LAMPIRAN 53
54 Lampiran 1. Prosedur Analisis Morfometrik Mikro Ileum Itik Cihateup Menggunakan Metode Paraffin Haemotoksilin Eosin Menurut Muntiha (2001), prosedur analisis hispatologi dan jaringan hewan, yaitu: 1) Persiapan Preparat a. Sampel diiosolasi dan dicuci menggunakan larutan NaCl fisiologis. b. Sampel difiksasi menggunakan larutan Bouin selama 2 hari. c. Sampel ditiriskan dari larutan Bouin menggunakan saringan dan dipotong dengan pisau scalpel, kemudian disusun ke dalam tissue cassette. Tissue cassette dimasukkan ke dalam keranjang khusus. d. Keranjang khusus yang berisi sampel dimasukkan ke dalam mesin processor otomatis. Kemudian dilakukan proses dehidrasi menggunakan tahapan alkohol seri naik, yaitu 70%, 80%, 90%, dan 100%. Setiap tahapan dilakukan selama 30 menit. e. Dilakukan clearing atau penjernihan menggunakan larutan xilol dan alkohol 100% dengan tahapan perbandingan 1:3, 1:1, 3:1. Masing masing dilakukan selama 5 menit. f. Sampel diinfiltrasi ke dalam oven dengan suhu 56ºC dengan perbandingan xilol dan paraffin 3:1, 1:1 dan terakhir menggunakan paraffin murni. Setiap tahapan dilakukan selama 15 menit. g. Sampel direndam dengan cairan paraffin cair kemudian dibiarkan paraffin tersebut membeku. Selanjutnya blok paraffin dilepas dari cetakan dan disimpan ke dalam freezer dengan suhu -20 o C. h. Blok paraffin dipotong menggunakan mesin mikrotom putar dengan ketebalan 6-8 μm. Hasil sayatan disimpan sementara pada object glass.
55 i. Dilakukan proses fiksasi, yaitu penempatan object glass diatas heating plate dengan perekat albumen meyers. Disimpan minimal 1 hari sebelum dilakukan pewarnaan. j. Dilakukan proses pewarnaan sampel.
56 2) Tahap Pewarnaan Haematoksilin Eosin a. Sampel dicelupkan secara bertahap ke dalam larutan xilol I dan xilol II dengan masing-masing tahapan 20 menit. b. Sampel dicelupkan kembali secara bertahap ke dalam alkohol 100%, 90%, 80% selama 3-5 menit dan ke dalam alkohol 70% selama 30 menit sampai warna kuning menghilang. c. Sampel dicelupkan ke dalam larutan Haematoksilin selama 2-10 menit. d. Sampel dibilas dengan air mengalir hingga sayatan tampak berwarna biru. Bila sampel kelebihan warna, dibilas dalam HNO3 0,5% dalam etanol 70% jika sampel belum terwarna dengan baik, maka ulangi tahapan larutan haematoksilin. e. Sampel dicelupkan secara bertahap kedalam alkohol 70%, 80%, 90% masing-masing selama 3-5 menit. f. Sampel dicelupkan kedalam larutan Eosin hingga sitoplasma berwarna merah muda. Bila sampel kelebihan warna, maka dibilas dengan alkohol 90%, jika sampel kekurangan warna maka dicelupkan kembali ke dalam alkohol 80% dan 90% selama 3-5 menit. g. Sampel dicelupkan ke dalam alkohol 90% sebanyak 5 celup. h. Sampel dicelupkan kembali ke dalam alkohol 100% sebanyak 3-5 celup selama 5 menit. i. Sampel dicelupkan ke dalam larutan xilol dan alkohol dengan perbandingan 1 : 1 selama 3 menit. j. Sampel dicelupkan kembali ke dalam larutan xilol I dan II masing-masing selama 15 menit.
57 k. Preparat diangkat dari larutan xilol dalam keadaan basah, diberi cairan perekat kemudian ditutup dengan kaca penutup. l. Sampel diamati di bawah mikroskop.
58 Lampiran 2. Prosedur Analisis Morfometrik Makro Ileum Itik Cihateup 1. Itik disembelih yang akan diukur morfometrik makro ileumnya yang meliputi panjang dan diameter. 2. Bagian usus halus dipisahkan dari bagian-bagian saluran pencernaan lainnya lalu panjang bagian ileum diukur dengan menggunakan meteran dan diameter ileum diukur menggunakan jangka sorong. 3. Bagian tengah ileum dipotong hingga kira-kira 2 cm kemudian dibilas dengan NaCl 0,9%. 4. Sampel dimasukkan ileum ke dalam tabung reaksi yang berisi larutan fiksatif. Larutan fiksatif (Bouin) harus merendam semua bagian sampel.
59 Lampiran 3. Tata Letak Kandang Percobaan Keterangan : = Itik Cihateup tanpa Pemberian Kitosan Iradiasi = Itik Cihateup dengan Pemberian Kitosan Iradiasi
60 Lampiran 4. Suhu Lingkungan Kandang Selama Percobaan Minggu Suhu ( o C) I 29,60 II 31,20 III 30,10 IV 30,20 Rata-rata 30,27
61 Lampiran 5. Karakteristik Kitosan Iradiasi No. Parameter Standar 1. Warna Putih kekuningan 2. Bau Tidak berbau 3. Bentuk Butiran/serbuk 4. Kadar Air < 10% 5. Derajat Deasetilasi 60-90% 6. Kelarutan ph 6-7 Sumber : Badan Tenaga Nuklir Nasional, 2013
Lampiran 6. Rataan Jumlah Vili, Panjang Vili, dan Lebar Vili Ileum Itik Cihateup tanpa Pemberian Kitosan Iradiasi Tanpa Kitosan Iradiasi Ulangan Jumlah Vili (Perbesaran 10x10) Panjang Vili Lebar Vili...(μm)... 1 8,00 265,00 46,40 2 8,00 275,00 47,30 3 7,00 288,00 47,70 4 8,00 275,00 45,50 5 7,00 267,00 46,70 6 7,00 258,00 51,50 7 7,00 254,00 46,60 8 7,00 248,00 49,10 9 7,00 254,00 47,70 10 8,00 275,00 46,30 11 8,00 254,00 46,30 12 7,00 265,00 45,90 13 8,00 274,00 50,30 14 8,00 274,00 47,40 15 8,00 284,00 47,70 16 8,00 265,00 49,60 17 7,00 275,00 43,50 18 8,00 288,00 45,90 19 9,00 275,00 45,30 20 7,00 267,00 49,10 21 8,00 258,00 45,30 22 7,00 254,00 45,50 23 8,00 248,00 45,50 24 7,00 254,00 45,90 25 8,00 275,00 46,30 26 8,00 254,00 49,10 27 9,00 265,00 50,30 28 8,00 274,00 46,40 29 8,00 274,00 43,50 30 8,00 284,00 45,50 Rata-rata 7,70 267,33 46,97 62
Lampiran 7. Rataan Jumlah Vili, Panjang Vili, dan Lebar Vili Ileum Itik Cihateup dengan Pemberian Kitosan Iradiasi Kitosan Iradiasi Ulangan Jumlah Vili (Perbesaran 10x10) Panjang Vili Lebar Vili...(μm)... 1 12,00 297,00 56,40 2 9,00 321,00 57,40 3 11,00 317,00 55,40 4 10,00 316,00 52,80 5 11,00 257,00 56,80 6 10,00 352,00 57,30 7 10,00 345,00 56,40 8 11,00 356,00 55,60 9 12,00 356,00 56,50 10 10,00 325,00 60,10 11 9,00 295,00 56,40 12 10,00 314,00 51,40 13 11,00 327,00 52,80 14 10,00 327,00 54,60 15 12,00 321,00 56,70 16 9,00 317,00 56,40 17 12,00 346,00 53,80 18 11,00 345,00 57,50 19 12,00 342,00 60,10 20 10,00 321,00 55,60 21 11,00 329,00 57,60 22 10,00 316,00 53,50 23 12,00 257,00 56,40 24 9,00 342,00 57,40 25 11,00 345,00 53,50 26 9,00 348,00 56,80 27 10,00 356,00 55,40 28 10,00 321,00 56,40 29 11,00 352,00 55,60 30 10,00 318,00 54,30 Rata-rata 10,50 326,03 55,89 63
Lampiran 8. Rataan Panjang dan Diameter Ileum Itik Cihateup tanpa Pemberian Kitosan Iradiasi Tanpa Kitosan Iradiasi Ulangan Panjang Ileum Diameter Ileum...(cm)... 1 60,40 1,70 2 61,30 1,60 3 61,30 1,70 4 61,60 1,60 5 60,30 1,80 6 60,30 1,70 7 61,40 1,60 8 63,60 1,40 9 61,50 1,50 10 62,40 1,50 11 62,70 1,80 12 60,90 1,60 13 60,40 1,70 14 61,80 1,50 15 61,30 1,60 16 61,60 1,60 17 60,40 1,60 18 60,30 1,20 19 61,40 1,60 20 60,40 1,40 21 64,90 1,60 22 61,30 1,80 23 60,70 1,40 24 64,70 1,60 25 60,30 1,50 26 61,40 1,50 27 63,30 1,60 28 61,50 1,80 29 62,40 1,60 30 63,70 1,70 Rata-Rata 61,65 1,59 64
Lampiran 9. Rataan Panjang dan Diameter Ileum Itik Cihateup dengan Pemberian Kitosan Iradiasi Kitosan Iradiasi Ulangan Panjang Ileum Diameter Ileum...(cm)... 1 60,50 1,60 2 64,20 1,60 3 63,40 1,70 4 62,30 1,70 5 61,40 1,80 6 62,00 1,70 7 60,80 1,60 8 65,30 1,60 9 64,80 1,50 10 63,70 1,50 11 65,30 1,80 12 65,40 1,50 13 60,40 1,70 14 60,40 1,50 15 64,10 1,40 16 62,40 1,60 17 63,20 1,50 18 62,80 1,70 19 60,40 1,60 20 64,80 1,40 21 63,70 1,60 22 65,30 1,70 23 62,00 1,40 24 60,80 1,60 25 65,30 1,70 26 64,80 1,50 27 63,70 1,60 28 61,50 1,60 29 65,40 1,50 30 60,40 1,60 Rata-Rata 63,02 2,10 65
66 Lampiran 10. Output Analisis Varians T-Test Makro Ileum Panjang Ileum Diameter Ileum Mikro Ileum Jumlah Vili Ileum Panjang Vili Ileum Lebar Vili Ileum Iradiation Chitosan N Mean Std. Deviation Std. Error Mean 1,00 30,00 61,65 1,29 0,24 2,00 30,00 63,02 1,83 0,33 1,00 30,00 1,90 0,14 0,02 2,00 30,00 2,10 2,81 0,51 1,00 30,00 7,70 0,59 0,11 2,00 30,00 10,50 1,01 0,18 1,00 30,00 267,33 11,67 2,13 2,00 30,00 326,03 25,28 4,61 1,00 30,00 46,97 1,94 0,35 2,00 30,00 55,89 1,96 0,36
67 Lampiran 11. Output Analisis Varians Sampel Pengaruh Pemberian dan tanpa Kitosan Iradiasi terhadap Morfometrik Mikro Ileum Itik Cihateup Jumlah Vili Ileum Panjang Vili Ileum LebarVili Ileum assumed not assumed assumed not assumed assumed not assumed Levene s Test for Equality of Variances F Sig. T Df Sig. (2-tailed) T-Test for Equality of Means Mean Difference Std. Error Difference 95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper 11,60 0,00-13,09 58,00 0,00-2,80 0,21-3,22-2,37-13,09 47,05 0,00-2,80 0,21-3,23-2,37 7,02 0,01-11,55 58,00 0,00-58,70 5,08-68,88-48,52-11,55 40,82 0,00-58,70 5,08-68,97-48,43 0,03 0,86-17,72 58,00 0,00-8,93 0,05-9,93-7,92-17,72 57,99 0,00-8,93 0,05-9,93-7,92
68 Lampiran 12. Output Analisis Varians Sampel Pengaruh Pemberian dan tanpa Kitosan Iradiasi terhadap Morfometrik Makro Ileum Itik Cihateup Panjang Ileum Diameter Ileum Levene s Test for Equality of Variances F Sig. T df Sig. (2-tailed) T-Test for Equality of Means Mean Difference Std. Error Difference 95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper assumed 8,76 0,00-3,34 58,00 0,001-1,37 0,41-2,18-0,55 not assumed -3,34 52,17 0,002-1,37 0,41-2,18-0,54 assumed not assumed 3,49 0,06-0,99 58,00 0,33-0,51 0,51-1,54 0,52-0,99 29,14 0,33-0,51 0,51-1,56 0,54
69 Lampiran 13. Histologis Morfometrik Mikro Ileum Itik Cihateup yang Diberi dan tanpa Kitosan Iradiasi dengan Perbesaran 10 x 10 Ilustrasi 8. Vili Ileum tanpa Kitosan Iradiasi Ilustrasi 9. Vili Ileum yang Diberi Kitosan Iradiasi