DAFTAR ISI. HALAMAN JUDUL... i. HALAMAN PENGESAHAN... ii. PERNYATAAN... iii. KATA PENGANTAR... iv. DAFTAR ISI... vii. DAFTAR TABEL...

Transkripsi

1 DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL... i HALAMAN PENGESAHAN... ii PERNYATAAN... iii KATA PENGANTAR... iv DAFTAR ISI... vii DAFTAR TABEL... xi DAFTAR GAMBAR... xvi DAFTAR LAMPIRAN... xvii DAFTAR SINGKATAN... xviii INTISARI... xxi ABSTRACT... xxii BAB I PENDAHULUAN... 1 A. Latar Belakang Masalah... 1 B. Perumusan Masalah... 5 C. Keaslian Penelitian... 5 D. Urgensi Penelitian... 6 E. Tujuan Penelitian... 6 BAB II TINJAUAN PUSTAKA... 7 A. Tinjauan Pustaka Tinjauan tentang Furosemid... 7 a. Farmakologi furosemid... 8 vii

2 b. Farmakokinetik furosemid... 8 c. Analisis furosemid Tinjauan tentang Propranolol HCl Validasi Metode Analisis a. Definisi validasi metode analisis b. Parameter validasi metode analisis Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) B. Landasan Teori C. Hipotesis BAB III METODE PENELITIAN A. Bahan dan Alat Penelitian Bahan Penelitian Alat Penelitian B. Jalannya Penelitian Pembuatan Larutan Bufer, Pelarut, Larutan Stok, dan Seri Larutan Standar a. Pembuatan bufer fosfat 20 mm ph 3, b. Pembuatan pelarut c. Pembuatan larutan stok standar furosemid 1 mg/ml d. Pembuatan larutan stok standar propranolol 1 mg/ml e. Pembuatan larutan standar propranolol 10 µg/ml f. Pembuatan seri larutan standar furosemid viii

3 2. Penyiapan Seri Konsentrasi Furosemid dalam Sampel Plasma untuk Kurva Kalibrasi dan Sampel Akurasi-Presisi Penyiapan Konsentrasi Furosemid dalam Plasma untuk LOD Penyiapan Blanko Sampel Plasma Pengembangan Metode Analisis Penentuan Panjang Gelombang Analisis Uji Kesesuaian Sistem Validasi Metode Analisis a. Selektivitas b. Kurva kalibrasi c. Akurasi d. Presisi e. Stabilitas f. LOD g. Robustness (Ketahanan) C. Variabel Variabel Bebas Variabel Terkendali Variabel Tergantung D. Definisi Operasional Variabel E. Analisis Data Kurva Kalibrasi Akurasi ix

4 3. Presisi Stabilitas Robustness BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan B. Saran DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN x

5 DAFTAR TABEL Halaman Tabel 1. Metode Analisis Furosemid yang Telah Dikembangkan oleh Beberapa Peneliti Tabel 2. Parameter Puncak Kromatogram Furosemid dan Propranolol pada Kondisi KCKT (Optimasi I) Tabel 3. Parameter Puncak Kromatogram Furosemid dan Propranolol pada Kondisi KCKT (Optimasi II dan III) Tabel 4. Parameter Puncak Kromatogram Furosemid dan Propranolol pada Kondisi KCKT (Kondisi Optimum) Tabel 5. Hasil Uji Kesesuaian Sistem Furosemid dan Propranolol dalam Preparat Plasma Tabel 6. Hasil Perhitungan % Error pada Kurva Kalibrasi (Batch I) Tabel 7. Hasil Studi Akurasi Metode Analisis Tabel 8. Hasil Studi Presisi Metode Analisis Tabel 9. Hasil Studi Stabilitas Furosemid dalam Preparat Plasma Tabel 10. Hasil Studi Stabilitas Larutan Baku Kerja Furosemid dan Propranolol dalam Pelarut Tabel 11. Hasil Injeksi Berulang pada Konsentrasi 100 ng/ml Furosemid dalam Preparat Plasma Tabel 12. Parameter-Parameter KCKT pada Studi Robustness untuk Furosemid 1000 ng/ml xi

6 Tabel 13. Parameter-Parameter KCKT pada Studi Robustness untuk Propranolol 1000 ng/ml Tabel 14. Pengaruh Variasi Perubahan Kondisi KCKT terhadap Hasil Analisis Tabel 15. Waktu Retensi Furosemid dan Propranolol pada Berbagai Perbandingan Fase Gerak dan Kecepatan Alir Tabel 16. Data Rekapitulasi Uji Kesesuaian Sistem Furosemid 1000 ng/ml dalam Preparat Plasma Tabel 17. Data Rekapitulasi Uji Kesesuaian Sistem Propranolol 1000 ng/ml dalam Preparat Plasma Tabel 18. Hasil Perhitungan % Error pada Kurva Kalibrasi (Batch II) Tabel 19. Hasil Perhitungan % Error pada Kurva Kalibrasi (Batch III) Tabel 20. Perhitungan Akurasi dan Presisi Metode Analisis Hari I (within-run) Tabel 21. Perhitungan Akurasi dan Presisi Metode Analisis Hari II (within-run) Tabel 22. Perhitungan Akurasi dan Presisi Metode Analisis Hari III (within-run) Tabel 23. Perhitungan Akurasi dan Presisi Metode Analisis Between-run Tabel 24. Perhitungan % Perolehan Kembali pada Kadar 400 ng/ml Furosemid dalam Preparat Plasma Tabel 25. Perhitungan Stabilitas Furosemid dalam Preparat Plasma yang Dipreparasi 4 Jam Setelah Spiking (25 ± 2 O C) xii

7 Tabel 26. Perhitungan Stabilitas Furosemid dalam Preparat Plasma Setelah Didiamkan 24 Jam di dalam Autosampler (25 ± 2 O C) Tabel 27. Perhitungan Stabilitas Furosemid dalam Preparat Plasma Setelah Mengalami 3 Siklus Pembekuan (-20 ± 2 O C) dan Pencairan (25 ± 2 O C) (Freeze and Thaw/FT ) Tabel 28. Perhitungan Stabilitas Larutan Baku Kerja Furosemid dan Propranolol dalam Penyimpanan di Lemari Pendingin (4 ± 2 O C) Selama 24 Jam Tabel 29. Perhitungan Estimasi Nilai LOD Tabel 30. Data Rekapitulasi Uji Robustness dengan Variasi Panjang Gelombang Detektor ( + 2 nm) Tabel 31. Data Rekapitulasi Uji Robustness dengan Variasi Panjang Gelombang Detektor ( 2 nm) Tabel 32. Data Rekapitulasi Uji Robustness dengan Variasi Kecepatan Alir (FR + 0,1 ml/menit) Tabel 33. Data Rekapitulasi Uji Robustness dengan Variasi Kecepatan Alir (FR 0,1 ml/menit) Tabel 34. Data Rekapitulasi Uji Robustness dengan Variasi Komposisi Fase Gerak (FG Organik + 2%) Tabel 35. Data Rekapitulasi Uji Robustness dengan Variasi Komposisi Fase Gerak (FG Organik 2%) Tabel 36. Data Rekapitulasi Uji Robustness dengan Variasi ph Bufer (ph + 0,1 Unit) xiii

8 Tabel 37. Data Rekapitulasi Uji Robustness dengan Variasi ph Bufer (ph 0,1 Unit) Tabel 38. Respon Analit pada Kondisi Optimum Tabel 39. Respon Analit pada Studi Robustness dengan Variasi Panjang Gelombang Detektor ( + 2 nm) Tabel 40. Respon Analit pada Studi Robustness dengan Variasi Panjang Gelombang Detektor ( 2 nm) Tabel 41. Respon Analit pada Studi Robustness dengan Variasi Kecepatan Alir (FR + 0,1 ml/menit) Tabel 42. Respon Analit pada Studi Robustness dengan Variasi Kecepatan Alir (FR 0,1 ml/menit) Tabel 43. Respon Analit pada Studi Robustness dengan Variasi Komposisi Fase Gerak (FG Organik + 2%) Tabel 44. Respon Analit pada Studi Robustness dengan Variasi Komposisi Fase Gerak (FG Organik 2%) Tabel 45. Respon Analit pada Studi Robustness dengan Variasi ph Bufer (ph + 0,1 Unit) Tabel 46. Respon Analit pada Studi Robustness dengan Variasi ph Bufer (ph 0,1 Unit) Tabel 47. Uji Normalitas Tabel 48. Hasil Uji Varian dan Uji t antara Kondisi Optimal dengan Variasi Panjang Gelombang Detektor ( + 2 nm) xiv

9 Tabel 49. Hasil Uji Varian dan Uji t antara Kondisi Optimal dengan Variasi Panjang Gelombang Detektor ( 2 nm) Tabel 50. Hasil Uji Varian dan Uji t antara Kondisi Optimal dengan Variasi Kecepatan Alir (FR + 0,1 ml/menit) Tabel 51. Hasil Uji Varian dan Uji t antara Kondisi Optimal dengan Variasi Kecepatan Alir (FR 0,1 ml/menit) Tabel 52. Hasil Uji Varian dan Uji t antara Kondisi Optimal dengan Variasi Komposisi Fase Gerak (FG Organik + 2%) Tabel 53. Hasil Uji Varian dan Uji t antara Kondisi Optimal dengan Variasi Komposisi Fase Gerak (FG Organik 2%) Tabel 54. Hasil Uji Varian dan Uji t antara Kondisi Optimal dengan Variasi ph Bufer (ph + 0,1 Unit) Tabel 55. Hasil Uji Varian dan Uji t antara Kondisi Optimal dengan Variasi ph Bufer (ph 0,1 Unit) Tabel 56. Rekapitulasi Hasil Uji Homogenitas dan Uji t pada Studi Robustness xv

10 DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1. Struktur Kimia Furosemid... 7 Gambar 2. Struktur Kimia Propranolol Gambar 3. Profil Kromatogram Furosemid dan Propranolol pada Kondisi KCKT (Optimasi I) Gambar 4. Profil Kromatogram Furosemid dan Propranolol pada Kondisi KCKT (Optimasi II) Gambar 5. Profil Kromatogram Furosemid dan Propranolol pada Kondisi KCKT (Optimasi III) Gambar 6. Profil Kromatogram Furosemid dan Propranolol pada Kondisi KCKT (Kondisi Optimum) Gambar 7. Hasil Scanning Furosemid dan Propranolol pada Daerah UV.. 50 Gambar 8. Grafik Hubungan antara Konsentrasi Furosemid dalam Preparat Plasma dengan Rasio AUC (Batch I) Gambar 9. Kromatogram Furosemid dan Propranolol pada Uji Kesesuaian Sistem Gambar 10. Grafik Hubungan antara Konsentrasi Furosemid dalam Preparat Plasma dengan Rasio AUC (Batch II) Gambar 11. Grafik Hubungan antara Konsentrasi Furosemid dalam Preparat Plasma dengan Rasio AUC (Batch III) xvi

11 DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. CoA Furosemid Lampiran 2. CoA Propranolol Lampiran 3. Perhitungan Penimbangan KH 2 PO 4 dalam Pembuatan Bufer Fosfat 20 mm ph 3, Lampiran 4. Perubahan Waktu Retensi Furosemid dan Propranolol pada Berbagai Perbandingan Fase Gerak dan Kecepatan Alir Lampiran 5. Data Parameter dan Gambar Kromatogram pada Uji Kesesuaian Sistem Lampiran 6. Kurva Kalibrasi untuk Batch II dan III Lampiran 7. Perhitungan Akurasi dan Presisi Lampiran 8. Perhitungan % Perolehan Kembali pada Kadar LLOQ Lampiran 9. Studi Stabilitas Lampiran 10. Perhitungan Estimasi LOD Lampiran 11. Studi Robustness Ditinjau dari Parameter KCKT pada Furosemid 1000 ng/ml dan Propranolol 1000 ng/ml Lampiran 12. Analisis Statistik untuk Studi Robustness pada Furosemid 1000 ng/ml dan Propranolol 1000 ng/ml xvii

12 DAFTAR SINGKATAN ACE ACN AUC BA/BE β BP BPOM Cl - CoA CV DEPKES EMA FDA FG FR FTIR FUR GC HPLC ICH k Angiotensine Converting Enzyme Acetonitrile/Asetonitril Area Under Curve Bioavailabilitas dan Bioekivalensi Beta British Pharmacopoiea Badan Pengawas Obat dan Makanan Chlorida Certificate of Analysis Coefficient Variation Departemen Kesehatan European Medicine Agency Food and Drug Administration Fase Gerak Flow Rate/Kecepatan Alir Fourier Transform Infra Red Furosemid Gas Chromatography High Performance Liquid Chromatography International Conference on Harmonization Kapasitas kolom xviii

13 K + KCKT KH 2 PO 4 LLE LLOQ LOD LOQ MS MS/MS mau mv N N Na + NaCl NMR O ODS PMI PROP RP-HPLC RPLC RPM Kalium Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Kalium Dihidrogen Fosfat Liquid-Liquid Extraction Lower Limit of Quantification Limit of Detection Limit of Quantification Mass Spectrometry Tandem Mass Spectrometry Mili Absorban Unit Mili Volt Nitrogen Number of Theoritical Plate Natrium Natrium Chlorida Nuclear Magnetic Resonance Oksigen Octadecyl silane Palang Merah Indonesia Propranolol Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography Reversed Phase Liquid Chromatography Radial Per Menit xix

14 Rs RSD S SD SDS S/N SPE TEA TF TLC t R /TR UKS ULOQ UNODC USP UV Vis Resolusi Relative Standart Deviation Sulfur Standar Deviasi Sodium Dodecyl Sulfat Signal/Noise Solid Phase Extraction Trietilamin Tailing Factor Thin Layer Chromatography Retention time/waktu Retensi Uji Kesesuaian Sistem Upper Limit of Quantification United Nations Office on Drugs and Crime United State Pharmacopoeia Ultraviolet Visibel xx