Lampiran 1. Sertifikat Pengujian Natrium Diklofenak BPFI

Transkripsi

1 Lampiran 1. Sertifikat Pengujian Natrium Diklofenak BPFI

2 Lampiran.Hasil Orientasi Menentukan Eluen (Fase Gerak) dengan Menggunakan Alat KCKT.1. Kromatogram hasil penyuntikan larutan Natrium Diklofenak BPFI dengan kosentrasi 500 mcg/ml, fase gerak MeOH : Buffer Asetat ( 90:10), waktu tambat 3,9 menit.. Kromatogram hasil penyuntikan larutan Natrium Diklofenak BPFI dengan kosentrasi 500 mcg/ml, fase gerak MeOH : Buffer Asetat ( 85:15), waktu tambat 4,5 menit

3 Lampiran (lanjutan).3. Kromatogram hasil penyuntikan larutan Natrium Diklofenak BPFI dengan kosentrasi 500 mcg/ml, fase gerak MeOH : Buffer Asetat ( 80:0), waktu tambat 6,9 menit.4. Kromatogram hasil penyuntikan larutan Natrium Diklofenak BPFI dengan kosentrasi 500 mcg/ml, fase gerak MeOH : Buffer Asetat ( 70:30), waktu tambat 10,1 menit

4 Lampiran 3. Plasma yang Diperoleh Secara KCKT 3.1 Plasma Kosong dari Hewan Percobaan dimana Perlakuan Pemberian Natrium Diklofenak Tanpa Vitamin C 3.. Plasma Kosong pada Hewan Percobaan dengan Pemberian Natrium Diklofenak dengan Pemberian Vitamin C Dosis 50 mg/kg BB selama 7 hari berturut-turut

5 3.3 Natrium diklofenak dalam Plasma tanpa Pemberian Vitamin C 3.4 Natrium Diklofenak dalam Plasma dengan Pemberian Vitamin C 50 mg/kg BB yang diberikan sebelumnya selama 7 hari berturut-turut

6 Lampiran 4 Perhitungan Persamaan Regresi dari Kurva Kalibrasi 4.1. Perhitungan persamaan regresi dari kurva kalibrasi Natrium Diklofenak BPFI yang diperoleh Secara KCKT Data X Y X Y X Y Total Rataan Y = ax + b n a = n = ( ΣXY ) ( ΣX )( ΣY ) ( ΣX ) ( ΣX ) ( ) 550( ) 4( 97500) ( 550) = b = Y ax r = r = = = n ( )( ) ( ΣXY ) ( ΣX )( ΣY ) [ n ( ΣX ) ( ΣX ) ] n ( ΣY ) ( ΣY ) 4 [ ] ( ) ( 550)( ) [ ] [ 4(97500) (550) ] 4( ) ( ) r =0,9870 Jadi Persamaannya didapat : Y = X

7 Lampiran 4 (lanjutan) 4.. Perhitungan persamaan regresi dari kurva kalibrasi Natrium Diklofenak BPFI dengan perlakuan Vitamin C 50 mg/kg BB yang diberikan sebelumnya selama 7 hari berturut-turut yang diperoleh Secara KCKT Data X Y X Y X Y Total Rataan Y = ax + b n a = n = ( ΣXY ) ( ΣX )( ΣY ) 4 ( ΣX ) ( ΣX ) ( ) 550( ) 4( 97500) ( 550) = b = Y ax r = r = = = n ( )( ) ( ΣXY ) ( ΣX )( ΣY ) [ n ( ΣX ) ( ΣX ) ] n ( ΣY ) ( ΣY ) [ ] 4( ) ( 550)( ) ( 97500) ( 550) [ 4 ][ ( ) ( ) ] r =0,9998 Jadi Persamaannya didapat : Y = X

8 Lampiran 5. Flowsheet 5.1. Pengambilan Cuplikan Darah Untuk Kurva Baku Natrium Diklofenak Kelinci Dipuasakan minimal 8 jam sebelum percobaan Ditimbang Dicukur bulu telinganya hingga bersih Diambil darah sebanyak 5 ml di dalam tabung yang telah diberi tetes heparin Cuplikan Darah 5.. Pengambilan Cuplikan Darah Untuk Kurva Baku Natrium Diklofenak dengan Pemberian Vitamin C dosis 50 mg/kg BB selama 7 Hari Berturut-turut Kelinci Ditimbang Diberikan larutan vitamin C dosis 50 mg/kg BB selama 7 hari berturut-turut Pada hari keenam dipuasakan minimal 8 jam sebelum percobaan Dicukur bulu telinganya hingga bersih Pada hari ketujuh, diambil darah sebanyak 5 ml setelah 4 jam pemberian vitamin C ke dalam tabung yang telah di isi tetes heparin Cuplikan Darah

9 Lampiran 5 (lanjutan) 5.3. Pembuatan Kurva Kalibrasi Natrium Diklofenak Natrium Diklofenak Ditimbang 5,0 mg Dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml Ditambah fase gerak sampai larut Dicukupkan dengan fase gerak sampai garis tanda Larutan Natrium Diklofenak (LIB) (500 mcg/ml) Hasil Dipipet larutan LIB sebanyak 0,1; 0,; 0,3 dan 0,5 ml Diencerkan dengan darah hingga 1 ml Divorteks dan sentrifug pada 000 rpm selama 10 menit sehingga didapatkan supernatan Diukur supernatan dengan alat KCKT pada panjang gelombang 73 nm

10 Lampiran 5 (lanjutan) 5.4. Perlakuan Pada Hewan Percobaan dengan Pemberian Natrium Diklofenak Tanpa Vitamin C KELINCI Dipuasakan minimal 8 jam sebelum percobaan Ditimbang Cuplikan Darah Dicukur bulu telinganya hingga bersih Diambil darahnya 1 ml ke dalam tabung yang berisi heparin Diberikan Natrium diklofenak dengan dosis yasng telah dikonversikan terhadap dosis lazim 5 mg secara oral Diambil darah 1 ml ke dalam tabung yang berisi heparin pada waktu 0,5; 0,5; 0,75; 1,5; 1,75;,5; 3,5; 4,5 dan 5,5 jam setelah pemberian Natrium diklofenak Ditambahkan TCA 0% sebanyak 1 ml Lalu dihomogenkan dengan vortex Disentrifug pada 000 rpm selama 10 menit Diambil supernatan dan diukur dengan alat KCKT pada panjang gelombang 73 nm Hasil

11 Lampiran 5 (lanjutan) 5.5. Perlakuan Pada Hewan Percobaan dengan Pemberian Natrium Diklofenak dengan Pemberian Vitamin C dosis 50 mg/kg BB selama 7 hari berturut-turut KELINCI Cuplikan Darah Pada hari ke enam dipuasakan selama 8 jam Ditimbang Diberikan vitamin C dosis 50 mg/kg BB selama 7 hari berturut-turut Diambil darah 1 ml dimasukkan ke dalam tabung yang telah diberi tetes heparin Pada hari ke tujuh, 4 jam setelah pemberian vitamin C diberikan Natrium diklofenak dengan dosis yang telah dikonversikan terhadap dosis lazim 5 mg Diambil darah 1 ml kedalam tabung yang telah berisi tetes heparin pada waktu 0,5; 0,5; 0,75; 1,5; 1,75;,5; 3,5; 4,5 dan 5,5 jam setelah pemberian Natrium diklofenak Hasil Masing-masing cuplikan darah, ditambahkan TCA 0% sebanyak 1 ml Lalu dihomogenkan dengan Vortex Disentrifug pada 000 rpm selama 10 menit Diambil supernatan dan diukur dengan alat KCKT pada panjang gelombang 73 nm

12 Lampiran 6. Konversi Perhitungan Dosis Antar Jenis Hewan Percobaan Konversi Perhitungan Dosis Antar Jenis Hewan Percobaan (Donatus, 1996) Perlakuan Mencit 0g Tikus 00g Marmot 400g Kelinci 1,5kg Kera 4kg Anjing 1kg Manusia 70kg Mencit 0g 1,0 7,0 1,5 7,8 64,1 14, 387,9 Tikus 00g 0,14 1,0 1,74 3,9 9, 17,8 56,0 Marmot 400g 0,08 0,57 1,0,5 5, 10, 31,5 Kelinci 1,5kg 0,04 0,5 0,44 1,0,4 4,5 14, Kera 4kg 0,016 0,11 0,19 0,4 1,0 1,9 6,1 Anjing 1kg 0,008 0,06 0,10 0, 0,5 1,0 3,1 Manusia 70kg 0,006 0,018 0,031 0,07 0,16 0,3 1,0

13 Lampiran 7. Perhitungan Dosis yang Diberikan Kepada masing-masing Hewan Percobaan 7.1. Dosis Natrium Diklofenak Tanpa Perlakuan Vitamin C Kelinci I Dosis lazim = 5 mg Berat hewan = kg Konversi pada hewan kelinci = 0,07 Dosis konversi = 5 x 0,07 = 1,75 mg Dosis dari perkiraan berat per kg BB = 1000g 1500g x 1,75 mg = 1,17 mg / kg BB 000g Dosis = 1000g x 1,17 mg =,34 mg Volume dosis yang diberikan =,34mg 0,5mg x 1 ml = 4.68 ml 7.. Dosis Natrium Diklofenak Setelah Kelinci Jantan Mendapat Perlakuan Vitamin C 50 mg/kg BB selama 7 Hari Berturut-turut Kelinci I Dosis lazim = 5 mg Berat hewan = 1,8 kg Konversi pada hewan kelinci = 0,07 Dosis konversi = 5 x 0,07 = 1,75 mg Dosis dari perkiraan berat per kg BB = 1000g 1500g x 1,75 mg = 1,17 mg / kg BB Dosis = Volume dosis yang diberikan = 1800g 1000g x 1,17 mg =,106 mg,106mg 0,5mg x 1 ml = 4,1 ml

14 Lampiran 7 (lanjutan) 7.3 Dosis Vitamin C pada Kelinci dengan Perlakuan Vitamin C 50 mg/kg BB selama 7 Hari Berturut-turut Kelinci I Berat hewan = 1,8 kg Dosis = Volume = 1800g 1000g 90mg 10mg x 50 mg = 90 mg x 1 ml = 9 ml

15 Lampiran 8. Kadar Natrium Diklofenak Pada Kelinci Jantan dalam Plasma Setiap Waktu Pengambilan Sampel 8.1. Kadar Natrium Diklofenak Pada Kelinci Jantan Setelah Pemberian Natrium Diklofenak Peroral Tanpa Perlakuan Vitamin C Waktu (t) (jam) HEWAN UJI Rata-Rata Kadar ± SD I II III IV V VI (mcg/ml) Area Kadar Area kadar Area Kadar Area Kadar Area Kadar Area Kadar ± ± ± ± ± ± ± ± ±0.915

16 Lampiran 8 (lanjutan) 8.. Gambar Konsentrasi (log C) vs Waktu (t) Natrium Diklofenak tanpa Vitamin C masing-masing n = 6 ekor

17 Lampiran 8 (lanjutan) 8.. Kadar Natrium Diklofenak Pada Kelinci Jantan Setelah Kelinci Jantan Mendapat Perlakuan Vitamin C 7 Hari Berturut- Turut dan Diberi Natrium Diklofenak Per Oral Waktu (t) (jam) HEWAN UJI Rata-Rata I II III IV V VI Kadar ± SD (mcg/ml) Area Kadar Area kadar Area Kadar Area Kadar Area Kadar Area Kadar ± ± ± ± ± ± ± ± ±1.41

18 Lampiran 8 (lanjutan) 8.3. Gambar Konsentrasi (log C) vs Waktu (t) Natrium Diklofenak tanpa Vitamin C dan Natrium Diklofenak setelah Pemberian Vitamin C 50 mg/kg BB Selama 7 Hari Berturut-turut per Oral, masing-masing n = 6 ekor

19 Lampiran 9. Parameter Farmakokinetika Kelompok Natrium Diklofenak dan Kelompok Natrium Diklofenak yang sebelumnya mendapat perlakuan Vitamin C selama 7 hari berturut-turut 9.1 Parameter Farmakokinetika Kelompok Natrium Diklofenak Pada Kelinci Jantan Setelah Diberikan natrium Diklofenak per Oral Tanpa Pelakuan Vitamin C Kelinci BB Dosis Ka(Jam 1 ) t1/ a Tmaks Cmaks Vd AUC 0- AUMC 0- MRT Kel t1/el CL (kg) (mg) (jam) (jam) (mcg/ml) (mg) (mcg/ml.jam) (mcg/ml.jam ) (jam) (jam 1 ) (jam) (ml/jam) I,3401 3,0449 0,3 1,438 76,93 8, , II,1,4571 3,5303 0,0 1,87 85,69 30, III 1,7 1,989,5198 0,7 1, ,69 4, IV 1,6 1,87,1943 0,3 1,87 74,31 3, V,4,808 1,373 0,50,785 88, VI 1,7 1,989,4747 0,8 1,67 76, x SD

20 Lampiran 9 (lanjutan) 9. Parameter Farmakokinetika Kelompok Natrium Diklofenak Setelah Kelinci Jantan Mendapat Perlakuan Vitamin C 50 mg/kg BB selama 7 Hari Berturut-Turut Kelinci BB Dosis Ka t1/ a Tmaks Cmaks Vd AUC 0- AUMC 0- MRT Kel t1/el CL (kg) (mg) (Jam -1 ) (jam) (jam) (mcg/ml) (mg) (mcg/ml.jam) (mcg/ml.jam ) (jam) (jam -1 ) (jam) (ml/jam) I II III 1, IV V VI x SD

21 Lampiran 10. Contoh Perhitungan Parameter Farmakokinetika Secara Manual Hewan I Waktu (t) Konsentrasi (C) A.e K el t Residual (jam) (mcg / ml) (mcg/ml) (mcg/ml) 0,5 66,40 80,70 /-14,3/ 0,5 70,06 79,89 /-9,84/ Ln R = LnB-K a.t 0,75 73,79 79,09 /-5,31/ =3,6680 3,0449t 1,5 76,78 77,51 /0,740/ R = B.e -K a. t 1,75 81,30 75,57 /5,3/ = 39,17 e -3,0449t, ,45 /1,06) r = -0,98 Ln CE = Ln A-K el.t 3,5 7,18 = 4,4009-0,0403 4,5 67,44 CE = A.e -K el.t 5,5 66,59 = 8i,5e -0,0403 t r = -0,998 K el = 0, 0403 jam -1 T 1/ el 0,693 = 0,0403 = 17,19 jam K a = 3, 0449 jam -1 T 1/ ab = AUC (Area Under the Curve) AUC 0-t = { C xt 1 1 } + { + C1) x( t 0,693 3,0449 ( C t1 ) } + { = 0,3 jam 66,40x0,5 ( 66, ,06)(0,5 0,5) AUC 05,5 ={ }+{ }+ { +{ ( 73, ,78)(1,5 0,75) ( 70, ,79)(0,75 0,5) }+{ ( Cn + Cn 1 n tn 1 ) x( t ) } ( 76, ,30)(1,75 1,5) ( 81, ,5)(,5 1,75) ( 86,5 + 7,18)(3,5,5) +{ }+{ } ( 7, ,44)(4,5 3,5) ( 67, ,59)(5,5 4,5) +{ }+{ } = 378,635 mcg / ml jam } }

22 Lampiran 10 (lanjutan) AUC 5,5- AUC 0- c. AUMC t Ctn = Kel = 66,59 0,0403 = 165,357 mcg / ml jam = AUC 0-5,5 + AUC 5,5- = 378, ,357 = 030,99 (mcg/ml) x jam Ct 0,5 16,6 0,5 35,03 0,75 55,34 1,5 95,97 1,75 14,75,5 194,67 3,5 34,59 4,5 86,44 5,5 349,60 ( C1t1xt AUMC 0-t = { 1) ( Ct + C1t1)( t t1) ( Cntn + Cn 1tn 1 )( tn tn 1) }+{ }+{ } ( 16,6x0,5) ( 16,6 + 35,03)(0,5 0,5) AUMC 05,5 ={ }+{ }+ ( 35, ,34)(0,75 0,5) { } ( 55, ,97)(1,5 0,75) ( 95, ,75)(1,75 1,5) +{ }+{ } ( 14, ,67)(,5 1,75) ( 194, ,59)(3,5,5) +{ }+{

23 Lampiran 10 (lanjutan) AUMC 5,5- AUMC 0 - ( 34, ,66)(4,5 3,5) ( 86, ,60)(5,5 4,5) +{ }+ } = 993,8 mcg / ml jam Cttn Ctn = + Kel (Kel) = MRT = 346,60 0, ,59 + (0,0403) =8600, ,4 = 49601,9 (mcg/ml) x jam = AUMC 0-5,5 + AUMC 5,5- = 993, ,9 = 5059, mcg / ml jam = C maks = AUMC AUC ,mcg / ml. jam 030,59mcg / ml. jam = 4,91 jam = f. Dosis ke. t max Vd e 1x340mcg 0,0403x1,438 8,70ml. e = 69,639 mcg / ml,303 Ka T maks = log Ka ke Ke =,303 3,0449 = 1,438 jam log 0,0403 3,0449 0,0403

24 Lampiran 10 (lanjutan) Dosis. f Vd = 0 Cp 340mcg = 81,5mcg / ml = 8,70 ml Kliren (CL) = Dosis AUC 0 = 1,15 ml / jam 340mcg = 030,59mcg / ml. jam

25 Lampiran 11. Contoh Perhitungan Pengujian Hipotesis Perhitungan C maks No Tanpa Vitamin C Dengan Vitamin C 1 76,93 66,91 85,69 66, ,69 66, ,31 66,7 5 88,59 75, ,11 67,96 x 79,7 68,398 SD 5,89 3,7375 Ho: σ 1 = σ H1: σ 1 σ Pengujian Hipotesis f = S L / Ss 5,89 f = 3,7375 =,485 dibandingkan dengan nilai kritis : f α/, v1, v f tabel = f α/, v1, v f tabel = f 0,05, 6, 6 = 4,8 f hitung < f tabel Bila f hitung < f kritis (tidak dapat ditolak), maka harga kedua variansi tersebut adalah sama, maka uji selanjutnya dalam membedakan dua mean menggunakan uji t. Ho : µ 1 = µ H1: µ 1 µ Pengujian hipotesis t = ( y y / s 1/ r1 + 1 r 1 /

26 Lampiran 11 (lanjutan) r r r / i i 1 i 1 i= s= y y r1 + y y / r /( r + r ) 1i i 1 i= 1 r 1i \ s = [( 76,93) + ( 85,69) + ( 76,69) + ( 74,31) + ( 88,59) + ( 76,11) ( 76, , , ,31+ 88, ,11) / 6] [( 66,91) + ( 66,13) + ( 66,74) + ( 66,7) + ( 75,93) + ( 67,96) ( 66,91+ 66, , ,7 + 75, ,96) / 6] / ( ) s = {( 38305, ,6704) + ( 8139, ,990) }/( 10) s = {( 173,583) + ( 69,84548) }/( 10) s = 0, 485 s = 0,4985 t = ( y y / s 1/ r1 + 1 r 1 / t = 1 ( 79,7 68,3983/ 0, t = 11,317 / 0,878 t = 39,33 nilai t hasil pengujian statistik ini, kemudian dibandingkan dengan nilai kritis ( t tabel) yaitu t tabel = ± t α/, (r1+r-) t tabel = ± t 0,05, (6+6-) t tabel = ± t 0,05, 10 t tabel = ±,8 t hitung > t tabel (bermakna, p < 0,05)