Analisis Fitokimia Teknik Bioasai

Transkripsi

1 OH OH HO O OH OH S1-Kimia Institut Pertanian Bogor Analisis Fitokimia Teknik Bioasai

2 Teknik Bioasai Uji aktivitas sebagai bagian dari analisis Uji aktivitas in vitro dan in vivo Uji aktivitas terhadap larva udang Uji aktivitas antimikroba Uji aktivitas antioksidan Kajian jurnal yang berkaitan dengan bioasai

3 Uji aktivitas sebagai bagian dari analisis Tahap Analisis Saat uji dan tahap analisis Bahan dan organisme uji Kontrol positif dan kontrol negatif Perhitungan Jumlah bahan dan organisme uji

4 Tahapan analisis Pengambilan contoh Penyiapan contoh Ekstraksi komponen Pemisahan komponen Identifikasi komponen Representatif Bebas kontaminan Waktu/saat pengambilan Mengeringkan Menggiling dan mengayak Ukuran butiran/serbuk: mesh Penting: mencegah kerusakan komponen: suhu Pemilihan pelarut Pemilihan cara Penting: mencegah kerusakan komponen: suhu

5 Tahapan analisis Pengambilan contoh Penyiapan contoh Ekstraksi komponen Pemisahan komponen Identifikasi komponen Pengendapan Komponen target Komponen pengganggu/pengotor Ekstraksi pelarut-pelarut Kromatografi kolom/planar Reaksi spesifik Kromatografi planar HPLC/GC Spektroskopi, UV, Vis, IR, MS, NMR Gravimetri Titrimetri

6 Saat Uji dan tahap analisis Contoh Ekstraksi (berbagai pengekstrak, atau bertahap) Ekstrak Uji Aktivitas (berbagai ekstrak) Ekstrak aktif Fraksinasi ekstrak aktif Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Fraksi 4 Fraksi n Fraksi aktif Uji Aktivitas (berbagai fraksi) Bisa > 1 fraksi Fraksinasi/pemurian lanjut Diikuti dengan uji aktivitas Komponen aktif Identifikasi Komponen aktif Struktur /golongan senyawa komponen aktif

7 Bahan Uji dan Organisme Uji Bahan Uji: Bahan/zat yang diuji aktivitasnya Ekstrak, fraksi, komponen yang telah diisolasi/diidentifikasi atau zat murni sintetik Organisme uji Organisme (mikroba, larva, virus, tikus, tumbuhan, dll) yang menjadi objek untuk pengujian bahan uji Organismenya langsung, inang organisme, produk organisme contoh Uji aktivitas anti TMV: Bahan uji: Organisme uji; virus TMV: pengamatan pada inang yaitu tembakau Uji aktivitas antifeedant: Bahan uji: Organisme uji: larva serangga/nyamuk

8 Kontrol dalam analisis Kontrol positif Bahan yang diketahui pasti memiliki aktivitas tertentu Misal: Lentrex (antirayap), streptomisin (antimikrobe) Guna: Menunjukkan efek yang pasti Kontrol negatif Pembanding aktivitas kesetaraan Bahan yang tidak diketahui aktivitasnya tetapi diharapkan tidak memiliki aktivitas Misal: pelarut yang digunakan untuk ekstraksi/ melarutkan zat Guna: Menentukan aktivitas yang sebenarnya dari bahan uji 8

9 Perhitungan Jumlah Bahan dan Organisme Uji (termasuk media dan inang) Dasar Pertimbangan: Menjamin ketersediaan bahan uji maupun organisme sampai analisis komponen aktif selesai Cara Perhitungan 1. Jumlah bahan (zat uji, kontrol positif, kontrol negatif, media) untuk setiap kali pengujian 2. Jumlah organisme uji (larva, inokulan virus, tikus, inang dsb) 3. Jumlah pengujian Pada berapa tahap analisis jumlah ekstrak/fraksi pada setiap pengujian analisis 9

10 Latihan Contoh tumbuhan dianalisis komponen aktif antifeedantnya. Contoh diekstraksi dengan 3 pelarut didapat 3 ekstrak yang ketika diuji aktivitasnya hanya 1 ekstrak aktif. Ekstrak aktif difraksinasi menghasilkan 2 fraksi dan hanya 1 yang aktif. Fraksi aktifnya difraksinasi lanjut dan diperoleh 6 fraksi, dan dua yang aktif. Pada fraksinasi lanjutan untuk fraksi aktif satu didapat 2 fraksi dan dari fraksi 2 didapat 4 fraksi, yang masing-masing diuji aktivitasnya. setiap pengujian dilakukan 3 ulangan dan digunakan 15 larva, 2 g pakan dan 1 ml bahan uji dengan konsentrasi 100 ppm(ekstrak), 50 ppm (fraksi hasil tahap 1); 30 ppm (fraksi hasil tahap 2 dan 20 ppm (fraksi hasil tahap 4). Kadar air tumbuhan contoh 70%, rendemen 7,5% (ekstrak kasar) 5%(fraksi tahap 1), 5% (fraksi tahap 2) dan 5% (fraksi tahap 3). Hitunglah a. jumlah larva yang diperlukan sampai pengujian hasil tahap 3 b. Jumlah contoh tumbuhan c. Jumlah pakan

11 serbuk A B C A A1 A1 JAWABAN ekstraksi Uji aktivitas fraksinasi A2 Uji aktivitas fraksinasi A11 A12 A13 A14 A15 A16 A12 Uji aktivitas A15 fraksinasi (1) (2) (3) A121 A122 A151 A152 A153 A154 b. Jumlah bahan uji pada uji aktivitas (4)= 2 Fr(A121+A122)x1 mlx20mg/l x3 =0,12 mg A12=100/5x0,12=2,4 mg (yang difrakinasi) tapi karena rendemen sama 5%, A12 yang difraksinasi =A15= 4,8mg(asumsi tidak ada fraksinasi lanjutan pada A121 dst, hanya uji aktivitas) (4)= 4 Fr(A151-A154)x1 mlx20mg/l x3 =0,24 mg A15=100/5x0,24=4,8 mg(yang difraksinasi) (3)= 6 Fr(A11-A16)x1 mlx30mg/l x3 =0,54 mg A1=100/5x0,54=11.8 mg A15(4)=4,8mg total A11-A16 (karena rendemen sama 5%) = 6xA15=6x4.8mg = 28.8 mg A1=100/5x26.8 = 536mg (untuk fraksinasi) (2)=2frx1mLx50mg/Lx3=0,3mg A=100/5x0,3mg=6mg A1=A1uji+A1fr=3mg+536=539mg karena rendemen sama 5% Total A1+A2=2x539=1078mg A=100/5x1078mg= ( mg= 21,560 g Uji aktivitas (4)

12 3ekx1mLx100mg/Lx3=0,9mg (atau A=0,3mg) A total=afr+auji=21,560g+0,3mg=21,5603g total ABC (karena rendemen sama)=3x g= g serbuk= 100/7.5x64,6809g= g Contoh tumbuhan = 100/(100-70)x g=g = g Catatan: yang dihitung adalah kebutuhan minimal tanpa memperhitungkan kemungkinan berkurang karena menempel pada wadah dsb yang biasanya tidak dapat dihindarkan, sehingga perlu tambahan 25-50% Contoh = 1,5x2847,71g= 4,31 kg

13 Catatan: Perhitungan tersebut tanpa memperhitungkan pergantian pakan. Setiap pergantian pakan maka zat uji digunakan yang baru Bila pergantian pakan 4 x, maka total zat uji jadi 5x a. Jumlah pengujian (4 tahap pengujian): 3 BU(1) + 2BU(2) + 6 BU (3)+6BU(4) = 17 x 3 ulangan = 51 c. Jumlah pakan uji: Jumlah larva = 51x 15=765 Jumlah pengujian (4 tahap pengujian):= 3 BU(1) + 2BU(2) + 6 BU (3)+6BU(4) = 17 x 3 ulangan = 51 JUmlah pakan pada awal= 51x2g=104g JUmlah pakan pengganti (setelah pengamatan, biasa pakan diganti, bila pergantian 4x, maka pakan penggganti = 4x 51x2g=416g Jumlah pakan total (awal + pengganti) = 520 g