SELEKSI ISOLAT KAPANG TANAH WONOREJO PENGHASIL ENZIM LIPASE

Transkripsi

1 TUGAS AKHIR (SB ) SELEKSI ISOLAT KAPANG TANAH WONOREJO PENGHASIL ENZIM LIPASE NOVERA DIKMA PRAMITASARI NRP Dosen Pembimbing Nengah Dwianita Kuswytasari, S.Si., M.Si. Dr.rer.nat Ir. Maya Shovitri, M.Si. 1

2 LATAR BELAKANG Ikatan Ester Gliserol Asam lemak Kapang Tanah Wonorejo 2

3 Kapang Tanah Wonorejo Koleksi Lab. Mikrobiologi dan Bioteknologi ITS Publikasi Aspergillus Fusarium Penicillium Paecilomyces Verticillium Trichoderma Scopulariopsis Curvularia Stachybotrys Gliocladium Gliomastix Acremonium Chaetomium Mortierella Absidia Exophiala Cephaliophora (Kuswytasari et al., 2011). Curvularia lunata Penicillium notatum Penicillium chrysogenum Fusarium oxysporium Fusarium equiseti (Kakde et al., 2011) Absidia sp. Acremonium sp. Aspergillus fumigatus Aspergillus versicolor Cephaliophora tropica Paecilomyces varioti Stachybotrys atra (Reese et al., 1955) Aspergillus flavus (Pau et al., 2004) Trichoderma reesei (Rajesh et al., 2010) Verticillium lecanii (Lopez-Llorca and Carbonell, 1999) Scopulariopsis brevicaulis (Kunert, 2000) Mortierella vinacea (Gaspar et al., 1999) Exophiala crusticola (Bates et al., 2006) Lipase 3

4 PERMASALAHAN Bagaimanakah kemampuan isolat kapang tanah Wonorejo dalam menghasilkan lipase? Apabila isolat kapang tanah Wonorejo tersebut mampu menghasilkan lipase, bagaimanakah aktivitas lipase dari isolat tersebut? 4

5 BATASAN MASALAH Uji kemampuan kapang tanah dalam menghasilkan lipase dan mengetahui aktivitas lipase dilakukan dalam skala laboratorium. Lipid minyak zaitun Metode difusi agar Seleksi isolat kapang tanah penghasil lipase Isolat kapang penghasil lipase Aktivitas lipase Zona berpendar spektrofotometer 715 nm 5

6 TUJUAN PENELITIAN Mengetahui isolat kapang tanah Wonorejo yang mampu menghasilkan lipase Mengetahui aktivitas lipase dari isolat kapang tanah Wonorejo yang mampu menghasilkan lipase 6

7 MANFAAT PENELITIAN Dilengkapinya informasi tentang potensi kapang tanah Wonorejo dalam menghasilkan lipase. Sehingga nantinya dapat menjadi prospek dalam pengembangan agen hayati penghasil enzim lipase dan juga sebagai pendegradasi lipid yang penting dalam bidang pengolahan limbah berorientasi lingkungan serta industri. 7

8 WAKTU DAN TEMPAT PENELITIAN Penelitian dilakukan pada bulan Oktober 2011 sampai April 2012 di Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi Biologi ITS. 8

9 CARA KERJA Isolat kapang tanah Wonorejo Peremajaan pada agar miring (PDA) Kultur baru isolat kapang tanah Wonorejo Zona berpendar Ditentukan zona berpendar yang terbentuk Isolat yang menghasilkan zona berpendar diinokulasikan ke dalam media produksi lipase dengan substrat minyak zaitun Enzim kasar lipase Uji spektrofotometer Aktivitas lipase 9

10 UJI SELEKSI PENGHASIL LIPASE Isolat Kapang Tanah Wonorejo inokulasi inkubasi 168 jam Disinari UV Diulang 3 kali Diamati zona berpendar yang terbentuk 10

11 PENENTUAN AKTIVITAS LIPASE 1,5 ml Minyak zaitun + 1 ml buffer fosfat ph ml enzim kasar diinkubasi pada shaker incubator (120 rpm selama 30 menit) 1 ml HCl 6N + 5 ml heksana dikocok kuat diukur absorbansi campuran dengan spektrofotometer (715 nm) divortex lapisan atas diambil sebanyak 2 ml 0,5 ml reagen tembaga (II) asetat 11

12 DATA DAN PEMBAHASAN 37 isolat uji 23 isolat mampu menghasilkan enzim lipase Aspergillus niger Aspergillus versicolor Aspergillus flavus Mortiriella sp. Penicillium sp.1 Penicillium sp.2 Penicillium sp.3 Penicillium sp.4 Paecylomyces sp.1 Paecylomyces sp.3 Paecylomyces sp.4 Stachybotrys sp.1 Stachybotrys sp.2 Stachybotrys sp.4 Fusarium sp. Gliomastix sp.1 Gliomastix sp.2 Chaetomium sp. Acremonium sp. Trichoderma sp.1 Trichoderma sp.2 Mycelia sterilia (Unk1) Mycelia sterilia (Unk2) 12

13 23 isolat enam isolat yang dapat menghasilkan zona berpendar dengan intensitas rendah Aspergillus flavus Penicillium sp.2 Penicillium sp.3 Paecylomyces sp.1 Paecylomyces sp.4 Chaetomium sp. 13

14 23 isolat 10 isolat yang dapat menghasilkan zona berpendar dengan intensitas sedang Aspergillus niger Aspergillus versicolor Penicillium sp.4 Paecylomyces sp.3 Stachybotrys sp.1 Stachybotrys sp.2 Stachybotrys sp.4 Acremonium sp. Trichoderma sp.1 Trichoderma sp.2 14

15 23 isolat tujuh isolat yang dapat menghasilkan zona berpendar dengan intensitas yang tinggi Mortiriella sp. Penicillium sp.1 Fusarium sp. Gliomastix sp.1 Gliomastix sp.2 Mycelia sterilia (Unk1) Mycelia sterilia (Unk2) 15

16 Zona berpendar tersebut terbentuk dengan adanya pembentukan dimer kompleks antara rhodamine B dengan monogliserida, digliserida, dan asam lemak bebas (Kouker dan Jaeger, 1986). 16

17 Uji aktivitas lipase merupakan suatu uji konfirmasi dari uji seleksi penghasil lipase penghasil lipase yang baik dapat dilihat dari kekuatan pendaran yang dihasilkan (Hou dan Johnston, 1992) Isolat Mortiriella sp., Penicillium sp.1, Fusarium sp., Gliomastix sp.1, Gliomastix sp.2, Mycelia sterilia (Unk1), Mycelia sterilia (Unk2), dan Aspergillus niger Uji aktivitas lipase 17

18 UJI AKTIVITAS LIPASE Kontrol Mortiriella sp. Penicillium sp.1 Fusarium sp. Gliomastix sp.1 Gliomastix sp.2 Mycelia sterilia (Unk1) Mycelia sterilia (Unk2) Aspergillus niger Aktivitas Lipase (U/mL) *Satu unit lipase (U/mL) didefinisikan sebagai banyaknya ml enzim yang dibutuhkan untuk menghasilkan 1 µmol asam oleat tiap menit dengan minyak zaitun sebagai substrat 18

19 Enzim lipase yang dihasilkan bergantung kepada tiap spesies. Setiap isolat kapang dapat menghasilkan lipase dengan aktivitas yang berbeda-beda (Olivia et al., 1998). Pengaruh lingkungan kemungkinan turut memberikan peranan terhadap organisme penghasil lipase (Putranto et al., 2006). 19

20 KESIMPULAN 37 isolat uji 23 isolat mampu menghasilkan enzim lipase 7 isolat menghasilkan zona berpendar dengan intensitas tinggi 10 isolat menghasilkan zona berpendar dengan intensitas sedang 6 isolat kapang menghasilkan zona berpendar dengan intensitas rendah Mortiriella sp., Penicillium sp.1, Fusarium sp., Gliomastix sp.1, Gliomastix sp.2, Mycelia sterilia (Unk1), Mycelia sterilia (Unk2). 20

21 Mortiriella sp. 0,0077 U/mL Gliomastix sp.1 0,0073 U/mL Aspergillus niger 0,0063 U/mL aktivitas lipase Mycelia sterilia (Unk2) 0,0058 U/mL Mycelia sterilia (Unk1) 0,0043 U/mL Penicillium sp.1 0,0037 U/mL Gliomastix sp.2 0,0034 U/mL Fusarium sp. 0,0032 U/mL 21

22 SARAN Penelitian lebih lanjut mengenai kondisi lingkungan yang optimal untuk meningkatkan aktivitas lipase yang diproduksi pada tiap - tiap isolat dapat dilakukan 22

23 23