Lampiran 1 Bagan alir lingkup kerja penelitian

LAMPIRAN 13

14 Lampiran 1 Bagan alir lingkup kerja penelitian Serbuk daun kepel Ekstrak kental metanol Penentuan kadar air dan kadar abu Maserasi dengan metanol Ditambah metanol:air (7:3) Partisi dengan n-heksana Lapisan n-heksana diuapkan Ekstrak kental n-heksana Lapisan metanol:air Partisi dengan kloroform Lapisan metanol:air Ekstrak kental metanol:air diuapkan Lapisan kloroform Ekstrak kental kloroform Uji flavonoid Ekstrak terbanyak dan (+) flavonoid Kromatografi kolom dengan eluen terbaik Fraksi I Fraksi II Fraksi III Fraksi ke-n Uji aktivitas antibakteri Fraksi Teraktif Pemisahan dengan KLTP Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Fraksi ke-n Fraksi Teraktif Senyawa aktif antibakteri Uji aktivitas antibakteri Identifikasi senyawa dengan FTIR&UV-tampak

15 Lampiran 2 Kadar air daun kepel Ulangan Cawan kosong Bobot (g) Cawan + daun Daun awal kering Rerata 12.7940 Bobot daun kering = (bobot cawan + daun kering) (bobot cawan kosong) = 23.7351 21.1197 = 2. 6154 g Kadar air (%) = A B 100% A 3.0007 2.6154 = 100% 3.0007 = 12.8403 %(b/b) A adalah bobot daun sebelum dikeringkan (g) B adalah bobot daun setelah dikeringkan (g) Daun kering Kadar air (% b/b) 1 21.1197 3.0007 23.7351 2.6154 12.8403 2 17.7810 3.0003 20.3942 2.6132 12.9020 3 16.4787 3.0009 19.1003 2.6216 12.6395 Lampiran 3 Kadar abu daun kepel Ulangan Cawan kosong Rerata 11.4390 Bobot abu = (bobot cawan + abu) (bobot cawan kosong) = 21.2296 21.1123 = 0.1173 g Kadar abu (%) = B 100% A 0.1173 = 100% 1.0091 = 11.6242 %(b/b) A adalah bobot daun B adalah bobot abu Bobot (g) Daun awal Cawan + abu Abu Kadar abu (% b/b) 1 21.1123 1.0091 21.2296 0.1173 11.6242 2 21.1996 1.0044 21.3136 0.1140 11.3501 3 18.7107 1.0024 18.8244 0.1137 11.3428

16 Lampiran 4 Rendemen ekstrak daun kepel dalam metanol Ulangan Bobot daun (g) Bobot Ekstrak (g) Faktor koreksi Rendemen (%b/b) 1 100.0071 14.4579 1.1279 16.3059 2 100.0098 13.4732 1.1279 15.1949 3 100.0052 12.3559 1.1279 13.9355 Rerata 15.1454 Faktor koreksi = 100 + kadar air 100 = 100 + 12.79 100 = 1.1279 Rendemen (% b/b kering) = Bobot ekstrak x faktor koreksi x 100% Bobot contoh awal = 14.4579 x 1.1279 x 100% 100.0071 = 16.3059% (b/b kering) Lampiran 5 Rendemen hasil partisi ekstrak metanol daun kepel Ulangan Bobot Ekstrak Kasar (g) Pelarut Bobot Ekstrak Partisi (g) Rendemen (%b/b) n-heksana 0.9777 32.4925 1 3.0090 Kloroform 0.2462 8.1821 Metanol:Air (7:3) 0.3587 11.9209 n-heksana 0.9362 31.1309 2 3.0073 Kloroform 0.3344 11.1196 Metanol:Air (7:3) 1.2092 40.2088 n-heksana 0.9723 32.3303 3 3.0074 Kloroform 0.4851 16.1302 Metanol:Air (7:3) 0.9425 31.3394 n-heksana 31.9846 Rerata Kloroform 11.8106 Metanol:Air (7:3) 27.8230 Rendemen n-heksana = Bobot ekstrak x 100% (% b/b ekstrak MeOH) Bobot ekstrak MeOH = 0.9777 x 100% 3.0090 = 32.4925 % (b/b ekstrak MeOH)

17 Lampiran 6 Hasil penentuan eluen terbaik ekstrak metanol:air (7:3) No Jenis Eluen Volume total Jumlah Noda Nilai R f 1 n-heksana 5 2 Kloroform 5 3 Etil Asetat 5 2 0.075; 0.21 4 Aseton 5 4 0.04; 0.11; 0.19; 0.26 5 n-butanol 5 4 0.06; 0.19; 0.31; 0.45 6 metanol 5 5 0.10; 0.29; 0.63; 0.69; 0.75 7 asam asetat 5 5 0.09; 0.22; 0.37; 0.49; 0.65 8 n-butanol:metanol (9:1) 5 6 0.03; 0.06; 0.19; 0.29; 0.49; 0.64 9 n-butanol:metanol (7:3) 5 6 0.04; 0.14; 0.33; 0.48; 0.56; 0.69 10 n-butanol:metanol:asam asetat (8:1:1) 5 5 0.04; 0.51; 0.61; 0.83; 0.90 11 n-butanol:metanol:asam asetat (1:1:8) 5 4 0.43; 0.49; 0.57; 0.63 12 n-butanol:metanol:asam asetat (1:8:1) 5 6 0.17; 0.39; 0.65; 0.73; 0.81; 0.90 13 n-butanol:metanol:asam asetat (4:3:3) 5 4 0.09; 0.27; 0.63; 0.87 14 n-butanol:metanol:asam asetat (3:3:4) 5 3 0.49; 0.61; 0.67 15 n-butanol:metanol:asam asetat (3:4:3) 5 5 0.12; 0.28; 0.54; 0.68; 0.81 Eluen terbaik dari hasil penelitian yang disajikan pada tabel di atas adalah pelarut campuran n- butanol:metanol:asam asetat (1:8:1) Lampiran 7 Hasil Fraksinasi ekstrak metanol:air (7:3) No Fraksi Jumlah Spot Nilai Rf Bobot Fraksi (g) Rendemen (%b/b) I 2 0.78; 0,91 0.0235 1.5592 II 2 0.86; 0.94 0.0325 2.1563 III 4 0.66; 0.75; 0.84; 0.91 0.0728 4.8301 IV 4 0.54; 0.69; 0.76; 0.88 1.1024 73.1423 V 3 0.35; 0.59; 0.74 0.0941 6.2434 VI 1 0.35 0.0812 5.3875 VII 1 0.08 0.0710 4.7107 Bobot awal yang digunakan = 1.5072 g Rendemen Fraksi I = Bobot fraksi x 100% (% b/b ekstrak MeOH:air) Bobot awal = 0.0235 x 100% 1.5072 = 1.5592 % (b/b ekstrak MeOH:air)

18 Lampiran 8 Hasil Uji aktivitas antibakteri BahanUji Konsentrasi Fraksi Fraksi I Fraksi II Fraksi III Fraksi IV Fraksi V (mg/ml) VI Fraksi VII Ekstrak kasar Tetrasiklin TCC Kontrol negatif 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 2.00 x x x x x x 1.00 x x x x x x x x 0.50 x x x x x x x x 0.25 x x x x x x x x 0.12 x x x x x x x x x x x x x 0.06 x x x x x x x x x x x x x x x x x 0.03 x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x 0.01 x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x KHM 2.00 2.00 0.12 0.12 0.25 0.25 0.12 0.25 0.06 0.06 >2.00 0.25 0.25 0.06 0.06 0.12 0.12 - - Konsentrasi (mg/ml) Bahan Uji Fraksi I Fraksi II Fraksi III Fraksi IV Fraksi V Ekstrak kasar Tetrasiklin TCC 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 2.00 x x 1.00 x x x 0.50 x x x x x x 0.25 x x x x x x x x x x 0.12 x x x x x x x x 0.06 x x x x 0.03 0.01 KBM >2.00 2.00 2.00 1.00 1.00 1.00 2.00 0.50 0.50 0.25 0.25 0.50 0.50 1.00 1.00

19 adalah bening (tidak ada pertumbuhan bakteri) x adalah keruh (ada pertumbuhan bakteri) Fraksi V merupakan fraksi teraktif sebagai antibakteri Lampiran 9 Hasil Pemisahan dari Fraksi V No Fraksi Bobot awal Bobot Fraksi Rendemen (%b/b) A 0.0124 13.1775 B 0.0941 0.0308 32.7311 C 0.0419 44.5271 RendemenFraksi A = Bobot Fraksi Ax 100% (% b/b Fraksi V) Bobot Fraksi V = 0.0124 x 100% 0.0941 = 13.1775 % (b/b Fraksi V)

20 Lampiran 10 Hasil uji aktivitas antibakteri setelah pemisahan dengan KLTP Konsentrasi (mg/ml) Bahan Uji Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Tetrasiklin TCC Kontrol negatif 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 2.00 x x 1.00 x x x x x x 0.50 x x x x x x x x 0.25 x x x x x x x x x x x x 0.12 x x x x x x x x x x x x 0.06 x x x x x x x x x x x x 0.03 x x x x x x x x x x x x 0.01 x x x x x x x x x x x x KHM 2.00 2.00 2.00 2.00 1.00 1.00 0.50 0.50 0.50 0.50 - - Konsentrasi (mg/ml) Bahan Uji Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Tetrasiklin TCC 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 2.00 x x x 1.00 x x 0.50 x x 0.25 0.12 0.06 0.03 0.01 KBM 2.00 >2.00 >2.00 >20 2.00 2.00 0.50 0.50 1.00 1.00 adalah bening (tidak ada pertumbuhan bakteri) x adalah keruh (ada pertumbuhan bakteri) Fraksi V3 merupakan fraksi teraktif sebagai antibakteri

21 Lampiran 11 Spektrum UV-tampak&FTIR Fraksi V3 λ max = 327 nm Spektrum UV-tampak Regang C=O Regang O-H Regang C-H alifatik Regang C=C aromatik Regang C-O Lentur C-H alifatik Spektrum FTIR