BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN. Pada penelitian ini tanaman nilam yang digunakan adalah jenis Pogostemon

Transkripsi

1 BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN Pada penelitian ini tanaman nilam yang digunakan adalah jenis Pogostemon cablin Benth yang berasal dari perkebunan nilam Samigaluh, Kulonprogo, Yogyakarta. Alasan pemilihan jenis nilam Pogostemon cablin Benth adalah karena tanaman nilam jenis ini memiliki kandungan minyak paling banyak dibandingkan dengan tanaman nilam jenis lainnya dan paling banyak diminati pasar karena kualitas minyaknya yang baik (Napitupulu, 2006). Daerah ini merupakan dataran tinggi yang cukup baik untuk pertumbuhan nilam. Karena daerah tersebut merupakan dataran tinggi yang memiliki kadar patchouli alkaohol yang tinggi. Menurut Nuryani (2006a), kandungan patchoulol pada tanaman nilam yang tumbuh di dataran tinggi lebih tinggi dibandingkan nilam yang tumbuh di dataran rendah. Hal ini terjadi karena dataran rendah mengalami proses transpirasi lebih tinggi dibandingkan dataran tinggi sehingga senyawaalkohol lebih mudah menguap (Setiawan dan Rosman, 2013). 5.1 Perlakuan pra-destilasi Nilam Perlakuan pendahuluan sebelum penyulingan terhadap daun nilam merupakan salah satu cara untuk mempertinggi mutu minyak nilam. Perlakuan pendahuluan sebelum penyulingan dapat dilakukan dengan cara pelayuan, pengecilan ukuran, dan fermentasi (Kateran, 1985; Nasrudin dkk, 2009). Proses tersebut perlu dilakukan karena minyak atsiri terdapat di dalam vakuola daun, kelenjar minyak, pembuluh-pembuluh, dan kantong minyak atau rambut glandular. Apabila daun nilam dibiarkan utuh, minyak atsiri hanya dapat diisolasi apabila uap air berhasil 66

2 67 melalui jaringan tanaman dan mendesaknya kepermukaan, sehingga kecepatan pengeluaran minyak hanya tergantung dari proses difusi yang berlangsung sangat lambat (Rulianah, 2012) Pelayuan dan Pengeringan Proses pendahuluan yang pertama dilakukan pada penelitian ini adalah proses pelayuan, pelayuan ini bertujuan untuk menguapkan sebagian air dalam bahan sehingga penyulingan lebih mudah dan lebih cepat. Daun nilam segar dilayukan selama semalam dengan cara mengangin-anginkan daun nilam di tempat yang tidak terkena cahaya matahari, karena kehilangan minyak selama proses pelayuan atau pengeringan dibawah sinar matahari langsung lebih besar dari kehilangan minyak selama proses penyimpanan. Jika daun nilam dilayukan atau dikeringkan dibawah sinar matahari langsung, air dalam tanaman akan berdifusi sambil mengangkut minyak atsiri dan akhirnya menguap (Andini, 2011). Proses pelayuan dilakukan dengan cara dianginkan-anginkan dengan digantung selama 1 hari. Pelayuan ini di lakukan tanpa terkena sinar matahari langsung. Hal ini dikarenakan proses pengeringan yang sebenarnya bertujuan untuk menghilangkan kadar air dan mempermudah keluarnya minyak bisa menjadi tidak optimal jika suhu yang digunakan terlalu panas (Salim, 2007).

3 68 (A) (B) Gambar 17. Pelayuan Tanaman Nilam; (A) Nilam yang diangin-anginkan, (B) Nilam yang sudah dilayukan 1 hari. Pelayuan dilakukan sampai kadar air dalam terna nilam mencapai %, ditandai dengan warna daun nilam menjadi abu-abu kehijaun dan timbulnya aroma minyak nilam yang lebih tajam (Ma mun, 2011) Pengecilan ukuran Pengecilan ukuran bertujuan agar kelenjar minyak dapat terbuka sebanyak mungkin sehingga memudahkan pengeluaran minyak dari bahan. Sebanyak 2 Kg nilam yang sudah diangin-anginkan selama 1 hari di potong-potong menggunakan pisau untuk memperkecil ukurannya dengan perbadingan berat daun:batang (3:1). Hal ini disebabkan kandungan minyak dalam batang, cabang atau ranting jauh lebih kecil (0,4-0,5 %) dibandingkan dalam daun (5-6 %) (Rusli, 2002). Kadar Patchoulol terbesar adalah pada batang. Komposisi ini adalah yang terbaik dalam proses penyulingan. Menurut Ma mun (2011), semakin besar persentase bobot batang atau ranting akan semakin rendah rendemen minyak hasil penyulingan.

4 Fermentasi Prinsip fermentasi pada isolasi minyak nilam adalah dengan cara memecahkan dinding sel dari daun nilam dengan menggunakan enzim yang terdapat dalam mikroorganisme. Hancurnya dinding sel mengakibatkan minyak nilam terpisah dari daun dan dapat diisolasi lebih mudah (Halimah dan Zetra, 2011). Pemecahan diding sel ini dilakukan oleh enzim selulase. Selulase dapat diproduksi oleh jamur, bakteri, tumbuhan, dan ruminansia. Salah satu mikroorganisme utama yang dapat memproduksi selulase adalah jamur (Ul-Haq dkk, 2005; Safaria, 2013). Proses fermentasi pada penelitian ini dilakukan dengan memanfaatkan air, dalam hal ini digunakan akuades. Sebanyak ml dipercikkan ke dalam nilam secara merata. Air berfungsi sebagai pencipta suasana lembab pada daun nilam (Herliana, 2015). Nilam yang sudah di timbang di fermentasi selama 10 jam. Menurut Herliana (2015), waktu fermentasi 10 jam adalah waktu optimum. Pada dasarnya menurut Sudaryani dan Sugiharti (2001), daun nilam dengan keadaan lembab sangat mudah diserang oleh jamur. Air dapat digunakan untuk membantu menumbuhkan mikroorganisme dengan baik karena memiliki ph netral. Menurut Dwidjoseputro (1994), ph yang dapat digunakan mikroorganisme untuk tumbuh dengan baik adalah ph netral, sedagkan ph asam dan basa dapat merusak mikroorganisme. Setelah fermentasi nilam di timbang kembali dan didapatkan berat 2,88 Kg. Berat setelah fermentasi meningkat dikarenakan penambahan akuades pada saat sebelum fermentasi. Temperatur fermentasi didapatkan sebesar 29 o C.

5 70 Sampel daun nilam yang telah difermentasi diidentifikasi mikroorganismenya di Laboratorium Mikrobiologi FMIPA UGM. Tujuannya untuk mengetahui mikroorganisme yang berperan dalam proses fermentasi ini. Dari hasil isolasi mikroorganisme ini teridentifikasi isolat yang tumbuh berasal dari jamur Aspergilus sp. dan Penicillium sp. Menurut Alexopoulus dan Mims dalam Aryantha dkk (2004), jamur Aspergillus sp. dan Penicillium sp. dapat tumbuh secara optimum pada temperatur o C. Sehingga sesuai dengan temperatur yang terukur pada daun nilam selama proses fermentasi. (A) (B) Gambar 18. (A) isolat jamur Aspergilus sp.dalam cawan petri, (B) isolat jamur aspergilus sp.dalam mikroskop (A) (B) Gambar 19. (A) isolat jamur Penicillium sp.dalam cawan petri,(b) isolat jamur penicillium sp. dalam mikroskop

6 71 Pada Gambar 18 (A) yang diberi lingkaran merah merupakan isolat jamur Aspergilus sp. yang tumbuh dalam cawan petri. Isolat ini berwarna hitam merupakan spora (konidia) dari jamur Aspergilus sp. Spora merupakan alat reproduksi pada jamur. Pada Gambar 18 (B) merupakan isolat Aspergilus sp. yang dilihat menggunakan mikroskop terlihat miselium dan hifa tidak berwarna membentuk seperti pohon, dan konidia membentuk rantai berwarna hitam. Ciriciri ini menunjukkan bahwa isolat ini merupakan jamur Aspergilus sp. Jamur berfilamen seperti Aspergillus adalah penghasil enzim selulase dan crude enzyme secara komersial (Ul-Haq, dkk., 2005; Safaria, 2013). Sedangkan pada Gambar 19 (A) yang diberi lingkaran hitam merupakan isolat jamur Penicillium sp. yang tumbuh dalam cawan petri. Isolat ini berwarna hijau menunjukkan spora dari jamur Penicillium sp. yang masih muda. Pada Gambar 19 (B) merupakan isolat Penicillium sp. yang dilihat menggunakan mikroskop. Memiliki hifa dan miselium bercabang dan tidak berwarna, dan spora berwarna hijau. Kedua ciri-ciri jamur ini sama seperti tergambar dalam buku karya Pelczar dan Chan (1986). Kapang yang banyak digunakan pada produksi selulase adalah genus Penicillium. Kapang ini mempunyai kemampuan dapat menghasilkan endoglukanase, eksoglukanase dan β-glukosidase dalam jumlah yang tinggi (Liu et al., 2008; Long et al., 2009). Milala (2005) dan Lynd et al. (2002), menyebutkan bahwa kapang akan menghasilkan selulase jika ditumbuhkan pada medium yang mengandung selulosa.

7 Kerja Mikroorganisme pada Fermentasi Nilam Menurut Guenther (1987), minyak nilam paling banyak terdapat didalam vakuola daun. Menurut Rulianah (2012), vakuola ini terletak ditengah-tengah sel yang dikelilingi oleh dinding sel. Penyusun dari dinding sel tersebut yakni lignin, hemiselulosa, dan selulosa. Selulosa merupakan komponen utama penyusun dinding sel. Selulosa merupakan salah satu penghambat keluarnya minyak pada waktu penyulingan, sebab struktur kristalin selulosa alami sangat kokoh dan tidak larut dalam air sehingga sukar untuk dihidrolisis dalam waktu yang singkat. Menurut Nasrudin dkk (2005), enzim yang berperan dalam proses penghancuran dinding sel daun nilam adalah enzim selulase. Menurut Aryantha dkk (2004), jamur adalah mikroorganisme utama yang dapat memproduksi enzim selulase. Sedangkan menurut penelitian Usama dkk (2008), jamur dari genus Aspergillus sp., Penicillium sp., dan Trichoderma sp., adalah jamur yang mampu menghasilkan enzim selulase. Sehingga diasumsikan jamur Aspergilus sp. dan Penicillium sp.yang teridentifikasi dalam daun nilam selama proses fermentasi ini menghasilkan enzim selulase. Enzim selulase merupakan suatu enzim yang mempunyai kemampuan yang cukup tinggi untuk menghidrolisis selulosa dan hemiselulosa, sehingga molekulmolekul minyak yang terikat dalam vakuola daun lebih mudah untuk dilakukan penyulingan. Kinerja uap panas saat dilakukan penyulingan dengan tujuan untuk mengekstrak molekul-molekul minyak tidak mengalami hambatan yang signifikan.

8 73 Hemiselulosa merupakan suatu material yang terbentuk dari heteropolimer bercabang dan pendek silosa, monosa, arabinosa dan asam uronat. Hemiselulosa merupakan setengah bagian dari selulosa (Nasruddin, 2009). Adanya enzim selulase dapat menyebabkan pemecahan selulosa yang tidak larut dalam air menjadi komponen yang bersifat larut dalam air seperti sellabiosa dan glukosa. Mekanise hidrolisis selulosa dapat dilihat pada Gambar 20. Menurut Ikram dkk (2005), hidrolisis enzimatik yang sempurna memerlukan aksi sinergis dari tiga tipe enzim ini, yaitu: a. Endoselulosa, menguraikan polimer selulosa secara random untuk menghasilkan monomer selulosa dengan panjang rantai yang bervariasi. b. Eksoselulase, menguraikan selulosa menghasilkan selobiosa dan/atau glukosa. c. β-glukosidase (selobiase), menguraikan selobiosa untuk menghasilkan glukosa. Gambar 20. Mekanisme hidrolisis selulosa

9 74 Menurut Kodri dkk (2013), Pada dasarnya mekanisme pemotongan rantai ikatan oleh enzim selulase sangat kompleks karena melibatkan sinergitas kerja tiga komponen besar yaitu endo-1.4-β D-glukanase yang berfungsi memutuskan ikatan selulosa secara random dengan memulai serangan acak pada sisi internal daerah amorf dari serat selulosa sehingga sisi yang terbuka dapat diserang oleh cellobiohydrolase. Kemudian kerja dari Ekso-β-1.4-glukanase yang memotong ujung-ujung rantai individu selulosa. ekso-β-1.4-glukanase atau disebut cellobiohydrolase menyerang bagian luar non-reducing dari selulosa sehingga dihasilkan selobiosa sebagai struktur utamanya. Selanjutnya adalah kerja dari β- glukosidase yang berfungsi memotong selobiosa menjadi molekul-molekul glukosa. Enzim selulase dapat mengubah selulosa tak tersubtitusi menjadi selobiosa yang kemudian dihidrolisis lebih lanjut dengan β-glukosidase (Alexander dkk,1992). Hidrolisis selulosa menjadi glukosa secara konsisten melewati dua tahap penting dalam sistem enzimatik, yaitu pemecahan ikatan glukosidik pada selulosa menjadi selobiosa oleh β-1,4-glukanase dan pemecahan ikatan β-1,4- glukosidik pada selobiosa menjadi glukosa oleh β-glukosidase (Fox, 1991). Daun nilam pada dasarnya sangat mudah diserang oleh mikroorganisme. Menurut penelitian yang dilakukan oleh Wahyuno dkk dalam Herliana (2015), mikroorganisme lain yang dilaporkan sering terdapat dalam tanaman nilam dan menyebabkan penyakit pada tanaman nilam adalah kelompok bakteri Ralstonia solanacearum yang menyebabkan penyakit layu pada tanaman nilam. Kelompok nematoda Pratylenchus, Meloidogyne dan Radhopolus menyebabkan penyakit

10 75 kuning dan merah pada tanaman nilam. Kelompok virus Potyvirus dan Fabavirus menyebabkan penyakit virus mosaik pada tanaman nilam. A B Gambar 21. Perbandingan nilam sebelum dan setelah proses fermentasi: (A) keadaan nilam sebelum fermentasi dan (B) keadaan nilam setelah fermentasi Gambar 21 menunjukkan perbandingan nilam sebelum dan setelah proses fermentasi. Nilam setelah proses fermentasi cendrung terlihat lebih layu dan lembab dengan warna daun yang berubah menjadi kuning kecoklatan dibandingkan sebelum proses fermentasi yang terlihat masih terlihat hijau. Hal ini membuktikan bahwa fermentasi berpengaruh terhadap keadaan nilam. 5.2 Destilasi Nilam yang Terfermentasi Difusi minyak atsiri dengan air panas, hidrolisa terhadap beberapa komponen minyak atsiri, serta dekomposisis akibat panas, akan lebih baik jika dibandingkan dengan uap langsung (Anshori, 2009). Menurut Ketaren (1985), ada tiga cara destilasi daun nilam yaitu: Destilasi dengan air (Water Distillation), destilasi ini jarang dilakukan karena minyak nilam yang diperoleh mutunya rendah dan rendemennya juga rendah. Destilasi dengan air-uap (Water-Steam Distillation), rendemen minyak nilam 2,5 3,0 % dan mutunya cukup bagus. Destilasi dengan uap (Steam Distillation), Rendemen minyak yang dihasilkan sekitar 2,0 2,5 %.

11 76 Hal ini yang melatarbelakangi penggunaan destilasi uap-air pada penelitian ini dibandingkan destilasi uap langsung. Selain itu pada kenyataannya jika peralatan kita secara manual kontrol kita akan lebih sulit dalam pengontrolan uapnya yang akan selalu berubah akibat temperatur dan tekanan. Nilam yang sudah di fermentasi di bagi menjadi dua dengan berat yang sama yaitu 1,44 Kg. Yang pertama dimasukkan dalam ketel destilasi Air-Uap (Water- Steam Distillation). Sedangkan yang lainnya dimasukkan ke dalam ketel destilasi Water Bubble dan ditambahkan akuades sebanyak 10 L pada masing-masing ketel. Penyulingan dilakukan selama 6 jam setelah tetesan pertama keluar minyak. Setelah selesai penyulingan, hasil yang didapatkan dipisahkan antara minyak dan air, kemudian ditambahkan Na 2 SO 4 anhidrat pada minyak yang diperoleh. Na 2 SO 4 anhidrat berfungsi untuk mengikat air yang masih tertinggal di dalam minyak sehingga didapatkan minyak nilam yang bebas air. Proses perlakuan serta keterangannya secara lengkap kedua destilasi tersebut akan dijelaskan di bawah ini Destilasi Air-Uap (Water-Steam Distillation) Bahan baku dimasukan beserta akuades pada bagian bawah ketel dimana bahan baku dan air tidak kontak secara langsung. Kemudian ketel dipanaskan hingga minyak menguap. Pemanasan awal dilakukan dengan api yang besar. Hal ini bertujuan agar mempercepat penguapan minyak. Air pada bagian bawah ketel yang terdekat dengan sumber pemanasan akan mendidih saat pemanasan hingga menghasilkan uap yang akan berkontak langsung dengan bahan baku yang

12 77 kemudian terjadi proses hidrodifusi sehingga minyak dapat ikut menguap bersamaan dengan menguapnya air. Proses hidrodifusi pada penyulingan tanaman melalui beberapa proses yaitu pada suhu air mendidih sebagian minyak yang mudah menguap larut dalam air yang terdapat di dalam kelenjar-kelenjar. Larutan minyak air ini oleh peristiwa osmosis, menembus melalui selaput-selaput yang telah menggelembung dan akhirnya mencapai permukaan paling luar yang kemudian minyak atsiri akan teruapkan oleh uap yang dilewatkan. Proses ini berlangsung terus-menerus hingga semua senyawa yang mudah menguap terdifusi dari kelenjar-kelenjar minyak dan kemudian teruapkan oleh uap air yang lewat (Sastrohamidjojo, 2004). Setelah tetesan pertama minyak dilakukan pengecilan api pada sumber pemanasan agar mencegah terjadi gosong. Selain itu dalam Sastrohamidjojo (2004), untuk penyulingan uap-air pada tekanan atmosfer luar maka suhu pemanasan yang digunakan sebesar 100 o C. Usahakan suhu operasional serendah mungkin, meskipun kita mengetahui bahwa kecepatan produksi ditentukan oleh suhu. Uap air dan minyak yang teruapkan akan melalui pendingin dimana pada tahap ini air dan minyak akan berubah fase dari uap menjadi cair. Kemudian air dan minyak mengalir menuju tempat penampungan minyak. Pada penampung ini minyak akan sangat mudah dipisahkan karena perbedaan berat jenis kedua cairan tersebut. Pada hal ini minyak berada pada bagian atas sedangkan air berada pada bagian bawah. Penampung minyak ini merupakan sistem kohobasi dimana air yang berada pada bagian bawah mengalir kembali ke dalam ketel.

13 Destilasi Water Bubble a. Optimalisasi Alat Destilasi Water Bubble Tujuan optimalisasi ini adalah untuk menentukan kondisi optimum alat destilasi Water Bubble. Pengujian dilakukan dengan beberapa parameter uji fisik yaitu kapasitas bahan yang digunakan, tekanan dan temperatur. 1. Kapasitas bahan yang digunakan Pada pengujian ini dilakukan dengan variasi berat bahan yaitu 1 Kg dan 2 Kg daun nilam. Penggunaan bahan baku nilam sebanyak 2 Kg menyebabkan kerusakan pada alat destilasi. Beberapa waktu setelah dilakukan pemanasan pada boiler, ketel destilasi menjadi tidak stabil. Kemudian bahan baku yang terdapat di dalam ketel meluap dan tumpah. Sedangkan pada penggunaan bahan baku sebanyak 1 Kg, ketel tetap stabil hingga keluar minyak. Perlakuan ini dilanjutkan hingga 6 jam. Selama perlakuan destilasi tidak terjadi kerusakan pada alat destilasi. Dari perlakuan tersebut didapatkan kondisi optimum bahan yang digunakan adalah sebesar 1 Kg. 2. Temperatur Temperatur optimum dalam penyulingan adalah sebesar 100 o C, lebih dari itu minyak yang akan dihasilkan berkualitas rendah. Menurut Sastrohamidjojo (2004), kualitas minyak atsiri yang paling baik, kita harus yakin bahwa selama penyulingan minyak atsiri diupayakan agar suhu pemanasan rendah. Minyak yang dihasilkan akan berwarna kecoklatan, bau yang sangat menyangat dan agak berbau gosong. Selain itu pada alat destilasi Water Bubble yang memiliki

14 79 temperatur >100 o C akan menyebabkan kebocoran uap pada ketel destilasi. Oleh karena itu alat destilasi dijaga temperatur tepat 100 o C. 3. Tekanan Tekanan yang diujikan pada alat destilasi Water Bubble adalah <0,5 Barr; 0,5 Barr dan >0,5 Barr. Pada pengujian ini tekanan <0,5 Barr dan 0,5 Barr dapat mengendalikan temperatur pada ketel tepat 100 o C. Sedangkan pada tekanan >0,5 Barr menghasilkan panas yang besar sehingga temperatur pada ketel melebihi 100 o C yang menyebabkan ketel menjadi tidak stabil. Pada tekanan ini uap keluar di beberapa bagian ketel seperti pada tutup, tempat baut ketel serta pada konektor. Oleh karena itu tekanan >0,5 Barr tidak boleh digunakan untuk destilasi. Pada tekanan <0,5 Barr memang mampu menghasilkan temperatur 100 o C serta mampu menghasilkan minyak dari tanaman nilam. Akan tetapi hasil yang didapatkan sedikit yaitu 3 ml. Sedangkan pada dengan penggunaan tekanan 0,5 Barr minyak yang dihasilkan sebesar 7,2 ml. Oleh karena itu tekanan pada alat destilasi Water Bubble yang digunakan dalam penelitian ini diatur sebesar 0,5 Barr. b. Proses Destilasi Bahan baku dimasukkan dalam ketel beserta akuades yang sudah ditentukan. Kemudian pada boiler diisi air sebagai sumber penghasil uap. Jadi, pada teknik destilasi ini merupakan gabungan dua teknik destilasi yaitu destilasi air dan destilasi uap. Pada ketel destilasi dilengkapi dengan pengadukan yang difungsikan agar pemanasan merata. Pada kenyataannya penyulingan yang dilakukan dengan destilasi uap tidak menggunakan pengadukan. Selain itu pengadukan pada

15 80 destilasi uap sulit dilakukan, hal ini disebabkan keadaan bahan baku yang agak kering sehingga pergerakan pengadukan agak terhambat. Oleh karena itu fungsi penambahan air yang kontak langsung dengan bahan baku akan mempermudah pengadukan. Seringkali pada praktek di lapangan terjadinya tidak pemerataan bahan baku yang terkena uap. Biasanya bagian tengah dan atas pada bahan baku yang tidak mengalami pemanasan oleh uap air sehingga proses destilasi menjadi tidak maksimal. Hal ini disebabkan oleh menumpuknya bahan baku yang dipadatkan didalam ketel sehingga uap sulit untuk menembus bahan baku. Setelah bahan baku serta air yang digunakan telah siap, dilakukan pemanasan pada boiler. Boiler di atur agar tekanan stabil pada 0,5 Barr dimana pada tekanan ini merupakan kondisi optimum pada destilasi Water Bubble. Tidak seperti destilasi uap yang menahan uap pada boiler hingga tekanan tertentu kemudian baru dilepaskan ke ketel, uap dari boiler pada destilasi Water Bubble langsung dilepaskan ke ketel. Hal ini bertujuan agar menjaga stabilitas ketel karena pada destilasi uap tekanan yang dilepaskan langsung dengan tekanan yang besar sehingga dapat membuat ketel menjadi tidak stabil. Dalam hal ini perlu penanganan yang baik serta pengalaman yang mencukupi. Tekanan yang dilepaskan akan memanaskan air dalam ketel sehingga terbentuk gelembung-gelembung air. Oleh karena pada tahap ini terjadinya gelembung-gelembung air, maka destilasi ini dinamakan Water Bubble. Pada proses ini gelembung-gelembung air akan mempermudah hidrodifusi. Pengadukan akan meratakan pemanasan sehingga lebih maksimal. Pada ketel dijaga

16 81 temperatur stabil pada 100 o C. Untuk dapat mengatur tekanan dan temperatur butuh keahlian dan pengalaman dalam mengatur panas dari kompor pemanas. Sama dengan penyulingan uap-air agar dapat mendapatkan hasil yang dengan kualitas yang pemanasan dilakukan serendah mungkin. Selama proses destilasi berlangsung, uap air akan menembus jaringan sel nilam dan membawa minyak dari bawah ke atas menuju pipa kondensor (Qodrillah, 2015). Air dan minyak yang menguap dilewatkan menuju kondensor. Pendingin yang digunakan berbentuk pipa yang dikumpar dan direndam dalam bejana yang dialiri dengan air dingin. Pendingin yang digunakan terbuat dari stainless steel. Hal ini dikarenakan pendingin seperti besi dan tembaga akan dapat memberikan warna pada minyak atsiri (Sastrohamidjojo, 2004). Uap air dan minyak yang telah melalui kondensor ditampung dan dipisahkan antara air dan minyak. Sama halnya dengan hasil destilasi uap-air, minyak nilam yang dihasilkan memiliki berat jenis yang lebih kecil dibandingkan dengan air sehingga minyak berada pada bagian atas. Kondisi ini memudahkan dalam pemisahan minyak dengan air dan untuk lebih memastikan minyak benar-benar telah dipisahkan dengan air maka ditambahkan garam seperti Na 2 SO 4 yang berfungsi mengikat air. Berbeda dengan destilasi uap-air, penampung minyak pada Water Bubble tidak memakai sistem kohobasi. Hal ini dikarenakan sistem pengairan pada boiler langsung dialirkan dari keran air sehingga akan memudahkan penambahan air pada saat boiler kekurangan air. Selain itu sulit untuk menggunakan sistem kohobasi pada destilasi yang menggunakan tekanan. Jika ingin dilakukan maka

17 82 perlu penggunaan pompa air yang memiliki kecepatan alir yang besar dalam artian memiliki tekanan yang lebih besar dibandingkan tekanan yang ada pada boiler saat proses destilasi berlangsung. 5.3 Perbandingan Minyak Nilam Minyak nilam hasil destilasi Water bubble diberi kode (label) F1 sedangkan hasil dari teknik destilasi uap-air diberi kode (label) F2. Hasil minyak yang didapatkan dari kedua teknik destilasi tersebut dibandingkan kualitasnya. Dalam hal ini minyak yang dihasilkan diuji dengan beberapa parameter umum yang diujikan, yaitu uji fisika seperti warna, berat jenis, rendemen, indeks bias, dan uji kimia seperti bilangan asam dan kadar patchoulol. Pembandingan destilasi uap-air dengan Water bubble ditujukan agar dapat menemukan metode yang lebih efisien dalam produksi minyak atsiri nilam. Dari ketiga teknik destilasi menunjukkan bahwa kualitas terbaik dalam penyulingan nilam adalah teknik destilasi uap-air. Akan tetapi penggunaan teknik ini memiliki kekurangan dari segi jumlah produksi dimana terkendala pada jumlah bahan yang akan di destilasi hanya mampu dalam jumlah yang sedikit. Sehingga waktu produksi cukup lama. Penggunaan tekanan uap yang besar pada destilasi uap memang mampu menghasilkan jumlah minyak yang cukup banyak dan membutuhkan waktu produksi yang relatif singkat. Hal ini dikarenakan tekanan uap yang dihasilkan mampu menghasilkan minyak dengan jumlah bahan baku yang besar. Akan tetapi kualitas rendemen yang dihasilkan lebih kecil. Oleh karena itu digunakan teknik destilasi Water bubble yang juga menggunakan tekanan uap akan tetapi hasil yang diharapkan memiliki kualitas yang baik.

18 Uji Fisika Minyak Nilam Di antara sifat fisika yang tercantum dalam Standar Nasional Indonesia (SNI ) tentang minyak nilam, warna, berat jenis dan indeks bias yang diuji pada sampel minyak nilam yang diperoleh dari destilasi Water bubble (F1) dan destilasi uap-air (F2). Warna minyak nilam yang dihasilkan F1 memberikan warna kuning muda sedangkan F2 berwarna kuning tua. Dalam hal ini warna pada kedua sampel minyak masih memenuhi standar SNI dimana warna yang diperbolehkan kuning muda-coklat kemerahan. Gambar 22. Minyak nilam F1 (Water bubble), F2 (uap-air) a. Berat Jenis dan Rendemen Berat jenis merupakan salah satu parameter penting dalam menentukan mutu dan kemurnian minyak atsiri. Menurut Sastrohamidjojo (2004), berat jenis minyak atsiri di definisikan sebagai perbandingan antara berat minyak dengan berat air pada volume air dan volume minyak yang sama. Berat jenis sering dihubungkan dengan fraksi berat komponen-komponen yang terkandung didalamnya. Semakin berat fraksi berat yang terkandung dalam minyak maka akan semakin besar nilai densitasnya. Semakin tinggi berat jenis menunjukan minyak memiliki kualitas yang baik. (Guenther,1987).

19 84 Berdasarkan SNI tentang minyak nilam menyatakan bahwa berat jenis minyak nilam berkisar antara 0,950-0,975 (25 o C/25 o C). Dari hasil pengukuran menunjukkan bahwa berat jenis sampel F1 sebesar 0,955 sedangkan sampel F2 sebesar 0,991. Hasil berat jenis yang didapatkan menunjukkan bahwa sampel F1 lebih baik dibandingkan dengan F2, karena F1 memiliki berat jenis yang memenuhi standar SNI. Dari hasil berat jenis yang diperoleh maka rendemen minyak nilam dapat diketahui. Rendemen minyak nilam dinyatakan dalam presentase dengan perbandingan antara berat minyak nilam yang dihasilkan per berat bahan baku basah. Jumlah minyak yang dihasilkan pada sampel F1 sebesar 7,2 ml dengan rendemen minyak sebesar 0,69%. Sedangkan jumlah minyak yang dihasilkan serta rendemen sampel F2 sebesar 17,2 ml dan 1,71%. Rendemen pada F2 lebih besar dibandingkan dengan F1. Rendemen yang digunakan adalah rendemen basah, jadi rendemen dikalikan dengan faktor 5 untuk mendapatkan rendemen kering. Sehingga rendemen minyak F1 menjadi sebesar 3,45 % sedangkan F2 sebesar 8,55 %. Gambar 23. Grafik perbandingan rendemen F1 dan F2

20 85 Daun nilam melalui proses fermentasi yang mampu menghancurkan dinding sel daun nilam sehingga minyak nilam masih terikat kuat didalam vakuola tanaman dan minyak dapat keluar secara optimal karena hanya memanfaatkan uap air saat proses destilasi yang berhasil melalui jaringan tanaman dan mendesaknya kepermukaan (Guenther, 1987). b. Penentuan Indeks Bias Penentuan nilai indeks bias dilakukan untuk mengetahui kualitas mutu dari minyak nilam yang dihasilkan. Menurut Sastrohamidjojo (2004), Indeks bias minyak atsiri berhubungan erat dengan komponen-komponen yang tersusun dalam minyak atsiri yang dihasilkan. Sama halnya dengan berat jenis dimana komponen penyusun minyak atsiri dapat mempengaruhi nilai indeks biasnya. Semakin banyak komponen berantai panjang seperti sesquiterpen atau komponen bergugus oksigen ikut tersuling, maka kerapatan medium minyak atsiri akan bertambah sehingga cahaya yang datang akan lebih sukar untuk dibiaskan. Hal ini menyebabkan indeks bias minyak lebih besar. Indeks bias merupakan perbandingan antara kecepatan cahaya dalam dengan kecepatan cahaya didalam zat pada suhu tertentu. Indeks bias minyak atsiri behubungan erat dengan komponen-komponen yang tersusun di dalam minyak atsri yang dihasilkan. Pembiasan yang terjadi kenaikkan oleh interaksi antar gaya elektrostatik dan elektromagnetik atom-atom dalam molekul minyak atsiri nilam. Indeks bias juga merupakan perbandingan sinus sudut sinar jauh dan sinar jatuh pantulan cahaya yang melalui minyak atsiri nilam.

21 86 Perlakuan bahan dan lama penyulingan berpengaruh terhadap indeks bias minyak nilam. Semakin kecil ukuran bahan, maka nilai indeks bias minyak semakin besar. Hal ini disebabkan penguapan minyak dari bahan berukuran kecil yang berlangsung lebih mudah sehingga fraksi berat minyaknya lebih banyak terkandung didalam minyak. Hal ini mengakibatkan kerapatan molekul minyak lebih tinggi dari sinar yang menembus,minyak sukar diteruskan. Berdasarkan SNI tentang minyak nilam menyatakan bahwa indeks bias (nd 20 ) minyak nilam berkisar antara 1,507-1,515. Penentuan indeks bias ini menggunakan refraktometer. Indeks bias yang dihasilkan berdasarkan pengamatan refraktometer pada F1 dan F2 masing-masing sebesar 1,510 dan 1,623. Pada F2 indeks bias yang dihasilkan melebihi dari standar SNI Hal ini disebabkan oleh jumlah senyawa yang dihasilkan dari destilasi banyak, dimana berdasarkan hasil kromatogram KG menunjukkan terdapat 25 senyawa yang terdeteksi pada F2. Menurut Guenther (1987), semakin banyak komponen berantai panjang seperti sesquiterpen atau komponen bergugus oksigen ikut tersuling, maka kerapatan medium minyak atsiri akan bertambah sehingga cahaya yang datang akan lebih sukar untuk dibiaskan. Hal ini menyebabkan indeks bias minyak lebih besar. Sedangkan pada F1 hanya terdeteksi 15 senyawa penyusun minyak nilam.

22 87 Tabel 9. Perbandingan uji fisika F1 dan F2 terhadap standar SNI No. Parameter F1 F2 SNI Warna Kuning muda Kuning tua Kuning muda-coklat kemerahan 2. Berat jenis 0,955 0,991 0,950-0, Rendemen (%) 3,45 8,55-4. Indeks bias 1,510 1,623 1,507-1, Uji Kimia Minyak Nilam Pengujian sifat kimia kedua sampel yaitu uji bilangan asam dan kadar patchoulol. Berdasarkan SNI tentang minyak nilam menyatakan bahwa minyak nilam yang baik memiliki bilangan asam maksimal 8,0 sedangkan kadar patchoulol yang terkandung dalam minyak nilam minimal 30 %. a. Bilangan asam Menurut syarat mutu SNI bilangan asam pada minyak nilam memiliki nilai maksimal 8,0. Prosedur pengukuran bilangan asam pada kedua sampel minyak dilakukan berdasarkan SNI tentang minyak nilam. Dari hasil pengukuran didapatkan bahwa bilangan asam sampel F1 sebesar 6,61 dan sampel F2 sebesar 13,19. Data yang dihasilkan menunjukkan bilangan asam F1 masih memenuhi standar sedangkan sampel F2 telah melebihi standar yang sudah ditetapkan. Menurut Espino et al (2002), minyak nilam dengan bilangan asam < 5, relatif tidak mudah menjadi tengik, sehingga waktu penyimpananya akan lebih lama. Minyak nilam dengan nilai bilangan asam > 5 akan menyebabkan iritasi pada kulit jika digunakan langsung.

23 88 Salah satu indikator kualitas sampel minyak dapat diketahui dari angka asam sampel tersebut. Angka asam digunakan untuk mengetahui jumlah asam lemak bebas yang terdapat dalam minyak. Besarnya angka asam menyatakan banyaknya asam lemak bebas yang terbentuk akibat hidrolisis minyak. Makin tinggi angka asam maka makin rendah kualitas minyak yang digunakan (Panangan, 2011). b. Analisis Kromatografi Gas-Spektrometer Massa Identifikasi minyak atsiri nilam menggunakan kromatografi gas-spektrometri massa. Prinsip dasar dari KG-SM yaitu fasa diam yang digunakan adalah cairan dan fasa gerak yang digunakan harus bersifat inert (tidak berekasi) dengan cuplikan maupun fasa diam. Interaksi yang terjadi berupa partisi antara fasa diam dan fasa gerak (Sastrohamidjojo, 2002). Identifikasi dilakukan untuk mengetahui komponen senyawa penyusun minyak atsiri dengan cara menginjeksikan sampel minyak ke dalam ruang injeksi yang telah dipanasi dan sampel akan diuapkan, selanjutnya dibawa oleh gas pembawa yang berupa gas helium kedalam kolom dan didalamnya terjadi proses pemisahan. Di dalam kolom fasa diam akan menahan komponen-komponen secara selektif berdasarkan koefisien distribusinya dan akan dialirkan kedetektor yang memberi sinyal untuk kemudian dapat diamati pada sistem pembaca. Senyawa-senyawa yang memiliki afinitas rendah terhadap fasa diam akan keluar dari kolom pertama. Sedangkan senyawa-senyawa dengan afinitas tinggi terhadap fasa diam akan keluar dari kolom kemudian. Hasilnya adalah berupa molekul gas yang kemudian akan diionisasikan pada spektrometer massa sehingga molekul gas itu akan mengalami fragmentasi yang berupa ion-ion positif. Ion akan memiliki

24 89 rasio yang spesifik antara massa dan muatannya. Hasil analisis dilakukan dengan membandingkan spektrum massa dari sampel dengan data spektrum massa yang tersimpan dikomputer (kepustakaan), dengan melihat nilai SI (Similarity Index) atau indeks kemiripan spektrum senyawa yang ada pada komputer. Semakin tinggi nilai SI maka semakin tinggi kemiripannya (Wati, 2011). Minyak nilam bebas air dianalisis dengan menggunakan KG-SM Shimadzu QP 2010 SE. Sampel sebanyak 1 μl diinjeksikan ke dalam ruang injeksi yang telah dipanaskan dengan temperatur injektor 200 o C kemudian sampel akan diuapkan yang selanjutnya akan dibawa oleh gas Helium sebagai gas pembawa ke dalam kolom kapiler dengan panjang 30 m, diameter 0,25 mm dan ketebalan 0,25 μm. Di dalam kolom tersebut terjadi proses pemisahan, fasa diam Rtx 5MS akan menahan komponen-komponen secara selektif berdasarkan koefisien distribusinya kemudian dialirkan ke detektor menghasilkan urutan puncak-puncak, dimana setiap puncak mewakili satu senyawa dalam campuran yang melaluinya. Hasil kromatogram kedua sampel F1 dan F2 dapat dilihat pada gambar 24 beserta perbandingan kadar patchoulol masing-masing kromatogram. Kadar patchoulol yang dihasilkan sampel F1 sebesar 61,53 % sedangkan pada F2 sebesar 38,24 %. Kadar patchoulol kedua sampel telah memenuhi standar minimum yaitu 30 % pada SNI

25 90 Gambar 24. Perbandingan kromatogram dan kadar patchoulol F1 dan F2 Dari penampakan kromatogram kedua sampel tidak memiliki perbedaan yang signifikan. Kedua sampel memiliki waktu retensi yang relatif sama pada setiap puncak kromatogram. Jumlah puncak pada kromatogram F1 sebanyak 15 puncak sedangkan pada F2 sebanyak 25. Jumlah puncak yang lebih sedikit pada F1 dikarenakan ada beberapa senyawa yang tidak teruapkan pada saat penyulingan atau dikarenakan kadarnya yang sangat kecil pada sampel sehingga tidak terdeteksi.

26 91 Tabel 10. Perbandingan Jumlah Puncak, Waktu Retensi, Persen Area dan Senyawa F1 dan F2 F1 F2 Puncak Waktu Luas Waktu Luas Nama Senyawa Puncak retensi area (%) retensi area (%) Nama Senyawa ,1 Bicyclogermacrene ,81 beta-patchoulene ,57 Seychellene ,49 trans-caryophyllene ,92 trans-caryophyllene ,49 alpha-guaiene ,6 alpha-guaiene ,83 delta.-guaiene ,69 Seychellene ,35 beta-selinene ,73 alpha-humulene ,04 alpha-patchoulene ,71 alpha-patchoulene ,42 alpha.-copaene ,2 alpha-gurjunene ,4 Patchulane ,62 Alloaromadendrene ,345 alpha-guaiene ,32 Germacrene-D ,6 alpha-selinene ,41 Cyclobutene ,4 alpha-guaiene ,15 delta-guaiene ,27 delta-guaiene ,27 apha-panasinsen ,47 Patchulane ,13 2-methyl-4-(2,6,6-trimethyl-cyclohex-1-enyl)-but-2-e ,15 Valerenol ,32 1-Naphthalenamine ,33 delta.-guaiene ,19 beta-selinene ,32 Pogostol ,35 Veridiflorol ,38 delta-guaiene ,36 delta-guaiene ,6 alpha-selinene ,53 Patchouli alcohol ,24 Patchouli alcohol ,6 Cycloheptan ,17 Cycloheptan Jumlah 100,00 Jumlah 100,00

27 92 Senyawa-senyawa yang memiliki afinitas rendah terhadap fasa diam akan keluar dari kolom pertama, sedangkan senyawa-senyawa dengan afinitas tinggi terhadap fasa diam akan keluar dari kolom selanjutnya. Hasilnya berupa molekul gas yang kemudian diionisasi oleh spektrometer massa sehingga molekul-molekul gas tersebut akan mengalami fragmentasi berupa ion-ion positif. Temperatur oven diatur antara o C dengan laju kenaikan temperatur 10 o C/menit. Tabel 10 menunjukkan perbedaan jumlah puncak dan senyawa yang terkandung dalam minyak F1 dan F2. F1 hanya memiliki 15 puncak sedangkan pada F2 terdapat 25 puncak. Perbandingan puncak terhadap waktu retensi, yaitu puncak diurutkan berdasarkan kemiripan waktu retensi. Patchoulol berada pada puncak 14 pada F1 sedangkan 24 pada F2. Terdapat 10 senyawa yang dimiliki F2 tetapi tidak dimiliki F1 yaitu Seychellene, alpha-guaiene, Germacrene-D, alpha-selinene, apha-panasinsen, 1-Naphthalenamine, valerenol, veridiflorol, Pogostol dan alpha-selinene. Senyawa-senyawa ini tidak terdapat pada puncak F1 serta tidak terdapat kemiripan waktu retensinya terhadap puncak manapun pada F1. Selain itu, terdapat puncak yang memiliki waktu retensi yang sama akan tetapi mempunyai senyawa yang berbeda. Senyawa-senyawa yang berbeda yaitu bicyclogermacrene pada F1 dan beta-patchoulene pada F2 dengan waktu retensi antara 11,40-11,42. Kemudian delta.-guaiene pada F1 dan Seychellene pada F2 dengan waktu retensi antara 12,33-12,35. Pada waktu retensi 12,40-12,41 senyawa yang berbeda adalah beta-selinene pada F1 dan alpha-humulene pada F2. Senyawa lainnya adalah alpha.-copaene, Patchulane, Cyclobutene,

28 93 Patchulane dan delta.-guaiene pada F1 sedangkan pada F2 senyawa yang muncul adalah alpha-gurjunene, Alloaromadendrene, alpha-guaiene, 2-methyl-4-(2,6,6- trimethyl-cyclohex-1-enyl)-but-2-enal dan beta-selinene masing-masing pada rentang waktu retensi 12,55-12,56; 12,60-12,61; 12,94-12,95; 13,90-13,92; dan 14,62-14,63. alpha.-copaene tidak terdapat pada F2 sedangkan pada F1 dengan kadar sebesar 0,42%. Berdasarkan SNI maksimal kandungan alpha.- Copaene adalah 0,5%. Patchoulol muncul pada waktu retensi 15,271 pada F1 dan 15,261 pada F2. Waktu retensi patchoulol pada kedua sampel relatif sama. Tabel 11. Perbandingan sifat kimia F1 dan F2 No. Parameter F1 F2 SNI Bilangan asam 6,61 13,19 Maks.8,0 2 Patchoulol (%) 61,53 38,24 Min alpha.-copaene (%) 0,42 - Maks. 0,5 Pada tabel 11 dan gambar 24 dapat diketahui minyak nilam dengan teknik destilasi Water bubble dengan fermentasi memiliki kandungan patchoulol sebesar 61,53 %. Hasil ini menujukkan bahwa kadar patchoulol yang dikandung oleh minyak nilam lebih tinggi dibandingkan standar mutu minyak nilam berdasarkan Standar Nasional Indonesia (SNI) maupun menurut Essential Oil Association (EOA). Menurut SNI standar mutu minyak nilam yang baik adalah memiliki kadar patchouli alcohol minimal 30 %, sedangkan standar minyak nilam internasional menurut EOA memiliki kadar patchoulol minimal 38 %. Sehingga mutu minyak nilam hasil penelitian ini dikatakan sangat baik. Sedangkan penggunaan teknik destilasi uap-air memiliki kandungan patchoulol sebesar

29 94 38,24%. Hasil ini juga cukup baik karena telah memenuhi standar minimum SNI maupun EOA. Hal ini dipengaruhi oleh beberapa faktor. Jika dilihat faktor tempat tumbuh nilam, Samigaluh, Kulonprogo, Yogyakarta daerah tumbuh nilam yang dijadikan bahan baku merupakan kawasan dataran tinggi. Menurut Nuryani (2006b), kandungan patchoulol pada tanaman nilam yang tumbuh di dataran tinggi lebih tinggi dibandingkan nilam yang tumbuh di dataran rendah. Menurut Setiawan dan Rosman (2013), hal ini terjadi karena dataran rendah mengalami proses transpirasi lebih tinggi dibandingkan dataran tinggi sehingga senyawa alkohol lebih mudah menguap. Jika dibandingkan dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh Andini (2011), menggunakan daun nilam dari tanaman nilam asal Jepara, Jawa Tengah menggunakan sistem penyulingan yang sama yaitu destilasi water bubble hanya mampu menghasilkan minyak nilam dengan kandungan patchoulol sebesar 43,19%. Faktor lain adalah perlakuan fermentasi pada daun nilam sebelum penyulingan juga mempengaruhi kadar patchoulol (Herliana, 2015). Selain itu proses penyulingan menggunakan metode destilasi water bubble juga mempengaruhi tingginya kadar patchoulol yang didapatkan. Jika dibandingkan dengan hasil penelitian oleh Nuryani (2006a), penyulingan minyak nilam dari tanaman nilam asal Lhokseumawe, NAD menggunakan destilasi uap hanya mampu menghasilkan patchoulol dalam minyak nilam sebesar 29,11%. Patchoulol muncul pada puncak kedua terakhir pada kromatogram yang ditunjukkan pada gambar 24. Hal ini menunjukkan bahwa patchoulol merupakan

30 95 komponen yang memiliki titik didih relatif tinggi dalam minyak nilam. Titik didih yang relatif tinggi tersebut dapat menerangkan mengapa minyak nilam memiliki sifat fiksatif, yaitu sebagai pengikat senyawa atsiri lainnya, sehingga titik didih senyawa atsiri yang relatif rendah jika dicampur dengan minyak nilam akan menaikkan titik didih campurannya (Permatasari, 2015). Tingginya titik didih campuran ini membuat aroma pada minyak atsiri yang dicampurkan tidak mudah menguap. Sifat inilah yang merupakan sifat unik dari minyak nilam, sehingga dapat digunakan sebagai pengikat bau (aroma) pada produk-produk parfum atau kosmetik (Ma mun dan Maryadhi, 2008). Patchoulol merupakan komponen utama penyusun minyak nilam. Senyawa patchoulol merupakan penentu mutu minyak nilam. Semakin tinggi kandungan patchoulol maka mutu minyak semakin baik karena senyawa patchoulol menentukan wangi minyak nilam yang dihasilkan (Purwaningrat, 2008). Identitas patchoulol diperkuat dari data analisis spektrometer massa yang ditunjukkan pada Gambar 25 dengan mengetahui massa molekul senyawa dan pola fragmentasinya yang dibandingkan dengan standar NIST (National Institute of Standards and Technology). Pola fragmentasi patchoulol disajikan pada Gambar 26. Spektra massa pada Gambar 25 menunjukkan puncak ion molekuler (M + ) = 222 yang merupakan massa molekul dari patchoulol. Ion molekul tersebut mengalami beberapa kemungkinan fragmentasi yaitu: membentuk fragmen (m/z) = 207 dengan melepas radikal -CH 3, yang kemudian terfragmentasi melepaskan molekul netral H 2 O membentuk m/z 189. Fragmen pada m/z 179 diperoleh dengan melepaskan radikal C 3 H 7 dari ion molekuler, terfragmentasi membentuk

31 96 fragmen dengan m/z = 161 dengan melepaskan molekul netral H 2 O. Fragmen m/z 161 selanjutnya terfragmentasi menghasilkan fragmen m/z = 147 dengan melepaskan ion CH 2. Fragmen pada m/z = 147 mengalami penataan ulang yang kemudian terfragmentasi menjadi beberapa bagian yaitu fragmen dengan m/z = 41 yang merupakan puncak dasar (base peak) dan fragmen 4-metil-1,3,5-heksatriena yang kemudian terfragmentasi lebih lanjut membentuk fragmen dengan dengan m/z = 83 (Yuliawati, 2014). Spektra massa patchoulol dan pola fragmentasinya dapat dilihat pada Gambar 25 dan 26.

32 97 (A) (B) m/z (C) m/z Gambar 25. Spektra massa patchoulol (A) Standar NIST (National Institute of Standards and Technology); (B) F1 dan (C) F2

33 Gambar 26. Fragmentasi senyawa patchoulol (sumber: Yuliawati, 2014) 98