Kurva standar HPLC analitik untuk penentuan konsentrasi siklo(tirosil-prolil).

Transkripsi

1 Lampiran 1 Kurva standar HPLC analitik untuk penentuan konsentrasi siklo(tirosil-prolil). Kurva Standar HPLC siklo(tirosil-prolil) Luas area (kromatogram HPLC) y = 16663x R 2 = antibiotik (mg.l -1 ) siklo(tirosil-prolil) (mg L -1 ) Jenis kolom Luas area kromatogram HPLC , , , , , , , Kondisi operasi : Fasa gerak : Sunfire C18 column (4,6 x 250 mm, Shiseido Co. Ltd., Tokyo, Japan) : metanol-air (0-100%) elusi linier gradien selama 25 menit, dilanjutkan elusi isokratik 100% metanol selama 10 menit. Kecepatan alir : 1 ml menit -1 Volume injeksi : 10μL Panjang gelombang detektor : λ 210 nm Suhu kolom : 30 C Tekanan kolom : 1267 psi Detektor : Photo Diode Array (PDA)

2 122 Lampiran 2 Metode penentuan konsentrasi gula reduksi (Miller 1959). Sebanyak 1 gram sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi 20 ml. Kemudian ditambahkan 1 ml HCl 4 N dan dipanaskan pada penganas air selama 30 menit. Selanjutnya didinginkan dan dinetralkan dengan menambahkan 2 ml NaOH 2 N. Sampel diencerkan sesuai dengan perkiraan konsentrasi gula pereduksi yang terdapat di dalam sampel. Selanjutnya sampel yang telah diencerkan ini diambil sebanyak 1 ml dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi 20 ml. Setelah itu ditambahkan 3 ml pereaksi DNS dan diinkubasi pada penangas air bersuhu ± 100 C selama 5 menit. Selanjutnya didinginkan dan diukur konsentrasi gula pereduksinya dengan cara dibaca absorbansinya menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 550 nm. Sebagai blanko dibuat sama seperti prosedur tersebut kecuali sampel diganti dengan akuades. Kurva standar dibuat menggunakan larutan glukosa standar pada kisaran mg L -1. Kurva standar glukosa standar dibuat dengan membuat larutan glukosa standar (Merck) pada beberapa konsentrasi antara lain dari konsentrasi 100 mg L -1 sampai dengan 300 mg L -1. Adapun kurva standar glukosa yang ditelah dibuat disajikan sebagai berikut; Absorbansi glukosa (mg L -1 ) 0, , , , , konsentrasi gula (ppm) y = x R 2 = absorbansi

3 123 Lampiran 3 Metode penentuan konsentrasi nitrogen total (Kirk 1950) Sebanyak 10 ml dari setiap pengambilan 30 ml sampel dianalisis untuk uji total nitrogen. Terlebih dahulu disentrifugasi dengan 8000 x g selama 15 menit untuk memisahkan biomassanya, fase air dipisahkan dari biomassanya. Fase air ditimbang sebanyak kurang lebih 1 g di dalam tabung destruksi ditambahkan 1 butir selenium tablet dan 10 ml H 2 SO 4 pekat, kemudian didekstruksi dalam dekstruksi Kjeldahl sampai perubahan warna menjadi bening. Larutan H 3 BO 4 4% dipipetkan sebanyak 25 ml ke dalam labu Erlenmeyer 250 ml. Setelah menjadi bening sampel kemudian didestilasi di destilasi Kjeldahl dengan NaOH 40% berlebih sampai selesai. Selanjutnya dititrasi dengan larutan HCl 0,05 N sampai titik akhir. Hal yang sama dilakukan untuk blanko. Nitrogen total dapat dihitung dengan menggunakan rumus: N total (% w/n) = (Vs-Vb) x N HCl x 14,01 x 100% Bobot contoh Dengan Vs sebagai volume HCl yang digunakan untuk titrasi sampel, Vb sebagai volume HCl yang digunakan pada titrasi blanko, dan N HCl sebagai normalitas HCl.

4 124 Lampiran 4 Metode penentuan bobot kering sel. (Voelker dan Altaba, 2001) Bobot kering sel ditentukan dengan mengikuti metode menurut Voelker dan Altaba (2001) yang dimodifikasi. Sebanyak 10 ml kaldu fermentasi dari sampel disentrifuse dengan kecepatan 8000 x g selama 10 menit. Selanjutnya sel dipisahkan dengan filtratnya menggunakan kertas saring 0,22 µm (Millipore) dan dicuci dengan menggunakan air demineral sebanyak dua kali. Sel dikeringkan pada suhu 110 C selama selama 48 jam, selanjutnya dimasukkan dalam desikator sampai diperoleh bobot konstan. Sel ditimbang dan diperoleh bobot kering sel per satuan volume.

5 125 Lampiran 5 Penentuan nitrogen total dan bobot bahan dari masing-masing sumber nitrogen yang digunakan untuk optimasi medium fermentasi Penentuan nitrogen total dalam medium fermentasi yang digunakan dalam penelitian ini mengacu dari medium fermentasi yang digunakan oleh Kanoh et al. 2005, dengan komposisi sumber nitrogen 5 g L -1 pepton dan 1 g L -1 ekstrak khamir. Hasil analisis kandungan nitrogen total beberapa sumber nitrogen yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh data sebagai berikut; No Sumber nitrogen Kandungan nitrogen (%) 1 Asam gutamat (C 5 H 9 NO 4 ) 8,00 2 Pepton 13,21 3 Kasein 11,39 4 Ekstrak Khamir 10,08 5 Amonium Sulfat(NH 4 ) 2 SO 4 3,59 Mengacu dari hasil analisis nitrogen total pepton dan ekstrak khamir tersebut diatas maka dalam 5 g pepton dan 1 g ekstrak khamir dalam setiap 1 l medium diperoleh kandungan nitrogen total sebanyak 0,76 g. Dengan demikian bobot masing-masing sumber nitrogen yang digunakan dalam penyusunan medium fermentasi adalah sebagai berikut; No Sumber nitrogen Bobot sumber nitrogen yang dibutuhkan (g L -1 ) 1 Asam gutamat 8,00 2 Pepton 5,76 3 Kasein 6,68 4 Ekstrak khamir 7,55 5 Amonium sulfat(nh 4 ) 2 SO 4 3,59

6 126 Lampiran 6 Urutan nukleotida fragmen gen isolat terpilih (Streptomyces sp.a11) dan kedekatan (homology) yang dibandingkan dengan gen spesies lainnya CACCTTCGACAGCTCCCTCCCACAAGGGGTTGGGCCACCGGCTTCGGGTGTTACCGAC TTTCGTGACGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGCAAT GCTGATCTGCGATTACTAGCAACTCCGACTTCATGGGGTCGAGTTGCAGACCCCAATC CGAACTGAGACCGGCTTTTTGAGATTCGCTCCGCCTCGCGGCATCGCAGCTCATTGTA CCGGCCATTGTAGCACGTGTGCAGCCCAAGACATAAGGGGCATGATGACTTGACGTC GTCCCCACCTTCCTCCGAGTTGACCCCGGCAGTCTCCTGTGAGTCCCCATCACCCCGA AGGGCATGCTGGCAACACAGAACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACA TCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCACCACCTGTATACCGACCACAAGGGGG GCACCATCTCTGATGCTTTCCGGTATATGTCAAGCCTTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCG TCGAATTAAGCCACATGCTCCGCTGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTT AGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGGAACTTAATGCGTTAGCTGCGGCACCGAC GACGTGGAATGTCGCCAACACCTAGTTCCCAACGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTA TCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTAATGGCC

7 127

8 128 Lampiran 7 Kurva penentuan MIC senyawa aktif siklo(tirosil-prolil) terhadap 4 bakteri uji Lampiran 7a Kurva penentuan MIC senyawa aktif siklo(tirosil-prolil) terhadap Escherichia coli Pengukuran zona bening I Pengukuran zona bening II Rata-rata diameter zona bening (x) x 2 logc(konsentrasi) (C) senyawa aktif (mg L -1 ) 12,21 12,11 12,16 147,8656 3, ,25 10,87 11,06 122,3236 3, ,89 9,95 9,92 98,4064 3, ,12 8,78 8,95 80,1025 2, ,5 8,11 8,01 8,06 64,9636 2, ,3 6,78 6,86 6,82 46,5124 2, ,1 5,98 6,15 6,07 36, , ,6 4,90 5,32 5,11 26,1121 1, ,5 Log (C) y = 0.017x R 2 = X 2 pada x=0 maka y= log (C) log (C)= 1,4316 Log(C) = Log (MIC) MIC =27,01 µg ml -1

9 129 Lampiran 7b Kurva penentuan MIC senyawa aktif siklo(tirosil-prolil) terhadap Staphylococcus aureus ATCC Pengukuran zona bening I Pengukuran zona bening II Rata-rata diameter zona bening (x) x 2 logc (konsentrasi) (C) senyawa aktif (mg L -1 ) 7,95 8,21 8,08 65,2864 3, ,21 7,11 7,16 51,2656 3, ,14 5,96 6,05 36,6025 3, ,01 6,67 5,84 34,1056 2, ,5 4,35 4,12 4,24 17, , ,3 3,32 3,22 3,27 10,6929 2, ,1 2,12 1,50 1,81 3,2761 2, ,6 0,50 0,89 0,71 0,5041 1, ,5 log(c) y = x R 2 = x 2 pada x=0 maka y= log(c) log (C) = 1,9042 Log (C) = Log (MIC) MIC = 80,2 µg ml -1

10 130 Lampiran 7c Kurva penentuan MIC senyawa aktif siklo(tirosil-prolil) terhadap Bacillus subtilis ATCC Pengukuran I zona bening (mm) Pengukuran II zona bening (mm) Rata-rata diameter zona bening (x) x 2 logc(konsentrasi) (C) senyawa aktif (mg L -1 ) 9,51 8,91 9,21 84,82 3, ,22 8,13 8,18 66,83 3, ,12 6,89 7,01 49,07 3, ,33 6,11 6,22 38,69 2, ,5 4,97 5,01 4,99 24,90 2, ,3 4,10 3,87 3,99 15,88 2, ,1 3,01 2,75 2,88 8,29 2, ,6 0,50 0,51 0,52 0,26 1, ,5 Log(C) y = x R 2 = X 2 pada x=0 maka y= log(c) log C= 1,8675 log(c) = Log(MIC) MIC =73,71 µg ml -1

11 131 Lampiran 7d Kurva penentuan MIC senyawa aktif siklo(tirosil-prolil) terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC Pengukuran zona bening I Pengukuran zona bening II Rata-rata diameter zona bening (x) x 2 logc(konsentrasi) (C) senyawa aktif (mg L -1 ) 9,32 9,01 9, , ,11 7,98 8,05 64,72 3, ,10 6,75 6,93 47,96 3, ,33 6,11 6,22 38,69 2, ,5 5,14 5,10 5,12 26,21 2, ,3 3,97 3,99 3,98 15,84 2, ,1 3,12 3,32 3,22 10,37 2, ,6 1,10 0,89 1,02 1,03 1, ,5 logc y = x R 2 = x 2 pada x=0 maka y= log (C) log C= 1,837 log (C) = log (MIC) MIC = 68,71 µg ml -1

12 132 Lampiran 7e Kurva penentuan MIC tetrasiklin terhadap Escherichia coli ATCC Pengukuran zona bening I Pengukuran zona bening II Rata-rata diameter zona bening (C) senyawa aktif (mg L -1 ) (x) x 2 logc(konsentrasi) 9,08 9,23 9,16 83,8140 3, ,11 7,58 7,35 53,9490 3, ,01 7,15 7,08 50,1264 3, ,33 7,23 6,28 39,4384 2, ,5 4,14 6,10 5,12 26,2144 2, ,3 3,97 4,32 4,15 17,1810 2, ,1 3,50 3,32 3,41 11,6281 2, ,6 1,20 1,29 1,26 1,5876 1, ,5 Log (C) y = x R 2 = X 2 pada x=0 maka y= log (C) log C= 1,8064 log (C) = log (MIC) MIC = 64 µg ml -1

13 133 Lampiran 7f Kurva penentuan MIC tetrasiklin terhadap Staphylococcus aureus ATCC Rata-rata Pengukuran Pengukuran diameter zona beningzona bening zona I II bening (x) x 2 logc(konsentrasi) (C) senyawa aktif (mg L -1 ) 5,39 5,01 5,20 27,0400 3, ,61 4,91 4,76 22,6576 3, ,81 3,96 3,89 15,0932 3, ,01 3,09 3,05 9,3025 2, ,5 2,10 2,12 2,11 4,4521 2, ,3 log(c) y = x R 2 = x 2 pada x=0 maka y= log (C) log C= 2,4082 log (C) = log (MIC) MIC = 256 µg ml -1

14 134 Lampiran 7g Kurva penentuan MIC tetrasiklin terhadap Bacillus subtilis ATCC Pengukuran zona bening I Pengukuran zona bening II Rata-rata diameter zona bening (x) x 2 logc(konsentrasi) (C) senyawa aktif (mg L -1 ) 7,12 6,94 7,03 49,4209 3, ,98 6,45 6,72 45,0912 3, ,92 5,65 5,79 33,4662 3, ,79 4,68 4,74 22,4202 2, ,5 3,52 3,72 3,62 13,1044 2, ,3 2,92 2,92 2,92 8,5264 2, ,1 Log(C) y = x R 2 = X 2 pada x=0 maka y= log (C) log C= 2,1073 log (C) = log (MIC) MIC = 128 µg ml -1

15 135 Lampiran 7h Kurva penentuan MIC tetrasiklin terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC Pengukuran zona bening I Pengukuran zona bening II Rata-rata diameter zona bening (x) x 2 logc(konsentrasi) (C) senyawa aktif (mg L -1 ) 14,32 14,26 14,29 204,2041 3, ,11 13,98 13,55 183,4670 3, ,10 12,75 12,43 154,3806 3, ,33 11,11 11,22 125,8884 2, ,5 10,14 10,10 10,12 102,4144 2, ,3 9,97 9,99 9,98 99,6004 2, ,1 8,12 8,32 8,22 67,5684 2, ,6 7,00 7,09 7,04 49,5616 1, ,5 logc y = x R 2 = x 2 pada x=0 maka y= log (C) log C= 1,0968 log (C) = log (MIC) MIC = 12,5 µg ml -1

16 136 Lampiran 8 Data perubahan parameter ph, gula reduksi, dan bobot kering sel kultur vegetatif menggunakan isolat Streptomyces sp. A11. Bobot kering sel (g L -1 ) Gula reduksi (g L -1 ) ph Jam ke- 0 0,22 10,22 7,65 8 0,62 9,57 7, ,06 8,15 6, ,29 6,51 6, ,45 4,52 6, ,35 3,21 6, ,35 2,37 5, ,86 1,79 5, ,85 1,51 5,80

17 137 Lampiran 9 Data perubahan parameter ph, gula reduksi, nitrogen total, bobot kering sel, dan konsentrasi siklo(tirosil-prolil) pada proses fermentasi menggunakan isolat Streptomyces sp.a11. Gula reduksi (g L -1 ) ph siklo(tirosilprolil) (mg L -1 ) Jam Bobot kering ke- sel (g L -1 ) 0 0,29 13,12 7,65 0 0,75 8 0,53 12,57 7,57 0 0, ,01 11,15 6,90 0 0, ,03 9,51 6,65 0 0, ,13 7,52 6,51 0 0, ,17 5,12 5,86 0 0, ,22 4,37 6,34 0 0, ,75 3,79 6,65 0 0, ,65 3,51 7,03 12,35 0, ,72 3,33 7,32 15,43 0, ,18 3,21 7,35 16,34 0, ,51 3,11 7,51 18,43 0, ,34 2,89 7,54 20,32 0, ,21 2,68 7,59 23,32 0, ,88 2,43 7,76 26,32 0, ,89 2,35 7,65 28,43 0, ,65 2,32 7,68 29,59 0, ,76 2,11 7,61 30,43 0, ,83 2,00 7,65 30,21 0,35 Nitrogen total (mg L -1 )

18 138 Lampiran 10 Penentuan laju pertumbuhan spesifik maksimal (µmaks) dan rendemen pembentukan biomassa per massa substrat (Y x/s ) Lampiran 10a Penentuan laju pertumbuhan spesifik maksimal (µmaks) Waktu (Jam) Bobot kering sel percobaan 1(g L -1 ) Bobot kering sel percobaan 2 (g L -1 ) Rata-rata (X) Ln (X) 16 1,87 2,15 2,01 0, ,78 3,28 3,03 1, ,70 4,56 4,13 1, ,94 5,40 5,17 1, y = x R 2 = Ln(X) waktu (jam) 50 µmaks yang merupakan gradien dari kurva waktu (jam) versus ln(x) menunjukkan nilai sebesar 0,04 Jam -1

19 139 Lampiran 10b Penentuan rendemen pembentukan biomassa per massa substrat (Y x/s ) Waktu (Jam) X1 X2 Ratarata (X) S1 S2 Ratarata (S) (X-Xo) (So-S) 16 1,87 2,15 2,01 10,94 11,36 11,15 1,72 1, ,78 3,28 3,03 9,03 9,99 9,51 2,74 3, ,70 4,56 4,13 7,05 7,99 7,52 3,84 5,6 40 4,94 5,40 5,17 4,78 5,46 5,12 4,88 8 X1 = bobot kering sel percobaan 1 (g L -1 ) X2 = bobot kering sel percobaan 2 (g L -1 ) S1 = konsentrasi gula reduksi percobaan 1 (g L -1 ) S2 = konsentrasi gula reduksi percobaan 2 (g L -1 ) 6 5 y = x R 2 = (X-Xo) (So-S) 9 (Y x/s ) yang merupakan gradien dari kurva (X-Xo) versus (So-S) menunjukkan 0,60 gram biomassa per gram sumber karbon.

20 140 Lampiran 11 Analisis ragam dan uji lanjut Duncan perlakuan suhu fermentasi terhadap konsentrasi siklo(tirosil-prolil) yang dihasilkan. Variabel suhu Aktvitas antbiotik (mg L -1 ) ( o C) Ulangan 1 Ulangan 2 Rataan Jumlah 26 12,35 10,23 11,29 22, ,98 21,96 20,97 41, ,76 30,89 30,33 60, ,21 23,76 24,49 48, ,37 20,34 19,86 39,71 total 213,85 FK 4573,18 JKP 387,91 JKT 394,28 ANOVA db JK KT F F(0,05)tabel P(perlakuan) 4 387,91 96,98 76,15 3,02 G(galat) 5 6,37 1,27 T(total) 9 394,28 UJI DUNCAN (0,05) p=5 dbg=5 Ulangan=2 Pembanding(P-1) JND(0,05) 3,35 3,47 3,54 3,58 3,6 JNT(JNDxSy) 2,67 2,77 2,82 2,86 2,87 Suhu ( o C) antibiotik (mg L -1 ) kode 26 11,29 a 34 19,86 b 28 20,97 c 32 24,49 d 30 30,33 e

21 141 Lampiran 12 Analisis ragam dan uji lanjut Duncan perlakuan ph awal medum fermentasi terhadap konsentrasi siklo(tirosil-prolil) yang dihasilkannya ph awal antibiotik (mg L -1 ) fermentasi Ulangan 1 Ulangan 2 Rataan Jumlah 4 19,98 21,30 20,64 41,27 4,5 22,33 22,52 22,42 44, ,04 23,73 23,39 46,77 5,5 23,38 23,27 23,32 46, ,38 28,53 25,95 51,90 6,5 31,54 30,44 30,99 61, ,40 32,12 31,76 63,52 7,5 32,38 31,26 31,82 63, ,14 23,93 24,03 48,06 total 468,65 FK 12201,70 JKP 302,66 JKT 318,58 ANOVA db JK KT F F(0,05)tabel P(perlakuan) 8,00 302,66 37,83 21,39 3,02 G(galat) 9,00 15,92 1,77 T(total) 17,00 318,58 UJI DUNCAN (0,05) p=9 dbg=9 Ulangan=2 Pembanding (P-1) 2 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 JND(0,05) 3,2 3,34 3,41 3,47 3,50 3,52 3,52 3,52 JNT(JNDxSy) 2,93 3,06 3,12 3,18 3,20 3,22 3,22 3,22 ph antibiotik (mg L -1 ) ph4 20,64 a ph4,5 22,42 ab ph5,5 23,32 ab ph5 23,39 ab ph8 24,03 bc ph7,5 31,82 bc ph6 25,95 cd ph7 31,76 d ph6,5 30,99 d

22 142 Lampiran 13 Analisis ragam dan uji lanjut Duncan penentuan sumber karbon terbaik pada proses fermentasi produksi siklo(tirosil-prolil) dan hasil analisis gula total sebelum dan sesudah fermentasi. Lampiran 13a Analisis ragam dan uji lanjut Duncan penentuan sumber karbon terbaik pada proses fermentasi produksi siklo(tirosil-prolil) Sumber antibiotik (mg L -1 ) karbon Ulangan 1 Ulangan 2 Rataan Jumlah glukosa 22,83 23,17 23,00 46,00 maltosa 25,34 25,25 25,29 50,59 laktosa 13,12 12,57 12,84 25,69 sukrosa 14,51 13,58 14,05 28,09 molase 18,67 12,33 15,50 30,99 dekstrin 27,14 29,68 28,41 56,82 total 238,19 FK 4727,84 JKP 429,15 JKT 453,10 ANOVA db JK KT F F(0,05)tabel P(perlakuan) 5 429,15 85,83 21,50 3,02 G(galat) 6 23,96 3,99 T(total) ,10 UJI DUNCAN (0,05) p=6 dbg=6 ulangan=2 Pembanding(P-1) 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 JND(0,05) 3,15 3,30 3,37 3,43 3,46 3,47 JNT(JNDxSy) 3,74 3,92 4,01 4,08 4,11 4,12 Sumber karbon antibiotik (mg L -1 ) Kode Laktosa 12,84 a Sukrosa 14,05 a Molase 15,50 a Glukosa 23,00 bc Maltosa 25,29 cd Dekstrin 28,41 d

23 143 Lampiran 13b Hasil analisis gula total dari beberapa sumber karbon sebelum dan sesudah fermentasi. antibiotik (mg L -1 ) sumber karbon awal (mg L -1 ) (S0) sumber karbon akhir (mg L -1 ) (S1) Jumlah konsumsi (mg) (S0-S)/S0 x 100 Rasio siklo (tirosilprolil) terhadap total konsumsi sumber karbon Sumber karbon Laktosa 12,84 a ,26 0,00318 Sukrosa 14,05 a ,87 0,00319 Molase 15,50 a ,47 0,00314 Glukosa 23,00 bc ,05 0,00224 Maltosa 25,29 bc ,45 0,00269 Dekstrin 28,41 d ,08 0,00331

24 144 Lampiran 14 Analisis ragam dan uji lanjut Duncan penentuan sumber nitrogen terbaik pada proses fermentasi produksi siklo(tirosil-prolil) dan hasil analisis nitrogen total sebelum dan sesudah fermentasi. Lampiran 14a Analisis ragam dan uji lanjut Duncan penentuan sumber nitrogen terbaik pada proses fermentasi produksi siklo(tirosil-prolil) antibiotik (mg L -1 ) Sumber nitrogen 1 2 Rataan Jumlah Ekstrak khamir 13,10 12,65 12,88 25,75 Pepton 23,06 22,34 22,70 45,39 Amonium sulfat 0,00 0,00 0,00 0,00 Kasein 20,17 23,12 21,65 43,29 Asam glutamat 9,74 10,25 9,99 19,98 FK 1806,98 JKP 691,76 JKT 696,61 Total 134,42 ANOVA db JK KT F F(0.05)tabel P(perlakuan) 4,00 691,76 172,94 178,34 3,02 G(galat) 5,00 4,85 0,97 T(total) 9,00 696,61 UJI DUNCAN (0,05) p=5 dbg=5 ulangan=2 Pembanding(P-1) 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 JND(0,05) 3,35 3,47 3,54 3,58 3,60 JNT(JNDxSy) 2,80 2,90 2,95 2,99 3,00 Sumber Nitrogen antibiotik (mg L -1 ) Amonium sulfat 0 a Asam glutamat 9,99 b Ekstrak khamir 12,88 b Kasein 21,65 c Pepton 22,70 c

25 145 Lampiran 14b Hasil analisis nitrogen total dari beberapa sumber nitrogen sebelum dan sesudah fermentasi Nitrogen total awal fermentasi (mg.ml -1 ) Nitrogen total akhir fermentasi (mg.ml -1 ) siklo(tirosilprolil) (mg L -1 ) Jumlah konsumsi nitrogen total (mg.ml -1 ) Asam glutamat (C 5 H 9 NO 4 ) 0,76 0,44 9,99 0,32 Pepton 0,76 0,35 22,70 0,41 Kasein 0,75 0,34 21,65 0,41 Ekstrak khamir 0,74 0,30 12,88 0,44 Amonium sulfat (NH 4 ) 2 SO 4 0,75 0,55 0 0,20

26 146 Lampiran 15 Analisis ragam dan uji lanjut Duncan penentuan mineral terbaik pada proses fermentasi produksi siklo(tirosil-prolil). antibiotik mg L -1 Jenis mineral Percobaan 1 Percobaan 2 rataan jumlah Mineral I 35,23 35,76 35,50 70,99 Mineral II 31,23 32,12 31,68 63,35 Mineral III 33,22 32,98 33,10 66,20 Mineral IV 31,75 31,76 31,76 63,51 Mineral V 26,54 25,43 25,99 51,97 Blanko 25,13 24,32 24,73 49,45 total 365,47 FK 11130,69 JKP 176,78 JKT 178,29 ANOVA db JK KT F F(0.05)tabel P(perlakuan) 5 176,78 35,36 140,54 3,22 G(galat) 6 1,51 0,25 T(total) ,29 p=6 dbg=6 ulangan=2 Pembanding (P-1) JND(0,05) 3,46 3,58 3,64 3,68 3,68 JNT(JNDxSy) 1,25 1,29 1,31 1,33 1,33 perlakuan Nilai tengah notasi Blanko 24,73 a Mineral V 25,99 b Mineral II 31,68 c Mineral IV 31,76 c Mineral III 33,10 d Mineral I 35,50 e

27 147 Lampiran 16 Respon hasil percobaan optimalisasi proses produksi siklo(tirosil-prolil) menggunakan isolat Streptomyces sp.a11 Dekstrin (g L -1 ) Pepton (g L -1 ) Mineral (ml) Notasi Gula reduksi fermentasi (g L -1 ) Gula reduksi akhir fermentasi (g L -1 ) Konsumsi gula (g L -1 ) (awalakhir) Rasio respon terhadap konsumsi gula X 1 X 2 X 3 X 1 X 2 X 3 Respon Predicted value Residual ,13 17,19 1,94 27,99 8,87 19,12 1, ,96 20,15-0,19 37,78 17,19 20,59 0, ,19 24,64-1,45 28,22 7,15 21,07 1, ,35 36,28 4,07 38,26 15,32 22,94 1, ,59 23,72-3,13 27,94 7,98 19,96 1, ,99 28,61 2,38 37,89 14,32 23,57 1, ,67 34,54 1,13 28,17 5,56 22,61 1, ,11 48,11-1,00 38,21 15,21 23,00 2,05 21,6 10 7,5-1, ,00 24,65 1,35 23,12 5,43 17,69 1,47 38,4 10 7,5 1, ,88 38,56-2,68 43,11 17,23 25,88 1, ,64 7,5 0 1, ,74 16,89-0,15 31,98 12,46 19,52 0, ,36 7,5 0 1, ,37 39,55-1,18 33,24 10,34 22,90 1, , ,68 2,90 23,05-2,15 33,13 10,35 22,78 0, , ,68 39,31 38,49 0,82 33,21 9,35 23,86 1, , ,56 47,40 0,16 33,32 9,87 23,45 2, , ,71 47,40 0,31 33,11 9,92 23,19 2, , ,88 47,40 0,48 33,31 10,21 23,10 2, , ,94 47,40-0,46 33,21 10,14 23,07 2, , ,19 47,40-0,21 33,16 9,88 23,28 2, , ,36 47,40-0,04 33,14 9,78 23,36 2,03

28 148 Lampiran 17 Keluaran hasil analisis data menggunakan Design Expert 7 pada proses optimasi produksi siklo(tirosil-prolil). Lampiran 17a Keluaran Design Expert 7 dan respon yang diperoleh

29 Lampiran 17b Keluaran design summary dan respon yang diperoleh 149

30 150 Lampiran 17 c Keluaran hasil analisis fit summary dari Design Expert 7

31 Lampiran 17d Keluaran hasil analisis variansi (ANOVA) dari DesignExpert 7 151

32 152 Lampiran 17e Keluaran variabel hasil optimasi menggunakan DesignExpert 7

33 153 Lampiran 18 Data pengamatan konsentrasi siklo(tirosil-prolil) dan konsumsi gula pada proses verifikasi model percobaan di laboratorium. siklo(tirosil-prolil) (mgl -1 ) Konsumsi gula (gl -1 ) Percobaan Ulangan 1 49,32 22,05 Ulangan 2 50,81 23,82 Ulangan 3 48,83 21,76 Ulangan 4 51,20 23,28 Rata-rata 50,04 22,73 Rasio pembentukan siklo(tirosil-prolil) terhadap konsumsi gula adalah sebesar 2,20 mg siklo(tirosil-prolil) per gram gula.