LAMPIRAN. Lampiran 1. Prosedur Analisis Morfometrik Vili Ileum Itik Cihateup Menggunakan Metode Paraffin

Transkripsi

1 LAMPIRAN Lampiran 1. Prosedur Analisis Morfometrik Itik Cihateup Menggunakan Metode Paraffin 1) Persiapan Preparat a. Mengisolasi dan mencuci jaringan menggunakan larutan NaCl fisiologis. b. Sampel difiksasi menggunakan larutan Bouin selama 2 hari. c. Sampel dihedrasi menggunakan tahapan alkohol seri naik, yaitu 70 %, 80 %, 90 % dan 100 %. Setiap tahapan dilakukan selama 30 menit. d. Melakukan clearing atau penjernihan menggunakan larutan xilol dan alkohol 100 % dengan tahapan perbandingan 1:3, 1:1, 3:1. Masing masing dilakukan selama 5 menit. e. Sampel diinfiltrasi di dalam oven dengan suhu 56ºC dengan tahapan perbandingan xilol dan paraffin 3:1, 1:1 dan terkahir menggunakan paraffin murni. Setiap tahapan dilakukan selama 15 menit. f. Melakukan proses embedding atau penempelan sampel ke dalam blok paraffin. g. Sampel disayat menggunakan mikrotom putar dengan ketebalan 6-8 µm. Hasil sayatan disimpan sementara pada baki preparat. h. Melakukan proses fiksasi, yaitu penempatan sayatan pada kaca objek diatas heating plate dengan perekat albumen meyers. Sampel disimpan minimal 1 hari sebelum dilakukan pewarnaan. i. Proses pewarnaan sampel.

2 36 Lanjutan 1. 2) Tahap Pewarnaan HE (Haematoksilin Eosin) a. Mencelupkan sampel secara bertahap ke dalam larutan xilol I dan xilol II dengan masing-masing tahapan 20 menit. b. Mencelupakan sampel kembali secara bertahap ke dalam alkohol 100 %, 90 %, 80% selama 3-5 menit dan kedalam alkohol 70% selama 30 menit sampai warna kuning menghilang. c. Mencelupkan sampel ke dalam larutan Haematoksilin Ehrlich selama 2-10 menit. d. Membilas sampel dengan air mengalir hingga sayatan tampak berwarna biru. Bila sampel kelebihan warna, sampel dibilas dalam HNO3 0,5 % dalam etanol 70 % jika sampel belum terwarna dengan baik, ulangilah tahapan larutan haematoksilin. Sampel di amati di bawah mikroskop. e. Mencelupkan sampel secara bertahap kedalam alkohol 70 %, 80 %, 90 % masing-masing selama 3-5 menit. f. Mencelupkan sampel kedalam larutan eosin hingga sitoplasma berwarna merah muda. Bila sampel kelebihan warna, sampel dibilas dengan alkohol 96 %, jika sampel kekurangan warna maka sampel dicelupkan kembali ke dalam alkohol 80% dan 90 % selama 3-5 menit. g. Mencelupkan sampel ke dalam alkohol 96 % sebanyak 5 celup. h. Mencelupkan sampel kembali ke dalam alkohol 100 % sebanyak 3-5 celup selama 5 menit. i. Mencelupkan sampel ke dalam larutan xilol dan alkohol dengan perbandingan 1 : 1 selama 3 menit.

3 37 Lanjutan 2. j. Mencelupkan sampel kembali ke dalam larutan xilol I dan II masing-msing selama 15 menit. Sampel ditutup dengan mounting agent. Lampiran 2. ANOVA Output SPPS Morfometrik Makro. Diameter Sum of Squares Df Mean Square F Sig. (Combined) 101, ,968 14,319 0,000 Linear Contrast 6, ,394 2,695 0,116 Term Deviation 95, ,755 20,131 0,000 Within 47, ,372 Total 149, (Combined) 0, ,004 1,148 0,354 Linear Contrast 0, ,009 2,394 0,137 Term Deviation 0, ,002 0,525 0,599 Within 0, ,004 Total 0, Lampiran 3. ANOVA Output SPPS Morfometrik Mikro. Jumlah Lebar Sum of Squares Df Mean Square F Sig. (Combined) 49, ,375 37,075 0,000 Linear Contrast 1, ,008 2,283 0,146 Term Deviation 48, ,058 54,472 0,000 Within 8, ,442 Total 57, (Combined) , , ,090 0,000 Linear Contrast 54060, , ,157 0,000 Term Deviation 46134, , ,556 0,000 Within 3105, ,275 Total , (Combined) 849, ,000 13,530 0,000 Linear Term Contrast 120, ,000 5,737 0,027 Deviation 729, ,500 17,426 0,000 Within 418, ,917 Total 1267,333 23

4 38 Lampiran 4. Uji Contrast Ortogonal Output SPPS Morfometrik Makro. Diameter equal equal Contrast Value of Contrast Std. Error T df Sig. (2- tailed) 1 3,9500 2, , , ,5500 1, , , ,9833 0, , , ,9500 3, ,266 5,624 0, ,5500 1, ,185 7,851 0, ,9833 0, ,807 9,580 0, ,9500 2, , , ,5500 1, , , ,9833 0, , , ,9500 3, ,684 5,171 0, ,5500 1, ,401 8,753 0, ,9833 0, ,678 5,657 0,525

5 39 Lampiran 5. Uji Contrast Ortogonal Output SPPS Morfometrik Mikro. Jumlah Lebar equal equal equal Contrast Value of Contrast Std. Error T Df Sig. (2- tailed) 1-2, , , , , , , , , , , , , , ,687 11,124 0, , , ,115 12,341 0, , , ,720 7,564 0, , , , , , , , , , , , , , ,298 6,495 0, , , , ,273 12,139 0, , , ,958 7,677 0, , , , , , , , , , , , , , , ,715 11,302 0, , , ,823 8,494 0, , , ,981 5,547 0,009

6 Lampiran 6. Pengaruh Pemberian FOS terhadap Morfometrik Mikro Itik Cihateup Menggunakan Metode Paraffin Pewarnaan Haematoksolin Eosin dengan Perbesaran 10 x Ilustrasi 2. Saat K Ilustrasi 3. Saat F.A Ilustrasi 2. Saat F.B Ilustrasi 3. Saat F.C