BAB III METODE PENELITIAN

Transkripsi

1 BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis Penelitian Jenis penelitian ini adalah eksperimen satu faktor yang menggunakan pola acak lengkap. B. Obyek, Waktu dan Tempat Penelitian 1. Obyek Penelitian Tikus putih (Rattus norvegicvus) sebanyak 20 ekor galur Wistar yang berjenis kelamin betina, usia 8-10 minggu dengan berat gram dan belum pernah bunting. 2. Waktu Penelitian ini dilaksanakan pada tanggal 1 November 2016 uji pendahuluan. dan pada tanggal 1 Januari 2017 dilakukannya uji definitif. 3. Tempat a. Pembuatan ekstrak biji pepaya (Carica papaya, L.) dilakukan di Farmasi Biologi UGM Unit II. b. Pemeliharaan tikus dilakukan di Unit Pengelolaan Hewan Laboratorium Biologi FMIPA UNY. c. Pembuatan preparat histologi organ dilakukan di Laboratorium Patologi FK UGM. 35

2 d. Pengamatan preparat histologi jumlah kelenjar endometrium, jumlah eritrosit dan lekosit dilakukan di Laboratorium Anatomi dan Zoologi Jurdik BIOLOGI FMIPA UNY. C. Teknik Penempatan Sample 1. Penempatan sampel uji pendahuluan Metode pengambilan sampel yang digunakan yaitu metode acak lengkap. Dengan mengambil tikus dari keranjang secara acak sebanyak 2 tikus dan diletakkan pada kotak/wadah pertama (perlakuan 1) kemudian diberi tanda yaitu merah dan biru, selanjutnya dilakukan sama untuk wadah selajutnya hingga wadah ke 4 (sampai perlakuan ke 3 dan kontrol). Ulagan tikus Wadah Kontrol (0 mg) Wadah Perlakuan 1 (100 mg/tikus/hari) Wadah Perlakuan 2 (200 mg/tikus/hari) Wadah Perlakuan 3 (300 mg/tikus/hari) Ulangan 1 Ulangan 2 Merah Merah Merah Merah Biru Biru Biru Biru 2. Penentuan dosis uji pendahuluan Dosis yang akan digunakan yaitu 0, 100, 200, dan 300 mg/tikus/hari. Uji pendahuluan dilakukan agar diketahui pasti apakah dosis yang ditentukan tersebut sudah cukup berpengaruh terhadap jumlah kelenjar endometrium, jumlah eritrosit dan lekosit tikus putih betina. Rumus penentuan dosis : 36

3 10% (ekstrak) Membuat 50 ml ekstrak cair 10 gram + 40 ml aquadesh = 50 ml ekstrak cair mg ekstrak kental = 50 ml ekstrak cair Berarti : 100 mg = ½ ml ekstrak cair (dalam 100 mg ekstrak kental dilarutkan dengan aquadesh hingga volume 0,5 ml) 200 mg = 1 ml ekstrak cair (dalam 200 mg ekstrak kental dilarutkan dengan aquadesh hingga volume 1 ml) 300 mg = 1 ½ ml ekstrak cair (dalam 300 mg ekstrak kental dilarutkan dengan aquadesh hingga volume 1,5 ml) D. Variabel Penelitian uji pendahuluan 1. Variabel Bebas uji pendahuluan Pemberian ekstrak biji pepaya dalam konsentrasi yang bervariasi pada tiap kelompok perlakuan, kelompok kontrol (tanpa pemberuan ekstrak biji pepaya), perlakuan 1 (100 mg/tikus/hari), perlakuan 2 (200 mg/tikus/hari), dan perlakuan 3 (300 mg/tikus/hari). 2. Variabel Tergayut : Jumlah kelenjar endometrium per satuan lapang pandang pada struktur penampang melintang uterus dengan perbesaran lensa objektif 10x (dilihat pada layar monitor), jumlah eritrosit dan lekosit tikus putih (Rattus norvegicvus) betina (1 ml /tikus/hari). 37

4 3. Perlakuan standart : a. Pakan dan minum untuk tikus selalu tersedia setiap saat b. Waktu pemberian ekstrak biji pepaya pukul 13:00 c. Jenis tikus galur Wistar d. Ukuran kandang E. Hasil Data Uji Pendahuluan 1. Hasil uji pendahuluan Pengaruh Pemberian Ekstrak Biji pepaya Terhadap Jumlah Kelenjar Endometrium Dilakukannya uji pendahuluan untuk mengetahui konsentrasi yang tepat untuk digunakan pada saat uji definitif. Tabel 1. Rata-Rata Jumlah Kelenjar Endometrium Uterus Tikus Putih Betina per satuan lapang pandang dengan perbesaran lensa objektif 10x (dilihat pada layar monitor) Sesudah Pemberian Ekstrak Biji Pepaya Uterus Ulangan K P1 P2 P3 Kanan Rata-rata 39,5 23, ,5 Kiri Rata-rata 29,5 15, Hasil Uji Pendahuluan Pengaruh Pemberian Ekstrak Biji Pepaya Terhadap Jumlah Eritrosit Dan Lekosit Tikus Putih Betina Tabel 2. Rata-Rata Jumlah Eritrosit Dan Lekosit Tikus Putih Betina Sesudah Pemberian Ekstrak Biji Pepaya Rata-Rata Jumlah Eritrosit (mm 3 ) dan Lekosit (mm 3 ) Tikus Variabel Ulangan kontrol (0 mg) Perlakuan 1 (100 mg/tikus/hari) Perlakuan 2 (200 mg/tikus/hari) Perlakuan 3 (300 mg/tikus/hari) Eritrosit 1 (merah ) (/2 ml) 2 (biru) Rerata Lekosit (/2ml) 1 (merah ) (biru)

5 Hasil data uji pendahuluan dari pengaruh ekstrak biji pepaya terhadap jumlah kelenjar endometrium, jumlah eritrosit dan lekosit tikus putih betina tidak berpengaruh nyata, dengan hasil signifikasi dari uji Kruskal wallis jumlah kelenjar endometrium sebelah kanan yaitu 0,238 dan jumlah kelenjar endometrium sebelah kiri yaitu 0,100 angka ini lebih besar dari taraf uji 0,05. Artinya Ha ditolak. Hasil uji One Way Anova angka signifikasi jumlah eritrosit yaitu sebesar 0,640 dan lekosit sebesar 0,696 artinya angka ini juga lebih besar dari pada taraf uji 0,05. maka dilakukannya pertambahan dosis untuk uji definitif yaitu sebesar 300, 350, dan 400 mg/ 150 BB tikus/hari. F. Penempatan Sampel uji definitif Metode pengambilan sampel yang digunakan yaitu metode acak lengkap. Mengambil tikus dari kerangjang secara acak sebanyak 5 tikus dan di letakkan pada kotak/wadah pertama (kontrol) kemudian diberi tanda yaitu (warna merah, hijau, merah-merah, hijau-hijau, merah-hijau), selanjutnya dilakukan sama untuk wadah perlakuan 1, 2, dan 3. Contoh : 39

6 Ulagan tikus Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Ulangan 4 Ulangan 5 Wadah Kontrol (0 mg) Wadah Perlakuan 1 (100 mg/tikus/hari) Wadah Perlakuan 2 (200 mg/tikus/hari) Wadah Perlakuan 3 (300 mg/tikus/hari) Merah Merah Merah Merah Hijau Hijau Hijau Hijau Merah-merah Merah-merah Merah-merah Merah-merah Hijau-hijau Hijau-hijau Hijau-hijau Hijau-hijau Merah-hijau Merah-hijau Merah-hijau Merah-hijau G. Variabel Penelitian uji definitif 1. Variabel Bebas Pemberian ekstrak biji pepaya dalam konsentrasi yang bervariasi pada tiap kelompok perlakuan, kelompok kontrol (tanpa pemberuan ekstrak biji pepaya), perlakuan 1 (300 mg/tikus/hari), perlakuan 2 (350 mg/tikus/hari), dan perlakuan 3 (400 mg/tikus/hari). 2. Variabel Tergayut : Jumlah kelenjar endometrium per satuan lapang pandang pada struktur penampang melintang uterus dengan perbesaran lensa objektif 10x (dilihat pada layar monitor), jumlah eritrosit dan lekosit tikus putih (Rattus norvegicvus) betina (1 ml /tikus/hari). 3. Perlakuan Standart : a. Pakan dan minum untuk tikus selalu tersedia setiap saat b. Waktu pemberian ekstrak biji pepaya pukul 10:00 (uji definitif) 40

7 c. Jenis tikus galur Wistar d. Ukuran kandang H. Populasi dan Sampel Penelitian 1. Populasi Tikus putih (Rattus norvegicus) betina galur Wistar yang belum pernah bunting. 2. Sampel Sampel dalam penelitian ini adalah 8 ekor tikus untuk uji pendahuluan pada bulan November 2016, dan 20 ekor untuk uji definitif pada bulan Januari 2017 tikus putih (Rattus norvegicus) galur Wistar betina usia 8-10 minggu dengan berat gram dan belum pernah bunting yang diberi perlakuan ekstrak biji pepaya. Tikus ini didapatkan / dibeli di (LPPT) UGM. I. Alat dan Bahan Penelitian 1. Alat yang digunakan Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu kandang tikus, tempat pakan dan minum, alat suntik dan sonde, oven, botol flakon, Timbangan makro dan mikro, Sarung tangan, kertas label, gunting, gelas benda, cover glass, mikroskop transmisi, pinset, petri, alat tulis, kuas, bak parafin, cutton buds, mikroskop, alat bedah, gelas benda, alat pengekstrak, alat-alat pembuatan preparat. 41

8 2. Bahan yang digunakan Bahan yang digunakan dalam penelitian ini berupa: alkohol, tikus putih betina, pakan dan minum tikus, ekstrak biji pepaya, sabun / antiseptik, aquades, etanol 96%, NaCl, latutan hayem, larutan turk, formalin, methanol, kloroform, xylol, larutan hematoxylin, larutan eosin, garam fisiologi, gliserin. J. Prosedur Kerja 1. Tahap Persiapan a. Menyiapkan tikus putih sebanyak 8 ekor untuk uji pendahuluan dan 20 ekor tikus putih untuk pengambilan data dengan bobot dan umur yang sama (berat badan rata-rata gr dan umur 2 bulan). b. Menyiapkan kandang tikus sebanyak 4 kandang. c. Melakukan ektraksi biji pepaya di Farmasi UGM unit II. d. Menyiapkan ekstrak bij pepaya 2. Pembuatan Ekstrak Biji Pepaya Dengan Teknik Maserasi Simplisia kering dari biji pepaya dihancurkan, kemudian massa yang telah halus dimasukkan kedalam maserator dan dituangi dengan etanol 96 % sampai terdapat selapis cairan penyari di atas simplisia. Proses maserasi yang dilakukan dengan cara perendaman dibiarkan selama 24 jam. Cairan hasil ditampung dan sisa ampas simplisia direndam kembali dengan etanol 96% dan dibiarkan selama 24 jam. Cairan hasil maserasi ditampung kembali dan dilakukan meserasi kembali pada sisa simplisia hingga didapat tiga cairan hasil maserasi dari simpliasia. Seluruh hasil maserasi tersebut dievaporasi 42

9 menggunakan alat evaporator sehingga di dapat ekstrak kental yang terpisah dari pelarut etanolnya. 3. Aklimatisasi a. Menyiapkan sekitar 8 ekor untuk uji pendahuluan dan 20 ekor tikus putih untuk pegambilan data galur Wistar dengan umur sekitar 2 bulan dan berat ± gram. b. Menyiapkan 4 kandang tikus, dan mengambil tikus secara acak sehingga masing-masing kandang terisi 2 ekor tikus untuk uji pendahuluan dan 5 ekor tikus untuk uji definitif. c. Pemberian pakan dan minum tikus dilakukan 1 hari sekali. d. Setiap 3 hari sekali dilakukan pergantian alas dengan mengganti serbuk gergaji lama dengan yang baru. e. Proses aklimatisasi dilakukan selama 7 hari di Unit Pengelolaan Hewan Biologi UNY. 4. Penentuan Dosis Hasil uji pendahuluan dosis tersebut tidak memberikan pengaruh yang nyata, maka pada uji definitif dilakukannya penambahan dosis sebesar 300, 350, dan 400 mg/tikus/hari. Hasil pelarutan ekstrak biji pepaya sebagai berikut: mg ekstrak kental = 50 ml ekstrak cair Berarti : 300 mg ekstrak kental = 1,5 ml ekstrak cair 350 mg ekstrak kental = 1,75 ml ekstrak cair 400 mg ekstrak kental = 2 ml ekstrak cair 43

10 5. Tahap Pelaksanaan a. Pemberian ekstrak biji pepaya Ekstrak biji pepaya diberikan secara oral pada tikus perlakuan sesuai dosisnya masing-masing dan diberikan setiap 1 hari sekali sebelum makan pada pagi menjelang siang hari selama 21 hari. b. Pemeliharaan dengan pemberian pakan pellet AD 1 secara rutin. c. Ulas vagina dilakukan pada awal sebelum pemberian ekstrak dan setelah selesai pemeberian ekstrak pada hari ke-22 untuk mengetahui siklus estrusnya. Salah satu cara untuk mengetahui siklus estrus tikus putih betina dengan cara ulas vagina, adapun prosedur pembuatan ulas vagina adalah gelas benda dibersihkan dengan alkohol 70%. Cotton bud dicelupkan ke dalam NaCl fisiologis, kemudian dimasukkan ke dalam vagina tikus sedalam 1 cm kemudian diputar secara merata dan perlahan-lahan sehingga diperoleh jaringan mukosa vagina. Cotton bud yang mengandung mukosa vagina selanjutnya dioleskan di atas gelas obyek sambil diputar sehingga diperoleh olesan yang merata. Gelas obyek kemudian dikering anginkan di udara kemudian difiksasi dengan methanol 70% selama 15 menit. Sediaan dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan pada suhu kamar. Sediaan ulas vagina kemudian ditetesi dengan cat gymsa selama 5 menit dan dicuci dengan air mengalir kemudian diamati di bawah mikroskop. Penentuan fase siklus estrus dilakukan berdasarkan keberadaan jumlah sel-sel epitelnya. 44

11 d. Pengamatan jumlah sel darah merah dan putih pengambilan sel darah dari tikus tersebut dengan meggunakan pipa hematokrit, di bagian vena orbitalis sebanyak 1 ml, dan meletakkan di atas hemositometer kemudian meneteskan dengan dengan Hayem untuk mengecek jumlah eritrosit dan meneteskan dengan Turk untuk mengecek jumlah lekosit tikus putih. 1) Penghitungan Jumlah Eritrosit dan Lekosit Cara penghitungan jumlah eritrosit dan lekosit dengan cara sampling sebagai berikut (Nurcahyo, 2003: 31,38). a) Mengambil darah yang ada dalam mikrotube dengan pipet khusus sampai tanda 0,5 kemudian membersihkan ujung pipet dengan kertas tissue. Hisap reagent hayem sampai tanda 101 (jangan sampai ada gelembung udara), kemudian pipet digoyangkan perlahan sampai homogen. b) Menyiapkan bilik hitung (haemacytometer). c) Dua tetes pertama larutan darah dalam pipet tersebut dibuang terlebih dahulu, lalu meneteskan dalam pipet ke haemacytometer yang telah diletakkan gelas penutup di atasnya lewat tepi sampai merata. d) Darah yang sudah ada dalam haemacytometer diamati menggunakan mikroskop dengan perbesaran lensa objektif 100x (dilihat pada layar monitor). e) Jumlah sel darah merah yang terhitung dimasukkan dalam rumus sebagai berikut: 45

12 Jumlah SDM = (SDM yang dihitung x 10 x 5 x 200) mm3 Keterangan: Angka 10 berasal dari dalamnya pipet 0,1 mm dijadikan 1 mm (10 kali) Angka 5 berasal dari 1/5 dari 1 mm3 (25 kotak) Angka 200 berasal dari pengenceran 200 kali (0,5 menjadi 101) Penghitungan sel darah putih, sama halnya dengan langkah kerja pada penghitungan sel darah merah. Reagent yang digunakan adalah reagent turk dan pipet khusus yang digunakan bertanda khusus 11. Perhitungan dilakukan pada 5 kotak besar haemocytometer dan jumlahnya dihitung denganrumus: Jumlah SDP = ((ax20x10)/4) mm3 Keterangan: Jumah SDP (a) Jumlah rata-rata kotak (b) Angka 20 berasal dari pengenceran 0,5 menjadi 11 (20 kali) Angka 10 berasal dari kedalaman parit 0,1 mm (menjadi 1 mm) Angka 4 berasal dari kotakan (mestinya hanya 1 kamar) e. Melakukan pembedahan dan pembuatan preparat Pembedahan dan pembuatan preparat organ uterus yang di dalamnya mencakup kelenjar endometrium, dan pembuatan preparat eritrosit dan lekosit. f. Pembuatan preparat histologi. Pembedahan dilakukan terhadap tikus pada hari ke 22 pada saat fase estrus kemudian pengambilan organ uterus, kemudian direndam dalam 46

13 formalin 10 %. Pembuatan preparat dilakukan di Fakultas Kedokteran UGM dengan cara kerja sebagai berikut: 1) Fixation yang telah dilabeli dimasukkan kedalam fixative, yaitu formalin 10%. 2) Trimming Triming adalah tahapan yang dilakukan setelah proses fiksasi dengan melakukan pemotongan tipis jaringan setebal kurang lebih 4 mm. 3) Dehydration (Pengeringan) Dehidrasi jaringan dimaksudkan untuk mengeluarkan air yang terkandung dalam jaringan, dengan meggunakan cairan dehidran yaitu alkohol secara bertingkat dengan waktu yang tertentu yaitu a) Alkohol 80%, dilakukan 2 jam perendaman b) Alkohol 96%, dilakukan 2 jam perendaman c) Alkohol 96%, dilakukan 1 jam perendaman d) Alkohol absolut, dilakukan 1 jam perendaman e) Alkohol absolut, dilakukan 1 jam perendaman f) Alkohol absolut, dilakukan 1 jam perendaman 4) Clearing (Penjernihan) Proses ini bertujuan untuk menghilangkan alkohol, agar parafin dapat masuk ke dalam jaringan. Agen penjernihan adalah Xylol dengan cara bertahap yaitu : a) Xylol, dilakukan 1 jam perendaman b) Xylol, dilakukan 1 jam perendaman 47

14 c) Xylol, dilakukan 1 jam perendaman 5) Parafination Proses infiltrasi dilakukan didalam oven (incubactor) dengan perbandingan xilol : paraffin = 1:1 selama 120 menit pada suhu 60 0 C. Pemberian paraffin murni dilakukan selanjutnya pada suhu 60 0 C selama 120 menit kemudian dilanjutkan pemberian paraffin murni pada suhu 60 0 C selama 120 menit. 6) Embeddingi (Penanaman) Jaringan berada pada parafin kemudian dilekatkan pada balok kayu ukuran 3x3 cm atau embedding cassette. Fungsi dari balok kayu atau embedding cassette adalah untuk pemegang pada saat blok dipotong dengan mikrotom. 7) Sectioning (pemotongan menggunakan mikrotom) a) Blok parafin yang telah berisi jaringan, diiris menggunakan scalpelsehingga bagian yang akan diiris dengan pisau mikrotom berbentuk segiempat teratur. Preparat diletak ditengah, kira-kira 3-5 mm dari tepinya. b) Meletakkan blok parafin pada holder kayu. c) Memasang holder dengan blok paraffin pada rotary mikrotom yang direkatkan. d) Menyiapkan tempat coupes atau pita preparat dan kuas kecil untuk mengambil coupes dari pisau mikrotom. 48

15 e) Mengatur tebal tipisnya coupes dengan mengatur pada pengaturan di mikrotom. f) Memasukkan preparat ke dalam nampan yang berisi air hangat. Hal tersebut dilakukan agar coupes dapat merentang dan jaringan tidak melipat. g) Menempelkan coupes pada gelas benda (pada proses affixing) yang sebelumnya telah diolesi oleh putih telur atau albumin. 8) Affixing a) Meletakkan sejumlah coupes (irisan tengah pita preparat) pada kaca benda yang telah diberi perekat dengan gliserin dan albumin. b) Memindahkan kaca-kaca gelas benda yang berisi coupes tersebut keatas hot plate dengan suhu (40-45 C), adanya kelebihan air dihisap dengan menggunakan pipet/kertas saring, dan mengarur letak coupes dengan parafinnya direntangkan. 9) Pewarnaan menggunakan Hematoxylin-Eosin a) Mencelupkan kaca benda yang telah ditempeli coupes ke dalam xylol secara berulang yaitu : Xylol (I) selama 5 menit Xylol (II) selama 5 menit Xylol (III) selama 5 menit b) Melakukan dehidrasi berulang yakni: Alkohol absolut (I) selama 5 menit Alkohol absolut (II) selama 5 menit 49

16 c) Mencelupkan coupes kedalam aquadest selama 1 menit d) Mencelupkan kedalam Harris-Hematoxyilin selama 20 menit e) Mencelupkan coupes kedalam aquadest selama 1 menit f) Mencelupkan coupes kedalam acid alkohol sebanyak 2-3 celupan g) Mencelupkan coupes kedalam aquadest selama 1 menit h) Mencelupkan coupes kedalam aquadest selama 15 menit i) Kemudian mencelupkan kedalam Eosin selama 2 menit j) Melakukan dehidrasi berulang lagi yakni: Alkohol 96% (I) selama 3 menit Alkohol 96% (I) selama 3 menit Alkohol absolut (III) selama 3 menit Alkohol absolut (IV) selama 3 menit k) Mecelupkan kedalam Xylol yaitu : Xylol (IV) selama 5 menit Xylol (V) selama 5 menit l) Memounting dengan permount. g. Pengamatan struktur histologik Preparat yang telah dibuat di amati dan dihidung dengan cara sampling dibawah mikroskop per satuan lapang pandang pada struktur penampang melintang uterus dengan perbesaran objektif 10x (dilihat pada layar monitor) dan diamati seluruh lapang pandang preparat histologik kelenjar endometrium, kemudian dibandingkan antara preparat perlakuan dan kontrol. Pengambilan gambar preparat menggunakan optilab. 50

17 K. Metode Pengumpulan Data Metode ini dilakukan dengan memberi perlakuan konsentrasi ekstrak biji pepaya (0, 300, 350, dan 400 mg/tikus/hari) untuk uji definitif, setelah dilakukannya uji pendahuluan, yang diberikan dengan cara dicekokkan pada hewan uji coba, untuk melihat jumlah kelenjar endometrium yang ada pada struktur struktur histologik endometrium tikus putih (Rattus norvegicus) betina per satuan lapang pandang pada struktur penampang melintang uterus dengan perbesaran lensa objektif 10x (dilihat pada layar monitor), yang belum pernah bunting, juga untuk melihat jumlah sel eritrosit dan lekosit tikus putih (Rattus norvegicus) betina yang belum pernah bunting. Penelitian diakhiri setelah hari ke 22, setelah semua tikus telah mengalami fase estrus. Tikus dimatikan dengan cara dimasukkan ke dalam killing bottle, kemudian diambil darahnya melalui mata tikus (vena orbitalis) dengan pipa hematokrit kemudian tikus dibedah dan diambil organ uterusnya untuk dibuat preparat histologi. Preparat organ uterus, dan preparat eritrosi dan lekosit diamati menggunakan mikroskop untuk mengetahui akibat pengaruh pemberian ekstrak biji pepaya terhadap jumlah kelenjar endometrium per satuan lapang pandang pada struktur penampang melintang uterus dengan perbesaran lensa objektif 10x (dilihat pada layar monitor), jumlah eritrosit dan lekosit tikus putih (Rattus norvegicus) betina kemudian dilakukan analisis terhadap hasil perhitungan tersebut. 51

18 L. Desain Penelitian Desain pada penelitian ini merupakan eksperimen satu faktor pola acak lengkap. Jenis data dari hasil penelitian ini merupakan eksperimen. M. Teknik Analisis Data Data yang diperoleh merupakan data kuantitatif dari hasil pengamatan dan penghitungan jumlah kelenjar endometrium per satuan lapang pandang pada struktur penampang melintang uterus dengan perbesaran lensa objektif 10x (dilihat pada layar monitor), jumlah eritrosit dan lekosit tikus putih yang telah diberi perlakuan, yaitu pemberian ekstrak biji pepaya. Analisis data menggunakan program SPSS 16 dengan analisis nonparametrik Kruskal- Wallis untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh pemeberian ekstrak biji pepaya terhadap jumlah kelenjar endometrium tikus putih tikus putih. dan Data jumlah eritrosit dan lekosit pada tikus putih dianalisis menggunakan analisis kontrol One Way Anova dengan taraf signifikan p<0,05. Analisis tersebut dilakukan untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh ekstrak biji pepaya terhadap jumlah eritrosit dan lekosit tikus putih betina. Apabila hasil berpengaruh yang nyata, dilanjutkan dengan uji Duncan s Multiple Range Test (DMRT) untuk membandingkan antara kelompok kontrol dengan masing-masing perlakuan, bila tidak maka tidak dilanjutkan uji Duncan s Multiple Range Test (DMRT). 52