Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan

Transkripsi

1 Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan 58

2 Lampiran 2. Ethical clearance 59

3 Lampiran 3. Karakteristik tumbuhan daun Afrika Tumbuhan Afrika Daun Afrika 60

4 Lampiran 4. Gambar Sel HeLa yang telah konfluen (perbesaran 10x10) 61

5 Lampiran 5. Gambar Sel Vero yang telah konfluen (perbesaran 10x10) 62

6 Lampiran 6. Gambar Sel HeLa dalam kamar hitung (perbesaran 10x10) 63

7 Lampiran 7. Gambar Sel Vero dalam kamar hitung (perbesaran 10x10) 64

8 Lampiran 8. Gambar morfologi sel kanker serviks HeLa (perbesaran 10x10) setelah pemberian ekstrak Konsentrasi ekstrak 500 µg/ml Konsentrasi ekstrak 250 µg/ml 65

9 Lampiran 9. Gambar morfologi sel normal Vero (perbesaran 10x10) setelah pemberian ekstrak Konsentrasi ekstrak 500 µg/ml Konsentrasi ekstrak 250 µg/ml 66

10 Lampiran 10. Gambar ELISA Reader, Mikroskop Inverted Keterangan : Elisa Reader Keterangan : Mikroskop Inverted 67

11 Lampiran 11. Perhitungan Jumlah Sel pada hemositometer Jumlah Sel HeLa total (A + B + C + D) = 219 sel Jumlah sel/ml : sel/ml = sel A + sel B + sel C + sel D sel/ml = = 54,75 x 10 4 sel/ml Volume Panenan Sel HeLa : Jumlah total sel yang diperlukan Volume panenan sel = Jumlah sel terhitung/ml Volume panenan sel Hela = 54, = 1,2 ml di tambahkan media kultur hingga 10 ml untuk 1 plate. Jumlah Sel Vero total (A + B + C + D) = 357 sel Jumlah sel/ml : sel A + sel B + sel C + sel D sel/ml = 4 sel/ml = = 89,25 x 10 4 sel/ml 68

12 Volume Panenan Sel Vero : Volume panenan sel = Volume panenan sel = Jumlah total sel yang diperlukan Jumlah sel terhitung/ml , = 1,2 ml di tambahkan media kultur hingga 10 ml untuk 1 plate. 69

13 Lampiran 12. Perhitungan Persen Sel Hidup Dari Berbagai Konsentrasi Larutan Uji Ekstrak Etanol Daun Afrika (Vernonia amygdalina Del.) terhadap Sel Hela No. Absorbansi Kontrol Sel Absorbansi kontrol (a) Media (b) 1 0,678 0, ,678 0, ,669 0,108 Rata-Rata 0,675 0,089 Rumus Perhitungan Persen Sel Hidup : Absorbansi sel dengan perlakuan - Absorbansi kontrol media % Hidup = 100% Absorbansi kontrol media sel Absorbansi kontrol media Kadar Absorbansi Ratarata (c) c-b a-b % Hidup 500 0,135 0,159 0,163 0,152 0,064 0, ,114 0,122 0,215 0,150 0,062 0, ,275 0,317 0,243 0,278 0,190 0, ,5 0,602 0,493 0,522 0,539 0,450 0, ,25 0,330 0,400 0,548 0,426 0,337 0, ,625 0,507 0,509 0,507 0,508 0,419 0, % Mati 70

14 Lampiran 13. Perhitungan Persen Sel Hidup Dari Berbagai Konsentrasi Larutan Uji Ekstrak Etanol Daun Afrika (Vernonia amygdalina Del.) terhadap Sel Vero No. Absorbansi Kontrol Sel (a) Absorbansi kontrol Media (b) 1 0,914 0, ,874 0, ,892 0,056 Rata-Rata 0,893 0,057 Rumus Perhitungan Persen Sel Hidup : Absorbansi sel dengan perlakuan - Absorbansi kontrol media % Hidup = 100% Absorbansi kontrol media sel Absorbansi kontrol media Kadar Absorbansi Rata- Rata (c) c-b a-b % Hidup % Mati 500 0,102 0,095 0,093 0,123 0,066 0, ,095 0,091 0,103 0,122 0,065 0, ,620 0,684 0,663 0,546 0,489 0, ,5 0,795 0,786 0,822 0,653 0,596 0, ,25 0,821 0,816 0,821 0,669 0,612 0, ,625 0,849 0,884 0,629 0,643 0,586 0,

15 Lampiran 14. Perhitungan nilai IC 50 Ekstrak Etanol Daun Afrika (Vernonia amygdalina Del.) Sel HeLa menggunakan analisa Probit SPSS 22.0 Confidence Limits 95% Confidence Limits for 5% Confidence Limits for konsentrasi ekstrak Probability log(konsentrasi ekstrak) b stimate wer Bound Upper Bound Estimate wer Bound per Bound LOGIT a heterogeneity factor is used. ogarithm base =

16 Lampiran 15. Perhitungan nilai IC 50 Ekstrak Etanol Daun Afrika (Vernonia amygdalina Del.) Sel Vero menggunakan analisa Probit SPSS 22.0 Confidence Limits GIT a Probability stimate 95% Confidence Limits for konsentrasi ekstrak Lower Bound Upper Bound 95% Confidence Limits for log(konsentrasi ekstrak) b Lower stimate Bound er Bound

17 heterogeneity factor is used. ogarithm base =

18 Lampiran 16. Perhitungan nilai Indeks Selektivitas Indeks Selektivitas = IC 50 Sel Vero IC 50 Sel Hela = 79,561 µg/ml 61,357 µg/ml = 1,29 75

19 Lampiran 17. Uji Statistik ANOVA Pada Sel HeLa Descriptives Abdorbansi Zat N Mean Deviation td. Error Confidence Interval for Mean Minimum Maximum wer Bound per Bound , , , Total ANOVA Abdorbansi Zat Sum of Squares Df Mean Square F Sig. een Groups n Groups Post Hoc Tests Dependent Variable: Abdorbansi Zat (I) Kadar Daun Afrika Multiple Comparisons ) Kadar Daun Afrika an Difference (I-J) d. Error Sig. Confidence Interval Lower Bound per Bound y HSD * * * * * * * * * * * * * * * *

20 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * he mean difference is significant at the 0.05 level. Homogeneous Subsets Abdorbansi Zat Subset for alpha = 0.05 Kadar Daun Afrika N y HSD a , , , ns for groups in homogeneous subsets are displayed. es Harmonic Mean Sample Size = 3,

21 Lampiran 18. Uji Statistik ANOVA Pada Sel Vero Abdorbansi Zat 500 Descriptives N Mean. Deviation d. Error Confidence Interval for Mean Minimum Maximum wer Bound per Bound , , , Total Abdorbansi Zat ANOVA Sum of Squares df Mean Square F Sig. ween Groups in Groups l Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: Abdorbansi Zat Kadar Confidence Interval adar Daun Afrika Daun Afrika n Difference (I-J) d. Error Sig. wer Bound er Bound y HSD * * * *

22 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * he mean difference is significant at the 0.05 level. 79

23 Homogeneous Subsets Abdorbansi Zat Subset for alpha = 0.05 ar Daun Afrika N 1 2 y HSD a ns for groups in homogeneous subsets are displayed. es Harmonic Mean Sample Size = 4,

24 Lampiran 19. Bagan Pembuatan Media RPMI RPMI Sachet 2 g Hepes 2 g Dimasukkan kedalam erlenmeyer Ditambahkan 800 ml aquabidest steril Dihomogenkan dengan menggunakan stirer magnet Diatur ph 7,2 7,4 (HCl 1N atau NaOH 1N) Ditambahkan aquabidest steril samapai 1 l Dilakukan sterilisasi dengan penyaringan Ditampung dalam botol steril Diberi identitas pada botol media Disimpan pada suhu C Media RPMI 81

25 Lampiran 20. Bagan Pembuatan Media M199 M199 Sachet 2 g Hepes 2 g Dimasukkan kedalam erlenmeyer Ditambahkan 800 ml aquabidest steril Dihomogenkan dengan menggunakan stirer magnet Diatur ph 7,2 7,4 (HCl 1N atau NaOH 1N) Ditambahkan aquabidest steril samapai 1 l Dilakukan sterilisasi dengan penyaringan Ditampung dalam botol steril Diberi identitas pada botol media Media M199 Disimpan pada suhu C 82

26 Lampiran 21. Bagan Pembuatan Media Kultur Lengkap (MK RPMI) Fetal Bovine Serum (FBS) (10%) Penisilin- Streptomis in (1%) Fungizone (amphoteri cin B) (0,5%) RPMI ad 100% Dicampur Diberi identitas pada botol MK RPMI Disimpan pada suhu C Media Kultur Lengkap (MK RPMI) 83

27 Lampiran 22. Bagan Pembuatan Media Kultur Lengkap (MK M199) Fetal Bovine Serum (FBS) (10%) Penisilin- Streptomis in (1%) Fungizone (amphoterici n B) (0,5%) M199 ad 100% Dicampur Diberi identitas pada botol MK M199 Disimpan pada suhu C Media Kultur Lengkap (MK M199) 84

28 Lampiran 23. Bagan Penumbuhan Sel HeLa dan Vero Sel HeLa dan Diambil dari tangki nitrogen atau freezer Diambil beberapa tetes Dimasukkan kedalam konikel yg berisi RPMI/M199 Disentrifuge 6000 rpm selama 5 menit Dibuang supernatan Ditambahkan 4 ml MK RPMI Di resuspensi hingga homogen Dimasukkan ke dalam flask Ditambahkan 5 ml MK kedalam setiap flask Dihomogenkan Diamati kondisi sel dengan mikroskop inverted Diberi identitas pada flask Disimpan dalam inkubator CO2 5% Sel HeLa dan 85

29 Lampiran 24. Bagan Panen Sel HeLa dan Vero Sel HeLa dan Vero, alat, dan bahan Sel Panen HeLa dan Vero Dipersiapkan dan dikondisikan Diamati apakah sel telah konfluen 80% Dibuang MK dari flask dengan mikropipet Dicuci sel 2x dengan PBS Ditambahkan 400 µl trypsine-edta 0,25% Diinkubasi dalam inkubator CO2 5% selama 5 menit Ditambahkan 4 ml MK Di resuspensi dengan mikropipet Diamati sel dibawah mikroskop inverted Di resuspensi kembali jika masih ada sel yang menggerombol Ditransfer sel kedalam tabung konikel 86

30 Lampiran 25. Bagan Penghitungan Sel HeLa dan Vero Kultur Sel HeLa dan V Jumlah Sel HeLa dan Vero Diambil 10µl panenan sel Dipipetkan kedalam hemositometer Dihitung jumlah sel dibawah mikroskop 87

31 Lampiran 26. Bagan Pembuatan Larutan Uji Ekstrak etanol Ditimbang sebanyak 5 mg Dimasukkan kedalam polytube Dilarutkan dalam 50 µl DMSO Di vortex Dibuat pengenceran sampai diperoleh konsentrasi 500 µg/ml, 250 µg/ml, 125 µg/ml, 62,5 µg/ml, 31,25 µg/ml, 15,625 µg/ml Larutan Uji 88

32 Lampiran 27. Bagan Pengujian Sitotoksik Sel HeLa dan Vero Ditanam pada microplate 96 sumuran dengan kepadatan 1 x 10 4 Diinkubasi selama 24 jam Dibuang medium Ditambahkan medium baru Ditambahkan larutan uji Diinkubasi selama 24 jam Dibuang media dan larutan uji setelah 24 jam Dicuci dengan PBS Ditambahkan 100 µl MK dan 10 µl MTT (5 mg/ml) Diinkubasi selama 4-6 jam Ditambahkan SDS (sebagai stopper) Dibungkus dengan aluminium foil Dibiarkan selama 1 malam Dibaca serapan dengan ELISA reader pada λ 595 nm Absorban Dihitung % sel hidup Dihitung IC 50 dengan analisa probit menggunakan SPSS Nilai IC 50 89