TOKSISITAS SENYAWA FLAVONOID DARI EKSTRAK ETANOL DAUN DEWANDARU (Eugenia uniflora Linn.) SEBAGAI SKRINING AWAL ANTIKANKER SKRIPSI

Transkripsi

1 TOKSISITAS SENYAWA FLAVONOID DARI EKSTRAK ETANOL DAUN DEWANDARU (Eugenia uniflora Linn.) SEBAGAI SKRINING AWAL ANTIKANKER SKRIPSI OLEH : I MADE ADI SUARDHYANA NIM JURUSAN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS UDAYANA BUKIT JIMBARAN 2015

2 TOKSISITAS SENYAWA FLAVONOID DARI EKSTRAK ETANOL DAUN DEWANDARU (Eugenia uniflora Linn.) SEBAGAI SKRINING AWAL ANTIKANKER SKRIPSI Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains (S1) di Jurusan Kimia F.MIPA Universitas Udayana OLEH : I MADE ADI SUARDHYANA Menyetujui : Pembimbing I Pembimbing II Prof. Dr. Drs. I Made Dira Swantara, M.Si. Dr. Dra. Wiwik Susanah Rita, M.Si. NIP NIP Mengesahkan Ketua Jurusan Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana Anak Agung Bawa Putra, S.Si., M.Si. NIP ii

3 TEAM PENGUJI SIDANG SKRIPSI TOKSISITAS SENYAWA FLAVONOID DARI EKSTRAK ETANOL DAUN DEWANDARU (Eugenia uniflora Linn.) SEBAGAI SKRINING AWAL ANTIKANKER OLEH: I Made Adi Suardhyana Skrpsi ini disidangkan di Bukit Jimbaran pada tanggal 6 Juli 2015 Team Penguji Sidang Skripsi Ketua Sekretaris Prof. Dr. Drs. I Made Dira Swantara, M.Si. Dr. Dra. Wiwik Susanah Rita, M.Si. NIP NIP Anggota Dra. Ida Ayu Raka Astiti Asih, M.Si. NIP Anggota I Made Sutha Negara, S.Si., M.Si. NIP iii

4 ABSTRAK Flavonoid merupakan senyawa yang dipercaya berpotensi sebagai antikanker. Salah satu tanaman yang mengandung flavonoid adalah tanaman dewandaru (Eugenia uniflora Linn.). Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi dan uji toksisitas senyawa flavonoid dari ekstrak etanol daun dewandaru (Eugenia uniflora Linn.) yang berpotensi sebagai antikanker. Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi dan partisi menggunakan n-heksana, kloroform, dan etil asetat. Pemisahan fraksi kloroform dilakukan dengan kromatografi kolom silika gel menggunakan campuran pelarut kloroform : etil asetat (5:1) sebagai fase gerak. Uji toksisitas dilakukan dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), dan identifikasi dilakukan dengan spektrofotometer inframerah serta ultraviolet-visible. Ekstraksi 1000 g serbuk daun dewandaru dengan ml etanol 70% menghasilkan 273 g ekstrak pekat etanol dan proses partisi berturut turut menghasilkan 30,14 g ekstrak pekat air, 5,58 g ekstrak pekat n-heksana, 20,57 g ekstrak pekat kloroform, dan 22,45 g ekstrak pekat etil asetat. Uji fitokimia menunjukkan bahwa keempat ekstrak positif mengandung flavonoid, namun ekstrak kloroform memiliki efek toksik yang paling tinggi. Pemisahan dengan kromatografi kolom menghasilkan 3 kelompok fraksi (Fa, Fb, dan Fc). Fraksi Fc positif flavonoid dan relatif murni serta paling toksik terhadap larva udang Artemia salina Leach dengan LC 50 sebesar 63,10 ppm, isolat selanjutnya diidentifikasi dengan spektrofotometer inframerah serta ultraviolet-visible. Hasil identifikasi menunjukkan isolat (Fc) merupakan senyawa golongan flavonoid jenis dihidroflavonol yang mempunyai gugus fungsi OH terikat, CH alifatik, C = O, C = C aromatik, C O dan CH aromatik, serta terdapat gugus hidroksi pada atom C-3, C-5, dan C-7, serta mempunyai gugus orto dihidroksi pada cincin B dan memberikan serapan pada panjang gelombang (λ max ) 281,0 dan 315,0 nm. Kata kunci : Dewandaru (Eugenia uniflora Linn.), flavonoid, Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), LC 50. iv

5 ABSTRACT Flavonoid is believed has a potency as anticancer. One of plant containing flavonoids is dewandaru (Eugenia uniflora Linn.). This study aims to identify and toxicity test of flavonoid from ethanol extract of leaf of dewandaru (Eugenia uniflora Linn.) which the potential as an anticancer. Extraction was done by maceration method and partition using n-hexane, chloroform, and ethyl acetate respectively. Separation of chloroform extract was carried out by silica gel column chromatography with chloroform : ethyl acetate (5:1) as the eluent. The toxicity test with Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) methods and was identified with an infrared and UV-vis spectrophotometer. Extraction of 1000 g dewandaru leaf powder with ml ethanol produced 273 g of ethanol concentrated extract and partition process produced 30,14 g of concentrated water extract, 5,58 g of concentrated n-hexane extract, 20,57 g of concentrated of chloroform extract, and 22,45 g of concentrated ethyl acetate extract respectively. Phytochemical test showed that all extracts contained flavonoid, but the chloroform extract had the highest toxic effect. Separation with column chromatography produced 3 fractions was the Fa, Fb, and Fc. The fraction Fc contained flavonoid and was relatively pure. The isolate Fc was the most toxic to the shrimp larvae of Artemia salina Leach with LC 50 of ppm. Identification of isolates (Fc) showed that the flavonoid was dihidroflavonol which has functional groups OH bonded, CH aliphatic, C = O, C = C aromatic, C - O and CH aromatic, and there are a hydroxy group at atom C-3, C -5, and C-7, which has the ortho dihydroxy group in B ring and gives absorption at a wavelength (λ max ) of and nm. Keywords: Dewandaru (Eugenia uniflora Linn.), Flavonoids, Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), LC 50. v

6 KATA PENGANTAR Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa, Ida Shang Hyang Widhi Wasa karena berkat rahmat-nya Skripsi yang berjudul Toksisitas Senyawa Flavonoid dari Ekstrak Etanol Daun Dewandaru (Eugenia Uniflora Linn.) sebagai Skrining Awal Antikanker dapat diselesaikan sebagaimana diharapkan. Pembuatan skripsi ini merupakan salah satu syarat untuk menyelesaikan pendidikan di Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Dalam menyelesaikan skripsi ini, penulis banyak mendapat bantuan dari berbagai pihak sehingga pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan ucapan terima kasih kepada : 1. Bapak Prof. Dr. Drs. I Made Dira Swantara, M.Si., selaku pembimbing akademik sekaligus pembimbing I dan Ibu Dr. Dra. Wiwik Susanah Rita, M.Si, selaku pembimbing II yang telah memberikan semangat dan dorongan serta penuh kesabaran membimbing dan memberi nasihat hingga skripsi ini selesai. 2. Bapak Anak Agung Bawa Putra, S. Si., M.Si. selaku Ketua Jurusan Kimia Fakultas MIPA Universitas Udayana. 3. Seluruh staf Dosen dan staf Tata Usaha di lingkungan Jurusan Kimia Fakultas MIPA Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan dan dukungan kepada penulis. 4. Orang tua saya yang selalu mendukung saya baik dari segi moral dan dana dari awal kuliah sampai pembuatan skripsi ini. 5. Teman angkatan 2011 yang selalu memberikan kritik dan saran dalam penulisan skripsi ini. vi

7 6. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu, yang juga turut membantu dan memberikan dukungan dalam menyelesaikan skripsi ini. Penulis menyadari terbatasnya kemampuan yang penulis miliki sehingga skripsi ini masih jauh dari sempurna, oleh karena itu kritik dan saran yang positif dari semua pihak sangat penulis harapkan demi kesempurnaannya. Badung, 24 Juni 2015 Penulis vii

8 DAFTAR ISI viii Halaman HALAMAN JUDUL... i PENGESAHAN... ii TEAM PUNGUJI SIDANG SKRIPSI... iii ABSTRAK... iv ABSTRACT... v KATA PENGANTAR... vi DAFTAR ISI... viii DAFTAR GAMBAR... xi DAFTAR TABEL... xii DAFTAR LAMPIRAN... xiii BAB I. PENDAHULUAN Latar Belakang Rumusan Masalah Tujuan Penelitian Manfaat Penelitian... 5 BAB II. TINJAUAN PUSTAKA Tanaman Dewandaru (Eugenia uniflora Linn.) Kandungan Kimia Daun Dewandaru (Eugenia uniflora Linn.) Flavonoid Artemia salina Leach Cara penetasan telur Artemia salina Leach Uji toksisitas metode BSLT Pemisahan Komponen Bioaktif pada Tumbuhan Ekstraksi A Maserasi B Perkolasi C Soxhletasi Partisi Kromatografi kolom Kromatografi lapis tipis (KLT) Identifikasi A Uji Fitokimia... 17

9 B Spektrofotometri inframerah (IR) C Spektrofotometri UV-visible BAB III. METODE PENELITIAN Bahan dan Peralatan Penelitian Bahan penelitian Bahan kimia Alat penelitian Tempat Penelitian Metode Penelitian Penyiapan bahan Ekstraksi daun dewandaru Uji flavonoid A Uji Wilstatter B Uji Bate-Smith-Metchalf C Uji dengan NaOH 10 % Pemisahan dan pemurnian fraksi pekat daun dewandaru A Kromatografi lapis tipis B Kromatografi kolom Identifikasi isolat aktif A Analisis dengan spektrofotometer UV-visible dan IR B Uji toksisitas dengan metode BSLT BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN Identifikasi dan Penyiapan Bahan Ekstraksi Daun Dewandaru Pemisahan dan Pemurnian Fraksionasi (Partisi) Pemisahan dengan Kromatografi Lapis Tipis Pemisahan dengan Kromatografi Kolom Identifikasi Isolat ix

10 Identifikasi Isolat dengan Spektrofotometer UV-visible Identifikasi Isolat dengan Spektrofotometer Inframerah (IR) 46 BAB V. SIMPULAN DAN SARAN Simpulan Saran DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN x

11 DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 2.1 Tanaman dewandaru... 7 Gambar 2.2 Kerangka dasar flavonoid... 8 Gambar 2.3 Kerangka dasar beberapa golongan senyawa flavonoid... 9 Gambar 2.4 Spektrum serapan UV-vis jenis flavonoid yang berbeda Gambar 4.1 Profil kromatogram dari ekstrak kloroform dengan berbagai fase gerak Gambar 4.2 Profil KLT dari fraksi-fraksi kromatografi kolom Gambar 4.3 Profil kromatogram lapis tipis uji kemurnian fraksi Fc dari beberapa eluen Gambar 4.4 Spektrum UV-vis isolat Fc Gambar 4.5 Spektrum UV-vis isolat Fc dalam metanol dengan penambahan pereaksi geser NaOH Gambar 4.6 Reaksi modifikasi flavonoid dengan NaOH Gambar 4.7 Spektrum UV-vis isolat Fc dalam metanol dengan penambahan pereaksi geser NaOAc, dan NaOAc + H 3 BO Gambar 4.8 Reaksi flavonoid dengan pereaksi NaOAc dan NaOAc + H 3 BO Gambar 4.9 Spektrum UV-vis isolat Fc dalam metanol dengan penambahan pereaksi geser AlCl 3, dan AlCl 3 + HCl Gambar 4.10 Reaksi flavonoid dengan AlCl 3 dan HCl Gambar 4.11 Spektrum Inframerah isolat Fc Gambar 4.12 Struktur flavanon hasil identifikasi xi

12 DAFTAR TABEL Halaman Tabel 2.1 Rentang Serapan Spektrum UV-Vis Flavonoid Tabel 4.1 Hasil uji fitokimia senyawa golongan flavonoid dari ekstrakpekat Etanol Tabel 4.2 Hasil uji toksisitas ekstrak pekat etanol Tabel 4.3 Hasil uji flavonoid fraksi air, n-heksana, kloroform dan etil asetat Tabel 4.4 Hasil uji toksisitas ekstrak pekat hasil partisi Tabel 4.5 Hasil pemisahan komponen ekstrak kloroform (partisi) dengan KLT Tabel 4.6 Hasil pemisahan komponen ekstrak kloroform hasil fraksionasi dengan KLT penggabungan Tabel 4.7 Hasil uji flavonoid isolat kromatografi kolom Tabel 4.8 Hasil uji toksisitas fraksi hasil kromatografi kolom Tabel 4.9 Hasil uji kemurnian fraksi Fc dengan berbagai fase gerak Tabel 4.10 Data Spektrum UV-vis dari isolat Fc Tabel 4.11 Hasil identifikasi senyawa golongan flavonoid dalam isolat aktif dengan spektrofotometri UV-vis Tabel 4.12 Data Spektrum inframerah isolat Fc xii

13 DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Hasil Determinasi Tumbuhan Dewandaru (Eugenia uniflora Linn.) 55 Lampiran 2. Skema Kerja Ekstraksi dan Partisi Senyawa Flavonoid Daun Dewandaru Lampiran 3. Skema Kerja Pemisahan, Pemurnian, Uji Toksisitas, dan Identifikasi Senyawa Flavonoid Ekstrak Daun Dewandaru Lampiran 4. Hasil Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Daun Dewandaru (Eugenia uniflora Linn.) Lampiran 5. Hasil Uji Toksisitas Hasil Partisi Ekstrak Etanol Lampiran 6. Hasil Uji Toksisitas Isolat Hasil Kromatografi Kolom Lampiran 7. Pembuatan Larutan untuk Uji Toksisitas terhadap Larva Udang Artemia salina Leach Lampiran 8. Proses Penelitian xiii