Lampiran 1. Gambar kromatogram penentuan kurva kalibrasi Gambar 1. Kromatogram penentuan kurva kalibrasi secara KCKT menggunakan kolom Waters X-Bridge (50 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril:air (80:0) dan laju alir 1,5 ml/menit,volume penyuntikan 0 µl, panjang gelombang 38 nm dan suhu 50 o C. 54
Lampiran. Perhitungan Persamaan Regresi Simvastatin No Konsentrasi (µg/ml) Luas Area X Y XY X Y 1 0 734594 400 5,39x10 11 14691880 40 1516138 1600,30x10 1 6064550 3 60 33844 3600 5,40x10 1 139430640 4 80 308647 6400 9,5x10 1 46899760 5 100 3867748 10000 1,50x10 13 386774800 300 1158571 000 3,7x10 13 84844600 Rata-rata 60 305714 4400 6,54x10 1 16968050 Y ax + b XY a X 84844600 000 Y a X + b X Y / n ( X ) / n ( 300) ( 300) / 5 (1158571) / 5 3918,085 b Y a X 305714 (3918,085)(60) - 4510,9 Maka persamaan garis regresinya adalah: Y 3918,085 X - 4510,9 XY X Y / n r ( X X ) / n)( Y ( Y ) / n ( ) 84844600 ( 300) (1158571 ) / 5 13 { 000 ( 300) / 5} 3,7x10 ( 1158571) 0,9998 { / 5} 55
Lampiran 3. Gambar kromatogram penentuan kurva kalibrasi untuk sampel Ethicol Gambar 13. Kromatogram penentuan kurva kalibrasi secara KCKT menggunakan kolom Waters X-Bridge (50 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril:air (80:0) dan laju alir 1,5 ml/menit,volume penyuntikan 0 µl, panjang gelombang 38 nm dan suhu 50 o C. 56
Lampiran 4. Perhitungan persamaan baku simvastatin untuk sampel Ethicol No Konsentrasi (µg/ml) Luas Area X Y XY X Y 1 0 493477 400,44x10 11 9869540 40 1480974 1600,19x10 1 5938960 3 60 68985 3600 5,15x10 1 136137360 4 80 3030189 6400 9,18x10 1 44150 5 100 3805709 10000 1,45x10 13 380570900 300 11079305 000 3,13x10 13 88318880 Rata-rata 60 15861 4400 6,5x10 1 165646376 Y ax + b XY a X 8831880 000 Y a X + b X Y / n ( X ) / n ( 300) ( 300) / 5 (11079305) / 5 40868,395 b Y a X 15861 (40868,395)(60) - 364,7 Maka persamaan garis regresinya adalah: Y 40868,395X 364,7 XY X Y / n r ( X X ) / n)( Y ( Y ) / n ( ) 8831880 ( 300) (11079305 ) / 5 13 { 000 ( 300) / 5} 3,13x10 ( 11079305) 0,9986 { / 5} 57
Lampiran 5. Kromatogram Hasil Penyuntikan sampel tablet simvastatin produksi Dexa Medica Gambar 14. Kromatogram hasil penyuntikan sampel simvastatin produksi Dexa Medica secara KCKT menggunakan kolom Waters X-Bridge (50 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril:air (80:0) dan laju alir 1,5 ml/menit,volume penyuntikan 0 µl, panjang gelombang 38 nm dan suhu 50 o C. 58
Lampiran 6. Perhitungan Kadar Simvastatin Produksi Dexa Medica. Y ax + b Y 3918,085 X - 4510,9 X Y b a YLuas area, X Konsentrasi (µg/ml) 377633918,085 X - 4510,9 X 37763 + 4510,9 3918,085 60,5640 (µg/ml) 60,567 µg/ml x 99,73% % kadar 100,66% 60µg/ml No Berat Area %kadar Sampel 1 51,9 37763 100,66 5,0 38456 100,66 3 51,9 38144 100,68 4 51,8 3781 100,69 5 51,9 38107 100,67 6 5,1 3937 100,66 59
Lampiran 7. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Sampel simvastatin produksi Dexa Medica. Data Perhitungan Hasil Penyuntikan sampel simvastatin produksi Dexa Medica Kadar (%) Luas Area No X Y X- X (X- X ) 1 100,66 37763-0,01 0,0001 100,69 3781 0,0 0,0004 3 100,66 38456-0,01 0,0001 4 100,68 38144 0,01 0,0001 4 100,69 3781 0,0 0,0004 5 100,67 38107 0 0 6 100,66 3937-0,01 0,0001 X 604,0 (X- X ) 0,0008 X 100,67 SD ( Xi - X) n -1 0,0008 6 1 0,016 Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α 0.01, dk n-1 5, diperoleh nilai t tabel ± 4,03. Data diterima jika t hitung < t tabel. t hitung Xi SD / X n t hitung (1) 0,0 0,016/ 6 3,89 t hitung () - 0,01 0,016/ 6 1,94 t hitung (3) 0,01 0,016/ 6 1,94 60
t hitung (4) - 0,01 0,016/ 6 1,94 t hitung (5) 0 0,016/ 6 0 t hitung (6) - 0,01 0,016/ 6 1,94 Dari hasil perhitungan di atas didapat semua t.hitung: t hitung < t tabel., maka semua data tersebut diterima. Kadar Simvastatin dalam tablet produksi Dexa Medica: µ X ± (t tabel x SD/ n ) 100,67% ± (4,031 x 0,016/ 6 )% (100,67 ± 0,0)% 61
Lampiran 8. Kromatogram Hasil Penyuntikan sampel Selvim Gambar 15. Kromatogram hasil penyuntikan sampel Selvim secara KCKT menggunakan kolom Waters X-Bridge (50 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril:air (80:0) dan laju alir 1,5 ml/menit,volume penyuntikan 0 µl, panjang gelombang 38 nm dan suhu 50 o C. 6
Lampiran 9. Perhitungan kadar tablet selvim produksi PT.Ifars Y ax + b Y 3918,085 X - 4510,9 X Y b a YLuas area, X Konsentrasi (µg/ml) 3030843918,085 X - 4510,9 X 303084 + 4510,9 3918,085 59,93 µg/ml 59,93µg/ml x 99,73% % kadar 99,6% 60µg/ml No Berat Area %kadar Sampel 1 179,0 90804 98,33 181,0 93756 99,8 3 181,1 303084 99,6 4 181,0 9531 99,1 5 181,1 303849 99,65 6 181, 38434 100,6 63
Lampiran 10. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Sampel Selvim. Data Perhitungan Hasil Penyuntikan sampel Selvim Kadar (%) Luas Area No X Y X- X (X- X ) 1 98,33 90804-1,1167 1,581 99,8 93756-0,17167 0,094 3 99,6 303084 0,16833 0,0833 4 99,1 9531-0,4167 0,0584 5 99,65 303849 0,1983 0,0393 6 100,6 38434 1,16833 1,3650 X 596,71 (X- X ),7787 X 99,45 SD ( Xi - X) n -1,7787 6 1 0,7454 Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α 0.01, dk n-1 5, diperoleh nilai t tabel ± 4,03. Data diterima jika t hitung < t tabel. t hitung Xi SD / X n t hitung (1) -1,1167 0,7454/ 6 3,686 t hitung () - 0,17167 0,7454/ 6 0,565 t hitung (3) 0,16833 0,553 0,7454/ 6 t hitung (4) - 0,417 0,7454/ 6 0,794 64
t hitung (5) 0,1983 0,7454/ 6 0,65 t hitung (6) 1,1683 0,7454/ 6 3,839 Dari hasil perhitungan di atas didapat semua t.hitung: t hitung < t tabel., maka semua data tersebut diterima. Kadar Simvastatin dalam tablet produksi Dexa Medica: µ X ± (t tabel x SD/ n ) 99,45% ± (4,031 x 0,7454/ 6 )% (99,45 ± 1,3)% 65
Lampiran 11. Kromatogram Hasil Penyuntikan sampel tablet simvastatin produksi Bernofarm Gambar 16. Kromatogram hasil penyuntikan sampel tablet simvastatin produksi Bernofarm secara KCKT menggunakan kolom Waters X-Bridge (50 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril:air (80:0) dan laju alir 1,5 ml/menit,volume penyuntikan 0 µl, panjang gelombang 38 nm dan suhu 50 o C. 66
Lampiran 1. Perhitungan kadar tablet simvastatin produksi Bernofarm Y ax + b Y 3918,085 X - 4510,9 X Y b a YLuas area, X Konsentrasi (µg/ml) 3515563918,085 X - 4510,9 X 351556 + 4510,9 3918,085 61,17 µg/ml 61,17 µg/ml x 99,73% % kadar 101,67% 60µg/ml No Berat Area %kadar Sampel 1 16,4 353179 101,65 16, 351090 101,74 3 16,3 35513 101,7 4 16,3 351556 101,67 5 16, 34989 101,69 6 16,3 353179 101,74 67
Lampiran 13. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Sampel tablet simvastatin produksi Bernofarm. Data Perhitungan Hasil Penyuntikan sampel Selvim Kadar (%) Luas Area No X Y X- X (X- X ) 1 101,65 353179-0.05167 0.00669 101,74 351090 0.038333 0.001469 3 101,7 35513 0.018333 0.000336 4 101,67 351556-0.03167 0.001003 5 101,69 34989-0.0167 0.000136 6 101,74 353179 0.038333 0.001469 X 610.1 (X- X ) 0.0071 X 101.70 SD ( Xi - X) n -1 0,0071 6 1 0,0377 Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α 0.01, dk n-1 5, diperoleh nilai t tabel ± 4,03. Data diterima jika t hitung < t tabel. t hitung Xi SD / X n t hitung (1) - 0,05167 0,0377/ 6 3,44 t hitung () 0,05167,55 0,0377/ 6 t hitung (3) 0,01833 1, 0,0377/ 6 t hitung (4) - 0,03167 0,0377/ 6,11 68
t hitung (5) - 0,01167 0,03477/ 6 0,77 t hitung (6) 0,03833,55 0,0377/ 6 Dari hasil perhitungan di atas didapat semua t.hitung: t hitung < t tabel., maka semua data tersebut diterima. Kadar Simvastatin dalam tablet produksi Dexa Medica: µ X ± (t tabel x SD/ n ) 101,70% ± (4,031 x 0,0377 6 )% (101,70 ± 0,06)% Lampiran 14. Kromatogram Hasil Penyuntikan sampel Ethicol 69
Gambar 17. Kromatogram hasil penyuntikan Ethicol secara KCKT menggunakan kolom Waters X-Bridge (50 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril:air (80:0) dan laju alir 1,5 ml/menit,volume penyuntikan 0 µl, panjang gelombang 38 nm dan suhu 50 o C. 70
Lampiran 15. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Sampel Ethicol. Data Perhitungan Hasil Penyuntikan sampel Ethicol Kadar (%) Luas Area No X Y X- X (X- X ) 1 100,58 36004-0,0333 100,63 3746 0,0166 3 100,8 39867 0,0667 4 100,54 3975-0,0733 5 100,55 33476-0,0633 6 100,56 35496-0,0533 X 603,5 X 100,58 0.001 0.0003 0.047 0.0054 0.0040 0.008 (X- X ) 0,05633 SD ( Xi - X) n -1 0,05633 6 1 0,106145 Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α 0.01, dk n-1 5, diperoleh nilai t tabel ± 4,03. Data diterima jika t hitung < t tabel. t hitung Xi SD / X n t hitung (1) - 0,0333 0,106145/ 6 0,769 t hitung () 0,0166 0,106145/ 6 0,384 71
t hitung (3) 0,0667 0,106145/ 6 3,18 t hitung (4) - 0.0733 0,106145/ 6 1,69 t hitung (5) - 0.0633 0,106145/ 6 1,46 t hitung (6) - 0,0533 0,106145/ 6 1,3 Dari hasil perhitungan di atas didapat semua t.hitung: t hitung < t tabel., maka semua data tersebut diterima. Kadar Simvastatin dalam tablet Ethicol: µ X ± (t tabel x SD/ n ) 100,58% ± (4,031 x 0,106145/ 6 )% (100,58 ± 0,17)% 7
Lampiran 16. Data Kadar Simvastatin dalam Sampel Data Kadar Simvastatin dalam Sampel No 1 Sampel Tablet Simvastatin Produksi Bernofarm Tablet Simvastatin Produksi Dexa Medica 3 Selvim 4 Ethicol Kadar (%) 101,65 101,74 101,7 101,67 101,69 101,74 100,69 100,66 100,68 100,66 100,67 100,66 98,33 99,8 99,6 99,1 99,65 100,6 100,55 100,60 100,79 100,51 100,5 100,53 Kadar rata-rata (%) 101,70 100,67 99,45 100,58 73
Lampiran 17. Kromatogram Analisis Perolehan Kembali a. Sebelum Penambahan Baku 1. Sampel 80 % 74
. Sampel 100 % 75
3. Sampel 10 % Gambar 18. Kromatogram 1, dan 3 adalah sampel sebelum penambahan baku secara KCKT menggunakan kolom Waters X-Bridge (50 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril:air (80:0) dan laju alir 1,5 ml/menit,volume penyuntikan 0 µl, panjang gelombang 38 nm dan suhu 50 o C. 76
b. Setelah Penambahan Baku 1. Sampel + baku (rentang spesifik 80 %) 77
. Sampel + baku (rentang spesifik 100%) 78
3. Sampel + baku (rentang 10%) Gambar 19. Kromatogram 1, dan 3 adalah sampel setelah penambahan baku secara KCKT menggunakan kolom Waters X-Bridge (50 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril:air (80:0) dan laju alir 1,5 ml/menit, volume penyuntikan 0 µl, deteksi pada panjang gelombang 38 nm dan suhu 50ºC. 79
Lampiran 19. Contoh perhitungan untuk mencarai kadar tablet simvastatin Generik (PT. Bernofarm) Berat 0 tablet 56,6 mg Penimbangan serbuk 16,3 mg Kandungan simvastatin dalam tablet 10 mg Penimbangan serbuk setara simvastatin 10 mg Kadar simvastatin di etiket Perhitungan kadar sampel Y 3918,085x 4510,9 Luas area 35513 (mg) x berat 0 tablet (mg) (jumlah tablet x kandungan zat berkhasiat) mg 10 mg x 56,6 mg Penimbanga n serbuk 16,3 mg (0 x 10) mg Konsentrasi perolehan (X) 35513 + 4510,9 3918,085 61,19 µg/ml Konsentrasi ` simvastatin dari larutan yang diencerkan C x Fp x Kadar baku (%) 61,19µg/ml x 10/6 x 99,73% 0,1017 mg Konsentrasi simvastatin per tablet Cs x V 0,1017 mg x 100 ml 10,17 mg 80
Kadar ` simvastatin terhadap kadar yang tercantum di etiket Cp x Bu Ce x Br x 100 (%) 10,17 mg x 16,33 mg x 100% 10 mg x 16,33 mg 101,7% 81
Lampiran 0. Hasil pengolahan data penetapan kadar simvastatin tablet 1. Hasil analisa kadar tablet simvastatin Generik produksi Dexa Medica Bobot Bobot setara Luas area Bobot % Recovery penimbangan (mg) (mg) perolehan (mg) 51,9 10,0 37763 10,09 100,66 5,0 10,0 38456 10,09 100,66 51,9 10,0 38144 10,09 100,68 51,8 9,99 3781 10,09 100,69 51,9 10,0 38107 10,09 100,67 5,1 10,01 3937 10,10 100,66. Hasil analisa kadar tablet simvastatin Selvim produksi PT. Ifars Bobot Bobot setara Luas area Bobot % Recovery penimbangan (mg) (mg) perolehan (mg) 179,0 9,88 90804 9,74 98,33 181,0 9,99 93756 9,95 99,8 181,1 10,0 303084 9,99 99,6 181,0 9,99 9531 9,94 99,1 181,1 10,0 303849 9,99 99,65 181, 10,01 38434 10,09 100,6 3. Hasil analisa kadar tablet simvastatin Generik produksi Bernofarm Bobot penimbangan (mg) Berat setara (mg) Luas area Bobot perolehan (mg) Kadar simvastatin terhadap yang tercantum dietiket(%) 16,4 10,01 353179 10,0 101,65 16, 9,99 351090 10,19 101,74 16,3 10,0 35513 10,0 101,7 16,3 10,0 351556 10,19 101,67 16, 9,98 34989 10,18 101,69 16,3 10,0 353179 10,0 101,74 4. Hasil analisa kadar tablet simvastatin Ethicol produksi PT. Ethica Bobot penimbangan (mg) Berat setara (mg) Luas area Bobot perolehan (mg) Kadar simvastatin terhadap yang tercantum dietiket(%) 117,6 10,0 36004 10,08 100,55 117,6 10,0 3746 10,08 100,60 117,5 9,99 39867 10,09 100,79 117,5 9,99 3975 10,07 100,51 117,5 9,99 33476 10,07 100,5 117,6 10,0 35496 10,08 100,53 8
Lampiran 1. Gambar Kromatogram penentuan kurva kalibrasi untuk validasi metode Gambar 0. Kromatogram penentuan kurva kalibrasi untuk validasi metode menggunakan kolom Waters X-Bridge (50 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril:air (80:0) dan laju alir 1,5 ml/menit,volume penyuntikan 0 µl, panjang gelombang 38 nm dan suhu 50 o C. 83
Lampiran. Perhitungan Persamaan Regresi Recovery Konsentrasi Luas Area No (µg/ml) X Y XY X Y 1 10 49075 100 1,8x10 11 490750 0 73964 400 5,5x10 11 1479480 3 30 107887 900 1,x10 1 3348610 4 40 1473096 1600,x10 1 5893840 5 50 189970 500 3,35x10 1 91498500 150 555005 5500 7,41x10 1,0x10 8 Rata-rata 50 1850017 1833,33,5x10 1 678477 Y ax + b a XY X,0x10 X Y / ( X ) / n 8 5500 n ( 150) ( 150) / 5 (555005) / 5 3535,6 Y a X + b b Y a X 1850017 (3535,6)(5) 49431.8 Maka persamaan garis regresinya adalah: Y 3535,6X + 49431,8 r ( XY X Y / n X X ) / n)( Y ( 8,0x10 ( 150) 1 5500 ( 150) / 5 7,41x10 (555005) / 5 { }{ ( 55005) / 5} 0,9991 ( Y ) / n) 84
Lampiran 3. Data hasil penyuntikan simvastatin tablet sebelum dan sesudah penambahan Analit. No 1 Konsentrasi (%) 80% Bobot simvastatin Sesudah penambahan analit (mg) Bobot analit yang ditambahkan (mg) 5,61 7,95,4 97,44 Sebelum penambahan analit (mg) Kadar simvastatin terhadap kadar yang tertera di etiket (%) 5,6 7,94,4 96,87 3 5,60 7,94,4 97,5 1 7,1 10,1 3,0 100,10 100% 7,11 10,11 3,0 100,7 3 7,10 10,11 3,0 100,44 1 8,74 1,38 3,6 101,45 10% 8,73 1,38 3,6 101,66 3 8,73 1,37 3,6 101,3 Contoh Perhitungan % Recovery dengan Metode Adisi Standar CF CA % Perolehan kembali C * A x 100 % Keterangan: C F konsentrasi analit yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (µg/ml) C A konsentrasi analit sebelum penambahan bahan baku (µg/ml) C*A konsentrasi bahan baku yang ditambahkan ke dalam sampel (µg/ml) 85
Perhitungan %Recovery Rentang spesifik 80% 7,95 mg - 5,61 mg % Recovery x 100% 96.87%,4 mg 7,94 mg - 5,6 mg % Recovery x 100% 96.87%,4 mg 7,94 mg - 5,60 mg % Recovery x 100% 97,5%,4 mg Rentang spesifik 100% 10,11 mg - 7,1 mg % Recovery x 100% 100,10% 3,0 mg 10,11 mg - 7,11mg % Recovery x 100% 100,7% 3,0 mg 10,11 mg - 7,10 mg % Recovery x 100% 100,44% 3,0 mg Rentang spesifik 10% 1,38 mg - 8,74 mg % Recovery x 100% 101,45% 3,6 mg 1,38 mg - 8,73 mg % Recovery x 100% 101,66% 3,6 mg 1,37 mg - 8,73 mg % Recovery x 100% 101,3% 3,6 mg Nilai presisi dinyatakan dengan KV (%), dengan persamaan : 86
% KV SD 100% X Data hasil perhitungan presisi Kadar X (%) X- X (X- X ) 97,44 -,3 4,99 96,87 -,80 7,86 97,5 -,15 4,64 100,10 0,43 0,18 100,7 0,60 0,35 100,44 0,77 0,59 101,45 1,78 3,15 101,66 1,99 3,94 101,3 1,65,71 X 99,67 (X- X ) 8,4 SD ( Xi - X) n -1 8,4 9 1 SD 1,88 SD % RSD (KV) 100% X 1,88 100% 99,67 1,89 % 87
Lampiran 4. Data Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ) Data Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ) Y 3535,6 + 49431,8 Konsentrasi Luas Area Yi Y-Yi (Y-Yi) (X) (Y) 68097689 10 49075 40958 6117 0 73964 75684, -16860, 30 107887 1110010-3173,4 40 1473096 1463537 9559,4 50 189970 1817063 1907, 8466344 1006374108 913818 16659581 (Y-Yi) 30716081 Sy/x ( Y Yi) n - 30716081 5 768,5 µg/ml LOD 3 s y x Slope 3 768.5µg / ml,31 µg/ml 3535,6 LOQ 10 s y x Slope 10 768,5µg / ml 7,71 µg/ml 3535,6 88
Lampiran 5. Tabel Distribusi t 89
Lampiran 6. Sertifikat Pengujian Baku Simvastatin 90
Lampiran 7. Spesifikasi Sampel 1. Ethicol No. Reg : DKL 9906708417B1 No. Bets : 11E040 Pabrik : PT. Ethica Harga : Rp. 98.000 / kotak (3 blister) Tanggal registrasi : 3 Agustus 01 Tanggal daluarsa : Juli 014 Kandungan : Simvastatin 10 mg. Selvim No. Reg : DKL,040914304A1 No. Bets : 11EAS057 Pabrik : PT. Ifars Harga : Rp. 57.000 / kotak (3 blister) Tanggal registrasi : 03 Januari 011 Tanggal daluarsa : Januari 015 Kandungan : Simvastatin 10 mg 3. Tablet Simvastatin produksi Dexa Medica No. Reg : GKL98050417A1 No. Bets : 07SD58 Pabrik : Dexa Medica Harga : Rp..500 / strip Tanggal registrasi : 03 Januari 01 Tanggal daluarsa : Mei 015 Kandungan : Simvastatin 10 mg 4. Tablet Simvastatin produksi Bernofarm No. Reg : GKL 060339309A1 No. Bets : TSB0414 Pabrik : Bernofarm Harga : Rp..500 / strip Tanggal registrasi : Agustus 013 Tanggal daluarsa : Januari 016 Kandungan : Simvastatin 10 mg 91
Lampiran 8. Gambar Alat yang digunakan Gambar 1. Instrument KCKT (Shimadzu Prominence Series) Gambar. Instrument Spektrofotometer (Shimadzu UV 1800) 9
Gambar 3. Heating Magnetic Stirrer VELP Gambar 4. Alat Ultrasonic SONICA 93
Gambar 5. Pompa vakum (Boeco) Gambar 6. Neraca Analitik Presica 94
Gambar 7. Micro Balance Mettler Toledo Gambar 8. ELGA Water Purification 95