Sampel basah. Dikeringkan dan dihaluskan. Disaring

Transkripsi

1 34 Lampiran 1 Diagram alir penelitian Sampel basah Determinasi Dikeringkan dan dihaluskan Serbuk kering Kadar air & kadar abu Maserasi dengan n-heksana Disaring Diuapkan Ekstrak n-heksana Residu Maserasi dengan etilasetat Disaring Diuapkan Ekstrak etilasetat Residu Maserasi dengan metanol Disaring Diuapkan Ekstrak metanol Residu Maserasi dengan air Disaring Diuapkan Ekstrak air Residu Rendemen, total penol, uji fitokimia, uji akfivitas antioksidan & inhibitor α- glukosidase Ekstrak terbaik

2 35 Lampiran 1 (lanjutan) Ekstrak teraktif Fraksinasi dengan romatografi kolom Pemilihan eluen terbaik Fraksi A Fraksi B Fraksi C Fraksi nx Rendemen Uji fitokimia Uji aktivitas antioksidan Uji akfivitas inhibitor α-glukosidase Fraksi teraktif Fraksinasi dengan KLTP Fraksi Ax Fraksi Bx Fraksi Cx Fraksi n Rendemen Inhibitor enzimα-glukosidase Uji aktivitas antioksidan Fraksi teraktif Identifikasi senyawa (UV-VIS, IR)

3 36 Lampiran 2 Hasil determinasi tanaman andaliman

4 37 Lampiran 3 Hasil penentuan rendemen ekstrak kasar No Ekstrak Bobot awal Bobot ekstrak (g) (g) 1 n-heksan 15,3637 Kadar air (%) Rendemen (%) 1, Etil asetat 951,15 22,1139 9,59 2, Metanol 36,3187 4, Air 42,2086 4,9083 Contoh Perhitungan: Rendemen Rendemen Bobot ekstrak Bobot kering 1 kadar air X 100% 15,3637g 951,1537g 1 0,0959 X 100% Rendemen 15,3637g 859,9381 X 100% 1,7866%

5 38 Lampiran 4 Penentuan total fenol Sampel Ulangan Absorban Total fenol mg asam galat/ 100 g ekstrak 1 0,334 Ekstrak n-heksana 2 0, ,335 Rata-rata 0, ,505 Ekstrak etilasetat 2 1, ,503 Rata-rata 1, ,068 Ekstrak metanol 2 3,01 3 3,01 Rata-rata 3, ,612 Ekstrak Air 2 3, ,913 Rata-rata 3,712 38, , , ,9125 Contoh perhitungan: Kurva standar (asam galat) Absorban y = 0,008x + 0,025 R² = 0,995 Series Linear (Series1) Konsentrasi (ppm) Y = 0,008x + 0,025 0,335 = 0,008x + 0,025 X = 38,7500, jadi total fenol = 38,7500 mg asam galat /100 g ekstrak

6 39 Lampiran 5 Contoh perhitungan IC 50 ekstrak kasar buah andaliman untuk uji aktivitas antioksidan dan inhibitor α-glukosidase 1. Antioksidan Konsentrasi (ppm) Abs. sampel % Inhibisi 800 0,165 81, ,2 77, ,236 72, ,329 62, ,374 57, ,517 40, ,622 28,5878 blanko 0,871 IC 50 (ppm) 390,92 % Inhibisi Ekstrak metanol y = 0,087x + 15,99 R² = 0, Konsentrasi (ppm) Series1 Linear (Series1) Abs. blanko Abs. sampel % Inhibisi Abs. blanko 0,871 0,165 % Inhibisi x 100% 0,871 % Inhibisi 81,0563 Contoh perhitungan IC 50 : Y= 0,087x + 15,99 50= 0,087x + 15,99 X = 390,9195 ppm x 100%

7 40 Lampiran 5 (lanjutan) 2. Inhibitor α-glukosidase Konsentrasi (%) Abs (S0) Ekstrak metanol S1 S1-S0 % Inhibisi U1 U2 U1 U2 U1 U2 1 1,349 1,736 1,695 0,387 0,346 87, ,5544 0,5 0,784 1,224 1,222 0,44 0,438 85, ,5111 0,25 0,435 0,976 0,993 0,541 0,558 82, ,5415 0,125 0,281 1,082 1,128 0,801 0,847 73, ,9815 0,0625 0,181 1,526 1,565 1,345 1,384 55, ,2177 0,0313 0,158 1,744 1,804 1,586 1,646 47, ,5508 Blanko 0,093 3,266 2,966 3,173 2,873 Rerata blanko = 3,023 Rerata IC 50 = 0,0323 % Keterangan : S1= campuran dengan penambahan enzim S0= campuran tanpa penambahan enzim Contoh Perhitungan: 3,023 0,387 % Inhibisi x 100% 3,023 % Inhibisi 87,1981% % Inhibisi Ekstrak metanol y = 12,23ln(x) + 93,08 R² = 0,907 y = 13,13ln(x) + 93,97 R² = 0, Konsentrasi (%) Series1 series 2 Log. (Series1) Log. (series 2) Y = 12,23 ln(x) + 93,08 50 = 12,23 ln(x) + 93,08 Ln(x) = -3,5225 X = anti ln (-3,5225) = 0,0295 Jadi IC 50 rata-rata,, Jadi IC 50 rata-rata = 0,0323 % 0,0323

8 41 Lampiran 6 Nilai Rf setiap tabung hasil fraksinasi ekstrak metanol dengan kromatografi kolom Tabung Jlh spot Jarak spot(cm) Jarak eluen (cm) Rf Fraksi Warna 0.93 A Hijau muda B Hijau tua C Hijau D Coklat ; ; 0.07 E Kuning F Coklat muda Contoh perhitungan: Jarak tempuh spot dari garis awal Jarak tempuh eluen dari garis awal 8 cm 8.6 cm 0.93

9 42 Lampiran 7 Nilai Rf dan penentuan rendemen setiap fraksi hasil penggabungan setiap tabung dari fraksinasi dengan kromatografi kolom a. Nilai Rf Fraksi Jumlah spot Jarak spot(cm) A 1 6,5 Jarak eluen (cm) Rf Warna 0,8072 Hijau muda B 2 1,6; 4 0,1928; 0,4819 Hijau tua C 2 1,6; 3, ,1928; 0,3855 Hijau D 2 0,6; 1,7 0,0723; 0,3855 Coklat E 1 0,6 0,0723 Kuning F Coklat muda b. Contoh perhitungan rendemen fraksi hasil fraksinasi dengan kolom Fraksi Bobot (g) Bobot ekstrak (g) Rendemen (%) A ,1275 B ,2655 C ,4885 D ,0428 E ,4659 F ,2067 Contoh perhitungan: Rendemen Bobot fraksi g Bobot ekstrak g Rendemen g g x 100% Rendemen %

10 43 Lampiran 8 Contoh perhitungan IC 50 fraksi hasil fraksinasi ekstrak terbaik dengan kromatografi kolom untuk uji aktivitas antioksidan dan inhibitor α-glukosidase. a. Antioksidan Konsentrasi (ppm) % Inhibisi 0,56 0,121 0,56 %Inhibisi 78,3929 Absorban x 100 % Fraksi E % Inhibisi 800 0,121 78, ,137 75, ,171 69, ,266 52, ,316 43, ,498 11, ,473 15, ,553 1, ,72-28, ,722-28,9286 blanko 0,56 444,7716 ppm IC 50 % Inhibisi y = 32,80ln(x) - 150,0 R² = 0, Series1 Log. (Series1) -100 Konsentrasi (ppm) Y = 25,43 Ln(x) 120,6 Ln x 6,7 x anti Ln 6,7 812,4 ppm Jadi IC 50 = 812,4 ppm

11 44 Lampiran 8 (lanjutan) b. Inhibitor α-glukosidase Konsentrasi (%) Fraksi C S S0 S-S0 % Inhibisi U1 U2 U1 U2 U1 U2 0,26 3,711 3,71 3,611 0,1 0,099 95, ,6 0,13 2,417 2,464 2,196 0,221 0,268 90, ,0889 0,065 1,628 1,595 1,251 0,377 0,344 83, ,7111 0,0325 1,103 1,097 0,72 0,383 0,377 82, ,2444 0, ,863 0,846 0,407 0,456 0,439 79, ,4889 0, ,984 0,978 0,278 0,706 0,7 68, ,8889 0, ,322 1,354 0,194 1,128 1,16 49, ,4444 Blanko 2,428 2,326 0,127 Abs.blanko rata-rata = 2,25 IC 50 rata-rata = 0,0016 % K S1 S0 % Inhibisi x 100% K 2,25 0,1 % Inhibisi x 100% 2,25 % Inhibisi 95,5556 % Inhibisi y = 9,464ln(x) + 111,0 R² = 0,867 y = 9,485ln(x) R² = 0, Ulangan 1 Ulangan 2 Log. (Ulangan 1) Log. (Ulangan 2) Konsentrasi (%) Y = 9,464 Ln (x) IC 50 = anti Ln ( 6,445 0,0016 IC 50 rata-rata =,, 0,0016 %

12 45 Lampiran 9 Nilai rendemen dan Rf fraksi C dan E dari hasil KLTP Fraksi C (0,2503 g) Fraksi E (0,2178 g) Fraksi Bobot Rendemen Jlh Bobot Rendemen Jlh Rf Fraksi (g) (%) spot (g) (%) spot Rf FC 1 0,0136 5,43 1 0,1219 FE 1 0, ,08 1 0,0811 FC 2 0,0158 6,31 1 0,2439 FE 2 0,0162 7,44 1 0,1216 FC 3 0,0058 2,32 1 0,3171 FE 3 0,0088 4,04 1 0,2027 FC 4 0,0187 7,47 1 0,4268 FE 4 0,0059 2,71 2 0,1622; 0,4729 FC 5 0,0116 4,63 1 0,5366 FE 5 0,0035 1,61 1 0,5135 FC 6 0,0100 3,99 1 0,6341 FE 6 0,0021 0,96 1 0,6351 FC 7 0,0090 3,59 1 0,7073 FE 7 0,0037 1,69 2 0,5; 0,7027 FC 8 0,0053 2,12 1 0,8049 FE 8 0,003 1,38 1 0,8108 FC 9 0,0010 0,39 1 0, FC 10 0,0058 2,32 1 0, Contoh Perhitungan: Bobot fraksi Bobot ekstrak X 100 % 0,0136 0,2503 X 100 % 5,43 %

13 46 Lampiran 10 Perhitungan nilai IC 50 fraksi yang diperoleh dari hasil KLTP sebagai antioksidan dan inhibitor α-glukosidase a. Antioksidan FE2 Konsentrasi Absorbansi sampel % Inhibisi (ppm) U1 U2 U1 U ,143 0,138 79, , ,176 0,181 74, , ,187 0,186 72, , ,193 0,189 71, , ,476 0,432 30, , ,532 0,523 22, , ,707 0,733-2,6125-6,3861 blanko 0,715 0,663 Blanko rata-rata 0,689 IC 50 (ppm) 122, ,7821 Rerata = 132,9928 % Inhibisi Abs. blanko Abs. sampel Abs. blanko x 100% % Inhibisi 0,689 0,143 0,689 x 100% % Inhibisi 79,2453

14 47 Lampiran 10 (lanjutan) FE2 DPPH 100 % Inhibisi y = 28,54ln(x) - 91,96 R² = 0,950 y = 28,39ln(x) - 91,05 R² = 0,943 Series1 series 2 Log. (Series1) 0 Log. (series 2) Konsentrasi (ppm) Y = 29,54 Ln(x) 91,96 50 = 29,54 Ln(x) 91,96 Ln x 141,96 29,54 Ln x 4,806 x anti Ln 4,806 ppm IC 50 = 122,2034 ppm IC 50 rata-rata =,, IC 50 rata-rata = 132,9928 ppm b Inhibitor α-glukosida Konsentrasi (ppm) S1 S0 S1-S0 % Inhibisi 500 0,453 0,436 0,017 90, ,31 0,276 0,034 81, ,27 0,195 0,075 59, ,5 0,229 0,152 0,077 58, ,25 0,216 0,13 0,086 53, ,625 0,221 0,121 0,1 46,2366 7,8125 0,26 0,112 0,148 20,4301 Blanko 0,296 0,11 0,186

15 48 Lampiran 10 (lanjutan) % Inhibisi % Inhibisi K S1 S0 K 0,186 0,017 0,186 x 100% x 100% % Inhibisi 90,8602% % Inhibisi y = 14,84ln(x) - 2,643 R² = 0, Konsentrasi (ppm) Series1 Log. (Series1) Y = 14,84 Ln(x) 2, = 14,84 Ln(x) 2,643 Ln(x) = 3,5474 X = anti ln (3,5474) = 34,7219 ppm.