III. HASIL DAN PEMBAHASAN 3.1 Hsil 3.1.1 Uji In Vitro Cmpurn menirn-wng putih menunjukkn zon hmt terik pd kominsi dosis 20+25 g/l yitu seesr 12,33 mm (Tel 2). Berdsrkn nlisis sttistik, mpurn menirn-wng putih dosis 20+25 g/l menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) dengn dosis linny. Tel 2. Dimeter zon hmt (mm) hsil uji in vitro yng dilkukn terhdp Virio lginolytius menggunkn ekstrk menirn-wng putih dlm eerp kominsi dosis Dosis Ulngn ke- Kode Menirn+ Bwng Putih Rt-rt 1 2 3 (g/l) A 15+20 7 7 7,6 7,20 B 15+25 8 8 8,5 8,17 C 20+20 7 7,5 7,8 7,43 D 20+25 12 13 12 12,33 d E 25+20 10 11 10 10,33 Keterngn: huruf supersript yng ered menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) Zon hmt yng dientuk dri ergi kominsi dosis mpurn menirn+wng putih yng diujikn (Tel 2) menunjukkn zon hmt yng ered-ed. Zon hmt teresr terdpt pd kode D yitu dosis menirnwng putih 20+25 g/l (Gmr 2). 5 mm A 5 mm B 5 mm C 5 mm 5 mm D Gmr 2. Zon hmt hsil uji in vitro yng dilkukn terhdp Virio lginolytius menggunkn ekstrk menirn-wng putih dlm eerp kominsi dosis 14 E
3.1.2 Uji In Vivo 3.1.2.1 Respon Mkn Ikn terhdp Pkn Respon mkn ikn terhdp pkn terliht menglmi peningktn yng stil dn ukup sergm pd 14 hri seelum uji tntng untuk semu perlkun. Setelh uji tntng, respon mkn ikn menglmi penurunn yng ukup signifikn dindingkn 14 hri seelum uji tntng dilkukn. Wlupun demikin, respon mkn ikn kemli meningkt untuk semu perlkun dengn respon mkn ikn tertinggi setelh uji tntng terdpt pd kontrol negtif. Sementr itu, perlkun peneghn menunjukkn pol respon mkn yng sm dengn perlkun kontrol negtif sedngkn respon mkn terendh terdpt pd kontrol positif (Gmr 3). Seelum uji tntng Setelh uji tntng Keterngn: H0 ikn tidk dieri mkn Gmr 3. Respon mkn ikn terhdp pkn selm pemelihrn enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn 3.1.2.2 Lju Pertumuhn Hrin Lju pertumuhn hrin ikn uji terik terdpt pd perlkun kontrol negtif dengn lju pertumuhn hrin seesr 0,69%. Perlkun peneghn menunjukkn lju pertumuhn hrin ikn seesr 0,66%, sedngkn pd perlkun pengotn lju pertumuhn hrinny seesr 0,65% dn pd kontrol negtif seesr 0,64% (Gmr 4). Berdsrkn nlisis sttistik 15
(Lmpirn 7), lju pertumuhn hrin semu perlkun tidk ered nyt (P>0,05). Keterngn: huruf yng ered menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) Gmr 4. Lju pertumuhn hrin selm pemelihrn enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn. 3.1.2.3 Kelngsungn Hidup Grfik pol kelngsungn hidup hrin menglmi peruhn yng signifikn setelh uji tntng dilkukn. Pol kelngsungn hidup hrin ntr perlkun menunjukkn peruhn yng muli terjdi pd H2 hingg H5 (Gmr 5). Pd khir perlkun H7 kelngsungn hidup tertinggi terdpt pd kontrol negtif yitu 100±0%. Pd perlkun peneghn kelngsungn hidup ikn menpi 83,33±16,67%, sedngkn pd perlkun pengotn menpi 61,11±9,62%, sementr pd kontrol positif kelngsungn hidupny pling rendh yitu 38,89±9,62% (Gmr 6). Berdsrkn nlisis sttistik nili kelngsungn hidup pd H7 (Lmpirn 8), kelngsungn hidup perlkun kontrol negtif dn peneghn tidk ered nyt (P>0,05), kontrol positif dn pengotn sling ered nyt (P<0,05) egitupun keduny terhdp perlkun lin. 16
Seelum uji tntng Setelh uji tntng Gmr 5. Pol kelngsungn hidup hrin ikn selm pemelihrn enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn. Keterngn: huruf yng ered menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) Gmr 6. Kelngsungn hidup ikn pd khir pemelihrn enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn. 3.1.2.4 Prmeter Hemtologi 3.1.2.4.1 Aktifits Fgositosis Aktifits fgositosis setelh uji tntng meningkt pd H1 dn H4 untuk perlkun kontrol positif, pengotn dn terutm pd perlkun peneghn yitu seesr 44±1,41% pd H1 menjdi 50±1,41% pd H4. Pd kontrol negtif ktifits fgositosis enderung stil dn pd H7 ktifits fgositosis menglmi penurunn untuk semu perlkun (Gmr 7). Berdsrkn nlisis sttistik (Lmpirn 9), pd H-2 dn H1 ktifits fgositosis perlkun peneghn ered nyt (P<0,05) dengn perlkun lin, tetpi ntr perlkun 17
kontrol negtif, positif dn pengotn tidk ered nyt (P>0,05). Pd H4 dn H7 ktifits fgositosis perlkun kontrol positif dn pengotn tidk ered nyt (P>0,05) tetpi keduny ered nyt (P<0,05) dengn perlkun linny sedngkn, kontrol negtif dn peneghn ered nyt (P<0,05) dn keduny jug ered nyt dengn perlkun linny. Keterngn: huruf yng ered menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) Gmr 7. Aktifits fgositosis dlm drh enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn pd H-2 seelum uji tntng dn pd H1, H4 dn H7 setelh uji tntng. 3.1.2.4.2 Sel Drh Putih (Leukosit) Jumlh leukosit semu perlkun pd H-2 erkisr ntr (1,22-1,50)x10 5 sel/mm 3. Setelh uji tntng terjdi peningktn jumlh leukosit yng ukup signifikn pd perlkun kontrol positif, peneghn dn pengotn. Pd perlkun kontrol negtif jumlh leukosit enderung stil hingg khir pemelihrn. Jumlh leukosit tertinggi terdpt pd H4 dimn nili tertinggi terdpt pd perlkun peneghn seesr 4,90±0,09 x 10 5 sel/mm 3. Pd H7 jumlh leukosit perlkun peneghn dn pengotn menglmi penurunn, tetpi pd kontrol positif jumlh leukosit msih tinggi yitu 4,08±0,17 x 10 5 sel/mm 3 (Gmr 8). Berdsrkn nlisis sttistik (Lmpirn 10), pd H-2 jumlh leukosit perlkun peneghn ered nyt (P<0,05) dengn perlkun lin, tetpi ntr perlkun kontrol negtif, positif dn pengotn tidk ered nyt (P>0,05). Pd H1 jumlh leukosit 18
perlkun kontrol positif dn pengotn tidk ered nyt (P>0,05) tetpi keduny ered nyt (P<0,05) dengn perlkun linny sedngkn, kontrol negtif dn peneghn ered nyt (P<0,05) dn keduny jug ered nyt dengn perlkun linny. Pd H4 dn H7 semu perlkun menunjukkn hsil yng sling ered nyt (P<0,05). d d Keterngn: huruf yng ered menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) Gmr 8. Jumlh sel drh putih (leukosit) enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn pd H-2 seelum uji tntng dn pd H1, H4 dn H7 setelh uji tntng. 3.1.2.4.3 Sel Drh Merh (Eritrosit) Jumlh eritrosit ikn uji seelum uji tntng pd perlkun kontrol negtif, positif dn pengotn hmpir sm, tetpi pd perlkun peneghn jumlh eritrositny leih tinggi dindingkn perlkun yng linny yitu 2,74±0,16 x 10 6 sel/mm 3. Setelh uji tntng, jumlh eritrosit kontrol negtif enderung stil dindingkn perlkun lin yng menglmi penurunn. Penurunn jumlh eritrosit terendh terdpt pd H4 pd perlkun kontrol positif yitu 0,70±0,08 x 10 6 sel/mm 3. Pd H7 jumlh eritrosit semu perlkun menglmi peningktn kemli (Gmr 9). Berdsrkn nlisis sttistik (Lmpirn 11), pd H-2 dn H1 jumlh eritrosit perlkun peneghn ered nyt (P<0,05) dengn perlkun lin, tetpi ntr perlkun kontrol negtif, positif dn pengotn tidk ered nyt (P>0,05). Pd H4 dn H7 semu perlkun menunjukkn hsil yng sling ered nyt (P<0,05). 19
d d Keterngn: huruf yng ered menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) Gmr 9. Jumlh sel drh merh (eritrosit) enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn pd H-2 seelum uji tntng dn pd H1, H4 dn H7 setelh uji tntng. 3.1.2.4.4 Kdr Hemtokrit Kdr hemtokrit perlkun kontrol negtif enderung stil hingg khir pemelihrn dindingkn dengn perlkun linny yng enderung menglmi penurunn setelh uji tntng dilkukn terutm pd H4. Kdr hemtokrit perlkun kontrol positif, peneghn dn pengotn menglmi penurunn yng ukup signifikn pd H4, dimn nili terendh terdpt pd perlkun kontrol positif yitu seesr 20,81±0,03%. Pd H7 kdr hemtrokrit perlkun yng wlny menglmi penurunn kemli meningkt (Gmr 10). Berdsrkn nlisis sttistik (Lmpirn 12), pd H-2 kdr hemtokrit semu perlkun tidk ered nyt (P>0,05). Pd H1 kdr hemtokrit perlkun kontrol negtif dn pengotn tidk ered nyt (P>0,05) dn keduny jug tidk ered nyt terhdp perlkun lin, tetpi kontrol positif dn peneghn ered nyt (P<0,05) dn keduny jug ered nyt dengn perlkun linny. Pd H4 kdr hemtokrit perlkun kontrol positif dn pengotn tidk ered nyt (P>0,05) tetpi keduny ered nyt (P<0,05) dengn perlkun linny sedngkn, kontrol negtif dn peneghn ered nyt (P<0,05) dn keduny jug ered nyt dengn perlkun linny. Pd H7 perlkun kontrol negtif, 20
peneghn, dn pengotn tidk ered nyt (P>0,05) tetpi pd perlkun kontrol positif ered nyt terhdp perlkun linny. Keterngn: huruf yng ered menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) Gmr 10. Kdr hemtokrit dlm drh enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn pd H-2 seelum uji tntng dn pd H1, H4 dn H7 setelh uji tntng. 3.1.2.4.5 Kdr Hemogloin Kdr hemogloin perlkun kontrol negtif enderung stil hingg khir pemelihrn dindingkn dengn perlkun linny yng enderung menglmi penurunn setelh uji tntng dilkukn terutm pd H4. Kdr hemogloin perlkun kontrol positif, peneghn dn pengotn menglmi penurunn yng ukup signifikn pd H4, dimn nili terendh terdpt pd perlkun kontrol positif yitu seesr 3,7±0,14%. Pd H7 kdr hemogloin perlkun yng wlny menglmi penurunn kemli meningkt (Gmr 11). Berdsrkn nlisis sttistik (Lmpirn 13), kdr hemogloin pd H-2 dn H1 perlkun kontrol negtif, positif dn pengotn menunjukkn hsil yng tidk ered nyt (P>0,05) sedngkn peneghn ered nyt (P<0,05) dengn kontrol positif dn pengotn tetpi, tidk ered nyt dengn kontrol negtif. Pd H4 kontrol positif dn pengotn tidk ered nyt (P>0,05) tetpi keduny ered nyt (P<0,05) dengn perlkun linny sedngkn, kontrol negtif dn peneghn ered nyt (P<0,05) dn keduny jug ered nyt dengn perlkun linny. Pd H7 kontrol negtif dn peneghn tidk ered nyt (P>0,05) tetpi keduny ered nyt (P<0,05) dengn perlkun linny 21
sedngkn, kontrol positif dn pengotn ered nyt (P<0,05) dn keduny jug ered nyt dengn perlkun linny. Keterngn: huruf yng ered menunjukkn hsil yng ered nyt (P<0,05) Gmr 11. Kdr hemogloin dlm drh enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn pd H-2 seelum uji tntng dn pd H1, H4 dn H7 setelh uji tntng. 3.1.2.5 Pengmtn Orgn Dlm Ikn uji setip perlkun yng erthn hidup pd khir msing-msing perlkun menunjukkn peruhn morfologi dn wrn dri orgn dlm. Morfologi dn wrn dri orgn dlm msing-msing perlkun d yng norml dn menunjukkn peruhn seperti ukurn orgn yng menjdi keil dn engkk sert wrn orgn yng menjdi put (Tel 3). 22
Tel 3. Kondisi orgn dlm enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) yng diedh pd khir ms pemelihrn perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn Orgn dlm Ginjl (G) Peruhn morfologi dn wrn Kontrol negtif Kontrol positif Peneghn Pengotn Bentuk sedikit Bentuk norml Bentuk norml Bentuk norml engkk Wrn merh Wrn put Wrn merh Wrn merh keokltn merh mud mud G G G G Hti (H) Bentuk norml Wrn merh keokltn Bentuk keil Wrn put merh mud Bentuk norml Wrn merh keokltn Bentuk meler dn tipis Wrn merh keokltn digin tepi menghitm H H H H Usus (U) Bentuk norml Wrn merh mud Bentuk keil Wrn put terdpt irn kuning Bentuk norml Wrn merh mud Bentuk norml Wrn merh mud U U U U Gelemung Renng (GR) Bentuk norml Wrn putih trnsprn Bentuk norml Wrn putih trnsprn Bentuk norml Wrn putih trnsprn Bentuk leih esr Wrn putih trnsprn GR GR GR GR 23
3.1.2.6 Kulits Air Stndr ku mutu kulits ir untuk pemelihrn ikn kerpu mn pd penelitin ini mengu pd stndr ku yng dikelurkn Kementrin Lingkungn Hidup dlm Kep. Menneg. Lingkungn Hidup No. 52/2004. 3.1.2.6.1 Oksigen Terlrut Kdr oksigen terlrut pd wl perlkun erkisr ntr 4,55-4,85 mg/l, tengh 4,45-5 mg/l dn khir perlkun 5,05-5,8 mg/l (Gmr 12). Stndr ku oksigen terlrut untuk pemelihrn ikn kerpu mn yitu >5 mg/l. Gmr 12. Kdr oksigen terlrut pd wdh pemelihrn enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn pd wl, tengh dn khir perlkun 3.1.2.6.2 Amonik Kdr monik pd wl perlkun erkisr ntr 0,03-0,09 mg/l, tengh 0,02-0,03 mg/l dn khir perlkun 0,03-0,04 mg/l (Gmr 13). Stndr ku kdr monik untuk pemelihrn ikn kerpu mn yitu <0,3 mg/l. Gmr 13. Kdr monik pd wdh pemelihrn enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn pd wl, tengh dn khir perlkun 24
3.1.2.6.3 ph Kdr ph pd wl perlkun erkisr ntr 7,96-8,27, tengh 7,76-8,07 dn khir perlkun 7,93-8,09 (Gmr 14). Stndr ku kdr ph untuk pemelihrn ikn kerpu mn yitu 7-8,5. Gmr 14. Kdr ph pd wdh pemelihrn enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn pd wl, tengh dn khir perlkun 3.1.2.6.4 Slinits Stndr ku kdr slinits untuk pemelihrn ikn kerpu mn yitu 33 mg/l. Pd penelitin ini kdr slinits pd wdh pemelihrn menglmi peruhn yng ukup signifikn dri wl hingg khir perlkun dengn kdr slinits tertinggi menpi 36 mg/l yng terjdi pd H0 perlkun (Gmr 15). Gmr 15. Kdr slinits pd wdh pemelihrn enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn setip 4 hri sekli selm ms pemelihrn 3.1.2.6.5 Suhu Stndr ku suhu untuk pemelihrn ikn kerpu mn erkisr ntr 28-30 C. Pd penelitin ini suhu pd wdh pemelihrn menglmi peruhn yng ukup signifikn ntr pgi, sing dn mlm. Suhu tertinggi menpi 34 C yng terjdi pd H8 st sing hri perlkun (Gmr 16). 25
Gmr 16. Suhu pd wdh pemelihrn enih ikn kerpu mn (Epinephelus fusogutttus) perlkun kontrol negtif, positif, peneghn dn pengotn setip pgi, sing dn mlm hri 3.2 Pemhsn Identifiksi ulng terhdp isolt kteri yng digunkn segi kteri uji dilkukn untuk memstikn tidk dny kontminn pd isolt kteri yng digunkn. Hsil identifiksi kteri uji menunjukkn krkterissi fisiologi dn iokimi isolt kteri yng ersl dri Bli Budidy Air Pyu Situondo, Jw Timur yng dijdikn kteri uji memiliki krkter yng sm dengn Virio lginolytius yitu sm-sm memiliki sift Grm negtif yitu erwrn merh mud dn erentuk tng tunggl pd hsil pewrnn Grm, ersift fermenttif yng ditunjukkn dengn eruhny wrn medi dengn dn tnp prfin dri hiju menjdi kuning dn ersift motil pd uji motilits yng ditunjukkn dengn tumuhny kteri pd permukn medi. Selin itu, menunjukkn hsil positif pd uji ktlse yng ditunjukkn dengn dny gelemung udr pd tetesn H 2 O 2 3% dn positif pd uji oksidse ditunjukkn dengn eruhny wrn kerts krm yng erwrn ungu st ditetesi p-minodimethylniline oxlte menjdi merh st kteri dioleskn pd kerts krm terseut. Setelh hsil identifiksi menunjukkn persmn sift fisiologi dn iokimi dengn V. lginolytius, kteri inilh yng kn digunkn pd uji-uji erikutny dlm penelitin ini. Penentun nili LD 50 dilkukn untuk mengethui konsentrsi kteri yng digunkn pd uji tntng. Setelh pengmtn dengn menghitung jumlh ikn yng msih hidup dn yng mti smpi hri ke-7 dilkukn penghitungn sesui rumus untuk mengethui nili LD 50 -ny (Lmpirn 3). Mellui uji ini dikethui kteri V. lginolytius yng menjdi stok dpt menyekn kemtin seesr 26
50% dri populsi ikn terdpt pd konsentrsi kteri 10 4 fu/ml. Hl ini dpt diliht pd Lmpirn 3 yng menunjukkn jumlh ikn yng mti st diinfeksi V. lginolytius dengn konsentrsi 10 5, 10 4 dn 10 3 fu/ml sert perhitungn nili LD 50 ny sehingg didptkn V. lginolytius dengn konsentrsi 10 4 fu/ml yng kn digunkn dlm uji tntng selnjutny. Konsentrsi kteri 10 4 pd hsil pengujin LD 50 ini jug diperoleh pd penelitin Herfini (2011) yng menginfeksikn V. lginolytius pd enih kerpu mn ukurn 9-10 m. Pengujin in vitro dengn metode Kiry Buer (Ly, 1994) dilkukn untuk meliht ktifits ntikteri dri mpurn menirn-wng putih dlm menghmt pertumuhn kteri V. lginolytius dengn kepdtn 10 4 fu/ml yng diser pd medi gr plte SWC. Beerp dosis mpurn menirn+wng putih yng diujikn ntr lin 15+20, 15+25, 20+20, 25+20 dn 20+25 g/l. Kominsi dosis menirn-wng putih yng diujikn memerikn zon hmt yng ered-ed dn semkin tinggi dosis elum tentu memerikn zon hmt yng esr pul (Tel 2), didug pd dosis yng tinggi hn ktif dri menirn-wng putih sling menekn fungsi dri msingmsing hn ktif itu sendiri sehingg tidk dpt ekerj ser mksiml. St du jenis tu leih tnmn dimpurkn dpt menimulkn sift sinergis tu ntgonis dri tnmn itu sendiri (Cotton, 1997 dlm Angk, 2005). Hsil pengujin in vitro ini menunjukkn zon hmt terik terdpt pd dosis 20+25 g/l yitu seesr 12,33 mm. Zon hmt yng terentuk kren dny kepekn kteri terhdp hn yng digunkn (Belguith et l., 2010). Zon hmt yng dientuk menirn dn wng putih st diujikn pd kteri lin pd eerp penelitin seelumny yng jug menggunkn metode Kiry Buer menunjukkn hsil yng ered-ed (Tel 4). Peredn zon hmt yng terentuk dikrenkn dosis menirn dn wng putih yng digunkn jug ered-ed. Dosis yng tinggi elum tentu kn memerikn zon hmt yng esr pul. Hl ini dikrenkn msing-msing kteri memiliki respon yng ered-ed terhdp senyw ntikteri yng dierikn ergntung pd sift dn morfologi kteri itu sendiri, slh stuny dlh struktur dinding sel msing-msing kteri (Rinwti, 2011). 27
Tel 4. Perndingn zon hmt yng dihsilkn ekstrk menirn-wng putih dlm menghmt pertumuhn kteri uji pd uji in vitro Dosis Menirn+Bwng Putih Bkteri Uji Zon Hmt 5 + 20 g/l (Ayuningtys, 2008) Aeromons hydrophil 15 mm 15 + 20 g/l (Fuzih, 2012) Streptoous gltie 18,3 mm 20 + 25 g/l (Penelitin ini) Virio lginolytius 12,33 mm Pd wng putih terdpt zt ntikteri yng ersl dri senyw lliin. Menurut Plungkun dn Budirti (1998) lliin merupkn komponen yng memeri u khs pd wng putih dn memiliki ktifits ntikteri pd kteri Grm negtif mupun positif. Alliin ini kn terentuk jik terjdi keruskn meknik pd wng putih yng menyekn enzim lliin-lyse menguh lliin menjdi lliin (Curtis et l., 2004). Durirj et l. (2009) menytkn hw lliin dpt menghmt sintesis RNA dn lipid. Jik sintesis RNA terhmt mk tidk kn d messenger RNA, riosoml RNA dn trnsfer RNA. Hl ini kn erkit pd terhmtny sintesis protein sehingg struktur sel kteri kn tergnggu kren sm mino dn protein tidk terentuk. Selin itu, tergngguny sintesis lipid menyekn phospholipid iolyer pd dinding sel tidk dpt terentuk sempurn pd kteri Grm negtif mupun positif. Hl terseut tentuny kn menghmt pertumuhn kteri kren itulh lliin dpt erpern segi senyw ntikteri. Pd dun menirn didug senyw potensil yng erpern segi ntimikro dlh flvonoid, dismping itu senyw ini jug erpern segi imunostimuln, ntioksidn, ntikrsinogen, heptoprotektor dn ntilergi (Sir dn Roh, 2008). Selin itu, pd menirn jug terdpt senyw lignn, senyw terpen, enzoid, lkloid, steroid, lnes, tnin dn linny (Krdinn dn Kusum, 2004). Slh stu prmeter yng dimti pd pengujin in vivo yng dilkukn pd penelitin ini dlh respon mkn ikn terhdp pkn yng dierikn. Respon mkn ikn terhdp pkn yng dierikn dihitung setip hri dengn memndingkn jumlh pkn yng dikonsumsi dengn oot iomss ikn seelum dn sesudh uji tntng dilkukn. Berdsrkn grfik pd Gmr 3 28
respon mkn terliht menglmi peningktn yng stil dn ukup sergm pd 14 hri seelum uji tntng untuk semu perlkun. Setelh uji tntng, respon mkn ikn menglmi penurunn yng ukup signifikn dindingkn 14 hri seelum uji tntng dilkukn. Hl ini jug terjdi pd perlkun kontrol negtif yng hny diinjeksikn PBS. Penurunn respon mkn pd perlkun kontrol negtif ini didug kren ikn menglmi stres kit penyuntikn. Menurut Ghufrn dn Kordi (2004), stres menyekn ikn shok, tidk mu mkn, knilisme dn meningktkn kepekn terhdp penykit. Penurunn respon mkn yng terjdi pd perlkun kontrol positif, peneghn dn pengotn didug kren uji tntng yng dilkukn dengn menginjeksikn kteri V. lginolytius pd ikn uji. Menurut Koeshryni et l. (2001) ikn yng terserng kteri ini memiliki gejl wl yitu menurunny nfsu mkn. Wlupun egitu, dri grfik terseut dpt diliht respon mkn ikn yng kemli meningkt untuk semu perlkun. Nmun, respon mkn ikn tertinggi setelh uji tntng terdpt pd kontrol negtif dn perlkun peneghn yng terliht dri terentukny pol respon mkn yng sm, sedngkn respon mkn terendh terdpt pd kontrol positif. Pd kontrol positif uji tntng yng dilkukn tidk hny menurukn nfsu mkn sj, tetpi jug menyekn ikn skit hkn menglmi kemtin. Penykit yng dikitkn V. lginolytius memperlihtkn gejl klinis seperti orok pd pngkl sirip ekor, sirip yng usuk dn mulut merh sert menyekn kemtin dengn tingkt mortlitsny (kemtin) dpt menpi 20-30% (Koeshryni et l., 2001). Pemerin pkn komersil dn pkn uji (pkn peneghn mupun pengotn) pd penelitin ini tidk menggnggu lju pertumuhn hrin ikn uji msing-msing perlkun wlupun dlm pkn peneghn dn pengotn terdpt mpurn menirn-wng putih. Hl ini dpt diliht pd Gmr 4 yng menunjukkn hsil yng tidk ered nyt. Lju pertumuhn hrin pd penelitin ini tergolong lmt hny erkisr 0,64-0,69%. Nmun, nili ini leih ik jik dindingkn dengn penelitin Adillh (2010), yitu lju pertumuhn hrin ikn kerpu mn yng hny 0,44% dimn ikn dipelihr pd kerm jring tnp selm 4 minggu. 29
Setelh uji tntng dilkukn, ikn uji pd perlkun kontrol positif, peneghn dn pengotn muli menunjukkn gejl klinis hkn kemtin. Gejl klinis yng ditunjukkn erup hemorgi pd rhng mulut gin wh, orok pd gin tuuh, dn sirip yng geripis (Gmr 17). Menurut Koeshryni et l. (2001) V. lginolytius menyekn gejl klinis seperti orok pd pngkl sirip ekor, sirip yng usuk dn mulut merh sert menyekn kemtin. Pd penelitin Herfini (2011) ikn yng diinfeksi dengn kteri ini menunjukkn gejl hemorgi pd rhng wh dn seluruh tuuh, perut engkk, hti esr put, ginjl engkk, dn gelemung renng memesr. d Gmr 17. Gejl klinis (dieri tnd lingkrn kuning) yng munul pd enih ikn kerpu mn setelh diuji tntng dengn kteri Virio lginolytius ;. Hemorgi pd sirip pektorl dn rhng wh mulut,. Borok pd sirip pektorl,. Borok pd pngkl sirip udl dn hemorgi pd rhng wh mulut, d. Borok pd gin tuuh dn pngkl sirip udl, e. Sirip usuk pd dorsl, nl dn udl. Ikn uji yng sudh menglmi gejl klinis terseut (Gmr 17) isny kn menglmi kemtin. Toksin yng dikelurkn V. lginolytius e 30
segi produk ekstrseluler dlh hemolysin yng dpt merusk sel drh merh hingg peh dn kelur dri pemuluh drh yng memut jringn kulit pd mulut dn sirip seperti luk kemerhn (Sudheesh dn Xu, 2001). Hl ini tentuny kn mempengruhi nili kelngsungn hidup dri msing-msing perlkun. Nili kelngsungn hidup pd semu perlkun seelum uji tntng yitu 100% tetpi setelh uji tntng dilkukn, terjdi peruhn yng ukup signifikn pd H2 hingg H5 pd perlkun peneghn dn pengotn terutm pd perlkun kontrol positif. Pd khir perlkun yitu H7 nili kelngsungn hidup terendh terdpt pd perlkun kontrol positif yitu hny 38,89±9,62%. Pd kontrol positif ikn uji yng mti menglmi gejl klinis seperti pd Gmr 17. Pd kontrol negtif kelngsungn hidupny yitu 100±0% dimn ikn uji tidk menunjukkn gejl klinis ppun kren pd kontrol negtif ikn hny diinjeksi dengn PBS. Pd perlkun peneghn kelngsungn hidup ikn menpi 83,33±16,67%, nili yng ukup tinggi ini didug kren pd perlkun ini ikn dieri pkn yng mengndung mpurn menirn+wng putih dengn dosis 20+25 g/kg pkn (dosis peneghn) selm 14 hri seelum uji tntng dilkukn. Seelumny telh diseutkn hw menirn dn wng putih ini mengndung senyw flvonoid dn lliin yng ertindk segi zt ntikteri kren itulh nili kelngsungn hidup perlkun peneghn ukup tinggi. Menurut Krdinn dn Kusum (2004) flvonoid dpt memerikn rngsngn untuk mengktifkn kerj sel imun gr leih ik sehingg kn meningktkn kekeln tuuh dlm memperthnkn diri dri serngn kteri. Bered dengn perlkun peneghn, pd perlkun pengotn nili kelngsungn hidupny tidk terllu tinggi hny 61,11±9,62%, pdhl pkn dengn mpurn menirn+wng putih dengn dosis 40+50 g/kg pkn (dosis pengotn) dierikn pd ikn setelh uji tntng dilkukn. Menurut Angk (2005), dosis pengotn dlh du kli lipt dri dosis peneghn. Pemerin pkn pengotn ini msih dpt digunkn pd thp pengotn ikn yng telh terinfeksi V. lginolytius jik diliht dri nili kelngsungn hidup ikn yng memerikn hsil ered nyt terhdp kontrol positif (Gmr 6). Nmun, nili yng tidk terllu tinggi ini didug kren nfsu mkn ikn yng turun sehingg pkn kurng dimnftkn ser mksiml 31
segi pengotn untuk ikn yng telh terinfeksi kteri V. lginolytius. Menurunny nfsu mkn ikn merupkn slh stu gejl wl ikn terserng kteri ini (Koeshryni et l., 2001). Respon pkn pd perlkun pengotn ini dpt diliht pd grfik Gmr 3 yitu respon pknny tidk seik perlkun peneghn sehingg mnft mpurn menirn-wng putih memerikn hsil yng kurng mksiml dlm hl kelngsungn hidup ikn setelh diuji tntng dengn V. lginolytius. Nmun, pil dindingkn dengn hsil penelitin Setyotomo (2011) yng menggunkn menirn-wng putih pd thp pengotn pd ikn lele yng diinfeksi dengn Aeromons hydrophil yng menunjukkn nili kelngsungn hidup seesr 46,67%, pengotn dengn dosis menirn-wng putih 40+50 gr/kg pkn untuk mengoti infeksi V. lginolytius ini memerikn hsil yng leih ik. Prmeter hemtologi pd ikn uji msing-msing perlkun dimti untuk meliht kondisi kesehtn ikn. Menurut Stoskopf (1993) hemtologi sngt erhuungn dengn kesehtn ikn untuk mengethui ikn yng skit dn yng seht. Prmeter hemtologi yng dimti pd penelitin ini yitu ktifits fgositosis, jumlh leukosit, jumlh eritrosit, kdr hemtokrit dn kdr hemogloin. Aktifits fgositosis erhuungn dengn proses fgositosis yng dilkukn oleh leukosit ikn. Fgositosis merupkn perthnn pertm dri respon seluler yng dilkukn monosit (mkrofg) dn neutrofil (grnulosit) yng merupkn gin dri leukosit. Proses fgositosis terdiri dri thp kemotksis, thp pelektn, penelnn dn thp penernn (Tizrd, 1988). Aktifits fgositosis ikn setelh uji tntng meningkt pd H1 dn H4 untuk perlkun kontrol positif, pengotn dn terutm pd perlkun peneghn yitu seesr 44±1,41% pd H1 menjdi 50±1,41% pd H4. Aktifits fgositosis ini meningkt setelh uji tntng kren erhuungn dengn jumlh leukosit yng jug meningkt (Gmr 7). Jumlh leukosit semu perlkun pd H-2 erkisr ntr (1,22-1,50)x10 5 sel/mm 3. Setelh uji tntng terjdi peningktn jumlh leukosit yng ukup signifikn pd perlkun kontrol positif, peneghn dn pengotn. Peningktn jumlh leukosit dn ktifits fgositosis setelh uji tntng kren proses perthnn diri ikn dri infeksi kteri V. lginolytius. Menurut Mrtins et l. (2008) jumlh leukosit pd ikn yng diinjeksi kteri 32
ptogen menglmi peningktn segi upy meningktkn perthnn tuuhny terhdp kteri terseut. Selin itu, imunostimuln yng d pd menirn dn zt ntikteri pd wng putih jug mempengruhi prmeter ini. Menirn memerikn efek pd respon non-spesifik erup peningktn fgositosis, kemotksis mkrofg, kemotksis neutrofil dn meningktkn prolifersi sel limfosit T (Brour et l., 2004). Pd kontrol negtif ktifits fgositosis enderung stil dn pd H7 ktifits fgositosis menglmi penurunn untuk semu perlkun. Penurunn ktifits fgositosis pd H7 ini jug diikuti penurunn jumlh leukosit. Hl ini didug kren infeksi kteri V. lginolytius semkin erkurng kit nykny kteri yng telh difgosit pd hri seelumny oleh sel fgosit. Jumlh eritrosit ikn uji seelum uji tntng pd perlkun kontrol negtif, positif dn pengotn hmpir sm, tetpi pd perlkun peneghn jumlh eritrositny leih tinggi dindingkn perlkun yng linny yitu 2,74±0,16 x 10 6 sel/mm 3. Meskipun egitu jumlh eritrositny msih tergolong norml kren menurut Affndi dn Tng (2002) jumlh eritrosit ikn teleostei erkisr ntr (1,05-3,0)x10 6 sel/mm 3. Semkin tinggi jumlh eritrosit dlm drh ikn mk semkin tinggi pul kemmpun drh ikn dlm mengikt oksigen yng merupkn fungsi utm dri eritrosit (Affndi dn Tng, 2002). Hl ini tentuny kn meningktkn sistem metolisme pd ikn uji yng kn erdmpk pd pemnftn mpurn menirn-wng putih yng terdpt pd pkn. Artiny, pemerin pkn dengn mpurn menirn-wng putih ini tidk menggnggu kesehtn ikn uji. Setelh uji tntng, jumlh eritrosit kontrol negtif enderung stil dindingkn perlkun lin yng menglmi penurunn. Penurunn jumlh eritrosit terendh terdpt pd H4 pd perlkun kontrol positif yitu 0,70±0,08 x 10 6 sel/mm 3. Menurunny jumlh eritrosit pd drh ikn dikrenkn dny infeksi kteri pd orgn ginjl ikn. Pd penelitin Herfini (2011) dri eerp isolt V. lginolytius yng diuji tntng pd kerpu mn menunjukkn pemengkkn pd orgn ginjl. Pd H7 jumlh eritrosit semu perlkun menglmi peningktn kemli. Hl ini didug kren infeksi dri kteri sudh erkurng dn tuuh ikn muli memproduksi 33
eritrosit kemli untuk menggntikn eritrosit yng menurun kit infeksi kteri. Kdr hemtokrit perlkun kontrol negtif enderung stil hingg khir pemelihrn dindingkn dengn perlkun linny yng enderung menglmi penurunn setelh uji tntng dilkukn terutm pd H4. Kdr hemtokrit perlkun kontrol positif, peneghn dn pengotn menglmi penurunn yng ukup signifikn pd H4 yitu nili terendh terdpt pd perlkun kontrol positif 20,81±0,03%. Penurunn kdr hemtokrit ini dipengruhi oleh jumlh eritrosit yng jug menurun. Didug infeksi kteri V. lginolytius yng merusk orgn ginjl menyekn turunny produksi eritrosit dlm drh ikn sehingg kdr hemtrokritny jug menurun. Selin itu, respon mkn ikn yng turun setelh dilkuknny uji tntng jug dpt menjdi penye turunny kdr hemtokrit. Menurut Blxhll (1972) kdr hemtokrit dpt digunkn untuk meliht keterukupn ikn dlm hl protein, vitmin dn tnd ikn terinfeksi kteri kren menurunny nfsu mkn. Pd H7 kdr hemtrokrit perlkun yng wlny menglmi penurunn kemli meningkt seiring dengn meningktny jumlh eritrosit. Terdpt korelsi yng kut ntr jumlh eritrosit, kdr hemtokrit dn kdr hemogloin (Fujy, 2004). Semkin rendh jumlh eritrositny mk rendh pul kdr hemtokrit dn hemogloin. Kdr hemogloin perlkun kontrol negtif enderung stil hingg khir pemelihrn dindingkn dengn perlkun linny yng enderung menglmi penurunn setelh uji tntng dilkukn terutm pd H4. Kdr hemogloin perlkun kontrol positif, peneghn dn pengotn menglmi penurunn yng ukup signifikn pd H4 yitu nili terendh terdpt pd perlkun kontrol positif 3,7±0,14%. Pd H7 kdr hemogloin perlkun yng wlny menglmi penurunn kemli meningkt. Hl ini jug erkitn dengn jumlh eritrosit dlm drh ikn seperti yng telh diseutkn Fujy (2004) hw nik tu turun kdr hemogloin ini dikrenkn jumlh eritrosit yng jug nik tu turun. Pengmtn orgn dlm pd ikn uji yng erthn hidup setelh uji tntng dilkukn pd khir ms pemelihrn yitu H7 untuk memedkn kelinn klinis yng terjdi ntr perlkun. Peruhn morfologi dn wrn 34
orgn dlm pd ikn uji kontrol negtif tidk menunjukkn dny kelinn klinis pd ikn. Ginjl dn hti erukurn norml dn erwrn merh keokltn, usus norml dn erwrn merh mud sert gelemung renng yng norml (Tel 3). Pd perlkun kontrol positif orgn dlm ikn uji menunjukkn dny kelinn klinis, yitu ginjl erwrn merh mud, hti mengeil dengn wrn merh mud yng put dn terdpt irn kuning pd usus yng jug put. Hl ini didug kren infeksi V. lginolytius yng menyerng ginjl menggnggu proses sekresi sis-sis metolisme dlm tuuh ikn sehingg toksik yng sehrusny dikelurkn dri tuuh lewt feses dn urin mengendp dlm tuuh ikn (Tel 3). Pd perlkun peneghn tidk terdpt kelinn klinis pd orgn dlm ikn uji. Hl ini didug kren sistem imun yng ik pd ikn uji kit pemerin pkn yng mengndung mpurn menirnwng putih. Menirn-wng putih yng ditelh diseutkn seelumny memiliki pern segi imunostimuln dn zt ntikteri sehingg ikn pd perlkun ini memiliki sistem perthnn tuuhny sngt ik. Pd perlkun pengotn kondisi orgn dlm ikn uji menunjukkn dny kelinn klinis pd ginjl yng sedikit memengkk dn put, terdpt penghitmn pd gin hti dn gelemung renng yng memesr. Hl ini dikrenkn respon mkn ikn yng kurng ik sehingg pemnftn mpurn menirn-wng putih tidk is mksiml dlm mennggulngi infeksi kteri V. lginolytius dn telh diseutkn seelumny kteri ini menyekn turunny nfsu mkn ikn. Pengukurn prmeter kulits ir dilkukn untuk memstikn gejl klinis dn kelinn yng terjdi pd ikn uji disekn kren dny infeksi kteri ukn kren dri fktor lingkungn seperti kulits ir yng uruk pd wdh pemelihrn. Prmeter kulits ir yng diukur dlh oksigen terlrut, Amonik, ph, slinits dn suhu. Kulits ir diukur pd wl, tengh dn khir perlkun. Khusus untuk suhu diukur setip hri pd pgi, sing dn mlm hri, sedngkn slinits diukur setip 4 hri sekli. Jik dindingkn dengn stndr ku mutu kulits ir untuk pemelihrn ikn kerpu mn yng dikelurkn Kementrin Lingkungn Hidup dlm Kep. Menneg. Lingkungn Hidup No. 52/2004 (BBL Btm, 2010), hsil pengukurn prmeter oksigen terlrut, 35
monik dn ph pd wdh pemelihrn tidk terllu juh ered dengn stndr yng telh ditetpkn. Kdr oksigen terlrut pd wl perlkun erkisr ntr 4,55-4,85 mg/l, tengh 4,45-5 mg/l dn khir perlkun 5,05-5,8 mg/l (Gmr 12). Stndr ku oksigen terlrut untuk pemelihrn ikn kerpu mn yitu >5 mg/l. Kdr monik pd wl perlkun erkisr ntr 0,03-0,09 mg/l, tengh 0,02-0,03 mg/l dn khir perlkun 0,03-0,04 mg/l (Gmr 13). Stndr ku kdr monik untuk pemelihrn ikn kerpu mn yitu <0,3 mg/l. Kdr ph pd wl perlkun erkisr ntr 7,96-8,27, tengh 7,76-8,07 dn khir perlkun 7,93-8,09 (Gmr 14). Stndr ku kdr ph untuk pemelihrn ikn kerpu mn yitu 7-8,5. Stndr ku kdr slinits untuk pemelihrn ikn kerpu mn yitu 33 mg/l. Pd penelitin ini kdr slinits pd wdh pemelihrn menglmi peruhn yng ukup signifikn dri wl hingg khir perlkun dengn kdr slinits tertinggi menpi 36 mg/l yng terjdi pd H0 perlkun (Gmr 15). Hl ini dpt terjdi kren pengupn ir kit suhu yng pns di sing hri dn pergerkn ir yng terus-menerus menglir kit sistem resirkulsi yng digunkn. Nmun, ketik slinits erd dilur kisrn stndr ku dilkukn pengenern dengn menmhkn ir twr pd wdh pemelihrn hingg slinits erd pd kisrn stndr ku kemli. Stndr ku suhu untuk pemelihrn ikn kerpu mn erkisr ntr 28-30 C. Pd penelitin ini suhu pd wdh pemelihrn menglmi peruhn yng ukup signifikn ntr pgi, sing dn mlm. Suhu tertinggi menpi 34 C yng terjdi pd H-8 st sing hri perlkun (Gmr 16). 36