LAMPIRAN Lampiran 1. Flowsheet pembuatan larutan dapar fosfat ph 7,4 isotonis Natrium dihidrogen fosfat ditimbang 0,8 g Dinatrium hidrogen fosfat ditimbang 0,9 g dilarutkan dengan 100 ml aquadest bebas CO 2 dipipet 20 ml dilarutkan dengan 100 ml aquadest bebas CO 2 dipipet 80 ml campuran ditambahkan 0,44 g/100 ml NaCl diaduk sampai larut dan dihomogenkan Larutan dapar fosfat ph 7,4 isotonis
Lampiran 2. Flowsheet pembuatan usus halus homogen Kelinci jantan dipuasakan selama 20-24 jam dianastesi Usus halus dibedah pada bagian perut tetapi jangan sampai mengenai tulang dada dibersihkan bagian dalam dan bagian luarnya Usus halus homogen dicuci dengan NaCl fisiologis dingin ditimbang dipotong kecil-kecil dimasukkan kedalam alat homogenizer mixer ditambahkan dapar fosfat ph 7,4 isotonis dingin sebanyak 5 kali berat usus halus dihomogenkan dipipet 50 µl dimasukkan kedalam politube disimpan pada temperature 0-4 0 C dengan bantuan es 50 µl usus halus homogen
Lampiran 3. Flowsheet pembuatan LIB I parasetamol dalam dapar fosfat ph 7,4 isotonis 100 mg parasetamol dimasukkan kedalam labu tentukur 50 ml dilarutkan dengan dapar fosfat ph 7,4 isotonis ditambahkan dapar fosfat ph 7,4 isotonis sampai garis tanda dikocok homogen LIB I dengan konsentrasi 2000 mcg/ml
Lampiran 4. Flowsheet pembuatan LIB II parasetamol dalam dapar fosfat ph 7,4 isotonis LIB I parasetamol dipipet masing-masing 0,5 ml; 1 ml; 1,5 ml; 2 ml; 3,5 ml; 4,5 ml; 5,5 ml; 6,5 ml dan 7,5 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml ditambahkan dapar fosfat ph 7,4 isotonis sampai garis tanda dikocok homogen LIB II dengan konsentrasi 100 mcg/ml, 200 mcg/ml, 300 mcg/ml, 400 mcg/ml, 700 mcg/ml, 900 mcg/ml, 1100 mcg/ml, 1300 mcg/ml, 1500 mcg/ml
Lampiran 5. Flowsheet pembuatan larutan parasetamol dengan berbagai konsentrasi 7,5 mg; 15,1 mg; 22,6 mg; 37,8 mg; 75,5 mg parasetamol baku dimasukkan masing-masing ke dalam labu tentukur 50 ml dilarutkan dengan dapar fosfat ph 7,4 isotonis dicukupkan dengan dapar fosfat ph 7,4 isotonis sampai garis tanda dikocok sampai homogen Larutan parasetamol dengan konsentrasi 1 mm, 2 mm, 3 mm, 5 mm, 10 mm
Lampiran 6. Flowsheet pembuatan larutan aspirin dengan berbagai konsentrasi 0,9 mg; 2,7 mg, 4,5 mg aspirin baku Larutan aspirin dengan konsentrasi 0,1 mm, 0,3 mm dan 0,5 mm dimasukkan masing-masing ke dalam labu tentukur 50 ml dilarutkan dengan dapar fosfat ph 7,4 isotonis dicukupkan dengan dapar fosfat ph 7,4 isotonis sampai garis tanda dikocok sampai homogen
Lampiran 7. Flowsheet penentuan kurva absorpsi parasetamol dalam usus halus kelinci yang dihomogenkan 50 µl Usus halus homogen disimpan pada temperatur 0-4 0 C dengan bantuan es diprainkubasikan selama 3 menit pada suhu kamar dimasukkan 100 µl LIB I kedalam politube dihomogenkan dengan touch mixer diinkubasi selama 3 menit pada suhu kamar ditambahkan etanol sebanyak 4 kali volume sampel dihomogenkan dengan touch mixer disentrifuse selama 30 detik, 3000 rpm Supernatan dipipet 0,5 ml Endapan (dibuang) dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml cukupkan dengan dapar fosfat ph 7,4 isotonis dingin diukur absorbansinya pada panjang gelombang 200-400 nm Panjang gelombang maksimum
Lampiran 8. Kurva absorpsi parasetamol dalam usus halus kelinci yang dihomogenkan
Lampiran 9. Flowsheet penentuan kurva kalibrasi parasetamol dalam usus halus kelinci yang dihomogenkan 50µl Usus halus homogen disimpan pada temperature 0-4 0 C dengan bantuan es diprainkubasi selama 3 menit dimasukkan 100 µl LIB II kedalam politube dihomogenkan dengan touch mixer diinkubasi selama 3 menit pada temperatur 27 0 C ditambahkan etanol sebanyak 4 kali volume sampel dihomogenkan dengan touch mixer disentrifuse selama 30 detik, 3000 rpm Supernatan dipipet 0,5 ml Endapan (dibuang) dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml cukupkan dengan dapar fosfat ph 7,4 isotonis dingin sampai garis tanda diukur absorbansinya dengan spektrofotometer pada λ 243,5 nm Hasil
Lampiran 10. Flowsheet penentuan absorpsi parasetamol dalam usus halus kelinci yang dihomogenkan 50µl Usus halus homogen disimpan pada temperatur 0-4 0 C dengan bantuan es diprainkubasi selama 3 menit dimasukkan 100 µl larutan obat berbagai konsentrasi kedalam politube dihomogenkan dengan touch mixer diinkubasi selama 3 menit pada suhu kamar diinkubasi dengan variasi waktu 0,5 menit, 0,75 menit, 1 menit, 2 menit, 3 menit, 5 menit, 7 menit, 10 menit dan 15 menit ditambahkan etanol sebanyak 4 kali volume sampel dihomogenkan dengan touch mixer disentrifuse selama 30 detik, 3000 rpm Supernatan dipipet 0,5 ml Endapan (dibuang) dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml cukupkan dengan dapar fosfat ph 7,4 isotonis dingin sampai garis tanda diukur absorbansinya dengan spektrofotometer pada λ 243,5 nm Hasil
Lampiran 11. Flowsheet penentuan absorpsi parasetamol dengan penambahan aspirin dalam usus halus kelinci yang dihomogenkan 50µl Usus halus homogen disimpan pada temperatur 0-4 0 C dengan bantuan es diprainkubasi selama 3 menit dimasukkan 100 µl larutan obat parasetamol berbagai konsentrasi kedalam politube dimasukkan 100 µl larutan aspirin berbagai konsentrasi ke dalam politube yang sama dihomogenkan dengan touch mixer diinkubasi selama 3 menit pada suhu kamar diinkubasi dengan variasi waktu 0,75 menit, 2 menit dan 5 menit ditambahkan etanol sebanyak 4 kali volume sampel dihomogenkan dengan touch mixer disentrifuse selama 30 detik, 3000 rpm Supernatan dipipet 0,5 ml Endapan (dibuang) dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml cukupkan dengan dapar fosfat ph 7,4 isotonis dingin sampai garis tanda diukur absorbansinya dengan spektrofotometer pada λ 243,5 nm Hasil
Lampiran 12. Penentuan persamaan regresi dan kurva kalibrasi parasetamol pada usus halus kelinci yang dihomogenkan dalam dapar fosfat ph 7,4 isotonis Konsentrasi Absorbansi (ppm) x 2 y 2 XY X Y 0 0 0 0 0 100 0,0379 10000 0,00143641 3,7900 200 0,0741 40000 0,00549081 14,8200 300 0,1354 90000 0,01833316 40,6200 400 0,1678 160000 0,02815684 67,1200 700 0,2861 490000 0,08185321 200,2700 900 0,3546 810000 0,12574116 319,1400 1100 0,4327 1210000 0,18722929 475,9700 1300 0,4954 1690000 0,24542116 644,0200 1500 0,5742 2250000 0,32970564 861,3000 Σx = 6500 Σy = 2,5582 Σ x 2 = Σ y 2 = Σxy = 6750000 1,02336768 2627,0500 x = 650 y = 0,25582 Persamaan regresi : y = ax + b a = xy ( x)( 2 2 x ( x) y) / n / n 2627,05 (6500)(2,5582) /10 a = 2 6750000 (6500) /10 a = 0,0003 b = y ax b = 0,25582 (0,0003)(650) b = 0,0200 Jadi, persamaan regresi adalah y = 0,0003x + 0,0200 r = { xy ( x)( y) / n 2 2 x ( x) / n)}( y ( y) 2 / n} 2627,05 (6500)(2,5582) /10 r = 2 {6750000 (6500) /10}{1,02336768 (2,5582) r = 0,9986 2 /10}
Lampiran 13. Contoh perhitungan konsentrasi larutan obat parasetamol 2 mm Contoh perhitungan konsentrasi larutan obat parasetamol dengan menggunakan rumus sebagai berikut sehingga diperoleh konsentrasi 2 mm : C = mg BM 1000 x V C = 15,11 151,16 C = 2 mm 1000 x 50
Lampiran 14. Contoh perhitungan konsentrasi parasetamol dalam usus halus kelinci yang dihomogenkan pada dapar fosfat ph 7,4 isotonis Konsentrasi parasetamol dihitung dengan menggunakan persamaan regresi dari kurva kalibrasi parasetamol dalam usus halus kelinci yang dihomogenkan pada dapar fosfat ph 7,4 isotonis: Y = 0,0003x + 0,02 Sebagai contoh, absorpsi parasetamol dengan konsentrasi 1 mm pada t = 0,5 menit diperoleh absorbansi = 0,0552 maka : X 0,02 = Y 0,0003 X 0,0552 0,02 = 0,0003 X = 117,67 mcg/ml = 0,7785 mm Ini merupakan konsentrasi supernatan, untuk memperoleh konsentrasi yang diabsorpsi maka dikurangkan dengan konsentrasi awal, maka diperoleh konsentrasi yang diabsorpsi: C terabsorpsi = C 0 - C supernatan C terabsorpsi = 1-0,7785 mm C terabsorpsi = 0,2215 mm
Lampiran 15. Contoh perhitungan Standar Deviasi No x x-x (x-x) 2 1 0,2700 0,0463 0,00214369 2 0,1995-0,0242 0,00058564 3 0,2017-0,022 0,00048400 Σx = 0,6711 x = 0,2237 Σ(x-x) 2 = 0,00321333 Untuk menghitung standar deviasi digunakan persamaan : SD = SD = ( x x) n 1 2 0,00321333 3 1 SD = 0,0398
Lampiran 16. Gambar usus halus kelinci usus halus Es batu Usus halus yang telah dipotong kecil-kecil
Lampiran 17. Gambar Alat Homogenizer Mixer Modifikasi dan usus halus homogen Alat Homogenizer Mixer (Modifikasi) Usus halus yang dihomogenkan Es batu
Lampiran 18. Hasil uji T-Test profil laju absorpsi parasetamol dalam usus halus kelinci yang dihomogenkan H 0 : Tidak ada perbedaan laju absorpsi parasetamol dengan parasetamol dengan penambahan aspirin dalam usus halus kelinci yang dihomogenkan H 1 : Ada perbedaan laju absorpsi parsetamol dengan parasetamol dengan penambahan aspirin dalam usus halus kelinci yang dihomogenkan Group Statistics Std. Error Jenis N Mean Std. Deviation Mean Konsentrasi_1 Paracetamol 3.536900.2642245.1525501 Paracetamol+Aspirin 3.364433.1723154.0994863 Konsentrasi_2 Paracetamol 3 1.339167E0.0669664.0386631 Paracetamol+Aspirin 3 1.200667E0.0059138.0034143 Konsentrasi_3 Paracetamol 3 2.267533E0.2420864.1397687 Paracetamol+Aspirin 3 2.077233E0.1537012.0887394 Konsentrasi_5 Paracetamol 3 2.473100E0.3364901.1942726 Paracetamol+Aspirin 3 2.295033E0.2255652.1302301 Konsentrasi_10 Paracetamol 3 2.534233E0.3033499.1751391 Paracetamol+Aspirin 3 2.355600E0.2197610.1268791
Independent Samples Test Konsentrasi_1 Konsentrasi_2 Konsentrasi_3 Konsentrasi_5 Equal variances assumed Equal variances not assumed Equal variances assumed Equal variances not assumed Equal variances assumed Equal variances not assumed Equal variances assumed Equal variances not assumed Konsentrasi_10 Equal variances assumed Equal variances not assumed Levene's Test for Equality of Variances F Sig. t df Sig. (2- tailed) t-test for Equality of Means Mean Differenc e Std. Error Difference 95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper.515.513.947 4.000.1724667.1821237 -.3331899.6781232.947 3.441.000.1724667.1821237 -.3673210.7122543 7.535.052 3.568 4.000.1385000.0388136.030736 3.2462637 3.568 2.031.000.1385000.0388136 -.0260675.3030675 1.145.345 1.149 4.000.1903000.1655596 -.2693670.6499670 1.149 3.387.000.1903000.1655596 -.3041095.6847095.863.405.761 4.000.1780667.2338840 -.4712995.8274328.761 3.495.000.1780667.2338840 -.5099872.8661205.455.537.826 4.002.1786333.2162684 -.4218240.7790906.826 3.646.002.1786333.2162684 -.4455349.8028016
Uji Independent T-Test laju absorpsi parasetamol: T tabel : T 0,05 = 3,182 T hitung > T tabel = H 0 ditolak dan H 1 diterima. Jadi, ada perbedaan laju absorpsi parsetamol dengan parasetamol dengan penambahan aspirin dalam usus halus kelinci yang dihomogenkan.
Lampiran 19. Tabel Nilai Kritis Distribusi t