38 Lampiran 1. Perhitungan seri konsentrasi hidrokuinon dari larutan baku hidrokuinon a. Ditimbang 10 mg, dilarutkan dengan etanol 96% hingga 25 ml 10 mg / 25 ml = 10.000 µg / 25 ml = 400 µg/ml b. Dari 400 ppm dibuat seri konsentrasi 10, 20, 30, 40, 50 dan 60 ppm. Masingmasing seri konsentrasi dilarutkan hingga 10 ml = 10.000 µl Konsentrasi 10 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2 X x 400 = 10.000 x 10 400 X = 100.000 X = 100.000 : 400 X = 250 µl Konsentrasi 20 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2 X x 400 = 10.000 x 20 400 X = 200.000 X = 200.000 : 400 X = 500 µl Konsentrasi 30 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2 X x 400 = 10.000 x 30 400 X = 300.000 X = 300.000 : 400 X = 750 µl
39 Konsentrasi 40 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2 X x 400 = 10.000 x 40 400 X = 400.000 X = 400.000 : 400 X = 1000 µl Konsentrasi 50 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2 X x 400 = 10.000 x 50 400 X = 500.000 X = 500.000 : 400 X = 1250 µl Konsentrasi 60 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2 X x 400 = 10.000 x 60 400 X = 600.000 X = 600.000 : 400 X = 1500 µl
40 Lampiran 2. Perhitungan Uji Ketelitian Hidrokuinon a. Perhitungan presisi kadar hidrokuinon Replikasi 1 (absorbansi 0,509) Y = BX + A 0,509 = 0,0103X + 0,1091 0,509 0,1091 = 0,0103X 0,3999 = 0,0103X X = 38,83 µg/ml Replikasi 2 (absorbansi 0,515) Y = BX + A 0,515 = 0,0103X + 0,1091 0,515 0,1091 = 0,0103X 0,4059 = 0,0103X X = 39,41 µg/ml Replikasi 3 (absorbansi 0,511) Y = BX + A 0,511 = 0,0103X + 0,1091 0,511 0,1091 = 0,0103X 0,4019 = 0,0103X X = 39,02 µg/ml
41 Replikasi 4 (absorbansi 0,513) Y = BX + A 0,513 = 0,0103X + 0,1091 0,513 0,1091 = 0,0103X 0,4039 = 0,0103X X = 39,21 µg/ml Replikasi 5 (absorbansi 0,51) Y = BX + A 0,51 = 0,0103X + 0,1091 0,51 0,1091 = 0,0103X 0,4009 = 0,0103X X = 38,92 µg/ml Replikasi 6 (absorbansi 0,506) Y = BX + A 0,506 = 0,0103X + 0,1091 0,506 0,1091 = 0,0103X 0,3999 = 0,0103X X = 38,53 µg/ml
42 b. Perhitungan nilai RSD x x 100% Keterangan : RSD = Standar deviasi relative SD = Standar deviasi x = Kadar rata-rata hidrokuinon dalam sampel x 100% RSD = 0,78% Lampiran 3. Contoh Perhitungan Perolehan Kembali Hidrokuinon dengan Standard Addition Method 1. Perolehan kembali pada sampel yang ditambah baku sejumlah 80% dari target kadar analit dalam sampel a. Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (B) 1) Absorbansi hidrokuinon = 0,307 2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091 adalah 19,21 µg/ml b. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C) 1) Absorbansi hidrokuinon = 0,311 2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091 adalah 19,60 µg/ml c. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A) 1) Absorbansi total analit 1 = 0,507
43 Absorbansi total analit 2 = 0,511 Absorbansi total analit 3 = 0,509 2) Berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103x + 0,1091 maka : Kadar total analit 1 = 38,63 µg/ml Kadar total analit 2 = 39,02 µg/ml Kadar total analit 3 = 38,83 µg/ml Perhitungan perolehan kembali a. Analit 1 % perolehan kembali = b. Analit 2 % perolehan kembali = = 99,06% c. Analit 3 % perolehan kembali = = 101,04% = 100,05% 2. Perolehan kembali pada sampel yang ditambah baku sejumlah 100% dari target kadar analit dalam sampel a. Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (B) 1) Absorbansi hidrokuinon = 0,307
44 2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091 adalah 19,21 µg/ml b. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C) 1) Absorbansi hidrokuinon = 0,408 2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091 adalah 29,01 µg/ml c. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A) 1) Absorbansi total analit 1 = 0,606 Absorbansi total analit 2 = 0,604 Absorbansi total analit 3 = 0,606 2) Berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091 maka : Kadar total analit 1 = 48,24 µg/ml Kadar total analit 2 = 48,04 µg/ml Kadar total analit 3 = 48,24 µg/ml Perhitungan perolehan kembali a. Analit 1 % perolehan kembali = b. Analit 2 % perolehan kembali = = 100,03% c. Analit 3 = 99,36%
45 % perolehan kembali = = 100,03% 3. Perolehan kembali pada sampel yang ditambah baku sejumlah 120% dari target kadar analit dalam sampel a. Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (B) 1) Absorbansi hidrokuinon = 0,307 2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091 adalah 19,21 µg/ml b. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C) 1) Absorbansi hidrokuinon = 0,509 2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091 adalah 38,82 µg/ml c. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A) 1) Absorbansi total analit 1 = 0,709 Absorbansi total analit 2 = 0,707 Absorbansi total analit 3 = 0,706 2) Berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103x + 0,1091 maka : Kadar total analit 1 = 58,24 µg/ml Kadar total analit 2 = 58,04 µg/ml Kadar total analit 3 = 57,95 µg/ml Perhitungan perolehan kembali
46 a. Analit 1 % perolehan kembali = = 100,53% b. Analit 2 % perolehan kembali = = 100,03% c. Analit 3 % perolehan kembali = = 99,78% Lampiran 4. Perhitungan LOD dan LOQ hidrokuinon dengan Spektrofotometri Visibel No X Xi² i- ( i- )² Yi Yc 1 10 100-25 625 0,207 0,2121 (Yi- Yc) - 0,0051 (Yi-Yc)² 2,601E-05 2 20 400-15 225 0,322 0,3151 0,0069 4,761E-05
47 3 30 900-5 25 0,426 0,4181 0,0079 6,241E-05 4 40 1600 5 25 0,525 0,5211 0,0039 1,521E-05 5 50 2500 15 225 0,621 0,6241-0,0031 9,61E-06 6 60 3600 25 625 0,735 0,7271 0,0079 6,241E-05 35 9100 1750 0,00022326 Keterangan : Yc diperoleh dari persamaan regresi linier dimana Y = 0,0103 X + 0,1091 Yc = 0,0103 x kadar masing-masing larutan + 0,1091 1. 10 µg/ml = 0,0103 x 10 + 0,1091 = 0,2121 2. 20 µg/ml = 0,0103 x 20 + 0,1091 = 0,3151 3. 30 µg/ml = 0,0103 x 30 + 0,1091 = 0,4181 4. 40 µg/ml = 0,0103 x 40 + 0,1091 = 0,5211 5. 50 µg/ml = 0,0103 x 50 + 0,1091 = 0,6241 6. 60 µg/ml = 0,0103 x 60 + 0,1091 = 0,7271 { } 1/2 = 0,007471
48 = 0,007471 x = 0,007471 x 0,93094 = 0,006955 Perhitungan LOD Dihitung berdasarkan rumus Y = Y B + 3S B Y = 0,1091 + 3 (0,006955) = 0,1091 + 0,020865 = 0,129965 Maka nilai LOD : Y = 0,0103 X + 0,1091 0,129965 = 0,0103 X + 0,1091 X = 2,026 µg/ml Perhitungan LOQ Dihitung berdasarkan rumus Y = Y B + 10S B Y = 0,1091 + 10 (0,006955) = 0,1091 + 0,06955 = 0,17865
49 Maka nilai LOQ : Y = 0,0103 X + 0,1091 0,17865 = 0,0103 X + 0,1091 X = 6,572 µg/ml Lampiran 5. Penetapan kadar hidrokuinon dalam sediaan krim dengan metode Spektrofotometri Visibel Persamaan regresi linier kurva baku adalah : Y = bx + a Y = 0,0103X + 0,1091 Replikasi I Y = 0,0103X + 0,1091 0,316 = 0,0103X + 0,1091 0,2069 = 0,0103X X = 20,09 µg/ml Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah : X = 20,087 µg/ml x 50 X = 1004,37 µg/ml Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel : 1004,36 x 50 1000 = 50,22 mg Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel : 50,218 x 15 = 753,28 mg Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel :
50 5% x 15 gram = 0,75 gram = 750 mg % kadar hidrokuinon = x 100% = 100,44 % Replikasi II Y = 0,0103X + 0,1091 0,317 = 0,0103X + 0,1091 0,208 = 0,0103X X = 20,18 µg/ml Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah : X = 20,18 µg/ml x 50 X = 1009,0 µg/ml Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel : 1009,0 x 50 1000 = 50,45 mg Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel : 50,45 x 15 = 756,92 mg Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel : 5% x 15 gram = 0,75 gram = 750 mg % kadar hidrokuinon = x 100%
51 = 100,92 % Replikasi III Y = 0,0103X + 0,1091 0,313 = 0,0103X + 0,1091 0,204 = 0,0103X X = 19,80 µg/ml Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah : X = 19,80 µg/ml x 50 X = 989,81 µg/ml Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel : 989,81 x 50 1000 = 49,49 mg Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel : 49,49 x 15 = 742,35 mg Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel : 5% x 15 gram = 0,75 gram = 750 mg % kadar hidrokuinon = x 100% = 98,98 % Replikasi IV Y = 0,0103X + 0,1091 0,314 = 0,0103X + 0,1091 0,205 = 0,0103X X = 19,89 µg/ml
52 Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah : X = 19,89 µg/ml x 50 X = 994,66 µg/ml Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel : 994,66 x 50 1000 = 49,73 mg Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel : 49,73 x 15 = 745,99 mg Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel : 5% x 15 gram = 0,75 gram = 750 mg % kadar hidrokuinon = x 100% = 99,47% Replikasi V Y = 0,0103X + 0,1091 0,318 = 0,0103X + 0,1091 0,209 = 0,0103X X = 20,28 µg/ml Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah : X = 20,28 µg/ml x 50 X = 1014,08 µg/ml Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel : 1014,08 x 50 1000 = 50,70 mg
53 Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel : 50,70 x 15 = 750,56 mg Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel : 5% x 15 gram = 0,75 gram = 750 mg % kadar hidrokuinon = x 100% = 101,41 % Replikasi VI Y = 0,0103X + 0,1091 0,32 = 0,0103X + 0,1091 0,211 = 0,0103X X = 20,48 µg/ml Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah : X = 20,48 µg/ml x 50 X = 1023,79 µg/ml Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel : 1023,79 x 50 1000 = 51,19 mg Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel : 51,19 x 15 = 767,84 mg Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel : 5% x 15 gram = 0,75 gram = 750 mg
54 % kadar hidrokuinon = x 100% = 102,38 % Kadar rata-rata hidrokuinon dalam sampel : Rata-rata = = = 100,59 % Lampiran 6. Hasil scanning optimasi panjang gelombang maksim
55
Lampiran 7. Certificate of Analysis hidrokuinon 56
57 Lampiran 7. Gambar alat yang digunakan dalam penelitian Spektrofotometri UV-Vis (1800 Shimadzu)
Lampiran 8. Surat Keterangan Telah Melakukan Penelitian di Laboratorium Kimia, Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim 58