LAMPIRAN. Lampiran 1. Komposisi Media Bushnell-Haas,Larutan Standar Mc -Farland

Transkripsi

1 LAMPIRAN Lampiran 1. Komposisi Media Bushnell-Haas,Larutan Standar Mc -Farland a. Komposisi Media Bushnell-Hass per liter(atlas, 1946) 1. KH 2 PO 4 = 1,0 g 4. MgSO 4.7H 2 O = 0,2 g 2. K 2 HPO 4 = 1,0 g 5. FeCl 3 = 0,05 g 3. NH 4 NO 3 = 1,0 g 6. CaCl 2. 2H 2 O = 0,02 g 7. Agar = 20 g Kemudian semua komposisi ini dilarutkan dengan air laut steril sebanyak 1 liter dan disterilkan dengan autoclove. b. Komposisi Larutan Mc-Farland Sebanyak 0,5 ml BaCl 2 0,048 M ditambahkan ke dalam 99,5 ml H 2 SO 4 0,35 N.Kemudian divorteks hingga homogen. c. Insektisida Jordan 5G (Bahan aktif: Karbofuran 5%) Lampiran 2. Alur Kerja Isolasi Bakteri Endofit (Barzanti et al., 2007)

2 Akar Tomat Dicuci dengan air mengalir selama 20 menit Disterilisasi permukaan dengan cara direndam dalam alkohol 70% selama 2 menit Direndam dalam larutan sodium hipoklorit 5,3% selama 5 menit Direndam dalam alkohol 70% selama 30 detik Dibilas dengan akuades steril sebanyak 2 kali Akar Steril Dikeringkan dengan kertas saring steril Dibuang bagian ujung kiri dan kanan ±1 cm Dibelah menjadi 2 bagian Diletakkan di atas media NA + Ketokonazol Diinkubasi pada suhu o C selama 2 x 24 jam Koloni Bakteri Endofit Disubkultur pada media NA Hasil Lampiran 3. Alur Kerja Karakterisasi Morfologi dan Sifat Biokimia Bakteri

3 (Lay, 1994) Isolat Bakteri Karakterisasi Morfologi PewarnaanGra Uji Biokimia Bentuk Koloni Warna Koloni Tepi Koloni Elevasi Koloni Bentuk Sel Penataan Sel Uji Hidrolisa Pati Uji Gelatin Uji Sitrat Uji Sulfida Uji Motilitas Hasil

4 Lampiran 4. Alur Kerja Pengukuran Aktivitas Enzim Esterase Secara Kualitatif (Sierra, 1957) Isolat Bakteri Endofit Hasil Diinokulasikan ke dalam media Tween 80 Agar Diinkubasi pada suhu o C selama 2 x 24 jam Diamati dan diukur diameter koloni yang tumbuh Diamati dan diukur diamater zona halo yang terbentuk Dibandingkan diameter zona halo dengan diameter koloni sehingga diperoleh nilai Indeks Enzimatis (IE) dari enzim esterase

5 Lampiran 5. Alur Kerja Screening Aktivitas Biosurfaktan Metode Drop Collapsing Test (Jain et al., 1991) yang Dimodifikasi Isolat Bakteri Dibuat dalam bentuk suspensi yang setara dengan kekeruhan larutan Mc-Farland ( 10 8 sel/ml) Diinokulasikan sebanyak 2 ml ke dalam 98 ml media BHB yang mengandung 2% dekstros Diinkubasi pada shaker dengan kecepatan 150 rpm pada suhu 30 o C selama 15 hari Biakan Bakteri Disaring dengan kertas saring Filtrat Residu Diambil sebanyak 4 ml Dimasukkan ke dalam tabung reaksi Ditambahkan 4 ml N-heksan Ditambahkan 2 ml akuades Divortex selama 10 detik Diukur ketebalan emulsi yang terbentuk dengan jangka Sorong Dihitung nilai persentase Indeks Emulsifikasi (%IE) dari masing-masing isolat Hasil

6 Lampiran 6. Alur Kerja Perhitungan Pertumbuhan Sel Bakteri Endofit Metode Standard Plate Count(SPC)(Lay, 1994) Isolat Bakteri I ml MediaBiakan Hasil Dibuat dalam bentuk suspensi yang setara dengan kekeruhan larutan Mc-Farland ( 10 8 sel/ml) Diinokulasikan sebanyak 2 ml ke dalam 98 media BHB yang mengandung 2% insektisida karbofuran Diinkubasi pada waterbath shaker dengan kecepatan 110 rpm dengan suhu 30 o C selama 21 hari Diencerkan hingga konsentrasi 10-7 Diinokulasikan sebanyak 0,1 ml ke dalam media PCA denganmetode cawan sebar Diratakan dengan hockey stick Diinkubasi selama 24 jam Dihitung jumlah koloni yang tumbuh

7 Lampiran 7. Alur Kerja Uji Kemampuan Bakteri Endofit Dalam Mendegradasi Karbofuran Secara Kualitatif (Utami, 2013) Biakan Bakteri Hasil Diencerkan sampai konsentrasi 10-4 Dipipet sebanyak 0,1 ml dari tabung pengenceran terakhir Diinokulasikan ke dalam media BHA yang mengandung 2% insektisida karbofuran Dinkubasi selama 1 minggu Diamati koloni bakteri yang tumbuh

8 Lampiran 8. Alur Kerja Uji Potensi Bakteri Endofit Dalam Mendegradasi Karbofuran Secara Kuantitatif (Utami, 2013) Isolat Bakteri Media Biakan Dibuat dalam bentuk suspensi yang setara dengan kekeruhan larutan standar Mc-Farland ( 10 8 sel/ml) Diinokulasikan sebanyak 20 ml ke dalam 980 ml media BHB yang mengandung 2% insektisida karbofuran Diinkubasi pada shaker dengan kecepatan 110 rpm pada suhu 30 o C selama 21 hari Dipipet sebanyak 30 ml dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer steril Dibawa ke BBPPTP Medan untuk dianalisis residu karbofuran menggunakan HPLC Hasil

9 Lampiran 9. Perhitungan Mencari % Degradasi Karbofuran Isolat Bakteri Konsentrasi Karbofuran (ppm) Hari ke-0 (kontrol) Hari ke-7 Hari ke-14 Hari ke-21 HS06 175,333 2,2925 0,207 0,2189 HS08 175,333 2,3712 1,516 1,4785 Pengurangan karbofuran pada hari ke-7, 14 dan 21 =100% - [ KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK kkkkkkkkkkkkkkkkkkkk haaaaaa kkkk 7,14,21 KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK kkkkkkkkkkkkkkkkkkkk haaaaaa kkkk 0 xx 100%] Contoh: Pengurangan karbofuran pada hari ke-7 perlakuan isolat HS06 =100% - [ 2, ,333 =100% - 1,31% =98,69% xx 100%] Pengurangan karbofuran pada hari ke-7 perlakuan isolat HS08 =100% - [ 2, ,333 =100% - 1,36% =98,64% xx 100%]

10 Lampiran 10. Hasil Pengujian Residu Pestisida dari Balai Besar Proteksi dan Perbenihan Tanaman Perkebunan (BBPPTP), Medan Hari ke-0 (Kontrol)

11 HS06 Hari ke-7

12 HS08 Hari ke-7

13 HS06 Hari ke-14

14 HS08 Hari ke-14

15 HS06 Hari ke-21

16 HS08 Hari ke-21

17