78 LAMPIRAN LAMPIRAN 1. PEMBUATAN MEDIA SELEKTIF DAN REAGEN SALKOWSKI a) Media Luria Bertani Cair (Bric et al, 1991) Yeast extract 5 g, agar 20 g, Trypton 10 g, NaCl 0,5 g, 5 mm L-Tryptopan dilarutkan dalam 1 liter aquades dan diukur ph sampai 7,5, jika belum mencapai ditambahkan NAOH. b) Media JNFB (James Nitrogen Free Malat Bromthymol Blue) 5,0 g asam malat, 0,6 g K 2 HPO 4, 1,8 g KH 2 PO 4, 0,2 g MgSO 4.7H 2 O, 0,1 g NaCl, 0,2 g CaCl 2.2H 2 O, 0,066 g FeEDTA, 0,02 g ekstrak khamir, 4,5 g KOH, 2 ml BTB, 2 ml mikronutrien, ph 5,8) c) Pembuatan Reagen Salkowski (Patten & Glick, 2002) 150 ml H 2 SO 4 pekat; 250 ml akuades; 7,5 ml FeCl 3. 6H 2 O 0,5 M.
79 LAMPIRAN 2. PENENTUAN KURVA STANDART IAA (Indole Acetic Acid) Absorbansi 0.2 0.18 0.16 0.14 0.12 0.1 0.08 0.06 0.04 0.02 0 KURVA STANDAR IAA 2 4 6 8 10 Konsentrasi IAA (ppm) yy = 0.02005xx 0.0101 rr 2 = 0.999 r = 0.999 Gambar 7: Persamaan garis kurva standart IAA Tabel 8. Nilai Persamaan Garis Regresi Kurva Standart IAA x y x 2 y 2 xy 2 0.027 4 0.000729 0.054 4 0.073 16 0.005329 0.292 6 0.112 36 0.012544 0.672 8 0.150 64 0.022500 1.200 10 0.189 100 0.035721 1.890 xx = 3333 xx = 66 yy = 00. 555555 yy = 00. 11111111 xx 22 = 222222 yy 22 = 00. 000000000000 xxxx = 44. 111111 Untuk mencari persamaan garis regresi kurva maka nilai absorban (y) dari setiap konsentrasi IAA (x) dimasukkan ke dalam rumus: rr = = xxxx xx 2 ( xx)2 nn 4108 220 (30)2 5 ( xx) ( yy) nn yy2 ( yy)2 nn (30) (0.551) 5 (0.551)2 0.076823 5
80 4108 3306 = (220 180)(0.076823 0.0607202) = 0.802 0.64412 = 0.802 0.80256589 = 0.999 nn( xxxx) ( xx)( yy) bb = nn( xx 2 ) ( yy) 2 5(4108) (30)(0.551) = 5(220) (30) 2 20.54 16.53 = 1100 900 = 4.01 200 = 0.02005 aa = yy bbxx = 0.1102 0.1203 = 0.0101 yy = aa + bbbb yy = bbbb aa yy = 0.02005xx 0.0101 Sehingga diperoleh persamaan garis kurva standart adalah yy = 0.02005xx 0.0101 Untuk mencari konsentrasi sampel, substitusikan nilai absorban dari setiap sampel ke persamaan garis kurva standart diatas. Tabel 9. Nilai Rata-rata Konsentrasi IAA Secara In-vitro Isolat Konsentrasi IAA (ppm) Hari ke-2 Hari ke-4 Hari ke-6 I 1 15.35 19.65 20.45 I 2 13.10 18.30 15.15 I 3 24.10 32.80 33.3 I 4 10.50 19.80 17.55 I 5 23.75 18.15 18.00
lxxxi LAMPIRAN 3. DATA PENGAMATAN NILAI ABSORBAN SETIAP ISOLAT Tabel 10. Pengukuran Nilai Absorban Setiap Isolat Isolat Absorbansi hari ke-2 Absorbansi hari ke-4 Absorbansi hari ke-6 U1 U2 Rata-rata U1 U2 Rata-rata U1 U2 Rata-rata I 1 0,3204 0,2731 0,297 0,3973 0,3684 0,383 0,4833 0,3156 0,399 I 2 0,2185 0,2849 0,252 0,3657 0,3461 0,356 0,2581 0,3312 0,295 I 3 0,4799 0,4644 0,472 0,6136 0,6783 0,646 0,6613 0,6511 0,656 I 4 0,2017 0,1975 0,200 0,4105 0,3607 0,386 0,3734 0.3086 0,341 I 5 0,2334 0,6964 0,465 0,3566 0,3501 0,353 0,3658 0,3340 0,35
lxxxii LAMPIRAN 4. DATA PENGAMATAN TERHADAP PERTUMBUHAN TANAMAN KEDELAI (Glycine max L.) Tabel 11. Hasil Pengukuran Tinggi Tanaman dan Jumlah Daun tinggi tanaman minggui ke- Jumlah daun minggu ke- Perlakuan Ulangan Jumlah Jumlah 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 U1 28.2 30.5 36 42.5 57 79 81 81 86 86.8 60.80 2 3 4 5 5 4 4 2 3 0 3.20 U2 28.5 38.3 49.4 59.4 72.5 73 75 75 75 79.6 62.57 2 3 5 6 5 6 4 4 6 6 4.70 Tanah U3 28.9 28.9 37 49 57 59 60 60 62 67.7 50.95 2 3 5 5 4 2 3 2 2 2 3.00 kuning U4 28.7 30.8 34.5 45.2 52 57 57 57 52.5 59.4 47.41 2 3 4 4 5 5 4 3 3 1 3.40 U5 28 28 35 50.2 56 59 62 63 65 68.2 51.44 2 3 5 5 4 4 3 3 3 3 3.50 Rata-rata 54.63 Rata-rata 3.56 Tanah hitam I 3 N 3 N 3 I 3 U1 26 32.3 38 43.3 54 61 61 61 60.5 61 49.81 2 3 4 5 5 6 6 5 5 5 4.60 U2 26.2 37.5 40 42 51 59 59 60 60 60 49.47 2 3 4 5 5 6 6 6 8 9 5.40 U3 26.5 35 37 40.1 47.5 54.2 56 58 59 57.5 47.08 2 3 4 4 4 6 5 5 10 9 5.20 U4 26 38 41 43.8 59 64 65 68 68 68 54.08 2 3 4 4 4 5 5 5 5 6 4.30 U5 26.5 36 37.5 40 46.5 51 52 53 53 55 45.05 2 3 4 4 3 4 5 6 6 6 4.30 Rata-rata 49.10 Rata-rata 4.76 U1 27.5 36 36.3 49 52 52 52.2 55 59 60.6 47.96 2 3 5 5 3 3 4 6 9 11 5.10 U2 27.8 34.2 40.1 54 54.5 56 58 62.5 63 63 51.31 2 3 4 5 4 5 3 3 2 0 3.10 U3 27 33.5 39.4 57.2 68 70 72 73 73 73 58.61 2 3 4 5 4 6 5 4 2 1 3.60 U4 28 32 37.4 54 66 68 77.4 82 82 82.3 60.91 2 3 4 5 5 4 6 7 9 10 5.50 U5 27 34.2 43 62.5 79 85 103 105 106 104.1 74.88 2 3 5 5 5 4 3 3 3 0 3.30 Rata-rata 58.73 Rata-rata 4.12 U1 27.6 34.5 41.3 55 55 56 57 58 57 57 49.84 2 4 5 6 3 3 4 4 4 4 3.90 U2 27 33.9 35 43 43 45 51 57 58 54 44.69 2 3 4 5 5 5 4 4 3 4 3.90 U3 27.1 29 32 32 25 26 27 29.5 30 31 28.86 2 3 4 7 6 7 7 7 5 3 5.10 U4 27 33.8 44 54 66.9 75 75 81 83 84 62.37 2 3 5 6 6 7 6 4 2 0 4.10 U5 27.5 30.6 38 51 59 47 53 57 58 49 47.01 2 3 4 5 3 4 4 3 4 6 3.80 Rata-rata 46.55 Rata-rata 4.16 U1 27.1 37.2 48.3 70 80.6 90 95.8 96 97.4 93 73.54 2 3 5 6 7 8 9 9 8 4 6.10 U2 27.3 32.4 42.1 59.2 70.1 74 82 83 84.5 83.4 63.80 2 3 5 5 5 7 10 10 11 11 6.90 U3 27.5 35 45 62.5 70 78 79.4 82 85.5 91 65.59 2 4 5 5 4 1 3 4 5 6 3.90 U4 26.8 39.5 42 53.2 63.5 67 68 69 72.8 70 57.18 2 3 4 5 6 6 6 6 7 0 4.50 U5 27.2 32 36.7 54.3 67 68 68.5 71.6 79 72.5 57.68 2 3 5 6 5 5 6 6 6 1 4.50 Rata-rata 63.56 Rata-rata 5.18
lxxxiii Tabel 12. Hasil Perhitungan Jumlah Bunga dan Buah Tanaman Kedelai (Glycine max L.) Ratarata Perlakuan Ulangan JUMLAH BUNGA JUMLAH BUAH Ratarata 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Tanah UI 0 0 0 0 0 2 2 0 2 0 2.00 0 0 0 0 0 0 1 1 2 1 1.25 kuning Tanah hitam U2 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 2.00 0 0 0 0 0 1 2 2 2 2 1.80 U3 0 0 0 0 0 1 2 0 2 0 1.67 0 0 0 0 0 0 0 2 2 1 1.67 U4 0 0 0 0 2 0 0 1 0 0 1.50 0 0 0 0 0 2 2 2 1 1 1.60 U5 0 0 0 0 0 1 2 0 1 0 1.33 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1.00 Rata-rata 1.70 Rata-rata 1.46 U1 0 0 0 0 1 2 2 0 1 3 1.50 0 0 0 0 0 1 2 2 2 2 1.80 U2 0 0 0 0 0 5 3 1 4 12 5.00 0 0 0 0 0 0 0 1 3 9 4.33 U3 0 0 0 0 0 1 1 0 3 6 2.75 0 0 0 0 0 0 0 1 2 2 1.67 U4 0 0 0 0 0 5 3 0 0 0 4.00 0 0 0 0 0 0 0 1 2 2 1.67 U5 0 0 0 0 0 4 3 3 0 0 3.33 0 0 0 0 0 2 3 5 4 3 3.40 Rata-rata 3.32 Rata-rata 2.57 I 3 U1 0 0 0 0 0 1 2 3 4 0 2.50 0 0 0 0 0 0 1 2 2 6 2.75 U2 0 0 0 0 0 1 3 1 0 0 1.67 0 0 0 0 0 0 2 2 1 1 1.50 U3 0 0 0 0 0 2 3 2 0 0 2.33 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1.00 U4 0 0 0 0 0 2 4 6 4 0 4.00 0 0 0 0 0 1 2 4 6 6 3.80 U5 0 0 0 0 0 2 3 3 1 0 2.25 0 0 0 0 0 0 2 2 2 1 1.75 Rata-rata 2.55 Rata-rata 2.16 N 3 U1 0 0 0 0 0 6 7 6 2 0 5.25 0 0 0 0 0 0 1 2 2 2 1.75 U2 0 0 0 0 2 1 1 2 0 0 1.50 0 0 0 0 0 2 2 1 1 1 1.40 U3 0 0 0 0 0 2 2 7 3 0 3.50 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1.00 U4 0 0 0 0 1 2 2 5 0 0 2.50 0 0 0 0 0 2 2 2 2 1 1.80 U5 0 0 0 0 0 4 3 1 0 0 2.67 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1.00 Rata-rata 3.08 Rata-rata 1.39 N 3 I 3 U1 0 0 0 0 3 3 5 4 4 0 3.80 0 0 0 0 0 2 3 5 5 4 3.80 U2 0 0 0 0 0 2 7 5 8 0 5.50 0 0 0 0 0 0 0 4 5 5 4.67 U3 0 0 0 0 0 3 3 4 2 0 3.00 0 0 0 0 0 0 1 2 3 3 2.25 U4 0 0 0 0 0 2 4 4 2 0 3.00 0 0 0 0 0 0 1 3 3 3 2.50 U5 0 0 0 0 0 0 2 2 1 0 1.67 0 0 0 0 0 2 2 2 2 2 2.00
lxxxiv Rata-rata 3.39 Rata-rata 3.04
lxxxv Tabel 13. Hasil Perhitungan Berat Basah, Berat kering Tanaman, Volume Akar, Berat Buah dan Jumlah Polong Perlakuan Ulangan Berat Basah Berat Kering Volume akar Jumlah polong Berat Polong Tanah kuning Tanah hitam I 3 N 3 N 3 I 3 UI 1.9 0.8 0.2 2 0.3 U2 3.5 1.4 0.2 4 1.3 U3 1.7 0.6 0.2 1 0.2 U4 1.5 0.8 0.2 2 0.5 U5 2.2 1 0.2 2 0.5 Rata-rata 2.16 0.92 0.2 2.2 0.56 U1 3.4 1.2 0.2 3 1 U2 6.6 1.9 0.4 2 2.1 U3 4.9 1.5 0.4 4 1.3 U4 4.5 1.3 0.3 4 1.4 U5 4.3 1.2 0.2 6 1.7 Rata-rata 4.74 1.42 0.3 3.8 1.5 U1 5.1 2 0.2 12 1.2 U2 1.9 0.8 0.2 2 0.4 U3 1.4 0.7 0.2 1 0.2 U4 5.8 2.3 0.3 11 2.7 U5 1.7 1 0.2 2 0.4 Rata-rata 3.18 1.36 0.22 5.6 0.98 U1 1.7 0.2 4 1.1 U2 1.9 0.5 0.2 1 0.5 U3 1.9 0.8 0.2 2 0.3 U4 1.4 1.1 0.2 2 0.4 U5 2.6 1.1 0.2 2 0.6 Rata-rata 1.9 0.7 0.2 2.2 0.58 U1 6.6 2.6 0.2 6 3 U2 7.2 3.1 0.6 9 3.2 U3 4 1.7 0.4 6 1.7 U4 2.5 1.1 0.3 5 1.4 U5 2.65 1.4 0.4 4 1.7 Rata-rata 4.59 1.98 0.38 6 2.2
lxxxvi LAMPIRAN 5. DATA UJI STATISTIK RANCANGAN ACAK LENGKAP TERHADAP PARAMETER PERTUMBUHAN TANAMAN KEDELAI (Glyzine max L.) Tabel 14. Daftar Sidik Ragam Parameter Tinggi Tanaman Perlakuan 961,5593 4 240,3898 3,394833161* 2,87 4,43 Galat 1416,21 20 70,8105 Total 2377,769 24 Tabel 15. Daftar Sidik Ragam Parameter Jumlah Daun Perlakuan 1218,188 4 304,5469 2,399197996 2,87 4,43 Galat 2538,739 20 126,937 Total 3756,927 24 Tabel 16. Daftar Sidik Ragam Parameter Jumlah Bunga Perlakuan 9,859304 4 2,464826 1,891178583 2,87 4,43 Galat 26,06656 20 1,303328 Total 35,92586 24 Tabel 17. Daftar Sidik Ragam Parameter Jumlah Buah Perlakuan 10,12262 4 2,530654 2,933248179* 2,87 4,43 Galat 17,25496 20 0,862748 Total 27,37758 24 Tabel 18. Daftar Sidik Ragam Parameter Berat Basah Perlakuan 35,0536 4 8,7634 3,834850341* 2,87 4,43 Galat 45,704 20 2,2852 Total 80,7576 24 Tabel 19. Daftar Sidik Ragam Parameter Berat Kering Perlakuan 4,1816 4 1,0454 3,491649967* 2,87 4,43 Galat 5,988 20 0,2994 Total 10,1696 24
lxxxvii Tabel 20. Daftar Sidik Ragam Parameter Volume Akar Perlakuan 0,124 4 0,031 4,558823529** 2,87 4,43 Galat 0,136 20 0,0068 Total 0,26 24 Tabel 21. Daftar Sidik Ragam Parameter Jumlah Polong Perlakuan 65,36 4 16,34 2,184491979 2,87 4,43 Galat 149,6 20 7,48 Total 214,96 24 Tabel 22. Daftar Sidik Ragam Parameter Berat Buah Perlakuan 9,6296 4 2,4074 5,405029187** 2,87 4,43 Galat 8,908 20 0,4454 Total 18,5376 24 Ket: * = Berbeda nyata ** = Berbeda sangat nyata
lxxxviii LAMPIRAN 6. DOKUMENTASI PENELITIAN a b Gambar 8: (a) biakan murni I 3 pada media LB + L-Triptofan, (b) Biakan murni N 3 pada media JNFB I 3 N 3 a b Gambar 9: (a) Isolat awal bakteri rizosfer dari perkebunan Tanjung Selamat, (b) Uji sinergisme bakteri IAA dan bakteri penambat nitrogen a Gambar 10: (a) Uji Standart Plate Count bakteri IAA pada media PCA
lxxxix I 1 I 2 I 3 I 4 I 5 a b Gambar 11: (a) IAA murni, (b) Supernatan bakteri IAA yang diberi reagen Salkowsky, terlihat isolat I 3 memiliki warna yang lebih pekat butt slant a b Gambar 12: (a) Uji biokimia TSIA, perubahan warna pada slant dan butt menunjukkan kemampuan bakteri memfermentasikan gula (b) Uji SSA, perubahan warna media dari hijau ke biru menunjukkan bakteri mampu menggunakan Na-sitrat dan NH 4 pelikel a b Gambar 13: (a) Uji biokimia Katalase, (b) Pembentukan pelikel pada medium JNFB semipadat oleh bakteri penambat nitrogen yang diinkubasi selama 10 hari pada suhu 35-36 o C