Lampiran 1. Ilustrasi ligasi antara GP25 dan pt-easy

Transkripsi

1 Lampiran 1. Ilustrasi ligasi antara GP25 dan pt-easy 64

2 Lampiran 2. Skema pembuatan konstruksi vaksin DNA Vaksin DNA untuk penyakit akibat infeksi KHV 65

3 Lampiran 3. Metode kultur cair perbanyakan bakteri dan isolasi plasmid 66

4 Lampiran 4. Peta plasmid pbluescript 67

5 Lampiran 5. Prosedur pembuatan preparat jaringan Prosedur pembuatan preparat jaringan (Angka et al. 1990): 1. Jaringan otot, insang, limpa dan ginjal dipotong dengan ukuran sebesar 10 mm 3 2. Jaringan difiksasi dalam fiksatif Bouin s selama 24 jam, setelah itu dipindahkan ke alkohol 70% (selama 24 jam sampai beberapa hari) 3. Jaringan didehidrasi dalam alkohol 80, 90, 95, 95 % masing-masing selama 2 jam dan selanjutnya dimasukkan dalam alkohol absolut (overnight) 4. Proses clearing dilakukan di dalam campuran alcohol-xylol (1:1) selama ½ jam, xylol I, xylol II dan xylol III masing-masing ½ jam 5. Jaringan selanjutnya diisi dengan paraffin dengan cara memindahkan jaringan ke dalam campuran xylol-parafin selama ¾ jam di dalam oven bersuhu o C, dilanjutkan dengan perendaman di paraffin I, paraffin II dan paraffin III masing-masing selama ¾ jam 6. Jaringan di-blocking dengan parafin 7. Pemotongan jaringan dilakukan dengan ketebalan 5 µm Prosedur pewarnaan jaringan: 1. Jaringan diwarnai dengan pewarnaan haematoxylin-eosin. Pewarnaan dilakukan dengan prosedur perendaman berturut-turut dalam xylol I, xylol II, alkohol absolut I, alkohol absolut II, alkohol 95%, alkohol 90%, alkohol 80%, alkohol 70%, perendaman dilakukan masing-masing selama 3 menit, kemudian dicuci 2 kali 2. Jaringan diwarnai dengan haematoxylin selama 7 menit, dicuci dengan akuades 3 detik, diwarnai dengan eosin 3 detik dan dicuci kembali 3. Jaringan didehidrasi dalam alkohol 50%, 70%, 85%, 90%, absolute I, absolute II, xylol I dan xylol II masing-masing selama 2 menit 4. Preparat di-mounting dengan entellan. 68

6 Lampiran 6. Analisis data RPS (Relative Percent Survival) dengan ANOVA dan uji lanjut dengan BNT (beda nyata terkecil) Data RPS adalah sebagai berikut: Ulangan A: 2.5 µg/ 100µl B: 7.5 µg/ 100µl C : 12.5 µg/100 µl Setelah diolah dengan menggunakan ANOVA diperoleh hasil: ANOVA Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups ** Within Groups Total Dari hasil perhitungan di atas menunjukkan bahwa minimal ada sepasang perlakuan yang berbeda pengaruhnya (F hit > F tabel). Untuk mengetahui perlakuan mana saja yang berbeda pengaruhnya maka dilakukan uji lanjut BNT (beda nyata terkecil). Hasilnya diperoleh sebagai berikut: bnt = Perlakuan Rata-rata A: 2.5 µg/ 100µl A B: 7.5 µg/ 100µl B C : 12.5 µg/100 µl B Dari hasil uji tersebut dapat disimpulkan bahwa perlakuan A berbeda pengaruhnya dengan perlakuan B dan C. Sedangkan, perlakuan B memberikan pengaruh yang sama dengan perlakuan C. 69

7 Lampiran 7. Suhu air setelah uji tantang dengan virus KHV Uji Tantang I Hari ke- Pagi Sore Suhu uji tantang tahap I Suhu Terendah: 23,5 o C (pagi) Suhu tertinggi: 25 o C (sore) 70

8 Lampiran 7 (Lanjutan). Suhu air setelah uji tantang dengan virus KHV Uji Tantang II Hari ke- Pagi Sore Suhu uji tantang tahap II Suhu Terendah: 23 o C (pagi) Suhu Tertinggi: 26 o C(sore) 71

9 Lampiran 8. Jaringan otot dan insang yang tidak divaksinasi dan yang divaksinasi (Pewarnaan Hematoxylin dan Eosin). Keterangan Gambar: A1= jaringan otot yang tidak divaksinasi A2= jaringan otot yang divaksinasi A1= myosit B1= insang yang tidak divaksinasi B2= insang yang divaksinasi b1= filamen b2= lamella Insert= filamen dan lamella insang yang diperbesar (20x) 72

10 Lampiran 9. Jaringan limpa dan ginjal yang tidak divaksinasi dan yang divaksinasi (Pewarnaan Hematoxylin dan Eosin). Keterangan Gambar: C1= jaringan limpa yang tidak divaksinasi C2= jaringan yang divaksinasi c1= pulpa putih c2= pulpa merah D1= ginjal yang tidak divaksinasi D1= ginjal yang divaksinasi d1= jaringan hematopoietik d2= tubulus proksimal Insert= pulpa putih pada limpa dan tubulus ginjal yang diperbesar (20x) 73