UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN FRAKSI-FRAKSI EKSTRAK ETANOL HERBA RANTI (Solanum nigrum Linn) DAN ISOLASI SENYAWA DARI FRAKSI AKTIF SKRIPSI OLEH: EMILDA KHAIRUNISA NIM 091524025 PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN 2 0 1 1
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN FRAKSI-FRAKSI EKSTRAK ETANOL HERBA RANTI (Solanum nigrum Linn) DAN ISOLASI SENYAWA DARI FRAKSI AKTIF SKRIPSI Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi OLEH: EMILDA KHAIRUNISA NIM 091524025 PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN
LEMBAR PENGESAHAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN FRAKSI-FRAKSI EKSTRAK ETANOL HERBA RANTI (Solanum nigrum Linn) DANISOLASI SENYAWA DARI FRAKSI AKTIF OLEH: EMILDA KHAIRUNISA NIM 091524025 Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Pada Tanggal: Agustus 2011 Pembimbing I Panitia Penguji Dra. Herawaty Ginting, M.Si., Apt. Prof. Dr. Urip Harahap, Apt. NIP 195112231980032002 NIP 195301011983031004 Pembimbing II, Dra. Herawaty Ginting, M.Si., Apt. NIP 195112231980032002 Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt. Dr. Marline Nainggolan, M.Si., Apt. NIP 195103261978022001 NIP 195709091985112001 Dra. Suwarti Aris, M.Si., Apt. NIP 195107231982032001 Disahkan Oleh: Dekan Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt. NIP 195311281983031002
KATA PENGANTAR Puji dan syukur kehadirat Allah SWT, karena limpahan rahmat dan karunianya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini yang berjudul Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi-Fraksi Ekstrak Etanol Herba Ranti (Solanum nigrum Linn) dan Isolasi Senyawa Dari Fraksi Aktif. Pada kesempatan ini penulis menyampaikan ucapan terimakasih dan penghargaan yang tulus kepada Ayahanda dan Ibunda tercinta, Mukmil Dumairi dan Huriyah atas doa dan pengorbanannya dengan tulus dan ikhlas, juga kepada kakak, abang dan adik tersayang yang selalu setia memberi doa, dorongan dan semangat. Penulis juga ingin menyampaikan rasa terimakasih yang sebesar-besarnya kepada: 1. Bapak Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi yang telah memberikan fasilitas selama masa pendidikan. 2. Ibu Dra. Herawaty Ginting, M.Si., Apt., dan Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt., selaku pembimbing yang telah memberikan waktu, bimbingan dan nasehat selama penelitian dengan penuh kesabaran hingga selesainya penyusunan skripsi ini. 3. Bapak Prof. Dr. Urip Harahap, Apt., Ibu Dr. Marline Nainggolan, M.Si., Apt., Dra. Suwarti Aris, M.Si., Apt., selaku dosen penguji yang telah memberikan masukan dan saran selama penelitian hingga selesainya penyusunan skripsi ini.
4. Ibu Dra. Aswita Hafni Lubis, M. Si., Apt., yang telah memberikan waktu, membantu dan membimbing selama penelitian dengan penuh kesabaran hingga selesainya penyusunan skripsi ini. 5. Ibu Poppy Anjelissa Z Hasibuan, S.Si M.Si., Apt., selaku dosen wali yang telah memberi bimbingan dan dorongan kepada penulis selama perkuliahan. 6. Ibu dan Bapak Kepala Laboratorium Penelitian dan Laboratorium Farmakognosi yang telah memberikan fasilitas, petunjuk dan membantu selama penelitian. 7. Sahabat-sahabat terbaikku ten_tuwin kak ira, kak winda, kak ve, desmi, rika, nita, ipit, vivi, iza, silvi, deni satria dan teman-teman di Farmasi Ekstensi 2008-2009 yang namanya tidak dapat ditulis satu persatu, yang telah begitu banyak membantu dalam proses penelitian hingga selesainya penulisan skripsi ini. Medan, Agustus 2011 Penulis, Emilda Khairunisa
Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi-fraksi Ekstrak Etanol Herba Ranti (Solanum nigrum Linn) Dan Isolasi senyawa Dari Fraksi Aktif Abstrak Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat oksidasi dengan cara bereaksi dengan radikal bebas reaktif membentuk radikal bebas tak reaktif yang relatif stabil. Senyawa fenolik dan flavonoid merupakan sumber antioksidan alami yang biasanya terdapat dalam tumbuhan. Herba ranti (Solanum nigrum Linn) merupakan salah satu tanaman yang mengandung senyawa fenolik dan flavonoid. Adanya kandungan flavonoid dalam herba ranti tersebut mendorong untuk melakukan pengujian aktivitas antioksidan sehingga dapat digunakan sebagai antioksidan alami. Uji aktivitas antioksidan penangkapan radikal bebas telah dilakukan terhadap fraksi n-heksan, kloroform, etilasetat, air dan senyawa aktif dari fraksi etilasetat dari herb ranti. Herba ranti diekstraksi secara maserasi dengan mengpgunakan etanol 96% diperolah ekstrak etanol. Kemudian difraksinasi dengan cara ekstraksi cair-cair menggunakan pelarut n-heksan, kloroform, etilasetat. Masing-masing fraksi diuji aktivitas antioksidan menggunakan penangkap radikal DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl). Fraksi etilasetat dikromatografi preparatif dengan menggunakan asam asetat 50% sebagai fase gerak. Kemudian dilihat menggunakan lampu UV dengan penampak bercak 5% b/v aluminium klorida pada panjang gelombang 366 nm. Isolat diidentifikasi dengan menggunakan spektrofotometer UV menggunakan pereaksi geser. Isolasi menghasilkan 2 flavonoid, F1 memiliki harga Rf = 0,48 kemungkinan adalah flavanon dan F2 memiliki harga Rf = 0.59 kemungkinan adalah flavonol dengan gugus 4 OH pada cincin B. kemudian dilakukan uji aktivitas antioksidan terhadap isolat. Hasil uji aktivitas antioksidan keempat fraksi dengan konsentrasi masingmasing 80 µg/ml diperoleh % peredaman fraksi n-heksan 15,22%, fraksi kloroform 68,03%, fraksi etilasetat 68,14% dan fraksi sisa 23,44%. Sedangkan aktivitas antioksidan isolat dengan konsentrasi masing-masing 80 µg/ml diperoleh % peredaman flavonoid1 (flavanon) 49,70%dan isolat flavonoid 2 (flavonol) 41,21%. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa fraksi etilasetat mempunyai aktivitas antioksidan paling kuat. Kata kunci; herba ranti, Solanum nigrum Linn, antioksidan
Antioxidant Activities Test of Fraction Ethanol Extract of Ranti Herb (Solanum nigrum. L) And Isolation of fraction active Abstract Antioxidant is a compound which can inhibit oxidation in such a way that it reacts with reactive free radicals to form a relatively stable radicals. Flavonoid and phenolic compounds are sources of antioxidant which are commonly found in plants. Ranti herb (Solanum nigrum L) contains flavonoid and phenolic compounds and believed possesses a medical use. A further research on the activity test of antioxidant is encouraged since ranti herb may be used as natural antioxidant for its flavonoid content In order to increase the usage of natural antioxidant from food, the research has been determine the activity testing of flavonoidas antioxidant, n- hexane fraction, chloroform fraction, ethylacetate fraction of ranti herb and isolating active fraction compounds and the activity testing of flavonoidas antioxidant. Ranti herb was extracted by maceration with ethanol 96%, and fractionated by liquid extraction using n-hexane, chloroform and solvent. The ethylacetate fraction was separated by preparative paper chromatography using 50% acetic acid as mobile phase, visualization using 5% b/v aluminium chloride and 366 nm UV ray. The isolate were identified by UV spectrophotometer using shift reagent.their antioxidant activities weredone by the DPPH (1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl) scaevenging method. The isolate result obtained two flavonoids, F1 has Rf = 0.48, indicated that F1 is flavanon and F2 has Rf = 0.59, indicated that F2 flavonol with hydroxyl grops in position 4. The result of antioxidant activity test all of fraction with each concentration 80 µg/ml showed that n-hexane fraction has %inhibition value is 15.22%, Chloroform fraction is 68.03%, ethylacetate fraction is 68.1%l, and water fractin is 23,44%. wherever the isolated flavonoid 1 (flavanon) has % inhibition value is 49.70% and isolated flavonoid 2 (flavonol) is 41.21%. The ethylacetate exhibited a strong free radical scavenging. Keyword(s): ranti herb, Solanum nigrum Linn, antioxidant
DAFTAR ISI Halaman JUDUL... i LEMBAR PENGESAHAN... iii KATA PENGANTAR... iv ABSTRAK... vi ABSTRACT... vii DAFTAR ISI... viii DAFTAR TABEL... xii DAFTAR GAMBAR... xiii DAFTAR LAMPIRAN... xiv BAB I. PENDAHULUAN... 1 1.1 Latar Belakang... 1 1.2 Perumusan Masalah... 2 1.3 Hipotesis... 3 1.4 Tujuan Penelitian... 3 1.5 Manfaat Penelitian... 3 1.6 Kerangka Pikir Penelitian... 4 BAB II. TINJAUAN PUSTAKA... 5 2.1 Uraian Tumbuhan... 5 2.1.1 Daerah Tumbuh... 5 2.1.2 Nama Daerah... 5 2.1.3 Sistematika Tumbuhan... 5
2.1.4 Marfologi Tumbuhan... 6 2.1.5 Kandungan Kimia Tumbuhan dan Kegunaan... 6 2.2 Ekstraksi... 7 2.3 Radikal Bebas... 8 2.4 Antioksidan... 9 2.4.1 Antioksidan Sintetik... 10 2.4.2 Butylated Hydroxytoluent (BHT)... 11 2.5 DPPH... 11 2.5.1 Pelarut... 12 2.5.2 Pengukuran Absorbansi-Panjang Gelombang... 12 2.5.3 Waktu Pengukuran... 13 2.6 Spektrofotometri... 13 2.7 Senyawa Flavonoid... 14 2.8 Kromatografi... 17 BAB III.METODE PENELITIAN... 20 3.1 Alat-alat... 20 3.2 Bahan-bahan... 20 3.3 Pengumpulan dan Pembuatan Simplesia... 21 3.3.1 Pengumpulan Bahan Tumbuhan... 21 3.3.2 Identifikasi Tumbuhan... 21 3.3.3 Pembuatan Simplisia... 21 3.4 Pembuatan Pereaksi... 22 3.4.1 Larutan Pereaksi Libermann-Burchard... 22 3.4.2 Larutan Pereaksi Asam Klorida 2N... 22
3.4.3 Larutan Pereaksi Asam Sulfat 2N... 22 3.4.4 Larutan Pereaksi Aluminium Klorida 5%b/v... 22 3.4.5 Larutan Pereaksi Natrium Hidroksida 2N... 22 3.4.6 Larutan Radikal Bebas DPPH 0,5mM... 23 3.5 Pembutan Ekstrak Etanol Dan Ekstraksi Cair-Cair Ekstrak Etanol... 23 3.5.1 Pembuatan Ektrak Etanol... 23 3.5.2 Ekstraksi Cair-cair Ekstrak Etanol... 23 3.6 Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi n-heksan, kloroform,etilasetat, sisa dan BHT... 24 3.6.1 Prinsip Metode Penangkapan Radikal Bebas... 24 3.6.2 Pembuatan Larutan DPPH 0,5mM... 24 3.6.3 Pembuatan Larutan Induk... 24 3.6.4 Pengukuran Aktivitas Antioksidan Sampel Uji dan BHT. 25 3.6.5 Penentuan Persen Peredaman... 25 3.6.6 Penentuan Nilai IC50... 26 3.7 Isolasi Senyawa Dari Fraksi Aktif... 26 3.7.1 Analisis Senyawa dari Fraksi Aktif Secara KKt... 26 3.7.2 Pemisahan Senyawa Dari Fraksi Aktif Secara KKt Preparatif... 27 3.7.3 Uji Kemurnian Terhadap Isolat... 28 2.7.4 Identifikasi Isolat... 28 3.8 Uji Aktivitas Antioksidan Isolat Senyawa Dari Fraksi Aktif... 29 3.8.1 Pembuatan Larutan Induk Isolat... 29 3.8.2 Pengukuran Aktivitas Antioksidan Isolat... 29
3.8.2.1 Pengukuran Aktivitas Antioksidan Isolat 1... 29 3.8.2.2 Pengukuran Aktivitas Antioksidan Isolat 2... 30 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN... 31 4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan... 31 4.2 Hasil Ekstraksi dan Fraksinasi Cair-cair dari Ekstrak Etanol... 31 4.3 Hasil Uji Aktivtas Antioksidan Fraksi n-heksan, kloroform, Etilasetat, air dan BHT... 31 4.4 Hasil Analisis Senyawa Dari Fraksinasi Secara KKt... 33 4.5 Hasil Uji Kemurnian Terhadap Isolat... 34 4.6 Hasil Analisis Aktivitas Antioksidan Isolat... 38 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN... 41 5.1 Kesimpulan... 41 5.2 Saran... 41 DAFTAR PUSTAKA... 42 LAMPIRAN... 44
DAFTAR TABEL Tabel Halaman 4.1 Aktivitas Antioksidan frksi n-heksan, kloroform, etilasetat, air dan BHT dari ekstrak etanol herba ranti... 32 4.2 Aktivitas Antioksidan isolat flavonoid herba ranti... 38
DAFTAR GAMBAR Gambar Halaman 1.1 Kerangka fikir Penelitia... 4 2.1 Rumus Bangun BHT... 11 2.2 Rumus Bangun DPPH... 11 2.3 Reaksi antara DPPH dengan atom H netral yang berasal dari Antioksidan... 12 2.4 Kerangka Flavonoid... 14 2.5 Struktur Dasar Flavonoid... 14 2.6 Struktur Flavon... 15 2. 7 Struktur Flavonol... 15 2.8 Struktur Flavanon... 16 2.9 Struktur Flavanonol... 16 2.10 Struktur Auron... 16 2.11 Struktur Kalkon... 16 2.12 Struktur Isoflavon... 17 2.13 Struktur Antosianin... 17 3.1. Gambar grafik Konsentrasi Vs persen peredaman fraksi n heksan, kloroform, etilasetat, air dan isolat flavonoid... 33 3.2. Gambar grafik Konsentrasi Vs persen peredaman isolat senyawa dari fraksi aktif... 39
DAFTAR LAMPIRAN Lampiran Halaman 1. Gambar Tumbuhan Dan Daun Ranti... 44 2. Hasil Identifikasi Tumbuhan... 45 3. Bagan Kerja Penelitian... 46 4. Bagan Pembuatan Ekstrak Etanol Herba Ranti... 47 5. Bagan Ekstraksi Cair-cair Ekstrak Etanol... 48 6. Bagan Analisis Senyawa Dari Fraksi Aktif... 49 7. Gambar Kromatogram Hasil fraksinasi Secara KKt dengan Fase Diam Kertas Whatman N0. 1... 50 8. Bagan Pemisahan Senyawa Dari Fraksi Aktif... 55 9. Gambar Kromatogram KKt Preparatif Senyawa Dari Fraksi Aktif 56 10. Gambar Kromatogram KKt Dua Arah Isolat Senyawa Dari Fraksi Aktif... 57 11. Spektrum UV Isolat Flavonoid... 59 12. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan... 71 13. Perhitungan Nilai IC50 fraksi n-heksan, kloroform, etilasetat, sisa/air, isolat flavonoid dan BHT... 74 14. Gambar Alat rotary evaporator, freeze dryer, dan Spektrofotometer UV-Visibel... 81