Lampiran 1. Penghitungan Dosis Pemberian Kepel.

Transkripsi

1 LAMPIRAN 30

2 31 Lampiran 1. Penghitungan Dosis Pemberian Kepel. Berat keseluruhan daging buah kepel yang masih basah:440 g, dan setelah dikeringkan diperoleh 60 g serbuk simplisia kering. Jadi rendemen kepel:60 g/440 g x 100% = 13.63% Dosis empiris konsumsi kepel pada manusia adalah 2 buah kepel dalam 2 hari. Jika diasumsikan berat kepel adalah 70 g/buah dan BB manusia 70 kg, maka konsumsi kepel pada manusia dalam dua hari adalah 140 g/70 kg. Konsumsi buah kepel dalam bentuk serbuk kering pada manusia adalah: 13.63/100 x 140 g= g atau rata-rata 20 g serbuk kering. Faktor konversi dosis manusia ke mencit: (Laurence & Bacharach 1964), sehingga dosis konsumsi kepel normal (sama dengan dosis pada manusia) adalah: = 20 g x = g/20g mencit = 52 mg/20 g mencit = 2.6 mg/g BB mencit (Dosis 1x) Dosis 5x= 2.6 mg/g BB x 5 = 13 mg/g BB.

3 32 Lampiran 2. Penghitungan Volume Pemberian Kepel. Dosis 1x = 2.6 mg/g BB Volume pemberian = (Dosis x BB)/Konsentrasi = (2.6 mg/g BB x 20 g)/10% = (2.6 mg/g x 20 g)/(10 g/100 ml) = (52 mg)/100 mg/ml = 0.5 ml Dosis 5x = 13 mg/g BB Volume pemberian = (Dosis x BB)/konsentrasi 0.5 ml= (13 mg/g x 20 g BB)/konsentrasi Konsentrasi = 260 mg/0.5 ml = 520 mg/ml Konsentrasi = 5.2 g/10ml 5.2 g serbuk buah dilarutkan ke dalam 10 ml akuades. Kepel tidak dapat tersuspensi dengan baik dalam akuades karena terlalu pekat sehingga untuk dosis 5x, konsentrasi yang digunakan sebesar 2.6 gr/10 ml, dan didapat volume pemberian sebesar 1 ml.

4 33 Lampiran 3. Pembuatan Sediaan Histopatologi dan Pewarnaan HE. Hati difiksasi dalam larutan Buffer Neutral Formalin 10% selama 3 hari. Hati yang sudah difiksasi dipotong-potong atau ditrimming dan dimasukkan kedalam tissue cassette. Selanjutnya jaringan didehidrasi dengan cara dimasukkan secara berturutturut ke dalam larutan alkohol 70%, 80%, 90% dan alkohol 95% selama 2 jam. Kemudian dehidrasi dilanjutkan ke dalam alkohol absolut I selama 2 jam, alkohol absolut II selama 2 jam, xylol I, xylol II dan xylol III masing-masing selama 40 menit, parafin I, parafin II, parafin III dan parafin IV masing-masing selama 30 menit dalam suhu 60 o C. Proses selanjutnya adalah embedding dimana jaringan dimasukkan ke dalam blok pencetak berisi parafin cair kemudian parafin cair ditambahkan lagi ke dalam blok pencetak hingga penuh dan ditunggu sampai seluruh parafin mengeras. Setelah paraffin mengeras blok paraffin dimasukkan ke dalam refrigerator dengan suhu sekitar 4-6 C. Proses pembuatan sediaan histopatologi dilanjutkan dengan pengirisan blok parafin menggunakan mikrotom dengan ketebalan 3-5 mµ. Kemudian potongan jaringan tersebut diletakkan di atas permukaan air hangat dengan suhu 45 C untuk menghilangkan lipatan-lipatan. Setelah itu potongan jaringan diangkat (mounting) dengan kaca objek yang sudah diulas dengan larutan albumin. Sediaan dikeringkan selama minimal 2 jam dalam inkubator bersuhu 58 C. Selanjutnya dilakukan pewarnaan HE, dengan mencelupkan sediaan ke dalam larutan-larutan dengan urutan sebagai berikut: larutan xylol I dan xylol II masingmasing selama dua menit, alkohol absolut selama 2 menit, alkohol 95% dan 80% masing-masing selama 1 menit, kemudian dicuci dalam air keran atau akuades selama 1 menit, dilanjutkan dengan memasukkan sediaan ke dalam larutan pewarna Mayer s Hematoksilin selama 8 menit, kemudian dicuci kembali dengan air keran selama 30 detik. Setelah itu sediaan dimasukkan ke dalam larutan lithium karbonat selama detik dan kembali dicuci dengan air keran atau akuades selama 2-3 menit. Selanjutnya sediaan diwarnai dengan pewarna eosin selama dua menit dan dicuci dalam air keran selama detik.

5 34 Langkah selanjutnya adalah mencelup sediaan ke dalam larutan alkohol 95% sebanyak sepuluh kali, alkohol absolut I sebanyak sepuluh kali, alkohol absolut II selama dua menit, xylol I selama satu menit, dan xylol II selama dua menit. Setelah itu sediaan dikeringkan dan diberi perekat permount, lalu ditutup dengan kaca penutup dan disimpan selama beberapa menit sampai zat perekat mengering dan sediaan siap untuk diamati.

6 35 Lampiran 4 Analisis Perubahan Degenerasi Hidropis Pada Sel Hati. dh * perlakuan Dh perlakuan Mean N Std. Deviation kontrol dosis 1x dosis 5x Total Duncan Dh Subset perlakuan N kontrol dosis 1x dosis 5x Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) =

7 36 Lampiran 5 Analisis Perubahan Apoptosis Pada Sel Hati. apoptosis * perlakuan apoptosis perlakuan Mean N Std. Deviation kontrol dosis 1x dosis 5x Total Duncan apoptosis Subset perlakuan N dosis 5x dosis 1x kontrol Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) =

8 37 Lampiran 6 Analisis Sel Hati Normal. normal * perlakuan normal perlakuan Mean N Std. Deviation kontrol dosis 1x dosis 5x Total Duncan normal Subset perlakuan N 1 2 dosis 5x dosis 1x kontrol Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) =