PEMBUATAN PREPARAT IRISAN MELALUI METODE PARAFIN

Transkripsi

1 PEMBUATAN PREPARAT IRISAN MELALUI METODE PARAFIN Kelompok 1 Ardhania Pratiwi Erma Yunita Nur Azizah Yunita Putri JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS NEGERI MALANG

2 TUJUAN 1. Membuat preparat irisan melintang batang dengan metode parafin 2. Membuat preparat irisan melintang akar dengan metode parafin 3. Membuat preparat irisan melintang daun dengan metode parafin 4. Membuat preparat irisan bujur meristem apikal batang dengan metode parafin 5. Membuat preparat irisan bujur meristem apikal akar dengan metode parafin 6. Mendeskripsikan ciri khas preparat irisan yang dihasilkan terkait dengan: a. Struktur anatomis spesimen b. Teknis fiksasi dan pewarnaan yang dilakukan

3 BAHAN Dikotil : - Akar, batang/cabang, daun tumbuhan Klerek (Sapindus rarak) Monokotil : - Akar dan batang tumbuhan Jagung (Zea mays) - Daun tumbuhan Sereh (Cymbophogon nardus)

4 ALAT & BAHAN - Pompa Vakum - Neraca - Alkohol abs : Xylol = 2:2 - Desikator - Pipet tetes - Alkohol abs : Xylol = 1:3 - Oven - Pipet transfer - Xylol - Kulkas - Gelas koplin - Xylol - parafin - Mikrotom - Jarum preparat - Aquades - Mikroskop - Lampu spiritus - Eritrosin - Loupe - Gliserin - Safranin - Nampan pengering - Formalin - Kristal violet - Pisau - Asam asetat - Fast green - Silet - Alkohol 50% - Orange-G - Kaca benda - Alkohol 70% - Minyak Cengkeh - Kaca penutup - Alkohol 85% - Balsam - Beaker glass - Alkohol 95% Kanada/Entelan - Kuas - Alkohol absolut - Gelas ukur - Alkohol abs : Xylol = 3:1

5 PROSEDUR 1. Koleksi Spesimen 2. Fiksasi 3. Dehidrasi 4. Penjernihan 5. Infiltrasi 6. Pengeblokan 7. Pengirisan 8. Penempelan 9. Pengecatan/Pewarnaan 10. Mounting

6 KOLEKSI SPESIMEN

7 AKAR, BATANG, DAUN ( bisa dari tanaman pot, pengecambahan, piaraan dalam tempat lembab, kultur jaringan) Memotong Spesimen Memasukkannya ke dalam bejana/wadah yang di dalamnya terdapat air untuk mencegah kekeringan/kerusakan sebelum fiksasi

8 FIKSASI

9 Mengeluarkan udara dalam jaringan tumbuhan dengan menggunakan pompa vakum Hasil koleksi spesimen di rendam dalam akuades di dalam pompa vakum Jika spesimen sudah tenggelam,mengganti akuades di dalam pompa vakum dengan larutan fiksatif misal: FAA selama 24 jam/ tergantung jenis preparat

10 DEHIDRASI

11 Mengganti larutan fiksasi dengan alkohol 50%(rendam 30 menit/tergantung kebutuhan) Mengganti larutan alkohol 50% dengan alkohol 70%(rendam 30 menit/tergantung kebutuhan) Spesimen dapat disimpan

12 PENJERNIHAN

13 Alkohol/Xylol (3 : 1) 1 jam Alkohol/Xylol (1 : 1) 1 jam Alkohol/Xylol (1: 3) 1 jam Xylol I, 1 jam Xylol II, 1 jam

14 INFILTRASI

15 Xylol/ Parafin (1 : 1) 45 o 50 o C 1 jam Parafin I 65 o 70 o C 1 jam Parafin II 65 o 70 o C 1 jam

16 PENGEBLOKAN

17 Parafin pada dasar kotak Tambah parafin dan atur spesimen Luncur dan selam blok

18 PENGIRISAN

19 Menemukan tombol atau alat pengunci pisau mikrotom Mengatur tebal tipisnya irisan Memindah hasil irisan dan meletakkan pada kaca benda menggunakan kuas yang basah

20 PENEMPELAN

21 Melarutkan 1 gr gelatin dm 100 ml aquades Memanaskan sampai 30 C smbil diaduk.(hingga Larut) Menambahkan 2 gr kristal fenol dan 15 ml gliserin Menyaring selagi masih panas

22 Mengoleskan perekat Haupt diatas kaca benda Meneteskan sedikit formalin 3% diatas perekat Haupt pada kaca benda Letakkan irisan diatas formalin

23 Panaskan diatas lampu spiritus Sisa perekat dan formalin pada kaca benda dihisap menggunakan kertas hisap Mengeringkan preparat bisa menempatkan di kotak pengering

24 PEWARNAAN

25 Irisan tempel kering Xylol I (3 menit) Alkohol 70% (2 menit) Xylol II (3 menit) Alkohol 95% (2 menit) Alkohol absolut (2 menit)

26 Safranin 1% dalam alkohol 50% (2-24 jam) Air Air Kristal violet jenuh dalam aquades (1 menit) Alkohol absolut (3-4 celup) Alkohol absolut (3-4 celup) Orange-G jenuh dalam Minyak cengkeh (10 detik) Fast green 1% dalam Alkohol absolut (5-10 celup dalam 10 detik)

27 Alkohol absolut : Minyak cengkeh : xylol 1 : 1 : 1 Celup+goyang jernih Xylol I (2-5 menit) Xylol II (2-5 menit) MOUNTING

28 MOUNTING

29 Hasil pewarnaan Tetes balsem kanada/entelan Tutup kaca benda Simpan di pengeringan Pemeriksaan Preparat

30 PREPARAT AWETAN IRISAN

31 .terima kasih.