 5 (3 noda) 2) Perbandingan 6 : 4 (2 noda) Noda 1: Rf = 0,5 1,2 = 0,059 Noda 1: Rf = = 0,141 8,5 8,5 Noda 2: Rf = 1,6 3,0 = 0,188 Noda 2: Rf = = 0,353 8,5 8,5 Noda 3: Rf = 3,5 8,5 = 0,412 3) Perbandingan 7 : 3 (3 noda) 4) Perbandingan 8 : 2 (4 noda) Noda 1: Rf = 0,2 0,4 = 0,024 Noda 1: Rf = = 0,047 8,5 8,5 Noda 2: Rf = 1,7 2,2 = 0,200 Noda 2: Rf = = 0,259 8,5 8,5 Noda 3: Rf = 2,8 2,7 = 0,329 Noda 3: Rf = = 0,318 8,5 8,5 5) Perbandingan 9 : 1 (4 noda) Noda 1: Rf = 0,4 8,5 = 0,047 Noda 2: Rf = 1,7 8,5 = 0,200 Noda 3: Rf = 2,4 8,5 = 0,282 Noda 4: Rf = 3,0 8,5 = 0,353 Noda 4: Rf = 3,3 8,5 = 0,388

23 118 Lampiran 7. Kromatogram Hasil KLT Penggabungan dengan Fase Gerak Etil Asetat : n-heksana (2 : 8) F 1 F 2 F 3 F 4 F 5

24 119 Lampiran 8. Perhitungan Harga Rf Hasil KLT Penggabungan Kromatografi Kolom Ekstrak Kental Kloroform Retardation Faktor (Rf) Rf = Jarak yang ditempuh oleh masing masing komponen Jarak yang ditempuh oleh fase gerak A. Perhitungan Rf Fraksi 1 (1 noda) Noda 1: Rf = 4,3 8,5 = 0,506 B. Perhitungan Rf Fraksi 2 (1 noda) Noda 1: Rf = 3,8 8,5 = 0,447 C. Perhitungan Rf Fraksi 3 (1 noda) Noda 1: Rf = 2,5 8,5 = 0,294 D. Perhitungan Rf Fraksi 4 (2 noda) Noda 1: Rf = 2,0 8,5 = 0,235 Noda 2: Rf = 1,5 8,5 = 0,176 E. Perhitungan Rf Fraksi 5 (1 noda) Noda 1: Rf = 0,8 8,5 = 0,090

25 120 Lampiran 9. Perhitungan LC 50 Fraksi Hasil Kromatografi Kolom A. Fraksi 1 1) Hasil Uji Larva Ekstrak Ulangan Jumlah Larva yang Mati 0 ppm 10 ppm 100 ppm 1000 ppm Fraksi Persen mortalitas ,33 80 Keterangan : Jumlah larva tiap konsentrasi 10 ekor (total larva pada tiga konsentrasi adalah 30 ekor) 2) Tabel Pembantu Perhitungan LC 50 Konsentrasi Log C % Mortalitas (ppm) (x) (y) x 2 y 2 xy , ,69 126, Jumlah 6 163, ,69 386,66 Keterangan : % Mortalitas adalah tingkat kematian larva Artemia salina L. yang dihitung dengan cara menjumlahkan larva yang mati pada tiap konsentrasi dibagi total larva dikalikan 100 % 3) Perhitungan gradien (m) m = xy 1 n ( x y ) x 2 1 n ( x)2 m = 386, (6 163,33) (6)2 m = 386,66 326, m = 60 2 = 30

26 % Mortalitas 121 4) Perhitungan konstanta (b) b = 1 ( y m x) n b = 1 (163, ) 3 b = , b = ,67 b = 5,56 5) Persamaan garis lurus Persamaan garis lurus menjadi: y = 30x 5,56 6) Grafik garis lurus, y = 30x 5, Grafik Log Konsentrasi Fraksi 1 vs % Mortalitas Larva y = 30x R² = Log Konsentrasi Fraksi 1

27 122 7) Menghitung LC 50 Nilai LC 50 diperoleh dari anti log x, dengan x merupakan logaritma konsentrasi bahan toksik pada y = 50, sehingga menjadi: 50 b m 50 ( 5,56) ,56 30 = 55,56 30 = 1,85 LC 50 = inv log 1,85 = 10 1,85 = 70,79 ppm (Ekstrak Fraksi 1 spons genus Haliclona Grant, 1836 tergolong toksik) B. Fraksi 2 1) Hasil Uji Larva Ekstrak Ulangan Jumlah Larva yang Mati 0 ppm 10 ppm 100 ppm 1000 ppm Fraksi Persen mortalitas 0 6,67 43,33 86,67 Keterangan : Jumlah larva tiap konsentrasi 10 ekor (total larva pada tiga konsentrasi adalah 30 ekor) 2) Tabel Pembantu Perhitungan LC 50 Konsentrasi Log C % Mortalitas (ppm) (x) (y) x 2 y 2 xy , ,49 6, , ,49 86, , ,69 260,01 Jumlah 6 136, ,67 353,34 Keterangan : % Mortalitas adalah tingkat kematian larva Artemia salina L. yang dihitung dengan cara menjumlahkan larva yang mati pada tiap konsentrasi dibagi total larva dikalikan 100 %

28 123 3) Perhitungan gradien (m) m = xy 1 n ( x y ) x 2 1 n ( x)2 m = 353, (6 136,67) (6)2 m = 353,34 273, m = 80 2 = 40 4) Perhitungan konstanta (b) b = 1 ( y m x) n b = 1 (136, ) 3 b = , b = ,33 b = 34,44 5) Persamaan garis lurus Persamaan garis lurus menjadi: y = 40x 34,44

29 % Mortalitas 124 6) Grafik garis lurus, y = 40x 34,44 Grafik Log Konsentrasi Fraksi 2 vs % Mortalitas Larva y = 40x R² = Log Konsentrasi Fraksi 2 7) Menghitung LC 50 Nilai LC 50 diperoleh dari anti log x, dengan x merupakan logaritma konsentrasi bahan toksik pada y = 50, sehingga menjadi: 50 b m 50 ( 34,44) ,44 40 = 84,44 40 = 2,11 LC 50 = inv log 2,11 = 10 2,11 = 128,82 ppm (Ekstrak Fraksi 2 spons genus Haliclona Grant, 1836 tergolong toksik)

30 125 C. Fraksi 3 1) Hasil Uji Larva Ekstrak Ulangan Jumlah Larva yang Mati 0 ppm 10 ppm 100 ppm 1000 ppm Fraksi Persen mortalitas 0 6,67 36,67 73,33 Keterangan : Jumlah larva tiap konsentrasi 10 ekor (total larva pada tiga konsentrasi adalah 30 ekor) 2) Tabel Pembantu Perhitungan LC 50 Konsentrasi Log C % Mortalitas (ppm) (x) (y) x 2 y 2 xy , ,49 6, , ,69 73, , ,29 219,99 Jumlah 6 116, , Keterangan : % Mortalitas adalah tingkat kematian larva Artemia salina L. yang dihitung dengan cara menjumlahkan larva yang mati pada tiap konsentrasi dibagi total larva dikalikan 100 % 3) Perhitungan gradien (m) m = xy 1 n ( x y ) x 2 1 n ( x)2 m = (6 116,67) (6)2 m = ,34 m = 66, = 33,33

31 % Mortalitas 126 4) Perhitungan konstanta (b) b = 1 ( y m x) n b = 1 (116,67 33,33 6) 3 b = ,67 199,98 b = ,31 b = 27,77 5) Persamaan garis lurus Persamaan garis lurus menjadi: y = 33,33x 27,77 6) Grafik garis lurus, y = 33,33x 27, Grafik Log Konsentrasi Fraksi 3 vs % Mortalitas Larva y = 33.33x R² = Log Konsentrasi Fraksi 3 7) Menghitung LC 50 Nilai LC 50 diperoleh dari anti log x, dengan x merupakan logaritma konsentrasi bahan toksik pada y = 50, sehingga menjadi:

32 b m 50 ( 27,77) 33, ,77 33,33 = 77,77 33,33 = 2,33 LC 50 = inv log 2,33 = 10 2,33 = 213,79 ppm (Ekstrak Fraksi 3 spons genus Haliclona Grant, 1836 tergolong toksik) D. Fraksi 4 1) Hasil Uji Larva Ekstrak Ulangan Jumlah Larva yang Mati 0 ppm 10 ppm 100 ppm 1000 ppm Fraksi Persen mortalitas 0 3, ,33 Keterangan : Jumlah larva tiap konsentrasi 10 ekor (total larva pada tiga konsentrasi adalah 30 ekor) 2) Tabel Pembantu Perhitungan LC 50 Konsentrasi Log C % Mortalitas (ppm) (x) (y) x 2 y 2 xy , ,09 3, , ,29 219,99 Jumlah 6 96, ,38 263,32 Keterangan : % Mortalitas adalah tingkat kematian larva Artemia salina L. yang dihitung dengan cara menjumlahkan larva yang mati pada tiap konsentrasi dibagi total larva dikalikan 100 %

33 128 3) Perhitungan gradien (m) m = xy 1 n ( x y ) x 2 1 n ( x)2 m = 263, (6)2 (6 96,66) m = 263,32 193, m = 70 2 = 35 4) Perhitungan konstanta (b) b = 1 ( y m x) n b = 1 (96, ) 3 b = , b = ,34 b = 37,78 5) Persamaan garis lurus Persamaan garis lurus menjadi: y = 35x 37,78

34 % Mortalitas 129 6) Grafik garis lurus, y = 35x 37,78 Grafik Log Konsentrasi Fraksi 4 vs % Mortalitas Larva y = 35x R² = Log Konsentrasi Fraksi 4 7) Menghitung LC 50 Nilai LC 50 diperoleh dari anti log x, dengan x merupakan logaritma konsentrasi bahan toksik pada y = 50, sehingga menjadi: 50 b m 50 ( 37,78) ,78 35 = 87,78 35 = 2,51 LC 50 = inv log 2,51 = 10 2,51 = 323,59 ppm (Ekstrak Fraksi 4 spons genus Haliclona Grant, 1836 tergolong toksik)

35 130 E. Fraksi 5 1) Hasil Uji Larva Ekstrak Ulangan Jumlah Larva yang Mati 0 ppm 10 ppm 100 ppm 1000 ppm Fraksi Persen mortalitas 0 13,33 16,67 63,33 Keterangan : Jumlah larva tiap konsentrasi 10 ekor (total larva pada tiga konsentrasi adalah 30 ekor) 2) Tabel Pembantu Perhitungan LC 50 Konsentrasi Log C % Mortalitas (ppm) (x) (y) x 2 y 2 xy , ,69 13, , ,89 33, , ,69 189,99 Jumlah 6 93, ,27 236,66 Keterangan : % Mortalitas adalah tingkat kematian larva Artemia salina L. yang dihitung dengan cara menjumlahkan larva yang mati pada tiap konsentrasi dibagi total larva dikalikan 100 % 3) Perhitungan gradien (m) m = xy 1 n ( x y ) x 2 1 n ( x)2 m = 236, (6)2 (6 93,33) m = 236,66 186, m = 50 2 = 25

36 % Mortalitas 131 4) Perhitungan konstanta (b) b = 1 ( y m x) n b = 1 (93, ) 3 b = , b = ,67 b = 18,89 5) Persamaan garis lurus Persamaan garis lurus menjadi: y = 25x 18,89 6) Grafik garis lurus, y = 25x 18, Grafik Log Konsentrasi Fraksi 5 vs % Mortalitas Larva y = 25x R² = Log Konsentrasi Fraksi 5

37 132 7) Menghitung LC 50 Nilai LC 50 diperoleh dari anti log x, dengan x merupakan logaritma konsentrasi bahan toksik pada y = 50, sehingga menjadi: 50 b m 50 ( 18,89) ,89 25 = 68,89 25 = 2,76 LC 50 = inv log 2,76 = 10 2,76 = 575,44 ppm (Ekstrak Fraksi 5 spons genus Haliclona Grant, 1836 tergolong toksik)

38 133 Lampiran 10. Kromatogram Lapis Tipis Uji Kemurnian Fraksi 1 Keterangan: A. Fase gerak etil asetat : n-heksana (7 : 3) B. Fase gerak etil asetat : n-heksana (1 : 9) C. Fase gerak kloroform : n-heksana (1 : 1) D. Fase gerak etanol : n-heksana (7 : 3)

39 134 Lampiran 11. Perhitungan Harga Rf Uji Kemurnian Fraksi 1 Retardation Faktor (Rf) Rf = Jarak yang ditempuh oleh masing masing komponen Jarak yang ditempuh oleh fase gerak A. Perhitungan Rf dengan eluen etil asetat : n-heksana (7 : 3) Rf = 7,0 8,5 = 0,824 B. Perhitungan Rf dengan eluen etil asetat : n-heksana (1 : 9) Rf = 3,5 8,5 = 0,412 C. Perhitungan Rf dengan eluen kloroform : n-heksana (1 : 1) Rf = 3,0 8,5 = 0,353 D. Perhitungan Rf dengan eluen etanol : n-heksana (7 : 3) Rf = 7,8 8,5 = 0,918

40 135 Lampiran 12. Prosedur Pembuatan Pereaksi Pendeteksi 1. Pereaksi Pendeteksi Flavonoid Pereaksi H 2 SO 4 50 % Sebanyak 50 ml asam sulfat pekat dipipet dengan pipet volum, kemudian dituangkan ke dalam labu ukur 100 ml yang telah berisi sedikit aquades. Selanjutnya, aquades ditambahkan ke dalam labu ukur sampai tanda batas. 2. Pereaksi Pendeteksi Alkaloid Pereaksi Mayer Larutan A : sebanyak 1,36 g HgCl 2 dilarutkan dalam 60 ml aquades. Larutan B : sebanyak 0,5 g KI dilarutkan dalam 10 ml aquades Larutan A dan B dicampur dan diencerkan dengan aquades dalam labu ukur 100 ml sampai tanda batas, disimpan dalam botol coklat. Pereaksi Dragendroff Larutan A: sebanyak 0,85 g bismuth nitrat ditambahkan 2 ml asam klorida pekat dan 10 ml aquades. Larutan B: sebanyak 8 g kalium iodida ditambahkan 10 ml aquades. Larutan A dicampur dengan larutan B dengan perbandingan 1 : 1 dan disimpan dalam botol. Jika akan digunakan, 5 ml larutan stok ditambahkan 7 ml asam klorida pekat ke dalam 5 ml aquades.

41 Pereaksi Pendeteksi Triterpenoid Pereaksi Lieberman Burchard Sebanyak 5 ml asam asetat anhidrat dicampur dengan asam sulfat pekat sambil didinginkan, kemudian campuran tersebut ditambahkan ke dalam 50 ml etanol dalam keadaan dingin. 4. Pereaksi Pendeteksi Tanin/Polifenol Pereaksi FeCl 3 1 % Sebanyak 1 gram besi (III) klorida ditimbang dalam gelas beker, kemudian dilarutkan dengan akuades. Larutan ini kemudian dituang ke dalam labu ukur 100 ml dan ditambahkan akuades sampai tanda batas.

42 Lampiran 13. Hasil Uji Fraksi 1 Terhadap Sel Hela 137

43 138 Sampel Ulangan Rerata % Inhibisi µg/ml ODI ODII ODIII ,246 0,249 0,281 0,259 31, ,328 0,275 0,288 0,297 21, ,314 0,292 0,327 0,311 17, ,281 0,302 0,316 0,300 20,65 62,5 0,316 0,310 0,295 0,307 18, ,287 0,299 0,315 0,300 20,48 31,25 0,319 0,303 0,312 0,311 17,56 19,53 0,284 0,314 0,300 0,299 20,74 15,52 0,333 0,280 0,294 0,302 19,95 7,81 0,314 0,319 0,356 0, ,90 0,338 0,357 0,340 0,345 8,65 1,95 0,322 0,31 0,350 0, Kontrol Sel 0,376 0,378 0,379 0,378 0,00

44 % Daya hambat 139 Lampiran 14. Perhitungan IC 50 Fraksi 1 Terhadap Sel Hela Daya Hambat terhadap Sel HeLa Ukan y = 0.016x R² = Konsentrasi F 1 (µg/ml) Berdasarkan grafik dapat ditentukan nilai IC 50, dengan perhitungan sebagai berikut. y = 0,016x + 15,00 Jika y = 50, maka 50 15,00 0,016 = 2187,5 ppm Jadi, IC 50 Fraksi 1 adalah 2187,5 ppm.

45 140 Lampiran 15. Kromatogram Fraksi 1 Spons Genus Haliclona Grant, 1836 Puncak M + Waktu Retensi (menit) % Area Senyawa yang diduga ,901 3,91 Metil dodekanoat ,414 2,60 Metil heksadekanoat ,419 6,85 Dekil metil ptalat ,929 26,67 Mono(2-etilheksil)-1,2- Benzenadikarboksilat

46 141 Lampiran 16. Hasil Spektroskopi Massa Senyawa-senyawa Fraksi 1 Ekstrak Kloroform Spons Genus Haliclona Grant, 1836 Puncak 1

47 Puncak 2 142

48 Puncak 3 143

49 Puncak 4 144