IV. HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1. Kelngsungn Hidup Ikn Lele Dumo Dri hsil pengmtn diperoleh dt kelngsungn hidup pd dosis 2 µg/g, 4 µg/g, 6 µg/g, kontrol negtif, dn kontrol positif (Gmr 2). 12 Kelngsungn Hidup Ikn Lele Dumo (%) 1 8 6 4 2 Negtif 2 µg/g 4 µg/g 6 µg/g Dosis Kitosn Gmr 2. Kelngsungn hidup ikn lele selm penelitin Dri hsil yng diperoleh terliht hw pd kontrol negtif kelngsungn hidup ikn lele dumo tertinggi yitu 1%, hl ini dikrenkn hw pd kontrol negtif ikn disuntik dengn PBS tnp diuji tntng dengn kteri Aeromons hydrophil (ikn seht). Pd kontrol positif kelngsungn hidup ikn uji pling rendh seesr 53.33%, disekn hw kontrol positif disuntik dengn kteri Aeromons hydrophil tnp disuntik dengn kitosn. Pd perlkun dengn dosis 2 µg/g, 4 µg/g, dn 6 µg/g jdi kelngsungn hidup ikn uji erturut-turut seesr 8%, 83.33% dn 93.33%. Kelngsungn hidup pd perlkun dosis 2 µg/g, 4 µg/g, dn 6 µg/g leih tinggi dindingkn dengn kontrol positif dikrenkn, dny pemerin kitosn yng dpt menghmt infeksi kteri. Aeromons hydrophil sehingg dpt memperthnkn kelngsungn hidup ikn. Angk kelngsungn hidup tertinggi dihsilkn dri perlkun dengn pemerin kitosn 6 µg/g. 34
4.2. Jumlh Eritrosit Pd Gmr 3 dpt diliht hw jumlh eritrosit ikn perlkun kitosn dengn dosis 2 µg/g, 4 µg/g, dn 6 µg/g, pd hri ke- erturut-turut seesr 4.37, 4.53, dn 4.77 (x 1 6 ) sel/mm 3, leih tinggi dindingkn ikn kontrol yitu seesr 4.21 dn 4 (x 1 6 ) sel/mm 3, hl ini dikrenkn dny penmhn kitosn selin itu ikn uji elum diuji tntng dengn Aeromons hydrophil. Pd hri ke-2 psc injeksi kteri terjdi penurunn jumlh eritrosit pd perlkun 2, 4, 6 µg/g dn kontrol positif. Menurunny jumlh eritrosit dlm sel drh ikn menunjukkn hw dny luk kit penyuntikn kteri Aeromons hydrophil, sehingg drh kelur dri pemuluh drh. Penurunn nfsu mkn jug mempengruhi jumlh eritrosit dlm drh (Anderson, 1974). Penurunn jumlh eritrosit terjdi kren Aeromons hydrophil mmpu menghsilkn eksotoksin seperti lesitinse dn hemolisin yng mmpu melisis sel eritrosit. Dri hri ke-4 hingg hri ke-6 jumlh eritrosit menglmi peningktn, seiring semkin tinggi pemerin dosis kitosn. Hl ini menunjukkn hw kitosn dpt menghmt kteri dlm memproduksi toksin dn mempercept penyemuhn luk pd ikn (Sndford, 1989). Jumlh eritrosit tertinggi dihsilkn dri perlkun dengn pemerin kitosn 6 µg/g. Jumlh Eritrosit (sel/mm 3 ) 6 5 4 3 2 1 c c c c c c c Negtif 2 μg/g 4 μg/g 6 μg/g Dosis Kitosn hri 2 hri 4 hri 6 hri Gmr 3. Jumlh eritrosit ikn lele selm penelitin 35
4.3. Jumlh Leukosit Pemerin kitosn dosis 2, 4, dn 6 µg/g mellui injeksi selm 7 hri dpt meningktkn leukosit pd hri ke- (Gmr 4). Leukosit merupkn sel yng erpern penting dlm sistem perthnn seluler tuuh. 1 Jumlh Leukosit (sel/mm 3 ) 8 6 4 2 Negtif c c c c c cd 2 μg/g 4 μg/g 6 μg/g c Dosis Kitosn hri 2 hri 4 hri 6 hri Gmr 4. Jumlh leukosit ikn lele selm penelitin Dri grfik jumlh leukosit ikn lele perlkun kitosn dengn dosis 2 µg/g, 4 µg/g, dn 6 µg/g pd hri ke- erturut turut seesr 391.6, 362., dn 343.75 sel/mm 3, leih tinggi dri pd kontrol negtif dn kontrol positif yitu 35.616 dn 296.175 sel/mm 3. Dri hri ke-2 psc injeksi leukosit dlm drh menglmi kenikn semu pd perlkun. Hl ini dikrenkn hw leukosit erfungsi segi perthnn dlm tuuh, yng ereksi dengn gnggun dri lur tu end sing msuk ke dlm tuuh ikn seperti kteri. Meningktny leukosit dikitkn dny leukosit melwn end sing yng msuk ke dlm tuuh. Jumlh leukosit ikn perlkun kitosn 4 µg/g msih leih tinggi yitu 872.116 sel/mm 3 dinding dengn perlkun yng lin. Pd hri ke- 4 dn ke-6 terjdi penurunn kemli dengn totl leukosit tertinggi dihsilkn pd perlkun dengn dosis 2 µg/g seesr 753.225 sel/mm 3, disekn pd hri ke 6 kondisi ikn yng terinfeksi kteri umumny sudh menunjukkn tnd-tnd penyemuhn sehingg leukosit pd hri ke 6 rendh. Pd hri ke- 2, 4 dn 6 semu perlkun kitosn tidk menunjukkn hsil yng ered nyt (P>.5). Jumlh leukosit dlm drh ikn lele tertinggi dihsilkn pd perlkun 4µg/g hri ke-2. 36
4.4. Nili Hemtokrit Nili hemtokrit dlh persentse volume sel drh merh dlm drh yng diperoleh dri smpel drh totl yng d di tung kpiler. Seiring meningktny eritrosit mk nili hemtokrit ikut meningkt pul. 35 Nili Hemtokrit (%) 3 25 2 15 1 5 c c c c d d Negtif 2 μg/g 4 μg/g 6 μg/g Dosis Kitosn hri 2 hri 4 hri 6 hri Gmr 5. Hemtokrit ikn lele selm penelitin Pengmtn nili hemtokrit pd hri ke-2 psc injeksi, pd umumny menglmi penurunn, tetpi pd perlkun kitosn dengn dosis 6µg/g menujukkn hsil hmpir sm dengn kontrol negtif, dn niliny leih tinggi dri kontrol positif. Terjdiny penurunn nili hemtokrit setelh psc injeksi, disekn kren terdpt luk pd ikn uji. Hl ini disekn pd stdi wl perkemngn luk, terjdi pendrhn lewt luk kit dny pemuluh drh yng pech sehingg drh erkurng. Menurut Amlcher (197), selin dri infeksi kteri respon mkn pun dpt memeri pengruh pd komposisi drh termsuk jumlh eritrosit yng jug erpengruh terhdp hemtokrit. Pd hri ke-4 hingg ke-6 terjdi kenikn pd semu perlkun. Hl ini didug dengn ertmhny dosis kitosn dpt meningktkn sistem perthnn pd ikn lele dengn mempercept menyemuhn luk. Nmun nili hemtokrit pd dosis 6µg/g menunjukkn hsil yng ered nyt (p>.5) dn niliny leih tinggi seesr 31.9% dri perlkun 2µg/g dn 4µg/g (Gmr 4). Nili hemtokrit ikn lele (Clris trchus) norml dlh 3.8-45,5% sedngkn ikn lele 37
yng terserng ulcer mempunyi kdr hemtokrit seesr 34.4-48,2% (Chinut et l., 1991). 4.5. Kdr Hemogloin Menurut Lgler et l., (1977), kdr hemogloin dlm drh ikn erhuungn dengn nili hemtokrit dn eritrosit. Hemogloin dlm drh merupkn lt trnspor oksigen dn krondioksid. Kdr Hemogloin (%) 14 12 1 8 6 4 2 c c Negtif 2 µg/g 4 µg/g 6 μg/g Dosis Kitosn hri 2 hri 4 hri 6 hri Gmr 6. Hemogloin ikn lele selm penelitin Berdsrkn pengmtn kdr hemogloin pd hri ke- perlkun dengn pemerin kitosn leih tinggi dinding dengn kontrol negtif. Perlkun dengn pemerin dosis 6 µg/g menunjukkn hsil yng ered nyt (p>.5) dn leih tinggi dri perlkun yng lin seesr 11.8%. Sedngkn pd hri ke-2 menglmi penurunn kit terjdiny hemolisis kren diinfeksi oleh kteri sehingg kdr hemogloin rendh. Pd hri ke-4 hingg ke-6 kdr hemogloin menglmi peningktn pd perlkun kitosn, didug ikn lele sudh mementuk sutu sistem perthnn tuuh yng dpt mempercept penyemuhn luk. Pd hri ke-6 psc injeksi dpt diliht kdr hemogloin dengn dosis 6 µg/g menunjukkn hsil yng ered nyt (p>.5) ntr perlkun dn kontrol (Gmr 6). Kdr hemogloin ikn lele (Clris trchus) norml yitu seesr 1.3-13.5% dn ikn lele yng terserng ulcer mempunyi kdr hemogloin seesr 1.9-13 % (Alifuddin, 1991). 38
4.6. Indeks Fgositik Fgositosis dlh proses pemsukn prtikel sing yng kecil ke dlm individu sel monosit. Prmeter selnjutny yng dpt menggmrkn respon imun pd ikn uji dlh indeks fgositik (Gmr 7). Indeks Fgositik (%) 4 35 3 25 2 15 1 5 Negtif c 2 µg/g 4 μg/g 6 µg/g Dosis Kitosn hri 2 hri 4 hri 6 hri Gmr 7. Indeks fgositik ikn lele selm penelitin Pd hri ke- terliht indeks fgositik ikn kontrol negtif dn kontrol positif sm yitu seesr 17.66% dn 17.19%, leih tinggi dindingkn dengn perlkun dosis 2 µg/g (1.7%), 4 µg/g (11.93%), dn 6 µg/g (12.35%). Nmun indeks fgositik ikn uji perlkun dosis 2, 4, dn 6 µg/g terus menglmi kenikn smpi hri ke-7. Indeks fgositik tertinggi terjdi pd hri ke-7 psc injeksi pd ikn perlkun kitosn 6 µg/g yitu seesr 31.72% dri totl monosit (Gmr 7). Peningktn ini terjdi seiring dengn peningktn dosis kitosn yng dierikn. Dengn demikin kitosn mmpu meningktkn sistem imun pd ikn lele dumo. Fujy (24) menytkn hw il prtikel sing telh difgosit. Lisosom seger melektkn diri pd vesikel fgositik sehingg kedu memrn sling erstu, selnjutny lisosom melimphkn enzim sm hidrolse ke dlm vesikel. Proses fgositosis oleh monosit dilkukn dengn mendekti ntigen yng kn dihncurkn mellui tig thp, yitu pelektn, fgosit, dn peneln. 39
4.7. Diferensil Leukosit Limfosit Menurut Moyle dn Cech (1988) menytkn hw limfosit erfungsi segi penghsil ntiodi untuk kekeln tuuh dri gnggun penykit. Jumlh limfosit dlm drh ikn leih nyk dri jumlh neutrofil, monosit, dn tromosit dri dri hsil yng dihsilkn. Jumlh Limfosit (%) 8 7 6 5 4 3 2 1 Negtif c c 2 μg/g 4 µg/g 6 μg/g Dosis Kitosn hri 2 hri 4 hri 6 hri Gmr 8. Jumlh limfosit ikn lele selm penelitin Pd hri ke-, nili rtn totl limfosit ikn yng dierikn perlkun kitosn dengn dosis 6 µg/g leih tinggi dn ered nyt dengn semu perlkun. Nili totl limfosit dri perlkun 2 µg/g, 4 µg/g, dn 6 µg/g erturutturut seesr 53.33, 53.33 dn 6.33 sel/mm 3. Sedngkn totl limfosit pd kontrol negtif dn kontrol positif seesr 53 dn 53.67 sel/mm 3. Pd hri ke-2 psc injeksi totl limfosit menglmi peningktn dosis 4 µg/g dn 6 µg/g. Hl ini didug hw limfosit yng erfungsi segi ntiodi sedng menyerng dn menghncurkn ntigen erup kteri. Sedngkn pd kontrol positif dn dosis 2 µg/g terjdi penurunn jumlh limfosit, hl ini didug kren jumlh limfosit yng diproduksi tidk sending dengn limfosit yng dikirim ke jringn tuuh yng terinfeksi. Pd hri ke-4 hingg ke-6 terjdi penurunn pd dosis 2 µg/g, 4 µg/g, 6 µg/g, dn kontrol positif kren tuuh ikn tidk memerlukn limfosit lgi. Pd hri ke-2, 4 dn 6 semu perlkun kitosn tidk menunjukkn hsil yng ered nyt (P>.5). Jumlh limfosit tertinggi dihsilkn pd hri ke 2 4
pd ikn perlkun kitosn 6 µg/g seesr 6.33 sel/mm 3. Tingginy jumlh limfosit dlm drh dpt meningktkn sistem perthnn tuuh ikn uji terhdp infeksi kteri Aeromons hydrophil yng disuntik dengn kitosn. Neutrofil Neutrofil merupkn sel-sel pertm yng meningglkn pemuluh drh yng penting kren mengndung vkuol yng erisi enzim untuk menghncurkn orgnisme yng dihncurknny (Chinut et l., 1991). Jumlh Neutrofil (%) 3 25 2 15 1 5 Negtif c c 2 μg/g 4 μg/g 6 μg/g Dosis Kitosn hri 2 Hri 4 Hri 6 Hri Gmr 9. Jumlh neutrofil ikn lele selm penelitin Pd hri ke- jumlh neutrofil ikn perlkun kitosn 2 µg/g, 4µg/g, dn 6 µg/g erturut-turut 16.67, 19.33, dn 16.67 sel/mm 3. Sedngkn ntr semu perlkun tidk memperlihtkn peredn yng nyt (p>.5). Pd hri ke-2 psc injeksi menglmi peningktn jumlh neutrofil, hl ini didug kren dlm tuuh ikn telh terentuk sistem perthnn tuuh sehingg st infeksi kteri mk neutrofil diproduksi oleh limf untuk dikirim ke tempt infeksi. Semkin hri jumlh neutrofil menurun kren tuuh tidk memerlukn neutrofil lgi. Jumlh neutrofil yng tertinggi terdpt pd dosis 6 µg/g hri ke-2 seesr 23.33 sel/mm 3 tpi tidk menunjukkn hsil yng ered nyt (P>.5) dengn kontrol. Pd hri ke-4 perlkun kitosn dengn dosis 2 µg/g dn 6 µg/g memperlihtkn peredn yng nyt (p>.5). Menurut Dellmn dn Brown (1989), pd st terjdi infeksi kteri, isny jumlh neutrofil dlm drh 41
meningkt, hl ini disekn oleh limfoid perlu meleps leukosit untuk melwn infeksi. Monosit Moyle dn Cech (1988) menytkn hw monosit erfungsi segi fgosit terhdp end-end sing, termsuk gen penykit. 25 Jumlh Monosit (%) 2 15 1 5 Negtif 2 μg/g 4 μg/g 6 μg/g Dosis Kitosn hri 2 hri 4 hri 6 hri Gmr 1. Jumlh monosit ikn lele selm penelitin Rtn monosit ikn perlkun kitosn 2 µg/g, 4 µg/g, dn 6 µg/g pd hri ke- leih tinggi dinding kontrol seesr 14.33, 16.33, dn 17.33 sel/mm 3, didug pemerin kitosn dpt meningktkn jumlh monosit pd hri ke-. Akn tetpi, pd hri ke-2 psc injeksi hingg khir pengmtn terjdi penurunn jumlh monosit, hl ini didug hw monosit meningglkn pemuluh drh menuju derh yng terinfeksi dn memfgosit kteri. Selin itu, jumlh neutrofil meningkt pd kedu jenis leukosit ini kren monosit memiliki kemmpun memfgosit leih esr dri pd neutrofil (Fujy, 24). Jumlh monosit pd hri ke-, 2, 4, dn 6 tidk menunjukkn peredn yng nyt (p>.5) ntr semu perlkun. Totl monosit tertinggi dihsilkn pd perlkun dengn dosis 6 µg/g pd hri ke- seesr 17.33 sel/mm 3. 42
Tromosit Tromosit erpern penting dlm proses pemekun drh dn jug erfungsi untuk mencegh kehilngn cirn tuuh pd keruskn-keruskn di permukn (Ni dn Psriu, 1989). Fujy (24) menytkn hw tromosit tidk umum terdpt dlm drh pd situsi norml, tetpi il terjdi sesutu yng mengejutkn jumlh tromosit dpt meningkt tjm. Jumlh Tromosit (%) 4 35 3 25 2 15 1 5 Negtif c c c 2 μg/g 2μg/g 6 μg/g Dosis Kitosn hri 2 hri 4 hri 6 hri Gmr 11. Jumlh tromosit ikn lele selm penelitin Pd hri ke-, totl tromosit tertinggi dihsilkn oleh ikn perlkun kitosn 6 µg/g seesr 15.33 sel/mm 3 dn ered nyt il dindingkn dengn perlkun yng linny. Sedngkn totl tromosit ikn perlkun kitosn 2 µg/g dn 4 µg/g yitu 14.67 dn 15 sel/mm 3, tidk ered nyt dengn kontrol negtif dn kontrol positif yitu 12.67 dn 13.67 sel/mm 3. Pd hri ke-2 psc injeksi jumlh tromosit menglmi peningktn, hl ini didug ikn lele menglmi infeksi yitu penyuntikn kteri Aeromons hydrophil sehingg tromosit diproduksi untuk menjg keocorn pemuluh drh (Fujy, 24). Tromosit tertinggi dihsilkn oleh perlkun kontrol positif yitu 35.67 sel/mm 3. Kemudin jumlh tromosit muli menurun hingg khir pengmtn kren tuuh ikn lele melihtkn tnd-tnd penyemuhn pd luk sehingg tuuh tidk memerlukn tromosit lgi. Tromosit meningkt kren dny hemorgi dn tukk kren tromosit diproduksi gr drh memeku gun mencegh terjdiny pendrhn leih nyk (Angk et l., 24). 43
4.8. Respon Mkn Respon mkn pd ikn menjdi fktor yng sngt menunjng upy penceghn pd ikn lele dumo kren ikn lele dumo yng respon mkn ik mk proses penyemuhn pun semkin meningkt. Hl ini terkit dengn supn nutrisi yng tercukupi sehingg ikn lele dumo memiliki cukup energi untuk proses penyemuhn. Tel.1 Respon mkn pd ikn lele selm penelitin Hri ke K(-) K(+) 2 µg/g 4 µg/g 6 µg/g -7 PEMBERIAN KITOSAN -6 ++ ++ + + + -5 ++ ++ ++ ++ ++ -4 +++ ++ ++ ++ +++ -3 +++ ++ ++ ++ +++ -2 +++ ++ ++ ++ +++ -1 +++ ++ ++ ++ +++ UJI TANTANG DENGAN Aeromons hydrophil 1 + + + + + 2 ++ + ++ ++ ++ 3 +++ + ++ ++ +++ 4 +++ + ++ +++ +++ 5 +++ + +++ +++ +++ 6 +++ + +++ +++ +++ Keterngn: +++ = Mkn Bnyk ++ = Mkn Sedng + = Mkn Sedikit Pd kontrol positif, perlkun dosis 2 µg/g, 4 µg/g, dn 6 µg/g setelh penyuntikn dengn kteri Aeromons hydrophil yitu pd hri ke- ikn uji tidk dierikn mkn. Ikn uji mmpu mkn setelh hri erikutny, dn menglmi respon mkn yng kurng hingg khir pengmtn. Akn tetpi, pd kontrol negtif setelh dilkukn penyuntikn PBS tmpk respon mkn sedikit, hl ini didug ikn menjdi stress pd st dilkukn penyuntikn. 44
Ikn uji pd perlkun 2 µg/g, 4 µg/g, dn 6 µg/g nfsu mknny sedikit setelh disuntik kitosn, didug tuuh ikn sedng erdptsi dengn end sing dn keesokn hriny ikn muli meningkt nfsu mknny. Setelh hri ke-3 hingg hri ke-6 psc infeksi nfsu mkn ikn lele dumo meningkt dn dosis tertinggi terdpt pd dosis 6 µg/g. Hl ini menunjukkn hw semkin tinggi dosis kitosn yng dierikn pd ikn dpt meningktkn nfsu mkn pd ikn terseut. Setelh dilkukn infeksi dengn kteri pd hri ke- tmpk ikn uji memiliki nfsu mkn sedikit. Du hri erikutny nfsu mkn ikn muli meningkt lgi hingg khir pengmtn. 4.9. Pertmhn Boot Ikn Lele Pertmhn Boot (grm) 58 57 56 55 54 53 52 51 57.34 55.98 55.95 55.24 55.37 54.68 54.56 54.51 54.2 53.49 Negtif 2 ppm 4 ppm 6 ppm Boot Awl Boot Akhir Gmr 12. Pertmhn oot ikn lele selm penelitin Dri dt oot rt-rt yng diperoleh, dpt dikethui hw pertmhn oot tuuh dri ikn uji pd semu perlkun ered-ed (Gmr 12). Pd kontrol negtif, ikn uji memiliki peningktn oot yng pling esr yitu 2,86 grm sedngkn pertmhn oot pd ikn uji kontrol positif merupkn yng terendh yitu seesr.53 grm. Rendhny pertmhn oot pd kontrol positif dikrenkn menurunny respon mkn ikn uji yng erkit rendhny supli energi untuk pertumuhn. Hl terseut terjdi kit penginfeksin kteri Aeromons hydrophil terhdp ikn uji. Hl ini sesui dengn pernytn Plum (1999) ikn yng terinfeksi oleh motile eromond septicemi kn kehilngn nfsu mkn. 45
Perlkun 6 µg/g menunjukkn pertmhn oot yng ik il dindingkn dengn 2 µg/g dn 4 µg/g. Hl ini disekn kren ikn uji msih memiliki nfsu mkn yng ik sedngkn pd 2 µg/g dn 6 µg/g nfsu mknny kurng ik. Akn tetpi kedu perlkun ini msih leih gus dripd kontrol positif. Hl ini menunjukkn hw pemerin kitosn dpt meningktkn nfsu mkn ikn sehingg mengkitkn supli energi untuk pertumuhn jug meningkt. 4.1. Kulits Air Selm penelitin dilkukn pengukurn kulits ir meliputi suhu, ph, DO, dn TAN (NH 3 -N). Tel.2 Dt kisrn kulits ir selm penelitin. Prmeter Kulits Air Perlkun Amonik Suhu ( o C) DO (mg/l) (mg/l) Negtif 26.6-27.2 3.94-4.7.17-.23 26.6-27.1 7.22-7.25 3.92-4.8.16-.21 2 µg/g 26-6-26.9 7.13-7.19 3.93-4.13.12-.2 4 µg/g 26.6-26.9 7.1-7.19 3.92-3.96.12-.21 6 µg/g 26.4-26.7 7.19-7.23 3.88-3.96 Kisrn suhu setip hriny selm penelitin msih dlm kisrn norml untuk pemelihrn ikn lele yitu ntr 26.4-27.2 o C. Menurut Andrews et l. dlm Stickney (1993), ikn chnnel ctfish kn leih cept pd suhu ir ntr 26-3 o C. Nili ph selm penelitin erkisr ntr 7.1-7.28, nili ph terseut msih dlm kisrn optiml ikn lele. Nili ph yng ik untuk kegitn udidy erkisr ntr 6,5-9 (Boyd, 1982). Nili DO selm penelitin erkisr 3.88-4.8 mg/l, leih dri kisrn norml 3 mg/l. Sedngkn untuk monik erkisr ntr.12-.24 mg/l msih dlm ts norml. Dri hsil nlisis kulits ir selm penelitin menunjukkn hw prmeter suhu, ph, DO, dn monik yng dimti msih erd pd kisrn norml untuk kehidupn ikn lele. 46