Lampiran 1. Pembuatan Ekstrak Daun Nangka. (a) (b) (c)

Transkripsi

1 Lampiran 1. Pembuatan Ekstrak Daun Nangka (a) (b) (c) (d) (e) Keterangan : (a) Daun nangka segar dicuci kemudian dikeringkan (kering udara). (b) Daun nangka kering dihaluskan dengan cara diblender. (c) Daun nangka halus direndam dengan etanol selama 24 jam. Perendaman dilakukan 3 kali. (d) Supernatan diambil, kemudian dievaporasi dengan vakum rotavapour pada suhu ± 60 0 C dengan kecepatan 120 rpm. (e) Ekstrak daun nangka siap pakai. 39

2 Lampiran 2. Uji Fitokimia Daun Nangka No. Zat yang Diuji Hasil Positif Gambar 1. Alkaloid Terbentuk endapan putih 2. Flavonoid Terbentuk warna kuning kemerahan sampai merah 3. Saponin Terbentuk busa yang stabil tidak kurang dari 1-10 cm, tidak hilang pada penambahan satu tetes HCl 2N 4. Tanin Terbentuk warna biru tua atau hijau kehitaman Sumber : Bachtiar dkk

3 Lampiran 3. Pembuataan Konsentrasi Ektrak Daun Nangka Pembuatan konsetrasi ektrak daun nangka untuk uji zona hambat : 9 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml larutan stok larutan stok larutan stok larutan stok 0,9 ml 0,9 ml 0,9 ml 0,9 ml akuades akuades akuades akuades ppm ppm 1000 ppm 100 ppm 10 ppm (0,1 g ektrak + 0,9 ml akuades) Pembuatan konsetrasi ektrak daun nangka untuk uji zona LC 50 : A = 600 ppm = 600 mg/l = 9 g/15 L B = 300 ppm = 300 mg/l = 4,5 g/15 L C = 100 ppm = 100 mg/l = 0,15 g/15 L D = 50 ppm = 50 mg/l = 0,75 g/15 L Pembuatan konsentrasi ekstrak daun nangka untuk penelitian utama B = 20 ppm = 20 mg/l = 0,3 g/15 L C = 30 ppm = 30 mg/l = 0,45 g/15 L D = 40 ppm = 40 mg/l = 0,6 g/15 L E = 50 ppm = 50 mg/l = 0,75 g/15 L 41

4 Lampiran 4. Pembuatan Media Nutrien Agar (NA) Bahan NA (28 g/l) = 1,05 g Aquades = 37,5 ml Cara Pembuatan Media NA: Memasukan NA dan aquades kedalam labu Erlenmeyer Memasukan magnetik stirer agar NA dan akuades homogen kemudian ditutup dengan alumunium foil. Memanaskan larutan pada hotplates sampai mendidih. Memasukan media kedalam autoclave pada suhu C pada tekanan 1 atm selama 15 menit. 42

5 Lampiran 5. Pembuatan larutan bakteri kepadatan 10 8 cfu/ml dengan Spektrofotometer Langkah-langkah pembuatan larutan bakteri kepadatan 10 8 cfu/ml dengan menggunakan spektrofotometer adalah sebagai berikut : 1. Isolasi Aeromonas hydrophila dari media NA dari tabung reaksi. Penumbuhannya di cawan petri yang sudah berisi media NA. 2. Inkubasi dalam inkubator pada suhu 27 0 C selama 24 jam. 3. Pemanenan bakteri secara aseptik kedalam Falcon Centrifuge Tube yang telah berisi larutan NaCl fisiologis. 4. Penghitungan kepadatan dengan spektrofotometer dengan panjang gelombang 540 nm dan absorban (OD) 0, Apabilah belum diperoleh nilai OD tersebut, penambahan larutan NaCl fisiologis atau stok bakteri harus dilakukan hingga diperoleh absorban 0, Dari pengukuran dapat diasumsikan bahwa OD 0,235 setara dengan kepadatan bakteri 10 8 cfu/ml 43

6 Lampiran 6. Gambar Uji Zona Hambat Hasil Uji Zona Hambat (a) (b) (c) (d) (e) (f) Keterangan : (a) Zona bening pada konsentrasi ekstrak ppm (b) Zona bening pada konsentrasi ekstrak ppm (c) Zona bening pada konsentrasi ekstrak 1000 ppm (d) Zona bening pada konsentrasi ekstrak 100 ppm (e) Zona bening pada konsentrasi ekstrak 10 ppm (f) Zona bening pada konsentrasi ppm 1000 ppm, 100 ppm (ampisilin/kontrol) 44

7 Lampiran 7. Uji LC 50 Perendaman Ekstrak Daun Nangka a. Prosedur Rancangan percobaan untuk ekstrak herbal daun nangka pada benih ikan mas masing-masing 15 ekor menggunakan 4 perlakuan dengan 2 ulangan, lama waktu pemeliharaan selama 2 hari, dengan prosedur kerja: Benih ikan mas direndam menggunakan ekstrak daun nangka dengan konsentrasi yang berbeda, diamati kematian ikan setiap jam untuk perhitungan menentukan LC 50 b. Hasil Analisis Probit Analisis nilai toksisitas (LC 50 ) dengan menggunakan Software Epa Probhit Analysis Version 1,5 LC50 daun nangka EPA PROBIT ANALYSIS PROGRAM USED FOR CALCULATING LC/EC VALUES Version 1.5 ProportionObserved Responding Predicted Number Number Proportion Adjusted for Proportion Conc. Exposed Resp. Responding Controls Responding Chi - Square for Heterogeneity (calculated) = Chi - Square for Heterogeneity (tabular value at 0.05 level) = Mu = Sigma = Parameter Estimate Std. Err. 95% Confidence Limits Intercept ( , ) Slope ( , ) Theoretical Spontaneous Response Rate =

8 46 Lampiran 7. (lanjutan) LC50 daun nangka Estimated LC/EC Values and Confidence Limits Point Exposure Concentration LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC Analisis nilai toksisitas (LC 50 ) dengan menggunakan Software Epa Probhit Analysis Version 1,5 untuk perendaman ekstrak daun nangka terhadap benih ikan mas adalah ppm.

9 Lampiran 8. Tata Letak Perlakuan E1 A 1 D2 D1 B2 E2 B1 C2 C 1 A 2 A3 D3 E 3 B 3 C3 Keterangan : A, B, C, D, dan E = Perlakuan 1, 2, 3 = Ulangan 47

10 Lampiran 9. Kelangsungan Hidup Benih Ikan Mas Setelah Pengobatan Perlakuan A B C D E Ulangan Jumlah Benih yang Mati Pada Pengamatan Hari ke- Total (Ekor)

11 Lampiran 10. Analisis Data Kelangsungan Hidup Benih Ikan Mas Data Hasil Pengamatan Selama Pemeliharaan Perlakuan Konsentrasi (ppm) Jumlah ikan awal Jumlah ikan akhir U1 U2 U3 U1 U2 U3 Jumlah Ikan Hidup Selisih Mortalitas/ Perlakuan A B C D E Jumlah Data Hasil Persentase Perlakuan Konsentrasi (ppm) Kelangsungan Hidup (%) Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Total A 0 6,67 13,33 6,67 26,67 8,89 B 20 40,00 33,33 33,33 106,67 35,56 C 30 66,67 60,00 53,33 180,00 60,00 D 40 60,00 66,67 80,00 206,67 68,89 E 50 66,67 46,67 53,33 166,67 55,56 Jumlah 686,67 Hasil Transformasi arcsin Perlakuan Konsentrasi (ppm) Kelangsungan Hidup (%) Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Total Ratarata Ratarata A 0 3,82 7,66 3,82 15,31 5,10 B 20 23,58 19,47 19,47 62,52 20,84 C 30 41,81 36,87 32,23 110,91 36,97 D 40 36,87 41,81 53,13 131,81 43,94 E 50 41,81 27,82 32,23 101,86 33,95 Jumlah 422,41 49

12 50 Penghitungan Analisis Ragam 1. Faktor koreksi = = = 11895,28 2. Jumlah Kuadrat Total = = ((3,82) 2 + (7,66) 2 + (3,82) (32,23) 2 ) 11895,28 = 3144,25 3. Jumlah Kuadrat Perlakuan = FK = ( ) 11895,28 = 2835,96 4. Jumlah Kuadrat Galat = JK Total JK Perlakuan = 3144, ,96 = 308,29 Tabel Analisi Ragam SK DB JK KT Fhit F 0,05 Perlakuan ,96 708,99 23,00 3,48 Galat ,29 30,83 Total ,25 Keterangan : *) F hitung > F tabel maka H 0 ditolak, artinya dengan taraf 0,05 terdapat perbedaan pengaruh yang signifikan diantara perlakuan berbagai konsentrasi ekstrak daun nangka dalam pengobatan penyakit Aeromonas hydrophila terhadap persentase kelangsungan hidup benih ikan mas.

13 51 Uji Jarak Berganda Duncan Sx = LSR = SSR 5% x Sx = = 3,21 SSR 5% = Tabel lampiran 10 (Gasperz 1995) dengan db Galat (error df) = 10 untuk taraf nyata 0, SSR 5% 3,15 3,3 3,37 3,43 LSR 10,10 10,58 10,81 11,00 Tabel Perbandingan Antar Perlakuan Konsentrasi (ppm) Rata-rata Perlakuan Hasil Perbandingan A B E C LSR Notasi A 0 8,89 a B 20 35,56 26,67 10,10 b E 50 55,56 46,67 20,00 10,58 c C 30 60,00 51,11 24,44 4,44 10,81 c D 40 68,89 60,00 33,33 33,33 28,89 11,00 d Keterangan : *)Tiap rata-rata perlakuan yang diikuti huruf yang sama memberikan pengaruh tidak berbeda nyata menurut uji Duncan pada taraf kepercayaan 95 %.

14 52 Lampiran 11. Data Kualitas Air Selama Penelitian Awal Pengamatan Akhir pengamatan Perlakuan Ulangan Suhu ( 0 C) ph DO (mg/l) Amonia (mg/l) Suhu ( 0 C) ph DO (mg/l) Amonia (mg/l) ,28 4, ,56 4,7 0,50 A ,51 4, ,74 4,5 0, ,50 4, ,72 4,3 0, ,27 4, ,7 4,5 0,25 B ,14 4, ,64 4,4 0, ,26 4, ,55 4,8 0, ,42 4, ,65 4,8 0,25 C ,41 4, ,72 4,7 0, ,40 4, ,7 4,4 0, ,32 4, ,59 4,3 0,25 D ,28 4, ,63 4,7 0, ,10 4, ,74 4,5 0, ,32 4, ,67 4,1 0,50 E ,17 4, ,71 4,7 0, ,16 4, ,58 4,3 0,50 Optimal 23-25* 6,5-8,5* 3,0-5,0* < 1** 23-25* 6,5-8,5* 3,0-5,0* < 1** Keterangan : * Tim Lentera (2002) ** Boyd (1982)