MEMPELAJARI PENGGUNAAN KROMATOGRAFI KOLOM. Oleh. SOFHlANl DEW1 F 31.I700

Transkripsi

1 MEMPELAJARI PENGGUNAAN KROMATOGRAFI KOLOM UNTUK DEKLOROFILASI EKSTRAK ANTIOKSIDAN DAUN SlRlH HlJAU (Piper betle Linn.) Oleh SOFHlANl DEW1 F 31.I FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR

2 ' Dan dibumi ini terdapat bagian-bagian yang berdampingan dan kebun-kebun anggur, tanam-tanaman dan pohon kurma yang bercabang dan tidak bercabang, disiramidengan air yang sama, Kami melebihkan sebahagianfanam-tanaman itu atas sebahagian yang lain tentang rasa (dan bentuknya). ses";ngguhnya pada yang demikian itu terdapat tanda-tanda (kekuasaan AL i kaum ~ang berfikir" (Q.S. Ar-Ra'd : 4) 7 - id

3 Sofhiani Dewi. F Mempelajari Penggunaan Kromatografi Kolom untuk Deklorofilasi Ekstrak Antioksidan Daun Sirih Hijau (Piper betle Linn.). Dibawah bimbingan Nuri Andarwulan dan Anton Apriyantono. RINGKASAN Daun sirih telah diketahui mempunyai potensi untuk dikembangkan menjadi sumber antioksidan alami. Hal ini didasarkan pada beberapa penelitian yang menunjukkan bahwa ekstrak antioksidan daun sirih rnempunyai aktivitas antioksidasi yang lebih tinggi dari BHA pada konsentrasi 200 ppm (Cahyono, 1995). Akan tetapi, ekstrak ini mempunyai warna yang hijau pekat. Warna ini diduga berasal dari klorofil yang ikut terekstrak. Oleh karena itu, dalam penelitian ini dilakukan deklorofilasi (penghilangan klorofil) dari ekstrak dengan menggunakan kromatografi kolom sehingga didapat ekstrak yang tidak berwarna dan tetap mempunyai aktivitas antioksidasi yang tinggi. Penelitian terdiri dari empat tahap yaitu tahap pembuatan ekstrak antioksidan daun sirih yang terdiri dari pengeringan daun sirih dengan cabinet dryer, penepungan, pengurangan bau dengan distilasi uap yang kemudian dikeringkan dengan freeze dryer dan ekstraksi dengan etanol absolut. Tahap kedua adalah deklorofilasi dengan menggunakan Solid Phase Extraction (SPE). Kolom yang digunakan adalah Supelclean kapasitas 3 ml (Supelco), dengan panjang kolom 2 crn (panjang tabung 6.5 cm). diameter 0,9 cm dan berat fase diam 500 mg. Pada tahap ini dilakukan pemisahan dengan menggunakan tiga mode pemisahan yaitu adsorpsi dengan adsorben silika gel, pertukaran ion dengan resin penukar ion NH2dan mode pemisahan partisi dengan fase diam C-18. Tahap selanjutnya adalah optimasi pelarut terhadap mode pemisahan terbaik, berdasarkan persen fenolik tertinggi dan persen klorofil terendah pada eluat yang dihasilkan. Tahap akhir pada penelitian ini. dilakukan penentuan kapasitas ekstraksi untuk mengetahui volume ekstrak optimum yang masih dapat dilakukan pemisahan yang baik dengan menggunakan 1 g fase diam. Pengamatan dilakukan terhadap ekstrak sebelum dan sesudah deklorofilasi yang meliputi total fenolik, rendemen, total padatan, kadar klorofil a dan b, aktivitas antioksidan dan kadar Fe. Ekstrak yang diperoleh mempunyai rendemen 11.6%. total fenolik sebesar 11.8 mg/ml(49.2 mglg tepung daun sirih). total padatan 2.7% dan kadar Fe sebesar ppm, sedangkan kandungan klorofil a dan b masing-masing sebesar 263 rngll (0.7 mglg tepung daun sirih) dan 4,l mgll (0.1 rnglg tepung daun sirih). Pemisahan menggunakan mode pemisahan adsorpsi dengan adsorben silika gel menghasilkan fraksi yang berwarna hijau dan tidak berwarna. Pernisahan dengan menggunakan metilen klorida sebagai conditioning solvent, etil asetat sebagai pelarut untuk mengelusi klorofil dan aseton 80% untuk mengelusi fenolik. menghasilkan pemisahan yang tidak baik, karena pada fraksi ke- 1, 2 dan 3 berisi eluat berwarna hijau yang tinggi kandungan klorofil dan fenoliknya, sedangkan eluat pada fraksi ke-4 dan seterusnya, tidak berwarna dan mengandung komponen fenolik dan klorofil yang rendah (berdasarkan nilai absorbansi pada A 280 nm untuk fenolik dan l. 663 dan 645 nm untuk klorofil). Penggunaan metanol absolut sebagai conditioning solvent, aseton 80% sebagai pelarut untuk mengelusi klorofil dan pelarut etanol absolut untuk mengelusi fenolik, menghasilkan pemisahan yang lebih

4 baik berdasarkan nilai absorbansi. Eluat pada fraksi 1 dan 2 (pelarut aseton 80%) berwarna hijau dengan nilai absorbansi tinggi pada h 663 dan 645 nrn untuk klorofil, sedangkan pada fraksi ke 3 dan seterusnya (pelarut etanol) rnenghasilkan eluat tidak bewarna dengan nilai absorbansi tinggi pada h 280 nrn untuk fenolik, dirnana masing-masing fraksi berisi 1 rnl eluat. Pada fraksi tidak berwarna, berdasarkan uji total fenolik, total fenoliknya negatif (nol), sedangkan pada fraksi berwarna hijau terdapat fenolik sebesar 0.07 mglrnl atau sebesar 45 % dari total fenolik yang rnasuk ke kolorn. Kornponen fenolik lainnya diduga rnasih teradsorpsi pada silika gel. Penggunaan mode pernisahan pertukaran ion dilakukan dengan dua perlakuan yaitu dengan pernbasaan sarnpel dan tanpa pernbasaan sarnpel. Pembasaan sarnpel dapat mernperkuat penahanan klorofil dalarn kolorn, sehingga didapat filtrat yang tidak berwarna dari fraksi awal hingga akhir. Akan tetapi, total fenoliknya kecil sekali, sehingga tidak dapat diukur (negatif). Mode pernisahan partisi dengan fase diarn C-18 rnenghasilkan eluat yang berwarna hijau sejak fraksi pertama, ketika dielusi oleh pelarut metanol absolut. Akan tetapi, ketika digunakan etanol 75% sebagai eluen, eluat pada fraksi 1 dan 2 tidak berwarna, sedangkan eluat pada fraksi ke-3 hingga 7 berwarna kehijauan. Seluruh fraksi yang didapat disatukan dan ditepatkan rnenjadi 25 ml dengan etanol 75%. Nilai fenolik terekstrak sebesar 88,2%. sedangkan klorofil a dan b yang terekstrak. masing-masing sebesar 15% dan 100%. Hal ini rnenunjukkan bahwa mode pernisahan terbaik yang dapat digunakan untuk deklorofilasi ekstrak antioksidan daun sirih adalah mode pernisahan partisi dengan fase diarn C-18. Selanjutnya dilakukan optirnasi pelarut untuk rnendapatkan pernisahan yang lebih baik lagi. Penggunaan carnpuran 3 pelarut yaitu metanol, asetonitril dan air dengan perbandingan 40:40:20 (vlv), rnenghasilkan pernisahan yang lebih baik setelah dielusi hingga diperoleh 24 ml eluat. Klorofil rnulai keluar pada fraksi ke-8 hingga fraksi ke-15, sedangkan kornponen fenolik tinggi pada fraksi ke-1 hingga fraksi ke-4. Berdasarkan pengujian secara kuantitatif didapat fenolik terekstrak sebesar 88,7%. sedangkan klorofil a dan b terekstrak adalah 14.7% dan 100%. Penentuan kapasitas ekstraksi suatu kolom. dilakukan dengan rnenarnbahkan 0,2; 0.4 dan 0.6 rnl ekstrak antioksidan daun sirih pada kolorn yang berisi 1 g Ultron C18 (Shinwa Kakonyo Ltd.), kernudian dielusi dengan campuran rnetanol : asetonitril : air = 40 : 40 : 20 (vlv) sebanyak 25 ml. Hasil yang didapatkan rnenunjukkan bahwa 1 g Ultron C-18 (Shinwa Kakonyo Ltd.) dapat digunakan maksirnum untuk deklorofilasi ekstrak daun sirih sebanyak 0.4 rnl. Aktivitas antioksidan ekstrak daun sirih yang dihasilkan lebih tinggi dari BHA yang dinyatakan dalarn periode induksi dan faktor protektif. Periode induksi ekstrak antioksidan daun sirih sebelurn deklorofilasi adalah 92 hari, dengan faktor protektif 16,4, sedangkan BHA rnernpunyai periode induksi 48 hari dengan faktor protektif 8,6. Perlakuan deklorofilasi, dapat mernpertinggi nilai periode induksi (155 hari) dan nilai faktor protektif (27,7) atau sebesar 1.7 kali dibandingkan ekstrak sebelurn deklorofilasi. Hal ini rnenunjukkan adanya klorofil dalam ekstrak berpengaruh terhadap aktivitas antioksidan ekstrak antioksidan daun sirih.

5 MEMPELAJARI PENGGUNAAN KROMATOGRAFI KOLOM UNTUK DEKLOROFILASI EKSTRAK ANTlOKSlDAN DAUN SlRlH HIJAU (Piper betle, Linn.) Oleh SOFHlANl DEW1 F SKRlPSl Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN Pada Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi Fakultas Teknologi Pertanian lnstitut Pertanian Bogor 1998 FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23

24

25

26

27

28

29

30

31

32

33

34

35

36

37

38

39

40

41

42

43

44

45

46

47

48

49

50

51

52

53

54

55

56

57

58

59

60

61

62

63

64

65

66

67

68

69 L A M P I R A N

70

71

72

73

74

75

76

77

78