TINJAUAN PUSTAKA. Tanaman kemenyan (Styrax sumatranaj.j.sm) dalam sistematikatumbuhan dapat. Spesies : Styrax sumatrana J.J.

Transkripsi

1 TINJAUAN PUSTAKA Taksonomi Pohon Kemenyan Toba Tanaman kemenyan (Styrax sumatranaj.j.sm) dalam sistematikatumbuhan dapat diklasifikasikan sebagai berikut : Divisio Sub divisio Kelas Ordo Family Genus : Spermatophyta : Angiospermae : Dicotyledonae : Ebeneles : Styraceae : Styrax Spesies : Styrax sumatrana J.J.SM (Oetomo, 1974) Tempat tumbuh kemenyan terdapat pada ketinggian antara mdpl, namun di Tapanuli Utara kemenyan tumbuh baik pada ketinggian mdpl. Heyne (1987) menambahkan bahwa kemenyan toba mampu tumbuh baik pada tanah yang kaya humus dengan kelembapan cukup tinggi, berdrainase baik, curah hujan rata-rata 2000 mm/tahun dengan temperature C dan dapat tumbuh baik pada topografi bergelombang sampai berbukit. Van Steenis (1953) menyebutkan bahwa secara umum hanya 4 jenis yangdibudidayakan dan bernilai ekonomi yaitu: kemenyan toba (Styrax paralleloneurumperk), kemenyan durame (Styrax benzoine DRYAND), kemenyan bulu (Styrax benzoinevar. hiliferum) dan kemenyan siam (Styrax tonkinennsis).umumnya masyarakat di Tapanuli dan Dairi, Provinsi Sumatera Utara hanya membudidayakan jenis toba dan durame secara luas sedangkan jenis bulu kurang banyak dibudidayakan. Jenis kemenyan siam hinggasaat ini belum

2 banyak dikembangkan di Indonesia, namun telah dirintispenguasaan budidayanya oleh Balai Penelitian Kehutanan Sumatera(BPK Pematanag Siantar). Morfologi Pohon Kemenyan Pohon Kemenyan termasuk pohon besar, tinggi dapat mencapai 20 40mdan diameter batang mencapai cm. Batang lurus denganpercabangan sedikit. Kulit beralur tidak terlalu dalam (3-7 mm) dengan warna kulit merah anggur (Jayusman, 2014). Pohon ini terdapat di daerah pegunungan pada ketinggian m di atas permukaan laut (Heyne, 1987). Daun Kemenyan berdaun tunggal dan tersusun secara spiral. Daun berbentukoval bulat, bulat memanjang (ellips) dengan dasar daun bulat denganujung runcing. Sebelah atas daun berwarna hijau dan sebelah bawahberwarna kekuning-kuningan dengan pinggiran daun rata. Panjang daunmencapai 4-15 cm, lebar daun 5-7,5 cm, tangkai daun 5 13 cm,helai daun mempunyai nervi 7-13 pasang. Warna daun jenis Toba lebihgelap kecoklatan dan lebih tebal dibandingkan jenis Durame dan Bulu (Jayusman, 2014). Kemenyan berdaun majemuk, berbentuk bulat telur, tersebar, panjang 8-14 cm, lebar 2-5 cm, tepi rata, ujung meruncing, pangkal tumpul, pertulangan menyirip, hijau dan berambut (Tjitrosoepomo, 1994). Bunga Kemenyan berkelamin dua, dengan tangkai bunga memiliki panjang6-11 cm. Daun mahkota bunga 9-12 helai berukuran 2-3 mm, kelopak dan mahkota bunga masing-masing 5 buah. Kemenyanberbunga secara teratur 1 kali setiap

3 tahun. Waktu berbunga pada bulannovember sampai Januari (Jayusman, 2014). Bunga banci, aktinomorf, rangkaian berbentuk malai dan terdapat pada ketiak daun (Tjitrosoepomo, 1994). Buah dan biji Buah Kemenyan berbentuk bulat gepeng dan lonjong berukuran 2,5 3 cm. Biji berukuran mm, dengan warna coklat keputihan. BijiKemenyan terdapat di dalam buah dengan kulit buah berukuran 1,75mm 3,1 mm. Biji kemenyan toba berwarna coklat tua dan lebih gelapdibandingkan jenis durame dan bulu (Jayusman, 2014). Manfaat Kemenyan Usaha pelestarian tanaman penghasil senyawa bioaktif di Indonesia perlu mendapat perhatian karena memiliki nilai ekonomi tinggi. Kemeyan tumbuh dengan baik di hutan Sumatera Utara menjadi salah satu sumber penghasilan masyarakat dibeberapa desa, yang dikenal dengan getah kemeyan. Pemanfaatan kemenyan telah dikenal luas di Indonesia terutama sebagai bahan obat, baik sebagai obat tradisional maupun industri rokok, batik dan upacara ritual. Lebih dari itu tanaman kemenyan sebagai golongan Styrax mengandung senyawa kimia yang dapat digunakan sebagai obat-obatan. Kemenyan memiliki banyak senyawa bioaktif seperti asam sinamat dan turunannya yaitu senyawa kimia yang dapat digunakan sebagai bahan baku untuk industri kosmetik dan obat-obatan. Tanaman kemenyan prospektif dikembangkan untuk tanaman hutan rakyat, hutan kemasyarakatan, rehabilitasi, sekat baker, penghara industri pulp, maupun untuk pohon ornamen. Selain itu kayunya dapat digunakan untuk

4 bangunan rumah dan jembatan serta akarnya mengandung cairan berwarna kemerah-merahan yang berfungsi sebagai insektisida (Rajagukguk, 2009). Habitat dan Penyebaran Burkil (1935) menjelaskan bahwa pohon kemenyan berasal dari pantaibarat Sumatera, tumbuh secara alami dan telah banyak dibudidayakan. Steenis (1953) menambahkan bahwa pohon kemenyan banyakditemukan di hutan alam, hidup berkelompok dan bercampur dengantanaman lain.pohon kemenyan menyebar pada berbagai negara meliputi Malaysia,Thailand, Indonesia dan Laos. Indonesia memiliki daerah sebaran pohon kemenyan di Pulau Sumatera, Pulau Jawa bagian barat dan KalimantanBarat. Sumatera memiliki sebaran terluas, terutama daerah Tapanuli dandairi. Diperkirakan hampir 67% dari luas kebun kemenyan yang adadi Indonesia terdapat di daerah Tapanuli Utara. Pohon kemenyan menyebar pada berbagai elevasi (60 m 2100 m). Di daerah Palembang (Sumatera Selatan) dan Tapanuli Selatan, pohon kemenyan banyak ditemukan pada daerah dengan ketinggian mdpl. Sentra kebun kemenyan di Tapanuli Utara yang dikenalsecara luas ratarata berada pada ketinggian lebih dari 600 mdpl. Pohon kemenyan tidak memerlukan persyaratan yang istimewa. Heyne (1987) menjelaskan pohon kemenyan mampu tumbuh pada tanah-tanah tinggiyang berpasir, maupun tanah lempung rendah di hutan alam. Mamputumbuh pada Andosol, Podsolik, Latosol, Regosol, dan berbagai asosiasimulai tanah bertekstur berat sampai ringan, serta tanah yang suburhingga kurang subur, tanah berpasir hingga tanah lempung rendah dihutan alam, namun secara umum pohon kemenyan menghendaki tanahyang memiliki kesuburan yang baik. Pohon kemenyan tidak tahanterhadap

5 genangan air, sehingga untuk pertumbuhannya membutuhkantanah yang porositasnya tinggi (mudah meneruskan/meresapkan air).tumbuh baik pada solum tanah yang dalam dengan ph tanah berkisar4-7, menghendaki bulan basah yang tersebar merata sepanjang tahun. Penanda Molekuler Penanda molekuler merupakan fragmen sekuen DNA yang berhubungan dengan bagian genom pembawa gen yang bertanggung jawab terhadap suatu karakter tertentu (Bagali et al., 2010). Penanda molekuler ini bekerja dengan cara memberi tanda bagian sekuen DNA yang mengalami polimorfisme dari individu yang berlainan. Perbedaan tersebut meliputi insersi, delesi, translokasi, duplikasi dan mutasi titik. Penanda molekuler ini bersifat stabil, dapat terdeteksi pada semua jaringan tanpa dipengaruhi oleh status pertumbuhan, diferensiasi, perkembangan maupun sistem pertahanan sel serta dapat diaplikasikan pada bagian manapun dari genom (intron, ekson maupun daerah regulasi), dapatmembedakan polimorfisme yang tidak menghasilkan variasi yang nampak secara fenotip dan tidak dipengaruhi langsung oleh lingkungan (Mondini et al., 2009). Teknik molekuler telah diaplikasikan pada gen yang spesifik dalam upaya meningkatkan pemahaman mengenai aksi gen, peta genetik dan pengembangan teknologi transfer gen. Teknik molekuler juga memegang peranan penting dalam studi filogeni dan evolusi suatu jenis serta digunakan dalam meningkatkan pemahaman mengenai distribusi dan variasi genetik di antara dan antar jenis (Mondini et al., 2009). Data molekuler yang diperoleh dari hasil analisis terhadapkarakter genetik ini menjadi pilihan utama dalam studi sistematika karena

6 menghasilkan lebih sedikit homoplasi dibandingkan dengan karakter morfologi, merupakan indikator yang lebih nyata untuk filogeni serta menyediakan lebih banyak karakter yang obyektif (Pryer et al., 1995). DNA Kloroplasuntuk Analisis Genetika Populasi DNA kloroplas merupakan molekul DNA sirkular yang ditemukan pada kloroplas tanaman (Frankhamet al., 2010), bersifat stabil secara struktur, haploid, non-rekombinan dan pada sebagian besar tumbuhan diwariskan dari induk betina (Small et al., 2004). DNA kloroplas juga dapat dimanfaatkan untuk studi populasi tanaman, deteksi hibridisasi, analisis keanekaragaman genetik maupun filogeografi populasi tanaman (Mondini et al., 2009). Sekuen DNA kloroplas banyak digunakan untuk mengetahui hubungan kekerabatan antar jenis pada Angiospermae dan tumbuhan lainnya, namun lambatnya laju evolusi pada molekul ini merupakan kekurangan untuk mengetahui hubungan kekerabatan di dalam jenis (Taberlet et al., 1991). Intergenic spacer (IGS) trnl-trnf dari genom kloroplas memiliki variabilitas yang tinggi dan dapat digunakan untuk menganalisis strain yang berbeda (Guzmán & Vargas, 2005). Penanda kloroplas telah digunakan secara luas untuk penilaian filogenetik pada tumbuhan. Tingkat evolusi yang rendah dari DNA kloroplas adalah kelemahan tebesar untuk hubungan antar jenis diantara set sampel. Di sisi lain,urutan DNA noncoding dari genom kloroplas berkembang dengan cepat, dan menyajikan sumber berharga untuk studi filogenetik. Karena daerah noncoding DNA ini adalah hotspot mutasi, trna-leu (trnl) intron, dan intergenic spacer (IGS) diantara ekson trnl 3 dan trna-phe (trnf)merupakandaerah gen yang sangat cocok untuk analisis filogenetik variasi

7 intraspesies. Dengan demikian, konsensus primer digambarkan untuk daerahdaerah noncoding (Türktaşet al., 2012). trnl-trnf merupakan daerah yang terbentang dari trnl (UAA) 5 ekson hingga trnf (GAA) (Adjie et al., 2008). Gen plastid trnl (UAA) dan trnf (GAA) merupakan gen pengkode RNA transfer dan di antara kedua gen tersebut terdapat sekitar bp sekuen daerah non-pengkode (intron dari trnl (UAA) dan intergenic spacer (IGS) dari trnl-trnf (GAA) (Holt et al., 2005). Daerah non-pengkode tersebut merupakan daerah yang menunjukkan frekuensi mutasi paling tinggi dan mudah diamplifikasi maupun disekuen secara langsung karena ukurannya yang tidak terlalu panjang (Taberlet et al., 1991). Daerah non-pengkode pada genom kloroplas ini dianggap lebih sesuai untuk studi filogenetik mulai dari tingkatan di dalam jenis hingga antar suku dibanding plastid non-pengkode lainnya (Tsai et al., 2006). Daerah trnl-trnf (intron dan IGS) ini dapat menghubungkan banyak sekuen melalui perbandingan basis data di tingkat marga pada hampir seluruh keturunan tumbuhan darat. Gambar 1. Bagian-bagian pada daerah trnl-trnf.

8 Keterangan : Daerah trnl-trnf yang terbentang dari trnl (UAA) 5 ekson hingga trnf (GAA) dan dua daerah non-pengkode diantaranya (intron dan intergenic spacer (IGS)) serta primer universal yang digunakan untuk mengamplifikasi daerah tersebut (c-f) (Taberlet et al., 1991). Jumlah populasi yang besarmemungkinkan terbentuknya subpopulasi dan meningkatkan angka kompetisi. Dampak darisubpopulasi yang dikhawatirkan adanyainbreeding (perkawinan sedarah) yangmenjadikan populasi lebih rentan terhadapkepunahan. Kompetisi dapat mengakibatkan perubahanperilaku (adaptasi) yang memungkinkanterjadinya mutasi pada genotipe sehingggaterjadi evolusi baik secara mikro maupun makro (Hendra et al., 2013). Sekuensing merupakan metode yang digunakan untuk menentukan urutan basa nukleotida (adenine, guanine, cytosine dan thymine). Sekuensing DNA dapat dimanfaatkan untuk menentukan identitas maupun fungsi gen atau fragmen DNA lainnya dengan cara membandingkan sekuens target dengan sekuens DNA lain yang sudah diketahui. Teknik ini digunakan dalam riset dasar biologi maupun berbagai bidang terapan seperti DNA barcoding, kedokteran, bioteknologi, forensik, dan antropologi (Snustad & Simmons, 2003). Kata Filogenetik (Phyolgenetics) berasal dari bahasa Yunani, phyle dan phylon yang berarti suku dan ras, serta kata genetikos yang berarti kerabat dari kelahiran. Filogenetik merupkan sebuah ilmu yang mempelajari mengenai bagaimana keterhubungan organisme satu dan yang lainnya dilihat dari nenek moyang terakhir yang dimilki bersama. Dimana pada nenek moyang tersebut terdapat sebuah sifat khusus baik secara morfologi ataupun molekular yang masih dimiliki oleh dua atau lebih organisme tersebut. Lalu saat diturunkan dari nenek moyang tersebut terdapat sifat-sifat yang hilang ataupun tidak menurun pada

9 beberapa oganisme sehingga menyebabkan terpisahnya organisme tersebut dari satu organisme, karena sudah merupakan organisme yang berbeda satu dan lainnya. Melalui filogenetik, dapat diamati dengan lebih jelas bagaimana evolusi dapat terjadi, bagaimana alur evolusi itu terjadi pada mahkluk hidup, bagaimanakedekatan makhluk hidup yang satu dengan yang lainnya dan banyak hal lainnya dapat dilihat melalui pendekatan dengan filogenetik ini (Mirabella, 2011). Untuk menghindari terjadinya interbreeding antar spesies yang berbeda dari nenek moyangnya, harus ada isolasi. Isolasi yang paling berpengaruh adalah isolasi geografi dimana kelompok atau populasi terhalang oleh keadaan fisik lingkungan seperti laut, gunung, gurun pasir, sungai, dan bukit. Isolasi genetik yang disebabkan oleh satu atau lebih mutasi hanya dapat timbul sesudah terjadinya isolasi geologi dalam waktu yang lama. Isolasi ini menghasilkan perbedaan yang nyata antara kedua kelompok populasi. Apabila dua populasi yang berbeda beradaptasi pada lingkungan yang berbeda, maka masing-masing populasi akan mengakumulasi perbedaan-perbedaan yang terjadi dalam kumpulan gen (perbedaan frekuensi alel dan genotip) (Henuhili, 2008). Evolusi adalah perubahan struktur genetika populasi, paling sedikit terjadi pada satu gen lokus. Proses evolusi akan mengakibatkan terjadinya keragaman genetika pada organisme tidak terkecuali pada pohon hutan. Proses evolusi tersebut meliputi: mutasi (mutation), migrasi (migration), hanyutan genetika (genetic drift), seleksi (selection) dan sistem perkawinan (mating system). Informasi keragaman genetika pohon hutan sangat diperlukan oleh para

10 konservasionis untuk konservasi genetika sumber daya pohon, dan pemulia (breeder) sebagai dasar untuk pemuliaan pohon (Finkeldey, 1998). METODE PENELITIAN Lokasi dan Waktu Penelitian Penelitian ini dilakukan pada bulan Mei hingga September Pengambilan sampel dilaksanakan di Kabupaten Humbang Hasundutan, Kabupaten Pakpak Bharat, dan di kawasan hutan Batang Toru Blok Barat, Kabupaten Tapanuli Utara. Pengujian sampel dilakukan di Laboratorium Silvikultur Fakultas Kehutanan Institut Pertanian Bogor, Bogor. Alat dan Bahan Penelitian Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain plastik klip kedap udara, gunting, tissue, GPS (Global Positioning System), meteran, sarung tangan, masker, mortar, tabung mikro 1,5 ml dan 0,5 ml, rak tabung, rak tip, mikropipet, vortex, water bath, sentrifuge, gelas kimia, timbangan, tabung erlenmeyer, microwave, freezer, satu set alat elektroforesis, parafilm, spin down, mesin PCR (Polymerase Chain Reaction) PTC-100 Programmable Thermal Cycler,tabung PCR 0,5 ml, mesin UV transiluminator, mesin sekuenser, kamera digital. Bahan penelitian untuk analisis keragaman genetik berupa daun kemenyan toba (StyraxsumatranaJ.J.SM) yang diperoleh dari tiga lokasi geografis yang berbeda di Sumatera Utara, yaitu Tapanuli Utara, Dairi, dan Humbang Hasundutan, setiap populasi diambil sebanyak 10 individu, silika gel, aquades, CTABextraction buffer, Natrium chloride (NaCl), 1 M Tris HCl (ph 8,0), EDTA (ph 8,0), polivinilvirolidon (PVP) 1%, chloroform, phenol, agarose, buffer

11 TAE encer, etanol, buffer TE, pewarna GelRed, Blue Juice,loading dye, DNA ladder,nucleas Free Water (NFW), Green Go Taq, primer trnl-trnf. Prosedur Penelitian Sampel Daun Studikeragamangenetikdan genetika populasi DNA akandilakukanterhadap kemenyan toba (StyraxsumatranaJ.J.SM). Masing-masing jenis akan diwakili oleh 10 individu yang diambil dari minimal tiga populasi yang berbeda. Sehingga total semua sampel yang akan diekstraksi adalah 30 sampel dari pohon yang berdiameter 11 hingga 40 cm dengan jarak antar pohon minimal 3 meter. Pengambilan sampel meliputi setidaknya 3 populasi berbeda dengan tujuan untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh sebaran geografis dalam variasi genetik dan strukturisasi populasi pada setiap spesimen. Kemenyan toba atau S. sumatranadiambil dari populasi yang berasal daridesa Sosortolong Sihite III, Kecamatan Doloksanggul, Kabupaten Humbang Hasundutan, Desa Pardomuan, Kecamatan Sitellu Tali Urang Julu, Kabupaten Pakpak Bharat, dan di kawasan hutan Batang Toru Blok Barat, Kecamatan Adiankoting meliputi desa Banuaji IV, Kabupaten Tapanuli Utara. Bagian tumbuhan yang dijadikan target adalah daun dewasa segar. Sampel daun dipotong dengan ukuran ± 2 cm x 2 cm dan kemudian dimasukkan ke dalam plastik klip kedap udara yang telah diisisilika gel dengan perbandingan 1:5, disimpan sampai semua sampel daun dariseluruh populasi terkumpul. Ekstraksi DNA Ekstraksi DNA dilakukanterhadapseluruhsampeldaunkering yang sebelumnyadisiapkandalamkantungplastikklipbersilika gel.metode ekstraksi

12 dilakukandenganmetode CTAB (Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide) (Aritonang et al., 2007) denganbeberapamodifikasi ringan pada beberapa tahapan. Sampel digerus dengan menggunakan mortar hingga berbentuk tepung kemudian dimasukkan kedalam tabung mikro 1,5 ml. Kemudian ditambahkan buffer ekstrak 500 µl dan PVP 100 µl, diletakkan diatas vortex agar tepung daun dan buffer ekstrak tercampur merata. Selanjutnya diinkubasi selama 45 menit sampai dengan 1 jam di dalam water bath, setiap 15 menit tabung dibolak-balik sebentar agar tidak terbentuk endapan. Setelah didinginkan ditambahkan chloroform 500 µl dan fenol 5 µl untuk mendapatkan supernatan, kemudian diaduk lalu disentrifugasi rpm selama 10 menit. Setelah itu supernatan dipindahkan ke dalam tabung mikro yang baru dan ditambahkan chloroform 500 µl dan fenol 10 µl. Larutan diaduk dan kemudia disentrifugasi kembali dengan kecepatan rpm selama 10 menit. Dipindahkan kembali supernatan ke tabung mikro yang baru dan ditambahkan isopropanol 500 µl dan NaCl 300 µl kemudian diinkubasi dingin selama 1 jam. Setelah itu disentrifugasi dengan kecepatan yang sama dan dibuang cairan di dalam tabung dan ditambahkan etanol 70% 300 µl untuk memisahkan DNA kemenyan dan disentrifugasi kembali. Cairan etanol di dalam tabung dibuang hingga menyisakan cairan DNA yang menempel pada ujung tabung. Kemudian tabung dibalik, dikeringkan di atas silica gel ± 15 menit. Ditambahkan larutan buffer TE 50µl, lalu disentrifugasi dengan kecepatan rpm selama 3 menit. Uji Kualitas DNA Uji kualitas DNA menggunakan agarose sebagai media dan menggunakan mesin elektroforesis untuk melihat DNA setelah ekstraksi. Pembuatan agarose

13 menggunakan agarose 1% yang dimasukkan ke dalam tabung erlenmeyer, kemudian dipanaskan didalam microwave selama 2,5 menit hingga larutan jernih. Setelah itu ditambahkan GelRed atau pewarna agarose sebanyak 0,5 µl. Agarose dicetak didalam wadah cetakan elektroforesis dan didinginkan hingga membeku. Komponen yang dibutuhkan untuk elektroforesis DNA antara lain adalah DNA kemenyan, DNA leader, dan loading dye (Blue Juice). Loading dye (Blue Juice) sebagai pewarna DNA diletakkan diatas parafilm sebanyak 1 µl,dan ditambahkan DNA kemenyan sebanyak 3 µl. Dicampur dan diletakkan ke dalam pallete agarose (sumur). DNA leader diletakkan di pallete agarose pada ujung sebelah kiri, dengan catatan letak sumur cetakan pada sumbu negatif agar terjadi aliran energi. Kemudian di elektroforesis selama 30 menit dan setelah itu agarose PCR Amplifikasi PCR dilakukandengan volume final sebanyak 16µl, selanjutnyaamplikondilihatdalam agarose 2%. Pembuatan agarose untuk PCR sama dengan pembuatan agarose pada uji kualitas DNA. Komposisi PCR produk dalam satu tabung mikro antara lain DNA sebanyak 2 µl, primer reverse 1µl, primer forward 1 µl, NFW sebanyak 4 µl, dan Green GoTaq sebanyak 8 µl. Produk PCR dalam satu tabung mikro di spin down hingga tercampur merata. PCR dilakukandenganmenggunakan mesin PCR (Polymerase Chain Reaction) PTC-100 Programmable Thermal Cycler. Sampel dimasukkan ke dalam blok PCR dan disusun secara seimbang. Tahap peleburan (denaturasi) dengan suhu 94 C selama 30 detik, tahap penempelan (annealing) dengan suhu 55 C selama 30 detik, dan tahap pemanjangan (elongasi) dengan suhu 72 C selama 1 menit. Visusalisai DNA dilakukan dengan mesin UV transiluminator dengan cara yang sama dengan uji kualitas DNA sebelumnya.

14 Sekuensing DNA DNA kemenyan yang telah teramplifikasi kemudian dikirim ke PT. Genetika Science di Singapura untuk dilakukan sekuensing. Analisa Sekuens dan Analisa Data Sekuen-sekuen yang menunjukan hasil amplifikasi yang jelas dan tidak rancu selanjutnya dirakit menggunakan software perakitan nukleotida. Pada penelitian ini perakitan nukleotida lebih jelas nya menggunakan software BioEdit (Hall, 1999).Sekuen disejajarkan dengan menggunakan software MEGA 5.05 (Tamura et al., 2011) yang terdapat pada menu ClustalW (Larkin et al., 2007) secara otomatis dan selanjutnya disesuaikan secara manual. Hasil sekuen dibandingkan dengan database yang terdapat di National Center for Biotechnology Information (NCBI). Studi filogenetik dianalisis dengan menggunakan software MEGA 5.05 pada menu Phylogenymenggunakan metode Neighbor-Joining (NJ). Konsistensi pohon filogenetik NJdiuji dengan metodebootstrap (Felsenstein, 1985) sebanyak kali ulangan. Jarak genetik antar sampel dianalisis dengan metode Kimura 2-parameter (K2P) (Kimura, 1980). Untuk studi filogenetik terhadap beberapa jenis kemenyan dengan primer trnl-trnf dapat diperoleh dari pangkalan data sekuens-sekuensberbagaijenisstyrax yang sudahterdeposit di NCBI, urutan DNA kemudian dijajarkan dengan Mega 5.05 menggunakan Align by Musclelalusetelah itu pilih menu Phylogenyuntuk memperoleh pohon filogenetiknya.