Lampiran 1. Perhitungan Konsentrasi Pengukuran Sampel Diketahui : Nilai Absorptivitas spesifik (A 1 1= 659) (Moffat, 004) Tebal sel (b) = 1cm c = A 1 A xb 1 0,4343 c = = 0,000659g / ml 659 1 c c = 659,0 µg/ ml 6,59 µg/ml Konsentrasi untuk pengukuran serapan baku BPFI atau sampel digunakan 6 µg/ml
Lampiran. Perhitungan Persamaan Regresi Pirazinamida BPFI No X Y XY X Y 1. 0 0 0 0 0. 4 0,76 1,104 16 0,076167 3. 5 0,334 1,670 5 0,111556 4. 6 0,404,44 36 0,16316 5. 7 0,464 3,48 49 0,1596 6. 8 0,530 4.40 64 0,80900 30,008 1.686 190 0,847135 Rata-rata 5 0,334667 Y = ax + b a = = XY ( X )( X ( X ) = 0,06615 Y ) / n / n 1.686 (30)(,008) / 6 190 ( 30) / 6 b = Y - ax = 0,334667 (0,06615) (5) = 0,003917 Jadi Persamaan Regresi yang didapat : Y = 0,06615X + 0,003917 r = r = r = 0,9994 XY ( X ) ( Y ) / n [ X ( X ) / n][ Y ( Y ) / n] 1.686 (30)(,008) / 6 [ 190 ( 30) / 6] 0,847135 (,008) [ / 6]
Lampiran 3. Data Kadar Pirazinamida dalam Sediaan Tablet. Nama Sediaan Pirazinamida Generik (Indofarma) Sanazet (Sanbe) Siranamid (Mersi) TB Zet (Meprofarm) Pezeta Ciba (Sandoz) Penimbangan (mg) Setara (mg) Absorbansi (A) Kons teoritis (µg/ml) Kons perolehan (µg/ml) Kadar % 66, 50,3548 0,4055 6,04 6,0707 99,79 66,1 50,787 0,405 6,034 6,066 99,71 66,0 50,07 0,4047 6,04 6,0587 99,69 65,7 49,9745 0,4006 5,9964 5,9967,6 65,7 49,9745 0,3994 5,9964 5,9785,57 66, 50,3548 0,4041 6,04 6,0496,14 65,3 50,3733 0,4165 6,0444 6,370 97,17 65,5 50,576 0,4093 6,064 6,18 99,19 65,5 50,576 0,4043 6,064 6,056,43 65,4 50,4505 0,4061 6,0540 6,0798 99,84 65,5 50,576 0,4164 6,064 6,355 97,48 65,0 50,1419 0,4094 6,0168 6,197 98,43 61,8 50,4341 0,4150 6,0516 6,144 97,64 61,9 50,5157 0,4154 6,061 6,04 97,70 6,0 50,5973 0,441 6,0708 6,3519 95,83 6,0 50,5973 0,3918 6,0708 6,385 97,57 6,0 50,5973 0,4080 6,0708 6,1085 99,65 61,9 50,5157 0,407 6,0516 6,0964 99,53 65,5 50,4964 0,4105 6,0588 6,1463 98,84 64,9 50,0339 0,4076 6,0036 6,105 98,64 65,3 50,34 0,4131 6,0396 6,1856 97,90 65,4 50,4193 0,4094 6,049 6,197 98,95 65,5 50,4964 0,411 6,0588 6,3066 96,33 65, 50,65 0,4063 6,031 6,088 99,41 61,5 50,1704 0,4061 6,004 6,0789 99,30 61,8 50,415 0,416 6,049 6,1771 98,19 61,3 50,0073 0,4069 6,0000 6,0919 98,75 61,9 50,4968 0,4138 6,0588 6,196 98,04 61,8 50,415 0,4093 6,049 6,18 99,97 61,9 50,4968 0,4150 6,0588 6,144 97,75
Lampiran 4. Perhitungan Statistik Kadar Pirazinamida pada Tablet Generik (Indofarma) No Kadar [X] (%) Xi - X (Xi X) 1. 99,79-0,3 0,059. 99,71-0,31 0,0961 3. 99,69-0,33 0,1089 4.,6 0,4 0,0576 5.,57 0,55 0,305 6.,14 0,1 0,0144 X =,0 Ʃ = 0,634 SD = ( X X ) n 1 0,634 = = 0,3556 5 Jika taraf kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01; n = 6; dk = 5, dari daftar tabel distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,03 Data ditolak jika t hitung t tabel atau t hitung -t tabel t hitung = X X SD / n t hitung 1 : -0,3/0,145 = -1,5840 t hitung : -0,31/0,145 = -,1349 t hitung 3 : -0,33/0,145 = -,77 t hitung 4 : 0,4/0,145 = 1,658 t hitung 5 : 0,55/0,145 = 3,7878 t hitung 6 : 0,1/0,145 = 0,864
Karena t hitung t tabel maka data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara : µ = X ± t (1-1/α)dk x SD n =,0 ± ( 4,03 x 0,3556 ) 6 =,0 ± 0,58
Lampiran 5. Perhitungan Statistik Kadar Pirazinamida pada Tablet Sanazet (Sanbe) No Kadar [X] (%) Xi - X (Xi X) 1. 97,17-1,58,4964. 99,19 0,44 0,1936 3.,43 1,68,84 4. 99,84 1,09 1,1881 5. 97,48-1,7 1,619 6. 98,43-0,3 0,104 X = 98,75 = 8,4158 SD = ( X X ) n 1 8,4158 = = 1,973 5 Jika taraf kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01; n = 6; dk = 5, dari daftar tabel distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,03 Data ditolak jika t hitung t tabel atau t hitung -t tabel t hitung = X X SD / n t hitung 1 : -1,58/0,597 = -,988 t hitung : 0,44/0,597 = 0,8306 t hitung 3 : 1,68/0,597 = 3,1716 t hitung 4 : 1,09/0,597 =,0577 t hitung 5 : -1,7/0,597 = -,3975 t hitung 6 : -0,3/0,597 = -0,6041
Karena t hitung t tabel maka data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara : µ = X ± t (1-1/α)dk x SD n = 98,75 ± ( 4,03 x 1,973 ) 6 = 98,75 ±,13
Lampiran 6. Perhitungan Statistik Kadar Pirazinamida pada Tablet Siranamid (Mersi) No Kadar [X] (%) Xi - X (Xi X) 1. 97,64-0,34 0,1156. 97,70-0,8 0,0784 3. 95,83 -,15 4,65 4. 97,57-0,41 0,1681 5. 99,65 1,67,7889 6. 99,53 1,55,405 X = 97,98 = 10,1760 SD = ( X X ) n 1 10,1760 = = 1,466 5 Jika taraf kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01; n = 6; dk = 5, dari daftar tabel distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,03 Data ditolak jika t hitung t tabel atau t hitung -t tabel t hitung = X X SD / n t hitung 1 : -0,34/0,585 = -0,5836 t hitung : -0,8/0,585 = -0,4806 t hitung 3 : -,15/0,585 = - 3,6909 t hitung 4 : -0,41/0,585 = -0,7038 t hitung 5 : 1,67/0,585 =,8669 t hitung 6 : 1,55/0,585 =,6609
Karena t hitung t tabel maka data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara : µ = X ± t (1-1/α)dk x SD n = 97,98 ± ( 4,03 x 1,466 ) 6 = 97,98 ±,34
Lampiran 7. Perhitungan Statistik Kadar Pirazinamida pada Tablet TB Zet (Meprofarm) No Kadar [X] (%) Xi - X (Xi X) 1. 98,84 0,5 0,5. 98,64 0,3 0,09 3. 97,90-0,44 0,1936 4. 98,95 0,61 0,371 5. 96,33 -,01 4,0401 6. 99,41 1,07 1,1449 X = 98,34 = 6,0907 SD = ( X X ) n 1 6,0907 = = 1,1036 5 Jika taraf kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01; n = 6; dk = 5, dari daftar tabel distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,03 Data ditolak jika t hitung t tabel atau t hitung -t tabel t hitung = X X SD / n t hitung 1 : 0,5/0,4506 = 1,1096 t hitung : 0,3/0,4506 = 0,6657 t hitung 3 : -0,44/0,4506 = -0,9764 t hitung 4 : 0,61/0,4506 = 1,3537 t hitung 5 : -,01/0,4506 = -4,4607 Data ditolak t hitung 6 : 1,07/0,4506 =,3746 Karena t hitung t tabel maka data ditolak, selanjutnya dilakukan pengujian terhadap data yang dianggap tidak menyimpang.
No Kadar [X] (%) Xi X (Xi X) 1. 98,84 0,1 0,01. 98,64-0,1 0,01 3. 97,90-0,84 0,7056 4. 98,95 0,1 0,0441 5. 99,41 0,67 0,4489 X = 98,74 = 1,186 SD = ( X X ) n 1 1,186 = = 0,5519 4 Jika taraf kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01; n = 5; dk = 4, dari daftar tabel distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,60 Data ditolak jika t hitung t tabel atau t hitung -t tabel t hitung = X X SD / n t hitung 1 : 0,1/0,468 = 0,4051 t hitung : -0,1/0,468 = -0,4051 t hitung 3 : -0,84/0,468 = -3,4035 t hitung 4 : -0,1/0,468 = 0,8508 t hitung 5 : 0,67/0,468 =,7147 Karena t hitung t tabel maka data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara: µ = X ± t (1-1/α)dk x SD n = 98,74 ± ( 4,60 x 0,5519 ) 5 = 98,74 ± 1,13
Lampiran 8. Perhitungan Statistik Kadar Pirazinamida pada Tablet Pezeta Ciba (Sandoz) No Kadar [X] (%) Xi - X (Xi X) 1. 99,30 0,63 0,3969. 98,19-0,48 0,304 3. 98,75 0,08 0,0064 4. 98,04-0,63 0,3969 5. 99,97 1,3 0,05 6. 97,75-0,9 1,001 X = 98,67 = 3,5670 SD = ( X X ) n 1 3,5670 = = 0,8446 5 Jika taraf kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01; n = 6; dk = 5, dari daftar tabel distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,03 Data ditolak jika t hitung t tabel atau t hitung -t tabel t hitung = X X SD / n t hitung 1 : 0,63/0,3448 = 1,871 t hitung : -0,48/0,3448 = -1,391 t hitung 3 : 0,08/0,3448 = 0,30 t hitung 4 : -0,63/0,3448 = -1,871 t hitung 5 : 1,3/0,3448 = 3,7703 t hitung 6 : -0,9/0,3448 = -,668
Karena t hitung t tabel maka data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara : µ = X ± t (1-1/α)dk x SD n = 98,67 ± ( 4,03 x 0,8446 ) 6 = 98,67 ± 1,39
Lampiran 9. Contoh Perhitungan Penimbangan Sampel dari Tablet Pirazinamida Generik (Indofarma) Berat 0 tablet Kandungan Pirazinamida pada etiket = 13146.7 mg = 500 mg Dibuat larutan uji dengan kadar lebih kurang 6 µg/ml. Ditimbang serbuk setara dengan 50 mg Pirazinamida, maka berat sampel yang ditimbang adalah : Berat penimbangan sampel = 50mg x13146.7mg 0x500mg = 65,73 mg Sampel yang telah ditimbang di masukkan dalam labu tentukur ml, lalu dilarutkan dalam pelarut HCl 0,1 N dan cukupkan sampai garis tanda. 50mg Kadar larutan = = 500 µg/ml ml Setelah disaring, kemudian filtrat dipipet 5 ml, lalu dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda. 5ml Kadar larutan = x500µg/ml = 50 µg/ml 50ml Lalu dipipet lagi 6 ml larutan, lalu dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda. 6ml Kadar larutan uji = x50µg/ml = 6 µg/ml = 50ml
Lampiran 10. Contoh Perhitungan Persentase (%) Perolehan Kembali dari Tablet Pirazinamida Generik (Indofarma). Berat 0 tablet = 13146.7 mg Kandungan zat berkhasiat = 500 mg Berat penimbangan zat berkhasiat pada penetapan kadar = 50 mg Perolehan 80% 80 - Pirazinamida = x 50 mg = 40 mg 70 Analit 70% = x 40 mg = 8mg 8mg Sampel yang dibutuhkan = x13146.7mg = 36,81mg 0x500mg 30 Baku 30% = x 40 mg = 1mg Perolehan % - Pirazinamida = x 50mg = 50mg 70 Analit 70% = x 50 mg = 35mg 35mg Sampel yang dibutuhkan = x13146.7mg 0x500mg 30 Baku 30% = x50mg = 15mg Perolehan 10% 10 - Pirazinamida = x 50mg = 60mg 70 Analit 70% = x 60mg = 4mg 4mg Sampel yang dibutuhkan = x13146,7 mg 0x500mg = 46,01mg = 55,mg 30 Baku 30% = x60mg = 18mg
Lampiran 11. Perhitungan Kadar Pirazinamida Generik (Indofarma) dari Lampiran 10 Setelah Penimbangan - Perolehan 80% Analit = Sampel yg ditimbang Berat 0tablet x kandungan zat khasiat x % kadar rata rata = 37,1mg.0 x 0x500mgx 13146.7 mg = 8,mg Baku = 99,9 1mg x = 11,988 mg - Perolehan % Analit = Sampel yg ditimbang Berat 0tablet x kandungan zat khasiat x % kadar rata rata = 46,mg,0 x 0x500mg x 13146,7 mg = 35,14 mg Baku = 99,9 15mg x = 14,985 mg
- Perolehan 10% Analit = = Sampel yg ditimbang Berat 0tablet 55,5mg,0 x 0x500mg x 13146.7 mg x kandungan zat khasiat x % kadar rata rata = 4,1 mg Baku = 99,9 18mg x = 17,85mg
Lampiran 1. Contoh Perhitungan Penimbangan Bahan Baku pada Persen Perolehan Kembali Perolehan % 30 Baku 30% = x50 mg = 15 mg Pembuatan larutan baku : Timbang bahan baku mg ditimbang dimasukkan dalam labu tentukur 50 ml, lalu dilarutkan dalam pelarut HCl 0,1 N dan cukupkan sampai garis tanda. Kadar larutan = mg 50ml = mg / ml Kemudian dari larutan ini dipipet sesuai kebutuhan untuk uji validasi.
Lampiran 13. Contoh Perhitungan Penimbangan Analit pada Persen Perolehan Kembali dari Tablet Pirazinamida Generik (Indofarma) Perolehan % 70 Analit 70% = x50mg = 35mg 35mg Sampel yang dibutuhkan = x13146,7 mg = 46,0134mg 0x500mg Sampel yang ditimbang = 46, mg 46,mg.0 Setara dengan kadar pirazinamida= x 0x500 mgx 13146.7 mg =35,1489 mg Sampel yang telah ditimbang 46, mg di masukkan dalam labu tentukur ml, lalu dilarutkan dalam pelarut HCl 0,1 N 10 ml, dikocok dan cukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda. Kemudian disaring, 5 ml filtrat pertama dibuang. 35,1489mg Kadar larutan = = 351,489 µg/ml ml Kemudian dipipet 5 ml larutan, lalu dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda. 5ml Kadar larutan = x351,489µg/ml = 35.1489 µg/ml 50ml Lalu dipipet lagi 6 ml larutan, lalu dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda. 6ml Kadar larutan uji = x35,1489µg/ml = 4.178µg/ml 50ml
Lampiran 14. Contoh Perhitungan Penimbangan Analit dari Tablet Pirazinamida Generik (Indofarma) dan Bahan Baku pada Persen Perolehan Kembali Perolehan % 70 Analit 70% = x50mg = 35mg 35mg Sampel yang dibutuhkan = x13146,7 mg = 46,0134mg 0x500mg Sampel yang ditimbang = 46, mg 46, mg,0 Setara dengan kadar pirazinamida= x 0x500mgx 13146,7 mg =35,1489 mg 30 Baku 30% = x50 mg = 15mg Setara dengan kadar baku = 99,9 15mg x = 14,9850 mg Sampel ditimbang sebanyak 46, mg dimasukkan dalam labu tentukur ml, lalu dilarutkan dalam pelarut HCl 0,1 N 10 ml, ditambahkan baku 7,5 ml dikocok dan cukupkan sampai garis tanda dengan HCl 0,1 N. Kemudian disaring, 5 ml filtrat pertama dibuang. 50,1339mg Kadar larutan = = 501,339 µg/ml ml Kemudian dipipet 5 ml larutan, lalu dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda. 5ml Kadar larutan = x501,339µ g / ml = 50.1339 µg/ml 50ml Lalu dipipet lagi 6 ml larutan, lalu dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda. 6ml Kadar larutan uji = x50,1339µ g / ml = 6,0160 µg/ml 50ml
Lampiran 15. Contoh Perhitungan Persen Perolehan Kembali dengan Metode Penambahan Bahan Baku (Standard Addition Method) dari Tablet Pirazinamida Generik (Indofarma) Perolehan % A B % Recovery = x% C Dimana: A = Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku pirazinamid perolehan % B = Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku pirazinamid perolehan % C = Konsentrasi baku yang ditambahkan sebanyak 7,5 ml atau 15 mg % Recovery Pirazinamida 5,9664 µg/ml - 4,193 µg/ml = 1,8µg/ml x % = 98,51%
Lampiran 16. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Pirazinamida pada Tablet Generik (Indofarma) dengan Metode Penambahan Bahan Baku (Standard Addition Method) No Rentang Spesifik % Absorbansi Setelah penambahan baku (A) µg/ml Konsentrasi Sebelum penambahan baku (B) µg/ml Baku yang ditambahkan (C) µg/ml Persen perolehan A B = C x% 1. 0,3180 4,7480 3,3164 1,44 99,41. 80 0,318 4,7510 3,309 1,44 99,31 3. 0,3170 4,739 3,3300 1,44 97,4 4. 0,3986 5,9664 4,193 1,80 98,51 5. 0,3975 5,9498 4,1796 1,80 98,34 6. 0,398 5,9604 4,186 1,80 98,76 7. 0,4733 7,0957 4,9581,14 99,88 8. 10 0,4736 7, 4,9506,14,44 9. 0,4733 7,0957 4,9395,14,75 Rata-rata (% recovery) 99,0 Standard Deviation (SD) 1,06 Relative Standard Deviation (RSD) (%) 1,07
Lampiran 17. Contoh Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ) Persamaan garis regresinya adalah Y = 0,06615 X + 0,003917 No Konsentrasi (µg/ml) X Absorbansi Y Yi Y - Yi (Y Yi) 1. 0 0 0 0 0. 4 0,76 0,685 0,0075 0,0000565 3. 5 0,334 0,3346 0,0006 0,00000036 4. 6 0,404 0,4008 0,003 0,0000104 5. 7 0,464 0,4669 0,009 0,00000841 6. 8 0,530 0,5331 0,0031 0,00000961 Ʃ 30,008 0,00008487 Ratarata 5 0,3343 SB = = ( Y Yi) n 0,00008487 6 = 0,004606 LOD = = 3 x SB Slope 3 x 0,004606 0,06615 = 0,088 µg/ml LOQ 10 x SB = Slope = 10 x 0,004606 0,06615 = 0,696 µg/ml
Lampiran 18. Data Pengukuran Analit pada Persen Perolehan Kembali dari Tablet Pirazinamida Generik (Indofarma) a. Perolehan 80% Sample No. ABS Conc. mg/ ml 1. 0.33 3.3148. 0.36 3.304 3. 0.4 3.396 b. Perolehan % Sample No. ABS Conc. mg/ ml 1. 0.813 4.1916. 0.804 4.1787 3. 0.806 4.184 c. Perolehan 10% Sample No. ABS Conc. mg/ ml 1. 0.3319 4.9576. 0.3314 4.950 3. 0.3397 4.939
Lampiran 19. Data Pengukuran Analit pada Persen Perolehan Kembali dari Tablet Pirazinamida Generik (Indofarma) Setelah Penambahan Bahan Baku. a. Perolehan 80% Sample No. ABS Conc. mg/ ml 1. 0.3180 4.747. 0.318 4.7509 3.3. 0.3170 4.734 b. Perolehan % Sample No. ABS Conc. mg/ ml 1. 0.3986 5.9654. 0.3975 5.9488 3. 0.398 5.9599 c. Perolehan 10% Sample No. ABS Conc. mg/ ml 1. 0.4733 7.0951. 0.4736 7.6 3. 0.4733 7.0951
Lampiran 0. Daftar Spesifikasi Sampel 1. Pirazinamid (PT. Indofarma) No. Batch : 7005 No. Reg : GKL89090710A1 Expire Date : Desember 015 Komposisi : Pirazinamida 500 mg. Sanazet (PT. Sanbe) No. Batch No. Reg : LC0975 : GKL8809310 Expire Date : Maret 015 Komposisi : Pirazinamida 500 mg 3. Siranamid (PT. Mersi) No. Batch : 19391 No. Reg : DKL983330009 Expire Date : Maret 01 Komposisi : Pirazinamida 500 mg 4. TB Zet (PT. Meprofarm) No. Batch : 358 No. Reg : DKL0315616810A1 Expire Date : Agustus 01 Komposisi : Pirazinamida 500 mg
5. Pezeta Ciba (PT. Sandoz) No. Batch : 70735 No. Reg : DKL9930410110A1 Expire Date : Desember 015 Komposisi : Pirazinamida 500 mg
Lampiran 1. Nilai Distribusi t
Lampiran. Sertifikat Bahan Baku POM
Lampiran 3. Sertifikat Bahan Baku Pirazinamid dari PT. Indofarma
Lampiran 4. Alat Spektrofotometer Ultraviolet Gambar 3. Alat Spektrofotometer Ultraviolet