UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI DAUN PUTRI MALU (Mimosa pudica Linn.) DAN IDENTIFIKASI SENYAWA MENGGUNAKAN MS/MS SKRIPSI Diajukan sebagai salah satu syarat Untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi PRASETYO HADI MULIA 1108010012 PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO 2017 i
ii
iii
iv
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI DAUN PUTRI MALU (Mimosa pudica Linn.) DAN IDENTIFIKASI SENYAWA MENGGUNAKAN MS/MS Prasetyo Hadi, Asmiyenti Djaliasrin Djalil, Retno Wahyuningrum ABSTRAK Beberapa penelitian menyebutkan bahwa daun putri malu memiliki khasiat dalam bidang kesehatan, salah satunya yaitu memiliki aktivitas antibakteri. Pada penelitian kali ini dilakukan pengujian aktivitas antibakteri ekstrak metanol daun putri malu pada bakteri Gram negatif yaitu Pseudomonas aeruginosa dan bakteri Gram positif yaitu Basillus subtilis. Dalam penelitian ini juga dilakukan identifikasi senyawa yang memiliki aktivitas antibakteri paling aktif pada ekstrak metanol daun putri malu menggunakan MS/MS. Pada pengujian aktivitas antibakteri terhadap ekstrak metanol, fraksi n heksana, fraksi etil asetat, dan fraksi metanol-air. Yang memiliki aktivitas antibakteri paling aktif, yaitu fraksi metanol-air. Fraksi metanol-air kemudian dilakukan pemisahan dengan menggunakan KLT preparatif menggunakan pelarut etil asetat:kloforom (8:2). Pemisahan ini mendapat 7 isolat yang kemudian dilanjutkan penelitian menggunakan MS/MS. Hasil yang didapat pada penelitian MS/MS adalah m/z base peak tiap isolat dari pecahan fragmen paling dominan setiap isolatnya yaitu m/z 65,10. Kata kunci: Aktivitas antibakteri, daun putri malu, identifikasi senyawa dengan MS/MS v
ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF Mimosa pudica Linn. LEAVES AND COMPOUNDS IDENTIFICATION WITH MS/MS Prasetyo Hadi, Asmiyenti Djaliasrin Djalil, Retno Wahyuningrum, ABSTRACT Some research say that leaves of the Mimosa pudica has health benefit, one of which is having antibacterial activity. In this research, the antibacterial activity of methanolic extract the Mimosa pudica leaves makes orchid parent in Gram negative bacteria, Pseudomonas aeruginosa and Gram positive bacteria, Basillus subtilis. In this study also conducted identification of compounds that have the most aktive antibacterial activity on extract methanolic Mimosa pudica using MS/MS. In testing of antibacterial activity to methanolic extract, n-hexane fraction, ethyl acetate fraction, and methanol-water fraction. Which has the most active antibacterial activity is methanol-water fraction. The methanol-water fraction was then separated using preparative KLT using the solvent ethyl acetate : chloroform (8:2). This separation got 7 isolates which then continued research using MS/MS. The results obtained in the MS/MS study were m/z base peak of each isolate of the most dominant fragment fragments of each isolate of m/z 65,10. Keywords: Antibacterial activity, Mimosa pudica leaves, Compounds identification with MS/MS vi
KATA PENGANTAR Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa, karena atas berkah dan rahmat-nya, dapat menyelesaikan skripsi ini dengan judul Aktivitas Antibakteri Daun Putri Malu (Mimosa pudica linn) Dan Identifikasi Senyawa menggunakan LC-MS/MS. Penulisan skripsi ini dilakukan dalam rangka memnuhi salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Program Studi S1 Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto. Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak, dari masa perkuliahan sampai pada penyusunan skripsi ini, sangatlah sulit untuk menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, pada kesempatan ini, penulis mengucapkan terimakasih kepada yang terhormat: 1) Dr. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H., M.H., selaku Rektor Universitas Muhammadiyah Purwokerto; 2) Dr. Agus Siswanto. M.Si., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi yang telah berbagi informasi dan bimbingan tentang tata laksana penyusunan skripsi; 3) Wahyu Utaminingrum, M.Sc., Apt., selaku Ketua Program Studi S1 Farmasi yang telah membimbing dalam penyusunan skripsi; 4) Dr. Asmiyenti Djaliasrin Djalil, M.Si., serta Retno Wahyuningrum, M.Si., Apt., yang telah membimbing saya selama saya mengerjakan skripsi ini dari awal hingga akhir. Membimbing disaat melakukan penelitian maupun penulisan skripsi. 5) Dwi Hartanti, M.Farm., Apt., yang telah memberikan pertanyaan serta masukan dalam ujian skripsi sehingga saya dapat melewati ujian kelayakan sebagai sarjana Farmasi 6) Zainur Rahman Hakim, M.Farm, Apt., yang telah menyempatkan waktu dalam memberikan ujian skripsi serta memberikan pertanyaan dan masukan dalam penulisan skripsi sehingga saya dapat melewati ujian kelayakan sebagai sarjana Farmasi. 7) Bapak dan Ibu dosen yang telah membimbing selama perkuliahan S1 Farmasi 8) Bapak dan Ibu yang selalu mendukung dan mendoakan saya 9) Teman-teman S1 Farmasi yang telah menemani selama perkuliahan S1 Farmasi vii
Akhir kata, semoga Allah memberikan balasan atas segala kebaikan semua pihak yang telah membantu. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi pengemban ilmu. Amin. Purwokerto, 5 Juni 2017 Penulis, Prasetyo Hadi Mulia 1108010012 viii
DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL... SURAT PENGESAHAN... HALAMAN PERNYATAAN... ABSTRAK... KATA PENGANTAR... DAFTAR ISI... i ii iii iv vi viii BAB I PENDAHULUAN... 1 A. Latar Belakang... 1 B. Perumusan Masalah... 2 C. Tujuan Penelitian... 2 D. Manfaat Penelitian... 2 BAB II TINJAUAN PUSTAKA... 3 I. Hasil Penelitian Terdahulu... 3 II. Landasan Teori... 3 A. Sistematika Tumbuhan... 3 - Deskripsi Tanaman... 4 - Kandungan dan Manfaat Tanaman... 5 B. Bakteri... 5 C. Metode Isolasi Senyawa... 6 - Ekstrak... 6 - Ekstraksi... 6 - Kromatografi Lapis Tipis... 7 D. Antibakteri... 8 E. LC-MS/MS... 9 III. Kerangka Konsep... 12 IV. Hipotesis... 12 ix
BAB III METODE PENELITIAN... 13 1. Rancangan Penelitian... 13 2. Variabel Penelitian... 13 3. Sampel... 13 4. Subjek Uji... 13 5. Alat dan Bahan... 13 6. Cara Penelitian... 14 - Determinasi Tumbuhan... 14 - Pembuatan Simplisia dan Serbuk Daun... 14 - Pembuatan Ekstrak Daun Putri Malu... 15 - Ekstraksi Cair-Cair... 15 - Sterilisasi Alat... 15 - Pembuatan Media... 16 - Kultur Bakteri... 16 - Pembuatan Larutan Inokulum... 16 - Pengukuran Daya Hambat dengan Metode Kirby Bauer... 16 - Pemisahan Kandungan Senyawa dengan KLT Preparatif... 17 - Identifikasi Senyawa dengan LC-MS/MS... 17 7. Analisis Hasil... 18 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN... 19 A. Pengambilan dan Determinasi Tumbuhan... 19 B. Pembuatan Simplisia... 19 C. Pembuatan Ekstrak Metanol Daun Putri Malu... 20 D. Fraksinasi Ekstrak Daun Putri Malu... 21 E. Uji Aktivitas Antibakteri... 22 - Tabel diameter zona hambat P. aeruginosa... 23 - Tabel diameter zoba hambat B. subtilis... 23 F. Kromatografi Lapis Tipis Preparatif... 24 G. LC-MS/MS... 25 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN... 26 A. Kesimpulan... 27 x
B. Saran... 27 DAFTAR PUSTAKA... 28 LAMPIRAN... 30 a. Hasil Determinasi Daun Putri Malu... 31 b. Hasil Simplisia dan Penyerbukan Daun Putri Malu... 32 c. Ekstrak Metanol Daun Putri Malu... 33 d. Fraksinasi Ekstrak Daun Putri Malu... 34 e. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri... 35 f. Hasil KLT Preparatif... 36 g. Data Hasil MS/MS... 37 h. Data Spektrum dan Hasil MS/MS... 41 xi