Lampiran 1. Surat rekomendasi persetujuan etik penelitian kesehatan

Transkripsi

1 Lampiran 1. Surat rekomendasi persetujuan etik penelitian kesehatan

2 Lampiran 2. Surat hasil identifikasi daun bangun-bangun

3 Lampiran 3. Bagan pembuatan ekstrak etanol daun bangun-bangun Serbuk simplisia daun bangun-bangun 260 g - Maserat - dimasukkan ke dalam wadah kaca berwarna gelap dimaserasi dengan pelarut etanol 96% sebanyak 5L - ditutup wadah kemudian didiamkan selama 5 hari - dipisahkan maserat dan ampas - dimaserasi kembali ampas dengan pelarut etanol 96% sebanyak 2 L dan didiamkan selama 2 hari - dipisahkan kembali maserat dan ampas - digabung semua hasil maserat - diuapkan dengan rotary evaporator pada suhu C dipekatkan di atas penangas air Ekstrak kental 19,8533 g

4 Lampiran 4.Gambar makroskopik daun bangun-bangun Gambar Tumbuhan Bangun-Bangun Gambar Daun Bangun-Bangun

5 Gambar Simplisia Daun Lampiran 5. Bagan Bangun-Bangun alur penelitian Serbuk Simplisia Daun Bangun-Bangun Serbuk simplisia (260 g) dilakukan skrining fitokimia dan karakterisasi simplisia dimaserasi menggunakan etanol 96% yang telah didestilasi Hasil skrining fitokimia simplisia Penetapan kadar air simplisia Penetapan kadar sari larut dalam air simplisia Penetapan kadar sari larut dalam etanol simplisia Penetapan kadar abu total simplisia Penetapan kadar abu tidak larut asam simplisia Maserat Ekstrak kental 19,8533g Ampas diuapkan menggunakan rotary evaporator dilakukan uji aktivititas EEDBB terhadap kadar SOD dilakukan skrining fitokimia dan karakterisasi ekstrak Aktivitas Enzim SOD Hasil skrining fitokimia ekstrak Penetapan kadar air ekstrak Penetapan kadar sari larut dalam air ekstrak Penetapan kadar sari larut dalam etanol ekstrak Penetapan kadar abu Universitas total Sumatera Utara ekstrak Penetapan kadar abu tidak larut

6 Lampiran 5. Bagan alur penelitian (lanjutan) 30 ekor tikus betina Kontrol negatif (Dox) 20 mg/kg bb (5 ekor) hanya pada hari ke-8 dan ke-9 perlakuan Kontrol Pelarut (normal) (5 ekor) EEDBB : Dosis 250 mg/kg bb (5 ekor) Dosis 500 mg/kg bb (5 ekor) Dosis 750 mg/kg bb (5 ekor) Kontrol positif: rutin 50 mg/kg bb (5 ekor) diberikan perlakuan selama 9 hari secara per oral diberikan Dox 20 mg/kg bb secara i.ppada hari ke-8 dan ke-9 perlakuan dipuasakan selama 12 jam dan dianestesi dengan ketamin 70 mg/kg bb diambil darah dan organ hati Darah Hati Serum disentrifuge Disiapkan preparasi sesuai prosedurenzychrom dimasukan dalam wadah yang diberi buffer formalin 10 % dibuat preparat histologi

7 Lampiran 6.Gambar mikroskopik serbuk simplisia daun bangun-bangun Keterangan : a. Kristal kalsium oksalat bentuk prisma b. Rambut penutup multiselluler c. Rambut kelenjar bentuk glandular d. Pembuluh kayu berbentuk spiral

8 e. Epidermis berbentuk persegi panjang Lampiran 7. Gambar alat dan SOD Assay-Kit. Gambar: Spektrofotometer UV-Visible (Thermo scientific)

9 Gambar:SOD Assay-Kit. Gambar:Rotary Evaporator Lampiran 8. Perhitungan karakterisasi simplisia dan EEDBB A. Penetapan kadar air Volume air (ml) Kadar air = Berat sampel (g) x 100% Simplisia 1. Kadar air = 0,38 x 100% = 7,52% 5, Kadar air = 0,38 x 100% = 7,54% 5,0375

10 3. Kadar air = 0,39 x 100% = 7,60% 5,131 (7,52 + 7,54 + 7,60)% Kadar air rata-rata = = 7,55% 3 Ekstrak 1. Kadar air = 0,43 x 100% = 8,59% 5, Kadar air = 0,45 x 100% = 8,97% 5, Kadar air = 0,46 x 100% = 9,18% 5,012 (8,59 + 8,97 + 9,18)% Kadar air rata-rata = = 8,91% 3 Lampiran 8. (Lanjutan) B. Penetapan kadar sari larut air Berat sari air (g) Kadar sari larut air = Berat sampel (g) x x100% Simplisia

11 1. Kadar sari larut air = 0,3369 5,0830 x 100 x100% = 33,13% Kadar sari larut air = 0,3374 5,0043 x 100 x100% = 33,71% Kadar sari larut air = 0,2932 5,0261 x 100 x100% = 29,16% 20 (33, , ,16)% Kadar sari larut air rata-rata = = 32 % 3 Ekstrak 1. Kadar sari larut air = 0,3340 5,0020 x 100 x100% = 33,38% Kadar sari larut air = 0,3356 5,0020 x 100 x100% = 33,54% Kadar sari larut air = 0,2979 5,0010 x 100 x100% = 29,78% 20 (33, , ,78)% Kadar sari larut air rata-rata = = 32,23 % 3 Lampiran 8. (Lanjutan) C. Penetapan kadar sari larut etanol Berat sari etanol (g) Kadar sari larut etanol = x 100 Berat sampel (g) 20 x100% Simplisia

12 1. Kadar sari larut etanol = 0,0749 5,0020 x 100 x100% = 7,49% Kadar sari larut etanol = 0,0673 5,0050 x 100 x100% = 6,72% Kadar sari larut etanol = 0,0649 5,0210 x 100 x100% = 6,46% 20 (7,49 + 6,72 + 6,46)% Kadar sari larut etanol rata-rata = = 6,89% 3 Ekstrak 1. Kadar sari larut etanol = 0,0550 5,0020 x 100 x100% = 5,49% Kadar sari larut etanol = 0,0482 5,0010 x 100 x100% = 4,82% Kadar sari larut etanol = 0,0609 5,0010 x 100 x100% = 6,09% 20 (5,49 + 4,82 + 6,09)% Kadar sari larut etanol rata-rata = = 5,47% 3 Lampiran 8.(Lanjutan) D. Penetapan kadar abu total Berat abu (g) Kadar abu total = Berat sampel (g) x 100%

13 Simplisia 1. Kadar abu total = 0,3012 x 100% = 14,62% 2, Kadar abu total = 0,3100 x 100% = 15,20% 2, Kadar abu total = 0,3022 x 100% = 14,89% 2,0300 (14, , ,89)% Kadar abu total rata-rata = = 14,90% 3 Ekstrak 1. Kadar Abu Total = 0,080 x100% = 3,40% 2, Kadar Abu Total = 0,081 x100% = 3,80% 2, Kadar Abu Total = 0,065 x100% = 3,19% 2,038 3,40%+3,80% +3,19% Kadar Abu Total Rata-Rata = = 3,47% 3 Lampiran 8. (Lanjutan) E. Penetapan kadar abu tidak larut asam Berat abu(g) Kadar abu tidak larut asam = Berat sampel (g) x 100%

14 Simplisia 1. Kadar abu tidak larut asam = 0,0089 x 100% = 0,43% 2, Kadar abu tidak larut asam = 0,0092 x 100% = 0,45% 2, Kadar abu tidak larut asam = 0,0094 x 100% = 0,46% 2,0300 (0,43 + 0,45 + 0,46)% Kadar abu tidak larut asam rata-rata = = 0,45% 3 Ekstrak 1. Kadar abu tidak larut asam = 0,0020 x 100% = 0,10% 2, Kadar abu tidak larut asam = 0,0080 x 100% = 0,39% 2, Kadar abu tidak larut asam = 0,0050 x 100% = 0,24% 2,0380 (0,10 + 0,39 + 0,24)% Kadar abu tidak larut asam rata-rata = = 0,24% 3 Lampiran 9. Data hasil pengukuran standar SOD dan kurva standar SOD 1. Data hasil pengukuran standar SOD

15 No. Standard (U/mL) (x) OD 0 OD 60 ΔOD ΔΔOD (y) 1 3,0 0,054 0,051 0,003 0, ,4 0,055 0,065 0,010 0, ,8 0,055 0,067 0,012 0, ,2 0,056 0,068 0,012 0, ,54 0,056 0,068 0,012 0, ,24 0,057 0,071 0,014 0, ,12 0,057 0,073 0,016 0, ,058 0,075 0, Kurva standar SOD Absorbansi (440 nm) Kurva standar SOD Konsentrasi SOD (U/ml) y = ln(x) R² = Series2 Log. (Series2) Lampiran 10. Data hasil pengukuran aktivitas SOD sampel Kelompok OD 0 OD 60 (OD 60- ΔOD OD 0 ) Kontrol (CMC Na 1%) 0,0950 0,0660 0,1070 0,0770 0,0116 0,0110 ΔΔOD (std8- ΔOD) Aktivit as SOD (U/ml) 0,0054 0,0060 4,33

16 0,0990 0,0730 0,0810 0,1110 0,0840 0,0920 0,0115 0,0113 0,0112 0,0055 0,0057 0,0058 4,98 4,43 4,64 4,75 Doksorubisin 0,0570 0,0590 0,0670 0,0700 0,0710 0,0720 0,0740 0,0820 0,0850 0,0860 0,0150 0,0151 0,0148 0,0149 0,0153 0,0020 0,0019 0,0022 0,0021 0,0017 1,96 1,92 2,06 2,01 1,83 EEDBB (250 mg/kg BB) + Doksorubisin 0,0880 0,0860 0,0820 0,0810 0,0790 0,1082 0,1060 0,1019 0,1011 0,0985 0,0202 0,0200 0,0199 0,0201 0,0195 0,0032 0,0030 0,0029 0,0031 0,0025 2,59 2,48 2,42 2,54 2,20 EEDBB (500 mg/kg BB) + Doksorubisin 0,0660 0,0600 0,0781 0,0742 0,0690 0,0790 0,0812 0,0910 0,0950 0,0896 0,0130 0,0212 0,0129 0,0208 0,0206 0,0040 0,0042 0,0041 0,0038 0,0036 3,13 3,27 3,20 2,98 2,85 EEDBB (750 mg/kg BB) + Doksorubisin 0,0650 0,0620 0,0623 0,0880 0,0780 0,0760 0,0740 0,0737 0,1000 0,0897 0,0110 0,0120 0,0114 0,0119 0,0117 0,0060 0,0050 0,0056 0,0051 0,0053 4,98 3,94 4,53 4,04 4,23 Rutin 0,075 0,073 0,080 0,074 0,079 0,085 0,083 0,091 0,084 0,089 0,0106 0,0104 0,0107 0,0103 0,0105 0,0064 0,0066 0,0063 0,0067 0,0065 5,46 5,72 5,34 5,86 5,59 Contoh perhitungan kelompok kontrol pada sampel pertama : ΔOD = ΔOD 60 ΔOD 0 aktivitas SOD : y = 0,0043 ln(x) 0,0009

17 = 0, ,0950 0,0054 = 0,006 ln(x) 0,002 = 0,0116 x = 4,33 U/ml ΔΔOD = Standard 8 ΔOD = 0,017 0,0116 = 0,0054 ΔΔOD = y Lampiran 11. Perhitungan statistik aktivitas SOD ekstrak etanol daun bangunbangun 1. Kelompok kontrol CMC Na 1% (normal)

18 No Xi Aktivitas SOD (U/ml) (XX ii XX ) (XX ii XX ) 2 1 4,33-0,296 0, ,98 0,354 0, ,43-0,196 0, ,64 0,014 0, ,75 0,124 0,0154 n= 5 ΣX = 23,13 XX = 4,626 Σ(XX ii XX ) 2 = 0,2669 SD = ( Xi - X) n -1 2 = 0, = 0,2583 Maka rata rata nilai aktivitas SOD EEDBB pada kelompok kontrol adalah : µ = X ± SD = 4,626 ± 0,2583 U/ml Lampiran 11. (Lanjutan) 2. Kelompok kontrol negatif (doksorubisin 20 mg/kg bb)

19 No Xi Aktivitas SOD (U/ml) (XX ii XX ) (XX ii XX ) 2 1 1,96 0,0040 0, ,92-0,036 0, ,06 0,104 0, ,01 0,054 0, ,83-0,126 0, n= 5 ΣX = 9,78 XX = 1,956 Σ(XX ii XX ) 2 = 0,03092 SD = ( Xi - X) n -1 2 = 0, = 0,0879 Maka rata rata nilai aktivitas SOD pada kelompok doksorubisinadalah : µ = X ± SD = 1,956 ± 0,0879 U/ml Lampiran 11. (Lanjutan) 3. Kelompok EEDBB (250 mg/kb BB) + doksorubisin

20 No Xi Aktivitas SOD (U/ml) (XX ii XX ) (XX ii XX ) 2 1 2,59 0,144 0, ,48 0,034 0, ,42-0,026 0, ,54 0,094 0, ,20-0,246 0, n= 5 ΣX = 12,23 XX = 2,446 Σ(XX ii XX ) 2 = 0,09192 SD = ( Xi - X) n -1 2 = 0, = 0,152 Maka rata rata nilai aktivitas SOD EEDBB(250 mg/kb BB) + doksorubisin adalah: µ = X ± SD = 2,446 ± 0,152 U/ml Lampiran 11. (Lanjutan) 4. Kelompok EEDBB (500 mg/kb BB) + doksorubisin

21 No Xi Aktivitas SOD (U/ml) (XX ii XX ) (XX ii XX ) 2 1 3,13 0,044 0, ,27 0,184 0, ,20 0,114 0, ,98-0,106 0, ,85 0,236 0, n= 5 ΣX = 15,43 XX = 3,086 Σ(XX ii XX ) 2 = 0,11572 SD = ( Xi - X) n -1 2 = 0, = 0,170 Maka rata rata nilai aktivitas SOD EEDBB (500 mg/kb BB) + doksorubisinadalah : µ = X ± SD = 3,086 ± 0,170 U/ml Lampiran 11. (Lanjutan)

22 5. Kelompok EEDBB (750 mg/kg BB) + doksorubisin No Xi Aktivitas SOD (U/ml) (XX ii XX ) (XX ii XX ) 2 1 4,98 0,636 0, ,94-0,400 0, ,53 0,186 0, ,04 0,304 0, ,23-0,114 0, n= 5 ΣX = 21,72 XX = 4,344 Σ(XX ii XX ) 2 = 0, SD = ( Xi - X) n -1 2 = 0, = 0,421 Maka rata rata nilai aktivitas SODEEDBB (750 mg/kg BB) + doksorubisinadalah : µ = X ± SD = 4,344 ± 0,421 U/ml Lampiran 11. (Lanjutan)

23 6. Kelompok kontrol positif (rutin 50 mg/kg bb) No Xi Aktivitas SOD (U/ml) (XX ii XX ) (XX ii XX ) 2 1 5,46-0,134 0, ,72 0,126 0, ,34-0,254 0, ,86 0,266 0, ,59-0,004 0, n= 5 ΣX = 27,97 XX = 5,594 Σ(XX ii XX ) 2 = 0,16912 SD = ( Xi - X) n -1 2 = 0, = 0,2056 Maka rata rata nilai aktivitas SOD pada kelompok rutin adalah : µ = X ± SD = 5,594 ± 0,2056 U/ml Lampiran 12. Contoh perhitungan dosis EEDBB

24 Tabel volume maksimum larutan sediaan uji yang dapat diberikan pada hewan uji (Harmita dan Radji, 2008) Jenishewanuji Volume maksimal (ml) sesuaijalurpemberian iv. im. ip. sc. po. Mencit (20-30 g) Tikus (200 g) Hamster (50 g) Marmut (250 g) Merpati (300 g) Kelinci (2,5 kg) Kucing (3 kg) Anjing (5 kg) 0,5 0, , ,05 0,1 0,1 0,25 0,5 0, , , ,0 2, a. perhitungan dosis CMC-Na Sebagai kontrol pelarut (perlakuan normal) digunakan suspensi CMC-Na dengan dosis 10 ml/kg bb. Volume dosis maksimum untuk tikus adalah ml/kg (Laboratory Animal Resources Center of Oregon State University, 2011). Maka banyaknya suspensi CMC-Na yang akan diberikan untuk tikus dengan berat 200 g adalah : Volume = 10ml x 200 g 1000 g = 2 ml b. perhitungan dosis Rutin 50 mg/kg bb (kontrol positif) Dosis pemberian = 50 mmg xx 200 g 1000 g = 10 mg 50 mmmm 10 ml = 5 mmmm 1 ml 10 mmmm 5 mg, maka volume yang diberikan secara per oral : x 1 ml = 2 ml c. perhitungan dosis EEDBB (sediaan uji)

25 Sediaan uji ekstrak etanol daun bangun-bangun (EEDBB) juga diberikan dalam bentuk suspensi dan dibuat dalam konsentrasi 7,5% (75 mg/ml). Maka volume yang diberikan adalah sebagai berikut : dosis 250 mg/kg bb untuk tikus dengan berat 200 gram diberikan suspensi EEDBB sebanyak : Jumlah EEDBB 250 mg/kg bb = 250 mg x 200 g = 50 mg 1000 g Volume EEDBB yang diberikan = 50 mg 75 mg /ml = 0,67 ml dosis 500 mg/kg bb untuk tikus dengan berat 200 gram diberikan suspensi EEDBB sebanyak : Jumlah EEDBB 500 mg/kg bb = 500 mg x 200 g = 100 mg 1000 g Volume EEDBB yang diberikan = 100 mg 75 mg /ml = 1,33 ml dosis 750 mg/kg bb untuk tikus dengan berat 200 gram diberikan suspensi EEDBB sebanyak : Jumlah EEDBB 750 mg/kg bb = 750 mg x 200 g = 150 mg 1000 g Volume EEDBB yang diberikan = d. perhitungan dosis Ketamin 70 mg/kg bb 150 mg 75 mg /ml = 2 ml Ketamin digunakan sebagai anestesi dengan dosis 70 mg/kg bb. Pada sediaan ketamin yang digunakan tercantum tiap ml mengandung 100 mg ketamin.

26 70 mg x 200 g Dosis pemberian = = 14 mg 1000 g Volume ketamin yang diberikan = 14 mg 100 mg x 1 ml = 0,14 ml Dilakukan pengenceran menggunakan NaCl 0,9% sebanyak 0,3 ml. Volume yang diberikan secara i.p = 0,14 ml + 0,3 ml = 0,44 ml e. perhitungan dosis Doksorubisin 20 mg/kg bb (kontrol negatif) Doksorubisin dosis toksik 20 mg/kg bb untuk induksi stress digunakan sebagai kontrol negatif. Pada sediaan Doksorubisin yang digunakan tercantum tiap ml mengandung 2 mg Doksorubisin. Dosis pemberian = 20 mg x 200 g 1000 g = 4 mg Volume doksorubisin yang diberikan secara i.p = 4 mg 2 mg x 1 ml = 2 ml

27 Lampiran 13. Gambar sampel yang digunakan Gambar : Hati tikus dalam larutan formalin Gambar : Serum darah tikus

28 Gambar: Histologi hepatosit tikus Lampiran 14.Hasil analisis spss aktivitas SOD Aktivitas SOD Descriptives

29 95% Confidence Interval for Mean Std. Std. Lower Upper N Mean Deviation Error Bound Bound Minimum Maximum KONTROL DOKSORUBISIN BANGUN BANGUN BANGUN RUTIN Total ANOVA Aktivitas SOD Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups Within Groups Total Aktivitas SOD Tukey HSD Multiple Comparisons Mean 95% Confidence Interval Difference (I- (I) Sampel (J) Sampel J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound KONTROL DOKSORUBISIN * BANGUN * BANGUN * BANGUN RUTIN * DOKSORUBISIN KONTROL * BANGUN * BANGUN *

30 BANGUN * RUTIN * BANGUN 250 KONTROL * DOKSORUBISIN * BANGUN * BANGUN * RUTIN * BANGUN 500 KONTROL * DOKSORUBISIN * BANGUN * BANGUN * RUTIN * BANGUN 750 KONTROL DOKSORUBISIN * BANGUN * BANGUN * RUTIN * RUTIN KONTROL * DOKSORUBISIN * BANGUN * BANGUN * BANGUN * *. The mean difference is significant at the 0.05 level. Tukey HSD a Aktivitas SOD Subset for alpha = 0.05 Sampel N DOKSORUBISIN BANGUN BANGUN BANGUN KONTROL

31 RUTIN Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = Tests of Normality Kolmogorov-Smirnov a Shapiro-Wilk Sampel Statistic df Sig. Statistic df Sig. Konsentrasi KONTROL * DOKSORUBISIN * BANGUN * BANGUN * BANGUN * RUTIN * a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Lampiran 15.Prosedur EnzyChrom SuperOxide Dismutase Assay Kit (ESOD- 100)

32