Lampiran 1. Flowsheet Rancangan Percobaan

43 Lampiran 1. Flowsheet Rancangan Percobaan Furosemida Sifat Fisikokimia Serbuk hablur berwarna putih s/d kekuningan dan tidak berbau Praktis tidak larut dalam air pka 3,9 Log P 0,74 Kelarutan 0,01 (mg/ml) Panjang gelombang 275 nm Titik lebur 206 o C Penelitian yang telah dilakukan antara lain : 1. Laju Penguraian Furosemida Dalam Suasana Asam (Joshita D.,1991) 2. Uji Bioekivalensi Tablet Furosemida Generik dan Nama Dagang (Doharni Tanjung,2001) 3. Pengaruh Perbedaan ph Terhadap Laju Absorpsi Furosemida pada Duodenum Terbalik (Everted sac) Kelinci (Siregar,2006) 4. Pengaruh Perbedaan ph Terhadap Laju Absorpsi Furosemida pada Jejunum Terbalik (Everted sac) Kelinci (Matondang,2006) 5. Pengaruh Perbedaan ph Terhadap Laju Absorpsi Furosemida pada Ileum Terbalik (Everted sac) Kelinci (Panggabean, 2006) absorpsi furosemida pada intestine kelinci paling tinggi dalam jejunum pada ph 6,0. Proses absorpsi yang terjadi selain difusi pasif kemungkinan juga terjadi mekanisme absorpsi lain Faktor yang mempengaruhi transpor aktif antara lain : 1. Molekul (senyawa) ditranspor dari daerah yang mempunyai perbedaan potensial kimia yang rendah menuju yang lebih tinggi. 2. Hasil metabolisme senyawa akan mengganggu transpor. 3. Kecepatan transpor akan mengalami penjenuhan apabila konsentrasi dari senyawa meningkat. 4. Sistem transpor umumnya memperlihatkan struktur kimia spesifik. 5. Senyawa kimia dengan struktur yang hampir sama akan bekerja sebagai kompetitif inhibitor. Pengaruh Perbedaan Terhadap Laju Absorpsi Tablet Furosemida Generik Pada Jejunum Terbalik (Everted sac) Kelinci Dilakukan melalui proses Uptake Variasi waktu dan tetap Variasi dan Waktu tetap Diukur secara Spektrofotometri UV (277,0 nm) Diukur secara Spektrofotometri UV (277,0 nm) Diperoleh Hasil AUC, C maks, dan t maks Diperoleh hasil V maks dan Km melalui Kurva Lineweaver -Burk Kesimpulan

44 Lampiran 2. Contoh Perhitungan Kadar Furosemida Baku 1. Pembakuan NaOH 0,1 N No Berat Kalium Biftalat (mg) Volume Titrasi(ml) 1. 151 8,00 2. 152 7,95 3. 152 8,15 Perhitungan : N = mgkaliumbiftalat VxBEKaliumBiftalat 151 N 1 = = 0,0924 N 8,00x204, 2 N2 N3 = 0,0936 N = 0,0913 N Dihitung harga N rata-rata dan deviasi (d) Nr N1+ N 2 = 2 0,0924 + 0,0936 2 1 = = 0,093N N1 Nr1 d 1 = x100% = 0,6451% Nr1 Nr 2 = 0,0918 N dengan d 2 = 0,5988 % Nr3 = 0,0924 N dengan d 3 = 1,24 % Maka, normalitas NaOH adalah harga Nrata-rata dengan deviasi terkecil yaitu d 2 = 0,5988 % dengan N = 0,0918 N.

45 2. Penetapan Kadar Furosemida Baku No. Berat Sampel (mg) Volume titrasi (ml) 1. 606 19,75 2. 607 19,85 3. 605 19,80 Contoh Perhitungan : VxNxBE Kadar (K) = x100% beratsampel 19,75mlx0,0918Nx330,74 K 1 = x100% = 98,9518 % 606 K2 = 99,2890 % K3 = 99,3663 % Dihitung harga K rata-rata dan deviasi (d) Kr K1+ K 2 2 99,9518% + 99,2890% 2 1 = = = 99,1204% K1 Kr1 d 1 = x100% = 0,1701% Kr1 Kr 2 = 99,1590 % dengan d 2 = 0,2090 % Kr3 = 99,3276 % dengan d 3 = 0,0389 % Maka, kadar furosemida baku adalah harga Krata-rata dengan deviasi terkecil yaitu d 3 = 0,0389 % dengan K = 99,3276 %.

46 Lampiran 3. Flowsheet Pembuatan Larutan Induk Baku Furosemida dalam Dapar Fosfat ph 6,0 Isotonis Furosemida baku Dikeringkan pada suhu 105 C selama 3 jam Ditimbang seksama 50,0 mg Dimasukkan secara kuantitatif kedalam labu tentukur 100 ml. Ditambah tetes demi tetes NaOH 0,1 N sampai serbuk larut. Dicukupkan dengan dapar posfat ph 6,0 isotonis sampai dengan garis tanda Larutan Induk Baku 500 mcg/ml

47 Lampiran 4. Flowsheet Penentuan λ Maksimum Furosemida dalam Dapar Fosfat ph 6,0 Isotonis Larutan Induk Baku Dipipet 0,75 ml Dimasukkan dalam labu tentukur 50 ml Dicukupkan dengan dapar posfat ph 6,0 isotonis sampai dengan garis tanda Diukur pada panjang gelombang 230 340 nm. Panjang Gelombang maksimum

48 Lampiran 5. Penentuan Kurva Serapan Furosemida Baku dalam Larutan Dapar Fosfat ph 6,0 Isotonis

49 Lampiran 6. Flowsheet Pembuatan Kurva Kalibrasi Furosemida Baku dalam Dapar Fosfat ph 6,0 Isotonis Larutan Induk Baku Dipipet masing-masing 0,2; 0,25; 0,30; 0,35; 0,55; 0,75; 0,95; 1,15 ml atau setara dengan konsentrasi 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5; 3,0; 3,5; 5,5; 7,5; 9,5; 11,5 mcg/ml. Dimasukkan dalam labu tentukur 50 ml. Dicukupkan dengan dapar fosfat ph 6,0 isotonis sampai dengan garis tanda Diukur pada panjang gelombang maksimum 277,0 nm.

50 Lampiran 7. Penentuan Persamaan Regresi dan Kurva Kalibrasi Furosemida Baku dalam Larutan Dapar Fosfat ph 6,0 Isotonis (mcg/ml) Rata-rata SD I II III IV V VI 2,0 0,1285 0,1168 0,1245 0,1189 0,1119 0,1165 0,1195 0,0060 2,5 0,1407 0,1495 0,1575 0,1489 0,1417 0,1471 0,1476 0,0061 3,0 0,1782 0,1826 0,1902 0,1735 0,1753 0,1786 0,1797 0,0060 3,5 0,2096 0,2122 0,2203 0,2048 0,2045 0,2087 0,2100 0,0058 5,5 0,3306 0,3464 0,3547 0,3348 0,3314 0,3365 0,3391 0,0095 7,5 0,4536 0,4738 0,4816 0,4683 0,4644 0,4656 0,4679 0,0094 9,5 0,5829 0,5974 0,6191 0,5931 0,5891 0,5942 0,5960 0,0124 11,5 0,7113 0,7241 0,7473 0,7314 0,7108 0,7216 0,7244 0,0137 (mcg/ml) ( X ) Rata-rata (Y) 2 X Y XY 0,0 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 2,0 0,1195 4,0000 0,0143 0,2390 2,5 0,1476 6,2500 0,0218 0,3689 3,0 0,1797 9,0000 0,0323 0,5392 3,5 0,2100 12,2500 0,0441 0,7350 5,5 0,3391 30,2500 0,1150 1,8648 7,5 0,4679 56,2500 0,2189 3,5091 9,5 0,5960 90,2500 0,3552 5,6616 11,5 0,7244 132,2500 0,5248 8,3307 X = 45,0000 Y = 2,7842 X 2 = 340,5000 Y = 1,3263 Persamaan garis regresi : Y = ax + b n XY X. Y a = 2 2 n X ( X ) 9(21,2486) (45)(2,7842) a = 2 9(340,500) (45) a = 0,0634 2 2 XY = 21.2486 b = b = Y a X n ( 2,7842) (0,0634)(45) 9 b = - 0,0079

51 Jadi persamaan regresi furosemida dalam larutan dapar fosfat ph 6,0 isotonis adalah : Y = 0,0634X 0,0079 Nilai koefisien korelasi (r) = 0,9998 rata-rata (nm) 0.800 0.700 0.600 0.500 0.400 0.300 0.200 0.100 y = 0.0634x - 0.0079 R 2 = 0.9998 Data : rata-rata ± SD n = 6 0.000 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 konsentrasi (mcg/ml)

52 Lampiran 8. Flowsheet Pembuatan Jejunum Terbalik (Everted sac) Kelinci Kelinci jantan Berat 1,5-2 kg. Dipuasakan selama 20-24 jam Dianastesi dengan eter sampai pingsan Perutnya dibuka dan ususnya dikeluarkan Dibersihkan dari jaringan ikat, pembuluh darah halus dan jaringan saraf Usus bersih Potongan usus Dikanulasi pada jarak 25 cm dari pylorus. Bagian atas jejunum diukur 10 cm dan diikat dgn benang digunakan sebagai kontrol Bagian bawahnya diukur 10 cm diikat dan dilakukan sebanyak 3 kali, digunakan untuk percobaan Dipotong pada setiap bagian tetapi pada salah satu ujung tetap terikat. Isinya dibersihkan dengan cara dicelupkan dalam larutan NaCl dingin Dibalik menggunakan batang pengaduk berpenampang 2 mm. Dilepaskan dari batang pengaduk dan dicelupkan kembali dalam larutan NaCl dingin. Usus terbalik

53 Lampiran 9. Flowsheet Penentuan Pola Penembusan Membran oleh Tablet Furosemida Generik dengan Berbagai pada Jejunum Terbalik (Everted sac) Kelinci 10 cm potongan jejunum terbalik Ujung bagian atas dihubungkan dan diikat pd kanula dengan panjang 7 cm. Ke dalam kantong usus diisi 2 ml cairan serosa berupa larutan dapar fosfat ph 6,0 isotonis Dimasukkan cairan mukosa pada bagian atas (sebagai kontrol) berupa larutan dapar fosfar ph 6,0 isotonis tanpa mengandung bahan obat dan bagian bawah (sebagai percobaan) berupa larutan dapar fosfat ph 6,0 isotonis yang mengandung larutan tablet furosemida generik 0,001 M ke dalam tabung cairan Diatur termostat pada temperatur 37 ± 0,5 o C. Dialiri oksigen secara terus-menerus dengan kecepatan kira-kira 1 gelembung/detik. Pada menit ke-5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 cairan serosa diambil sebanyak 1 ml melalui kanula dan dimasukkan 1 ml setiap pengambilan Dipipet 0,5 ml masing-masing cairan diencerkan dengan larutan dapar fosfat ph 6,0 isotonis sampai dengan Diukur serapan dengan Spektrofotometer UV pada λ 277,0 nm Dilakukan cara yang sama untuk konsentrasi 0,002 M dan 0,003 M

54 Lampiran 10. Contoh Perhitungan Penentuan Harga Tablet Furosemida Generik dalam Cairan Serosa Kantung Terbalik (Everted sac) Jejunum Kelinci pada Berbagai dalam mcg/ml Harga konsentrasi dari tablet furosemida generik dalam larutan dapar fosfat ph 6,0 isotonis pada interval waktu tertentu dihitung dengan menggunakan persamaan garis regresi : Y = 0,0634 X 0,0079 Dimana; Y = X = Misal, pada waktu t = 5 menit untuk tablet furosemida generik dengan konsentrasi 0,001 M diperoleh absorbansi 0,0759. Maka konsentrasi cuplikan pada menit ke-5 adalah : X = 0,0759 + 0,0079 0,0634 X = 1,3218 mcg/ml Dilakukan cara yang sama untuk menit berikutnya dan pada masing masing konsentrasi yaitu 0,002 M dan 0,003 M.

55 Lampiran 11. Contoh Perhitungan Penentuan Harga Kumulatif Tablet Furosemida Generik dalam Cairan Serosa Kantung Terbalik (Everted sac) Jejunum Kelinci pada Berbagai dalam mcg/ml Nilai konsentrasi dari tablet furosemida dalam larutan dapar fosfat ph 6,0 isotonis pada interval waktu dihitung dengan menggunakan persamaan garis regresi; Y = 0,0634X 0,0079 Pada waktu t = 5 menit untuk tablet furosemida generik, dipipet larutan sebanyak 0,5 ml, diencerkan dengan larutan dapar fosfat ph 6,0 dalam labu tentukur 25 ml sampai garis tanda. Kemudian serapannya diukur pada panjang gelombang 277,0 nm sehingga diperoleh absorbansi 0,0759. Maka konsentrasi cuplikan pada menit ke-5 adalah : 0,0759 + 0,0079 25ml x x1ml = 66,0883mcg / ml = 0,1998.10-3 M 0,0634 0,5ml Pada waktu t = 10 menit, diperoleh absorbansi (A) = 0,0555, maka konsentrasi cuplikan pada menit ke-10 adalah: 0,0555 + 0,0079 25ml x x1ml + 66,0883mcg / ml 0,0634 0,5ml = 50,0000 mcg/ml + 66,0883 mcg/ml = 116,0883 mcg/ml = 0,3510.10-3 M Pada waktu t = 15 menit, diperoleh absorbansi (A) = 0,0251, maka konsentrasi cuplikan pada menit ke-15 adalah : 0,0251+ 0,0079 25ml x x1ml + 115,0883mcg / ml 0,0634 0,5ml = 26,0250 mcg/ml + 116,0883 mcg/ml = 142,1136 mcg/ml = 0,4297.10-3 M Demikianlah seterusnya, sampai diperoleh kadar kumulatif tablet furosemida pada menit ke-45.

56 Lampiran 12. Contoh Perhitungan Penentuan Harga AUC (Area Under The Curve) Tablet Furosemida Generik pada Berbagai dalam mcg.menit/ml Penentuan harga AUC dari tablet furosemida generik pada konsentrasi 0,001 M diperoleh dengan cara memplot konsentrasi terhadap waktu sehingga dihasilkan kurva absorpsi. Kemudian luas daerah di bawah kurva absorpsi dihitung dengan menggunakan metode luas trapesium berdasarkan rumus: Luas= ½ (Jumlah sisi yang sejajar) x tinggi Misal, pada waktu t = 5 menit sampai dengan t = 10 menit maka luas daerah di bawah kurva adalah: = (½ ( 1,3218 mcg/ml + 1,0000 mcg/ml) x (10 menit-5 menit) = 1,1609 mcg/ml x 5 menit = 5,8045 mcg.menit/ml Demikianlah seterusnya, sampai diperoleh jumlah total AUC pada konsentrasi 0,001 M tablet furosemida generik hingga menit ke-45 dan dilakukan cara yang sama untuk konsentrasi 0,002 M dan 0,003 M.

57 Lampiran 13. Data Tablet Furosemida Generik dalam Cairan Serosa Kantung Terbalik (Everted sac) Jejunum Kelinci pada Berbagai a. Data Furosemida dalam Cairan Serosa pada 0,001 M No Waktu (menit) Sampel Blanko Sebenarnya 1 5 0,1058 0,0299 0,0759 2 10 0,0686 0,0131 0,0555 3 15 0,0269 0,0018 0,0251 4 20 0,0101 0,0042 0,0059 5 25 0,0156-0,011 0,0266 6 30-0,0049-0,0177 0,0128 7 35-0,0176-0,0211 0,0035 8 40-0,0049-0,0216 0,0167 9 45-0,0071-0,0159 0,0088 No Waktu (menit) Sampel Blanko Sebenarnya 1 5 0,1028 0,0299 0,0729 2 10 0,0314 0,0131 0,0183 3 15 0,0061 0,0018 0,0043 4 20 0,0021 0,0042-0,0021 5 25-0,0099-0,011 0,0011 6 30 0,0126-0,0177 0,0303 7 35-0,0128-0,0211 0,0083 8 40-0,0122-0,0216 0,0094 9 45 0,0104-0,0159 0,0263 No Waktu (menit) Sampel Blanko Sebenarnya 1 5 0,1277 0,0299 0,0978 2 10 0,0342 0,0131 0,0211 3 15 0,0045 0,0018 0,0027 4 20 0,0356 0,0042 0,0314 5 25 0,0187-0,011 0,0297 6 30-0,0103-0,0177 0,0074 7 35 0,0233-0,0211 0,0444 8 40-0,0162-0,0216 0,0054 9 45 0,002-0,0159 0,0179

58 b. Data Furosemida dalam Cairan Serosa pada 0,002 M No Waktu (menit) Sampel Blanko Sebenarnya 1 5 0,0120 0,0050 0,0070 2 10-0,0020 0,0071-0,0091 3 15 0,0045-0,0078 0,0123 4 20 0,0106 0,0027 0,0079 5 25 0,0033 0,0007 0,0026 6 30 0,0004-0,0021 0,0025 7 35-0,0021-0,0049 0,0028 8 40 0,0000-0,0122 0,0122 9 45 0,0024-0,0170 0,0194 No Waktu (menit) Sampel Blanko Sebenarnya 1 5 0,0061 0,0050 0,0011 2 10 0,0068 0,0071-0,0003 3 15 0,0176-0,0078 0,0254 4 20 0,0004 0,0027-0,0023 5 25-0,0037 0,0007-0,0044 6 30-0,0095-0,0021-0,0074 7 35-0,0013-0,0049 0,0036 8 40-0,0045-0,0122 0,0077 9 45 0,0096-0,0170 0,0266 No Waktu (menit) Sampel Blanko Sebenarnya 1 5 0,0017 0,0050-0,0033 2 10 0,0000 0,0071-0,0071 3 15 0,0006-0,0078 0,0084 4 20 0,0018 0,0027-0,0009 5 25-0,0026 0,0007-0,0033 6 30-0,0094-0,0021-0,0073 7 35-0,0029-0,0049 0,0020 8 40-0,0081-0,0122 0,0041 9 45-0,0004-0,0170 0,0166

59 c. Data Furosemida dalam Cairan Serosa pada 0,003 M No Waktu (menit) Sampel Blanko Sebenarnya 1 5 0,0267 0,0178 0,0089 2 10 0,0140 0,0121 0,0019 3 15 0,027 0,0072 0,0198 4 20 0,0266 0,0117 0,0149 5 25 0,0228 0,0085 0,0143 6 30 0,0306 0,0205 0,0101 7 35 0,0496 0,0277 0,0219 8 40 0,0718 0,0139 0,0579 9 45 0,0531 0,0111 0,0420 No Waktu (menit) Sampel Blanko Sebenarnya 1 5 0,0137 0,0178-0,0041 2 10 0,0172 0,0121 0,0051 3 15 0,0739 0,0072 0,0667 4 20 0,0311 0,0117 0,0194 5 25 0,012 0,0085 0,0035 6 30 0,0172 0,0205-0,0033 7 35 0,0367 0,0277 0,0090 8 40 0,0244 0,0139 0,0105 9 45 0,0507 0,0111 0,0396 No Waktu (menit) Sampel Blanko Sebenarnya 1 5 0,0159 0,0178-0,0019 2 10 0,0044 0,0121-0,0077 3 15 0,0085 0,0072 0,0013 4 20 0,015 0,0117 0,0033 5 25 0,0258 0,0085 0,0173 6 30 0,0115 0,0205-0,0090 7 35 0,0151 0,0277-0,0126 8 40 0,0481 0,0139 0,0342 9 45 0,0293 0,0111 0,0182

60 Lampiran 14. Data Tablet Furosemida Generik dalam Cairan Serosa Kantung Terbalik (Everted sac) Jejunum Kelinci pada Berbagai dalam mcg/ml Perlakuan 0,001 M Tabet Generik 0,002 M Tablet Generik 0,003 M Tablet Generik Waktu Tablet Furosemid Dalam Interval Waktu Tertentu (mcg/ml) Rata-rata ± SD (menit) I II III 5 1,3218 1,2744 1,6672 1,4211 0,2144 10 1,0000 0,4132 0,4574 0,4353 0,0312 15 0,5205 0,1924 0,1672 0,2934 0,1971 20 0,2177 0,0915 0,6199 0,4188 0,2844 25 0,5442 0,1420 0,5931 0,5686 0,0346 30 0,3265 0,6025 0,2413 0,3901 0,1888 35 0,1798 0,2555 0,8249 0,4201 0,3526 40 0,3880 0,2729 0,2098 0,2902 0,0904 45 0,2634 0,5394 0,4069 0,4033 0,1380 5 0,2350 0,1420 0,0726 0,1073 0,0491 10-0,0189 0,1199 0,0126 0,0662 0,0758 15 0,3186 0,5252 0,2571 0,3670 0,1405 20 0,2492 0,0883 0,1104 0,1798 0,0981 25 0,1656 0,0552 0,0726 0,0978 0,0594 30 0,1640 0,0079 0,0095 0,0868 0,1093 35 0,1688 0,1814 0,1562 0,1688 0,0126 40 0,3170 0,2461 0,1893 0,2815 0,0502 45 0,4306 0,5442 0,3864 0,4085 0,0312 5 0,2650 0,0599 0,0946 0,1798 0,1205 10 0,1546 0,2050 0,0032 0,1798 0,0357 15 0,4369 1,1767 0,1451 0,5862 0,5317 20 0,3596 0,4306 0,1767 0,3223 0,1310 25 0,3502 0,1798 0,3975 0,3738 0,0335 30 0,2839 0,0726-0,0174 0,1782 0,1495 35 0,4700 0,2666-0,0741 0,3683 0,1439 40 1,0379 0,2902 0,6640 0,8509 0,2643 45 0,7871 0,7492 0,4117 0,7681 0,0268

61 Lampiran 15. Data Tablet Furosemida Generik dalam Cairan Serosa Kantung Terbalik (Everted sac) Jejunum Kelinci pada Berbagai dalam 10-3 M Perlakuan 0,001 M Tabet Generik 0,002 M Tablet Generik 0,003 M Tablet Generik Waktu Tablet Furosemid Dalam Interval Waktu Tertentu (10-3 M) Rata-rata ± SD (menit) I II III 5 0,0040 0,0039 0,0050 0,0043 0,0006 10 0,0030 0,0012 0,0014 0,0013 0,0010 15 0,0016 0,0006 0,0005 0,0009 0,0006 20 0,0007 0,0003 0,0019 0,0013 0,0008 25 0,0016 0,0004 0,0018 0,0017 0,0007 30 0,0010 0,0018 0,0007 0,0012 0,0006 35 0,0005 0,0008 0,0025 0,0013 0,0011 40 0,0012 0,0008 0,0006 0,0009 0,0003 45 0,0008 0,0016 0,0012 0,0012 0,0004 5 0,0007 0,0004 0,0002 0,0003 0,0002 10-0,0001 0,0004 0,0000 0,0002 0,0002 15 0,0010 0,0016 0,0008 0,0011 0,0004 20 0,0008 0,0003 0,0003 0,0005 0,0003 25 0,0005 0,0002 0,0002 0,0003 0,0002 30 0,0005 0,0000 0,0000 0,0003 0,0003 35 0,0005 0,0005 0,0005 0,0005 0,0000 40 0,0010 0,0007 0,0006 0,0009 0,0002 45 0,0013 0,0016 0,0012 0,0012 0,0002 5 0,0008 0,0002 0,0003 0,0005 0,0003 10 0,0005 0,0006 0,0000 0,0005 0,0003 15 0,0013 0,0036 0,0004 0,0018 0,0016 20 0,0011 0,0013 0,0005 0,0010 0,0004 25 0,0011 0,0005 0,0012 0,0011 0,0003 30 0,0009 0,0002-0,0001 0,0005 0,0005 35 0,0014 0,0008-0,0002 0,0011 0,0008 40 0,0031 0,0009 0,0020 0,0026 0,0011 45 0,0024 0,0023 0,0012 0,0023 0,0006

62 Lampiran 16. Data Kumulatif Tablet Furosemida Generik dalam Cairan Serosa Kantung Terbalik (Everted sac) Jejunum Kelinci pada Berbagai dalam mcg/ml Perlakuan 0,001 M tablet generik Waktu kumulatif tablet furosemid pada interval waktu tertentu (mcg/ml) Rata-rata ± SD (menit) I II III ( mcg/ml ) 5 66,0883 63,7224 83,3596 71,0568 10,7200 10 116,0883 84,3849 106,2303 95,3076 16,2251 15 142,1136 94,0063 114,5899 116,9033 24,1369 20 152,9968 98,5804 145,5836 149,2902 5,2420 25 180,2050 105,6782 175,2366 177,7208 3,5132 30 196,5300 135,8044 187,3028 173,2124 32,7231 35 205,5205 148,5804 228,5489 194,2166 41,1652 40 224,9211 162,2240 239,0379 208,7277 40,8872 45 238,0915 189,1956 259,3849 228,8906 35,9878 5 11,7508 7,0978 3,6278 5,3628 2,4537 0,002 M tablet generik 10 10,8044 13,0915 4,2587 8,6751 6,2457 15 26,7350 39,3533 17,1136 27,7340 11,1535 20 39,1956 43,7697 22,6341 30,9148 30,9148 25 47,4763 46,5300 26,2618 40,0894 11,9844 30 55,6782 46,9243 26,7350 41,2066 20,4659 35 64,1167 55,9937 34,5426 51,5510 15,2794 40 79,9685 68,2965 44,0063 74,1325 8,2533 45 101,4984 95,5047 63,3281 82,4132 26,9905 5 13,2492 2,9968 4,7319 8,9905 6,0227 0,003 M tablet generik 10 20,9779 13,2492 4,8896 17,1136 5,4650 15 42,8233 72,0820 12,1451 42,3502 29,9713 20 60,8044 93,6120 20,9779 58,4648 36,3735 25 78,3123 102,6025 40,8517 59,5820 26,4886 30 92,5079 106,2303 39,9842 99,3691 9,7032 35 116,0095 119,5584 36,2776 117,7839 2,5094 40 167,9022 134,0694 69,4795 118,6909 69,5954 45 207,2555 171,5300 90,0631 189,3927 25,2618

63 Lampiran 17. Data Kumulatif Tablet Furosemidan Generik dalam Cairan Serosa Kantung Terbalik (Everted sac) Jejunum Kelinci pada Berbagai dalam 10-3 M Perlakuan 0,001 M tablet generik Waktu kumulatif tablet furosemid pada interval waktu tertentu (10-3 M) Rata-rata ± SD (menit) I II III ( 10-3 M ) 5 0,1998 0,1927 0,2520 0,2148 0,0324 10 0,3510 0,2551 0,3212 0,2882 0,0491 15 0,4297 0,2842 0,3465 0,3535 0,0730 20 0,4626 0,2981 0,4402 0,4514 0,0892 25 0,5449 0,3195 0,5298 0,5373 0,1260 30 0,5942 0,4106 0,5663 0,5237 0,0989 35 0,6214 0,4492 0,6910 0,5872 0,1245 40 0,6801 0,4905 0,7227 0,6311 0,1236 45 0,7199 0,5720 0,7843 0,6921 0,1088 5 0,0355 0,0215 0,0110 0,0162 0,0123 0,002 M tablet generik 10 0,0327 0,0396 0,0129 0,0262 0,0139 15 0,0808 0,1190 0,0517 0,0839 0,0337 20 0,1185 0,1323 0,0684 0,0935 0,0336 25 0,1435 0,1407 0,0794 0,1212 0,0362 30 0,1683 0,1419 0,0808 0,1246 0,0449 35 0,1939 0,1693 0,1044 0,1559 0,0462 40 0,2418 0,2065 0,1331 0,2241 0,0555 45 0,3069 0,2888 0,1915 0,2492 0,0621 5 0,0401 0,0091 0,0143 0,0272 0,0166 0,003 M tablet generik 10 0,0634 0,0401 0,0148 0,0517 0,0243 15 0,1295 0,2179 0,0367 0,1280 0,0906 20 0,1838 0,2830 0,0634 0,1768 0,1100 25 0,2368 0,3102 0,1235 0,1801 0,0941 30 0,2797 0,3212 0,1209 0,3004 0,1057 35 0,3508 0,3615 0,1097 0,3561 0,1424 40 0,5077 0,4054 0,2101 0,3589 0,1512 45 0,6266 0,5186 0,2723 0,5726 0,1816

64 Lampiran 18. Perhitungan Analysis of Variance (ANOVA) Kumulatif Tablet Furosemida Generik pada Kantung Terbalik (everted sac) Jejunum Kelinci dengan Berbagai Waktu Source of variation Sum of Squares df Mean Square F hitung F tabel Sig. Between Groups 8144,921 2 4072,460 75,583* 5,14 0,000 5 menit Within Groups 323,285 6 53,881 Total 8468,206 8 Between Groups 16590,268 2 8295,134 71,303* 5,14 0,000 10 menit Within Groups 698,022 6 116,337 Total 17288,289 8 Between Groups 13722,962 2 6861,481 12,823* 5,14 0,007 15 menit Within Groups 3210,532 6 535,089 Total 16933,494 8 Between Groups 15451,100 2 7725,550 10,000* 5,14 0,012 20 menit Within Groups 4635,176 6 772,529 Total 20086,276 8 Between Groups 20419,100 2 10209,550 10,756* 5,14 0,010 25 menit Within Groups 5695,173 6 949,195 Total 26114,272 8 Between Groups 27023,560 2 13511,780 16,126* 5,14 0,004 30 menit Within Groups 5027,454 6 837,909 Total 32051,013 8 Between Groups 32612,756 2 16306,378 11,800* 5,14 0,008 35 menit Within Groups 8291,213 6 1381,869 Total 40903,969 8 Between Groups 31697,013 2 15848,507 10,545* 5,14 0,011 40 menit Within Groups 9017,890 6 1502,982 Total 40714,903 8 Between Groups 24704,154 2 12352,077 6,500* 5,14 0,031 45 menit Within Groups 11402,032 6 1900,339 Total 36106,185 8 * The mean difference is significant at the 0.05 level.

65 Lampiran 19. Perhitungan Analysis Variance (ANOVA) dan Least Significant Difference (LSD) terhadap Area Under The Curve (AUC) Tablet Furosemida Generik pada Kantung Terbalik (Everted sac) Jejunum Kelinci dengan Berbagai ANOVA Source of Sum of df Mean F F Sig. variation Squares Square hitung tabel Between Groups 289,377 2 144,689 15,470* 5,14 0,004 Within Groups 56,117 6 9,353 Total 345,494 8 LSD Mean Difference (I-J) Std.Error Sig. (I) (J) 1 mm 2 mm 13,84443* 2,49704 0,001 3 mm 5,95407 2,49704 0,054 2 mm 1 mm -13,84443* 2,49704 0,001 3 mm -7,89037* 2,49704 0,020 3 mm 1 mm -5,95407 2,49704 0,054 2 mm 7,89037* 2,49704 0,020 * The mean difference is significant at the 0.05 level.

66 Lampiran 20. Gambar Grafik Log Kumulatif Terhadap Waktu dari 0,001 M, 0,002 M dan 0,003 M Tablet Furosemida Generik dengan Menggunakan Orde Satu 3.0 Log Kumulatif (mcg/ml) 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 0 10 20 30 40 50 waktu (menit) 0,001 M; y = 0,0119 x + 1,8732 0,002 M; y = 0,0273 x + 0,7959 0,003 M; y = 0,0298 x + 1,0082

67 Lampiran 21. Gambar Grafik Kumulatif Terhadap Akar Waktu dari 0,001 M, 0,002 M dan 0,003 M Tablet Furosemida Generik dengan Menggunakan Orde Higuchi 250 Kumulatif (mcg/ml) 200 150 100 50 0 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0-50 Akar waktu (menit) 0,001 M; y =35,344 x - 12,272 0,002 M; y = 16,794 x - 40, 325 0,003 M; y = 36,02 x - 93,691

68 Pada waktu t = 5 menit untuk tablet furosemida generik dengan konsentrasi 1,0 mm, dipipet larutan sebanyak 0,5 ml, diencerkan dengan larutan dapar fosfat ph 6,0 dalam labu tentukur 25 ml sampai garis tanda. Kemudian serapannya diukur pada panjang gelombang 277,0 nm sehingga diperoleh absorbansi 0,0759. Kemudian dihitung harga konsentrasi berdasarkan nilai absorbansi tersebut dengan menggunakan metode pendekatan berdasarkan rumus : A 1 = C 1 A C 2 2 Sehingga diperoleh harga konsentrasi cuplikan. Pada waktu t = 5 menit, diperoleh konsentrasi = mcg/ml, maka harga konsentrasi kumulatif pada menit ke-5 adalah : 25ml mcg/ml x x 1 ml = mcg/ml = M 0,5ml Pada waktu t = 10 menit, diperoleh konsentrasi = mcg/ml, maka konsentrasi cuplikan pada menit ke-10 adalah: 25ml mcg / mlx x1ml + 0,5ml mcg/ml = + mcg/ml = mcg/ml = M Pada waktu t = 15 menit, diperoleh konsentrasi = konsentrasi cuplikan pada menit ke-15 adalah : mcg/ml, maka 25ml mcg / mlx x1ml + mcg/ml= 0,5ml = + mcg/ml = mcg/ml = M Demikianlah seterusnya, sampai diperoleh kadar kumulatif tablet furosemida pada menit ke-45.