LAMPIRAN. Lampiran 1. Prosedur Analisis Morfometrik Usus Halus Ayam Broiler. Menggunakan Metode Paraffin

Transkripsi

1 LAMPIRAN 51

2 52 LAMPIRAN Lampiran 1. Prosedur Analisis Morfometrik Usus Halus Ayam Broiler Menggunakan Metode Paraffin 1) Persiapan Preparat a. Mengisolasi dan mencuci jaringan menggunakan larutan NaCl fisiologis. b. Sampel difiksasi menggunakan larutan Bouin selama 2 hari. c. Sampel dihedrasi menggunakan tahapan alkohol seri naik, yaitu 70 %, 80 %, 90 % dan 100 %. Setiap tahapan dilakukan selama 30 menit. d. Melakukan clearing atau penjernihan menggunakan larutan xilol dan alkohol 100 % dengan tahapan perbandingan 1:3, 1:1, 3:1. Masing masing dilakukan selama 5 menit. e. Sampel diinfiltrasi di dalam oven dengan suhu 56ºC dengan tahapan perbandingan xilol dan paraffin 3:1, 1:1 dan terkahir menggunakan paraffin murni. Setiap tahapan dilakukan selama 15 menit. f. Melakukan proses embedding atau penempelan sampel ke dalam blok paraffin. g. Sampel disayat menggunakan mikrotom putar dengan ketebalan 6-8 µm. Hasil sayatan disimpan sementara pada baki preparat. h. Melakukan proses fiksasi, yaitu penempatan sayatan pada kaca objek diatas heating plate dengan perekat albumen meyers. Sampel disimpan minimal 1 hari sebelum dilakukan pewarnaan. i. Proses pewarnaan sampel.

3 53 2) Tahap Pewarnaan HE (Haematoksin Eosin) a. Mencelupkan sampel secara bertahap ke dalam larutan xilol I dan xilol II dengan masing-masing tahapan 20 menit. b. Mencelupakan sampel kembali secara bertahap ke dalam alkohol 100 %, 90 %, 80% selama 3-5 menit dan kedalam alkohol 70% selama 30 menit sampai warna kuning menghilang. c. Mencelupkan sampel ke dalam larutan Haematoksilin Ehrlich selama 2-10 menit. d. Membilas sampel dengan air mengalir hingga sayatan tampak berwarna biru. Bila sampel kelebihan warna, sampel dibilas dalam HNO3 0,5 % dalam etanol 70 % jika sampel belum terwarna dengan baik, ulangilah tahapan larutan haematoksilin. Sampel di amati di bawah mikroskop. e. Mencelupkan sampel secara bertahap kedalam alkohol 70 %, 80 %, 90 % masing-masing selama 3-5 menit. f. Mencelupkan sampel kedalam larutan eosin hingga sitoplasma berwarna merah muda. Bila sampel kelebihan warna, sampel dibilas dengan alkohol 96 %, jika sampel kekurangan warna maka sampel dicelupkan kembali ke dalam alkohol 80% dan 90 % selama 3-5 menit. g. Mencelupkan sampel ke dalam alkohol 96 % sebanyak 5 kali. h. Mencelupkan sampel kembali ke dalam alkohol 100 % sebanyak 3-5 kali selama 5 menit. i. Mencelupkan sampel ke dalam larutan xilol dan alkohol dengan perbandingan 1 : 1 selama 3 menit. j. Mencelupkan sampel kembali ke dalam larutan xilol I dan II masing-msing selama 15 menit. Sampel ditutup dengan mounting agent.

4 Lampiran 2. Gambaran Villi Ileum (P0) Dibawah Mikroskop Perbesaran 4x10 54 P0 U1 P0 U2 P0 U3 P0 U4 b a Keterangan: a: Tinggi villi b: Lebar apikal villi c: Lebar basal villi c P0 U5

5 55 Lampiran 3. Gambaran Villi Ileum (P1) Dibawah Mikroskop Perbesaran 4x10 P1 U1 P1 U2 P1 U3 P1 U4 b c a Keterangan: a: Tinggi villi b: Lebar apikal villi c: Lebar basal villi P1 U5

6 Lampiran 4. Gambaran Villi Ileum (P2) Dibawah Mikroskop Perbesaran 4x10 56 P2 U1 P2 U2 P2 U3 P2 U4 b a Keterangan: a: Tinggi villi b: Lebar apikal villi c: Lebar basal villi c P2 U5

7 Lampiran 5. Gambaran Villi Ileum (P3) Dibawah Mikroskop Perbesaran 4x10 57 P3 U1 P3 U2 P3 U3 P3 U4 b c a Keterangan: a: Tinggi villi b: Lebar apikal villi c: Lebar basal villi P3 U5

8 58 Lampiran 6. Koefisien Variasi Bobot Badan Awal Ayam Broiler Bobot Badan Awal Ayam Broiler No P0 P1 P2 P3...g Jumlah Rata-Rata 42,84 43,44 43,24 44,16 Koefisien Keragaman: n : 100 x : 43,42 (x i x) 2 : 944,36 Sd = (x i x) 2 n

9 59 = 944, = 9,44 = 3,07 KV = sd x x 100% = 3,07 43,42 x 100% = 7,07% Koefisien Variasi (KV) kurang dari 10% sehingga bobot badan awal ayam broiler dapat dikategorikan seragam.

10 60 Lampiran 7. Analisis Statistik Pengaruh Perlakuan terhadap Lebar Villi Ileum Ulangan Perlakuan P0 P1 P2 P3...(μm) ,05 156,74 130,59 117, ,08 127,04 139,55 137, ,35 145,36 119,96 118, ,69 150,17 152,97 131, ,54 129,48 142,64 126,33 Rata-rata 134,54 141,76 137,14 126,27 FK ( Y)2 = = (2778,871)2 = ,6 JKG = JKT JKP rt 20 JKT = Yij 2 FK =3472,21 633,48 =(120, , ) ,6 =2328,73 = 3472,21 KTP = JKP = 633,477 = 211,16 db 3 JKP = Yi2 r FK = 753, , =633, ,6 KTG = JKG = 2328,728 = 177,42 db 16 Fhit = KTP KTG = 211, ,4205 = 1,19 Daftar Sidik Ragam Sumber Keragaman Db JK KT F hitung F tabel (0,05) Perlakuan 3 633,48 211,16 1,19 3,24 Galat ,73 177,42 Total ,21 Keterangan: F hitung < F tabel (0,05) berarti tolak H1, terima H0. Maka perlakuan probiotik tidak berpengaruh secara signifikan terhadap pertambahan lebar villi ileum ayam broiler.

11 Lampiran 8. Analisis Statistik Pengaruh Perlakuan terhadap Tinggi Villi Ileum Ulangan Perlakuan P0 P1 P2 P3...(μm) ,31 692,10 565,55 670, ,37 606,65 659,57 575, ,54 656,53 613,47 558, ,46 664,12 651,99 499, ,87 688,89 717,12 604,33 Rata-rata 603,71 661,66 641,54 581,80 61 FK ( Y)2 = = (12443,6)2 = ,45 JKG = JKT JKP rt 20 JKT = Yij 2 FK =133550, ,753 =(646, , ,32 2 ) ,5 =114026,45 = ,21 KTP = JKP = 19523,75 = 6507,92 db 3 JKP = Yi2 r FK KTG = JKG = ,45 = 7126,65 db 16 = 3018, , =19523, ,5 Fhit = KTP KTG = 6507, ,65 = 0,91 Daftar Sidik Ragam Sumber Keragaman Db JK KT F hitung F tabel (0,05) Perlakuan , ,92 0,91 3,24 Galat ,5 7126,65 Total ,2 Keterangan: F hitung < F tabel (0,05) berarti tolak H1, terima H0. Maka perlakuan probiotik tidak berpengaruh secara signifikan terhadap pertambahan tinggi villi ileum ayam broiler.

12 Lampiran 9. Analisis Statistik Pengaruh Perlakuan terhadap Jumlah Villi Ileum Ulangan Perlakuan P0 P1 P2 P3 Total Total Rata-rata 43,80 46,80 50,60 48,60 189,80 62 FK ( Y)2 = = (949)2 = 45030,05 JKG = JKT JKP rt 20 JKT = Yij 2 FK =612,95 124,95 =( ) ,5 =488 = 612,95 KTP = JKP = 124,95 = 41,65 db 3 JKP = Yi2 r FK = =124, ,05 KTG = JKG db = = 30,50 Fhit = KTP KTG = 41,65 30,50 = 1,37 Daftar Sidik Ragam Sumber Keragaman Db JK KT F hitung F tabel (0,05) Perlakuan 3 124,95 41,65 1,37 3,24 Galat ,50 Total ,95 Keterangan: F hitung < F tabel (0,05) berarti tolak H1, terima H0. Maka perlakuan probiotik tidak berpengaruh secara signifikan terhadap pertambahan jumlah villi ileum ayam broiler.

13 63 Lampiran 10. Dokumentasi Kegiatan Penelitian Pembuatan Probiotik Analisis Sampel Probiotik Pemeliharaan Ayam Pengambilan Sampel Ileum Fiksasi Sampel

14 64 Dehidrasi Sampel Embedding Sampel Sectionning Sampel Blocking Sampel Stainning Sampel Mounting Sampel