Lampiran 1. Pembuatan Media Natrium Agar

Transkripsi

1 59 Lampiran 1. Pembuatan Media Natrium Agar Pembuatan Media Agar Natrium Agar (150 ml) 1. Siapkan gelas Erlenmeyer volume 250 ml dan air laut steril 150 ml. 2. Timbang natrium agar sebanyak 4,2 gram 3. Masukkan natrium agar ke dalam erlenmeyer lalu tuang air laut steril. 4. Panaskan media di atas hot plate hingga mendidih dan homogen. 5. Tutup erlenmeyer dengan kapas yang telah dibungkus dengan kassa. 6. Sterilisasi media menggunakan autoclave selama 15 menit pada suhu 121 o C 7. Setelah di autoclave, media didinginkan hingga suhu o C 8. Tuangkan media tersebut ke dalam cawan petri yang sudah steril sebanyak 8 10 ml dan biarkan membeku dalam keadaan tertutup. Pemanasan Nutrient Agar Nutrient Agar

2 60 Lampiran 2. Pembuatan Kultur Bakteri Vibrio harveyi dengan Kepadatan Sel 10 7 CFU/ml 1. Larutan McFarland skala 0,5 dibuat dengan 0,05 ml BaCl 2 1% dan 9,95 ml H 2 SO 4 1% ke dalam tabung reaksi kemudian diukur absorbansinya dengan menggunkan spektrofotometer pada panjang gelombang 600 nm. 2. Isolat bakteri uji yang berada dalam cawan petri diambil dengan menggunakan kawat ose sebanyak 2-3 ose kemudian dilarutkan ke dalam 10 ml air laut steril. 3. Bandingkan larutan bakteri yang telah dilakukan dengan larutan McFarland. 4. Sebanyak 0,01 ml larutan bakteri dituang ke dalam media agar. Larutan Vibrio harveyi dan Standar McFarland Penuangan Larutan Bakteri dalam Media Agar

3 61 Lampiran 3. Koordinat dan Data Parameter Fisik dan Kimia Perairan Lokasi Pengambilan Sampel Koordinat Lokasi Pengambilan Sampel: Area Perlindungan Laut (APL) : S ,48 E ,8 Perairan Semak Daun (PSD) : S ,9 E ,6 Perairan Panggang (PP) : S ,5 E ,7 1. Suhu ( C) Koordinat Ulangan Rata-rata I II III ( C) APL PSD PP Salinitas ( ) Habitat Ulangan Rata-rata I II III ( ) APL ,6 PSD ,3 PP ,6 3. Kecerahan (%) Habitat Ulangan I II III Rata-rata (%) APL PSD PP Kecepatan arus (m/s) Habitat Ulangan Rata-rata I II III (m/s) APL 0,14 0,17 0,17 0,16 PSD 0,13 0,06 0,07 0,08 PP 0,10 0,10 0,09 0,09

4 62 Lampiran 4. Ekstraksi Ascidian Didemnum molle Sampel Ascidian Didemnum molle Dikeringkan Ascidian Didemnum molle kering Serbuk Ascidian Didemnum molle Dihaluskan menggunakan blender Disaring Dimaserasi 1x24 jam dengan pelarut Metanol Ampas Filtrat Ekstrak Pasta Diuapkan dengan Rotary Evaporator Diagram Alir Ekstraksi Ascidian Didemnum molle

5 Lanjutan Lampiran 4 63

6 64 Lampiran 5. Pembuatan Konsentrasi Ekstrak pada Saat In Vitro Ascidian Didemnum molle 1 ppm = 1 mg/l = 0,001 g/l Larutan Stok ppm dalam 10 ml ppm = 0,001 g/l = = 1 g/10 ml 0,001 g x ml Pengenceran dilakukan dengan menggunakan Jembatan Stok V 1 = Volum larutan stok yang dibutuhkan V 2 = Volum pengenceran yang akan dibuat M 1 = Konsentrasi larutan stok M 2 = Konsentrasi pengenceran yang akan dibuat Konsentrasi ppm V 1 x M 1 = V 2 x M 2 V 1 x ppm = 5 ml x ppm V 1 = 50000/ = 0,5 ml 0,5 ml dari larutan stok ditambah dengan 4,5 ml akuades Konsentrasi ppm V 1 x M 1 = V 2 x M 2 V 1 x ppm = 5 ml x ppm V 1 = 5000/ = 0,05 ml 0,05 ml dari larutan stok ditambah dengan 4,95 ml akuades

7 65 Lanjutan Lampiran 5. Konsentrasi 100 ppm V 1 x M 1 =V 2 x M 2 V 1 x ppm = 5 ml x 100 ppm V 1 = 500/ V 1 = 0,005 ml 0,005 ml dari larutan stok ditambah dengan 4,995 ml akuades Konsentrasi 10 ppm V 1 x M 1 = V 2 x M 2 V 1 x ppm = 5 ml x 10 ppm V 1 = 500/ = 0,0005 ml 0,0005 ml dari larutan stok ditambah dengan 4,9995 ml akuades Larutan Ekstrak Ascidian Didemnum molle Berdasarkan Perlakuan yang digunakan pada Uji Aktivitas Antibakteri

8 Lampiran 6. Diameter Zona Hambat Ekstrak Didemnum molle Terhadap Bakteri Vibrio harveyi 66

9 67 Lampiran 7. Pembuatan Konsentrasi Ekstrak Ascidian Didemnum molle pada Uji LC 50 Konsentrasi larutan stok yang digunakan adalah ppm dalam volum 500 ml ppm = 10 g/l = 10 g 1 L 500 ml 1 L 1000 = 5 Untuk mendapatkan konsentrasi ppm dilarutkan 5 gram ekstrak dalam 500 ml akuades. Pengenceran dilakukan dengan menggunakan Jembatan Stok V 1 = Volum larutan stok yang dibutuhkan V 2 = Volum pengenceran yang akan dibuat M 1 = Konsentrasi larutan stok M 2 = Konsentrasi pengenceran yang akan dibuat Konsentrasi 1000 ppm V 1 x M 1 = V 2 x M 2 V 1 x ppm = 500 ml x ppm V 1 = / = 50 ml 50 ml dari larutan stok ditambah dengan 450 ml akuades Konsentrasi 100 ppm V 1 x M 1 = V 2 x M 2 V 1 x ppm = 500 ml x 100 ppm V 1 = / = 5 ml 5 ml dari larutan stok ditambah dengan 495 ml akuades

10 68 Lanjutan Lampiran 7 Konsentrasi 10 ppm V 1 x M 1 = V 2 x M 2 V 1 x ppm = 500 ml x 10 ppm V 1 = 5.000/ = 0,5 ml 0,5 ml dari larutan stok ditambah dengan 499,5 ml akuades Larutan Ekstrak Ascidian Didemnum molle Berdasarkan Perlakuan yang Digunakan pada Uji LC 50

11 69 Lampiran 8. Data Pengamatan Mortalitas Udang Windu pada Uji LC 50 Selama 48 jam Lama Perendaman Jumlah Udang yang Mati pada Konsentrasi (ppm) I II I II I II I II I II 15 menit menit jam jam jam jam jam jam jam jam Total

12 70 Lampiran 9. Hasil Perhitungan LC 50 dengan Menggunakan EPA Probit LC 50 Didemnum molle EPA PROBIT ANALYSIS PROGRAM USED FOR CALCULATING LC/EC VALUES Version 1.5 Conc. Number Exposed Number Responding Observation Proportion Proportion Responding Predicted Proportion Responding Adjused for Responding Controls ,0000 0,0000 0, ,0833 0,0833 0, ,8333 0,8333 0, ,0000 1,0000 0,9996 Chi - Square for Heterogeneity (calculated) = Chi - Square for Heterogeneity (tabular value at 0.05 level) = Mu = Sigma = Parameter Estimate Std. Err. 95% Confidence Limits Intercept ( , ) Slope ( , ) Theoretical Spontaneous Response Rate = Estimated LC/EC Values and Confidence Limits Point Exposure 95% Confidence Limits Conc. Lower Uper LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC

13 71 Lampiran 10. Pembuatan Konsentrasi Ekstrak Ascidian Didemnum molle pada Uji Tantang 1 ppm = 0,001 g/l Ekstrak dibuat dalam 1 liter air laut. Perlakuan B (96,75 ppm) 96,75 ppm = 0,001 g/l = 0,001 x 96,75 = 0,09675 g/l Perlakuan C (193,5 ppm) 193,5 ppm = 0,001 g/l = 0,001 x 193,5 = 0,1935 g/l Perlakuan D (96,75 ppm) 290,25 ppm = 0,001 g/l = 0,001 x 290,25 = 0,29025 g/l Perlakuan E (387 ppm) 387 ppm = 0,001 g/l = 0,001 x 387 = 0,387 g/l Larutan Ekstrak Ascidian Didemnum molle Berdasarkan Perlakuan yang Digunakan pada Uji Tantang

14 72 Lampiran 11. Dokumentasi Penelitian Salah Satu Lokasi Pengambilan Sampel Pengukuran Diameter Zona Hambat Menggunakan Jangka Sorong Bakteri Vibrio harveyi yang Digunakan dalam Penelitian

15 73 Lanjutan Lampiran 11 Media Pemeliharaan Selama Penelitian Benih Udang Windu yang Mati