Lampiran 1. Gambar Alat KCKT dan Syringe 50 µl

Lampiran 1. Gambar Alat KCKT dan Syringe 50 µl

Lampiran 2. Gambar Perangkat Penelitian Lainnya Ultrasonic cleaner Pompa vakum dan seperangkat penyaring fase gerak

Lampiran 3. Gambar Plasma Darah Manusia

Lampiran 4. Fase Gerak

Lampiran 5. Kromatogram Penyuntikan Larutan Pirazinamida Baku, Fase Gerak Buffer Fosfat ph 7,4 : Asetonitril (98 : 2)

Lampiran 6. Kromatogram Penyuntikan Larutan Nikotinamid Baku, Fase Gerak Buffer Fosfat ph 7,4 : Asetonitril (98 : 2)

Lampiran 7. Kromatogram Penyuntikan Plasma Kosong

Lampiran 8. Kromatogram Penyuntikan Sampel Plasma Darah Pasien TB

Lampiran 9. Kromatogram Penyuntikan Larutan Pirazinamida Baku pada Pembuatan Kurva Kalibrasi A. Kromatogram dari Larutan Pirazinamida Baku Konsentrasi 8.1228 mm (1000 mcg/ml) dengan Baku Dalam Nikotinamid Konsentrasi 1,2285 mm (150 mcg/ml)

Lampiran 9. (Lanjutan) B. Kromatogram dari Larutan Pirazinamida Baku Konsentrasi 12.1842 mm (1500 mcg/ml) dengan Baku Dalam Nikotinamid Konsentrasi 1,2285 mm (150 mcg/ml)

Lampiran 9. (Lanjutan) C. Kromatogram dari Larutan Pirazinamida Baku Konsentrasi 16.2456 mm (2000 mcg/ml) dengan Baku Dalam Nikotinamid Konsentrasi 1,2285 mm (150 mcg/ml)

Lampiran 9. (Lanjutan) D. Kromatogram dari Larutan Pirazinamida Baku Konsentrasi 40.6141 mm (5000 mcg/ml) dengan Baku Dalam Nikotinamid Konsentrasi 1,2285 mm (150 mcg/ml)

Lampiran 9. (Lanjutan) E. Kromatogram dari Larutan Pirazinamida Baku Konsentrasi 81.2282 mm (10000 mcg/ml) dengan Baku Dalam Nikotinamid Konsentrasi 1,2285 mm (150 mcg/ml)

Lampiran 10. Perhitungan Persamaan Regresi dan Kurva Kalibrasi Pirazinamida Baku yang Diperoleh Secara KCKT pada λ 254 nm Data Rasio Luas Puncak dari Penyuntikan Larutan Pirazinamida Baku Konsentrasi 8,1228 81,2282 mm dengan Baku Dalam Nikotinamid Konsentrasi 1,2285 mm dalam Plasma Konsentrasi Luas Area Puncak (μg/ml) (mm) Pirazinamida Rasio PZA / NIK Nikotinamid (NIK) (PZA) 1000 8,1228 127815 236205 0,541119 1500 12,1842 382077 267560 1,428005 2000 16,2456 1226371 318707 3,847958 5000 40,6141 2176204 265871 8,185188 10000 81,2282 5288919 214936 24,60695 Data Kalibrasi Pirazinamida Baku Rasio Luas Area Puncak Pirazinamida terhadap Nikotinamid (y) terhadap Konsentrasi (x) No. Konsentrasi PZA (mm) (x) Rasio Luas Area Puncak PZA / NIK (y) x.y x 2 Y 2 1. 8,1228 0,541119 4,3954 65,9798 0,29281 2. 12,1842 1,428005 17,3991 148,4547 2,03919 3. 16,2456 3,847958 62,5123 263,9195 14,80678 4. 40,6141 8,185188 332,434 1649,505 66,9973 5. 81,2282 24,60695 1998,778 6598,02 605,5019 Σ 158,3949 38,60922 2415,519 8725,88 689,638 Ratarata 31,6789 7,7218 a = = = xy 2 x ( x)( y) 2 ( x) / n / n 2415,519 (158,3949)(38,60922) / 5 2 8725,88 (158,3949) / 5 2415,519 1223,1007 8725,88 5017,788

= 1192,4183 3708,092 = 0,3216 y = ax + b b = y ax = 7,7218 (0,3216)(31,6789) = 7,7218 10,1879 = - 2,4661 Sehingga, diperoleh persamaan regresi Y = 0,3216 X 2,4661. Untuk mencari hubungan kadar (X) dengan perbandingan luas area (Y) digunakan pengujian koefisien kolerasi (r). r = xy ( x)( y) / n 2 2 2 ( x ( x )/ n) y ( y) 2 [ ( / n) ] r = r = r = r = 2415,519 (158,3949)(38,60922) / 5 2 2 [( 8725,88 (158,3949) /5)( 689,638 (38,60922) /5)] 2415,519 1223,1007 [( 8725,88 5017,788)( 689,638 298,1344) ] 1192,4183 [( 3708,092)( 391,5036) ] 1192,4183 1451731,3671 r = 1192,4183 1204,8782 r = 0,9897

Lampiran 11. Perhitungan Konsentrasi Obat Pirazinamida Luas Puncak Pirazinamida (sampel) = 3226132 Luas Puncak Nikotinamid (baku dalam) = 152320 Maka, perbandingan luas puncak sampel dan baku dalam (y) = 3226132 = 21,179963 152320 Dari persamaan regresi y = 0,3216 x 2,4661, maka konsentrasi obat 21,179963 = 0,3216 x 2,4661 0,3216 x = 21,179963 + 2,4661 0,3216 x = 23,646063 x = 23,646063 0,3216 x = 73,5263 mm = 0,0735263 M = 0,0735263 x 123,11 = 9,0518 g/l = 9,0518 mg/ml = 9051,8 mcg/ml (ppm)

Lampiran 12. Perhitungan Batas Deteksi dan Batas Kuantifikasi Pirazinamida Persamaan garis regresi Pirazinamida: y = ax + b y = 0,3216 x 2,4661 No. x (mm) y yi (y-yi) (y-yi) 2 1. 8,1228 0,541119 0,1462 0,394919 0,15596102 2. 12,1842 1,428005 1,4523 0,024295 0,000590 3. 16,2456 3,847958 2,7585 1,089458 1,1869187 4. 40,6141 8,185188 10,5954-2,410212 5,8091219 5. 81,2282 24,60695 23,6569 0,95005 0,902595 Σ = 8,0551866 SD = 2 (y yi) = n 2 8,0551866 5 2 = 2,685073 = 1,638619 LOD = LOQ = 3,3 xsd 3,3 x1,638619 = slope 0,3216 = 16.81419 mm 10 xsd 10 x1,638619 = slope 0,3216 = 50.95209 mm

Lampiran 13. Data Pasien Nama Umur : Tn ES : 49 tahun Jenis Kelamin : Laki-laki Berat Badan : 63 kg Telah memakan Obat TB tahap intensif selama ± 1 bulan.

Lampiran 14. Sertifikat Analisis Pirazinamida

Lampiran 15. Sertifikat Analisis Nikotinamid

Lampiran 16. Surat Persetujuan Komite Etik

Lampiran 17. Pembuatan Plasma dari Sampel Darah Pasien TB Pasien TB Darah + heparin didalam venoject Diambil darahnya sebanyak 5 ml dari vena Dimasukkan ke dalam venoject yang telah terbasahi heparin Disentrifugasi dengan kecepatan 4000 putaran per menit selama 5 menit Dipisahkan supernatan dari endapan Lapisan atas (plasma) Lapisan bawah (endapan) Plasma

Lampiran 18. Pembuatan Plasma Kosong Donatur (Dewasa dan Sehat) Darah + heparin didalam venoject Diambil darahnya sebanyak 5 ml melalui vena Dimasukkan ke dalam venoject yang telah terbasahi heparin Disentrifugasi dengan kecepatan 4000 putaran per menit selama 5 menit Dipisahkan supernatan dari endapan Lapisan atas (plasma) Lapisan bawah (endapan) Plasma Lampiran 19. Pembuatan Larutan Induk Baku Pirazinamida Pirazinamida Baku Ditimbang ± 10 mg Dimasukkan ke dalam vial yang telah dikalibrasi 1 ml Dilarutkan dengan fase gerak Dicukupkan sampai garis tanda LIB pirazinamida konsentrasi 81,2281 mm

Lampiran 20. Pembuatan Larutan Induk Baku Pertama Nikotinamid Nikotinamid Ditimbang ±10 mg Dimasukkan ke dalam labu ukur 10 ml Dilarutkan dengan fase gerak Dicukupkan sampai garis tanda LIB I Nikotinamid konsentrasi 8,1900 mm Lampiran 21. Pembuatan Larutan Induk Baku Kedua Nikotinamid LIB I Nikotinamid konsentrasi 8,1900 mm Dipipet sebanyak 1,5 ml menggunakan pipet volum Dimasukkan ke dalam labu ukur 10 ml Dicukupkan dengan fase gerak sampai garis tanda LIB II Nikotinamid konsentrasi 1,2285 mm

Lampiran 22. Penyuntikan Plasma Kosong Plasma Dipipet sebanyak 300 µl Dimasukkan ke dalam politube Ditambahkan 600 µl asetonitril, lalu divortex Disentrifugasi dengan kecepatan 4000 putaran per menit selama 5 menit Supernatan Endapan Dipisahkan menggunakan spuit Disaring menggunakan PTFE ø 0,2 µm Diinjeksikan ke dalam sistem KCKT sebanyak 20 µl Kromatogram plasma

Lampiran 23. Pembuatan Linearitas Kurva Kalibrasi Baku Pembanding Pirazinamida LIB pirazinamida Larutan Pirazinamida dengan konsentrasi 8.1228 mm; 12.1842 mm; 16.2456 mm; 40.614 mm; Dipipet sebanyak 100 μl; 150 μl; 200 μl; 500 μl Dimasukkan ke dalam vial yang telah dikalibrasi 1 ml Diencerkan dengan fase gerak sampai garis tanda Dipipet sebanyak 10 µl Dimasukkan ke dalam vial yang telah dikalibrasi 2 ml Ditambah sebanyak 50 µl nikotinamid ke masing-masing vial Dicukupkan dengan plasma sampai batas kalibrasi Divortex lalu didiamkan selama 5 menit Dipipet sebanyak 300 µl Dimasukkan ke dalam politube Ditambahkan 600 µl asetonitril lalu divortex Disentrifugasi dengan kecepatan 4000 putaran per menit selama 5 menit Supernatan Endapan

Lanjutan Untuk konsentrasi terakhir diambil langsung dari LIB Pirazinamida LIB Pirazinamida 81.2282 mm Dipipet sebanyak 10 µl Dimasukkan ke dalam vial yang telah dikalibrasi 2 ml Ditambah sebanyak 50 µl nikotinamid ke masing-masing vial Dicukupkan dengan plasma sampai batas kalibrasi Divortex lalu didiamkan selama 5 menit Dipipet sebanyak 300 µl Dimasukkan ke dalam politube Ditambahkan 600 µl asetonitril lalu divortex Disentrifugasi dengan kecepatan 4000 putaran per menit selama 5 menit Supernatan Endapan

Lanjutan: Supernatan Dipisahkan menggunakan spuit Disaring menggunakan PTFE ø 0,2 Diinjeksikan ke dalam sistem KCKT sebanyak 20 µl Kromatogram Diperoleh Rt dan luas puncak Dihitung persamaan regresi Hasil

Lampiran 24. Pemeriksaan Kadar Pirazinamida dalam Plasma Darah Pasien TB Plasma Pasien Ditambahkan 50 μl nikotinamid 1,2285 mm Divortex Didiamkan selama 5 menit Dipipet sebanyak 300 µl Dimasukkan ke dalam politube Ditambahkan 600 µl asetonitril lalu divortex Disentrifugasi dengan kecepatan 4000 putaran per menit selama 5 menit Supernatan Endapan Dipisahkan menggunakan spuit Disaring menggunakan PTFE ø 0,2 µm Diinjeksikan ke dalam sitem KCKT Kromatogram plasma + pirazinamida + nikotinamid Diperoleh Rt dan luas puncak Dihitung konsentrasi yang didapat Hasil