PENGEMBANGAN SENYAWA 9 METOKSIKANTIN 6 ONE SEBAGAI MARKER EKSTRAK AIR AKAR PASAK BUMI TERSTANDAR PADA PENELITIAN FARMAKOKINETIK HERBAL Farida Hayati *, Lukman Hakim **, Ngatidjan ***, Mustofa ***
Pengembangan obat tradisional di Indonesia FITOFARMAKA Bahan baku : ekstrak terstandar, didukung bukti kemanjuran dan keamanan secara kli OBAT HERBAL TERSTANDAR (OHT) Bahan baku : ekstrak terstandar, didukung bukti kemanjuran dan keamanan secara praklinis JAMU Bahan baku simplisia, kemanjuran didukung oleh bukti empiris penggunaan pada manusia, keamanan didukung bukti ilmiah
Riset pengembangan tanaman obat Budi daya tanaman Ekstraksi dan Standarisasi Farmakoki netik?? Khasiat Uji farmakologi pra Klinik Uji Klinik Uji toksikologi
Farmakokinetik herbal Jarang dilakukan penting untuk dapat membantu dalam memperhitungkan dosis suatu sediaan tanaman obat (Pal and Shukla, 2003) Perancangan dosis lebih rasional
Pustaka : Pasak Bumi Afrodisiak (Ang and Sim, 1997, 1998a 1998b; Ang and Ngai, 2001; Ang and Lee, 2002a; Ang and Lee, 2002b; Ang et al., 2000, 2001, 2003a, 2003b, 2004) Antimalaria (Ang et al., 1995; Kuo et al., 2004 Kardono et a.l, 1991) Antihiperglikemia (Husen et al., 2004) Khasiat Antitumor (Kardono et al., 1991; Itokawa et al., 2000) Anxiolitik (Ang and Cheang, 1999) Antiulcer (Tada et al., 1991)
eurikomanon dan 9 metoksikantin 6 one telah digunakan oleh beberapa peneliti sebagai marker untuk menentukan kualitas ekstrak pasak bumi sebagai bahan baku obat alami (Aziz et al., 2005). Gambar. Struktur senyawa 9 metoksikantin 6-one (Chan et al., 2004)
Penelitian farmakokinetik Akar pasak bumi Pra klinik Klinik Marker 1 (eurikomanon) (Low et al, 2005) Marker 2 (metoksikantin) (Tan et al., 2002) Belum ada riset
MARKER ALTERNATIF Eurycomanone Senyawa sangat polar Jumlah mayor Ada referensi, harga mahal 9 metoksikantin 6 one Senyawa semi polar Jumlah minor Ada referensi, harga lbh mahal
Penelitian farmakokinetik Validasi Metode Optimasi : dosis Waktu sampling Profil Kurva Cp vs t Parameter Farmakoki netik
TUJUAN Menemukan metode penetapan kadar 9 metoksikantin 6 one dalam serum tikus dan manusia yang tepat, teliti, sensitif, dan selektif
BAHAN 9 metoksikantin 6 one reference Ekstrak pasak bumi terstandar Darah Tikus jantan Serum manusia sehat Aquabides Metanol for HPLC Asetonitril for HPLC Etil asetat p.a. ALAT KCKT Shimadzu LC 6A Detektor spektrofluorometer Kolom ODS C 18, 15cm Waterbath Sentrifuse Alat gelas
Validasi Metode Penentuan panjang gelombang eksitasi dan emisi Penentuan kurva baku Penentuan batas deteksi (LOD dan LOQ) Penentuan stabilitas dalam darah Recovery dan kesalahan acak
(endogen) metoksikantin 5.067 Volts Metoksikantin stock dengan fase gerak acetonitril : air (30:70) 1.53 0.025 0.020 0.015 0.010 860986 24160 0.005 0.000 0 5 10 15 Minutes
250 µl darah+etil asetat 400 µl + spiking metoksi kadar 25 ng/ml sebanyak 5 µl Vortex 30 dan sentrifuse 20 kecepatan 2500rpm Ambil supernatan 250 µl Uapkan diatas pemanas dengan suhu 90ºCelcius dialiri gas N2 Larutan kering ditbh metanol 40µL, vortex 20 detik
3.783 129893 Metoksikantin + darah dipreparasi (kadar 0,5 ng/ml) metoksikantin 0.0020 0.0015 0.0010 0.0005 1925 4.66 5.233 64931 1562 1.45 0.0000 LOD = 0.18 ng/ml LLOQ = 0.58 ng/ml 0 5 10 15 Minutes
Menentukan perolehan kembali dan kesalahan acak Kadar seharusnya Kadar Terukur Perolehan kembali (%) Kesalahan Acak (%) µg/ml µg/ml Mean ± SE 0.92 92 1 1.03 103 91.67 ± 3.83 10.33 0.8 80 0.54 108 0.5 0.51 102 106 ± 1.15 6 0.54 108
Kesimpulan Metode penetapan kadar 9 metoksikantin 6 one pada darah tikus selektif, sensitif, akurat, dan presisi dengan nilai α = 1,375, recovery 91-100%, HORRAT (1,28) <2 Dapat dikembangkan sebagai metode penetapan kadar pada darah manusia
500 µl darah+etil asetat 0,8ml + spiking metoksi kadar 25 ng/ml sebanyak 5 µl Vortex 30 dan sentrifuse 20 kecepatan 2500rpm Ambil supernatan 400 µl Uapkan diatas pemanas dengan suhu 90ºCelcius dialiri gas N2 Larutan kering ditbh metanol 40µL, vortex 20 detik Metoksikantin
Volts metoksikantin 5.650 109623 1433 Metoksikantin + darah manusia dipreparasi (kadar 0,5 ng/ml) 0.0015 RF-10AXL (Ex:359nm, Em:491nm) metoksikantin H 0.25+24jam Name Retention Time Area Height 0.0010 0.0005 0.0000-0.0005 3.833 36633 1267 5.025 88597 1543 LOD = 0.14 ng/ml LLOQ = 0.16 ng/ml 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 Minutes
Menentukan perolehan kembali dan kesalahan acak Kadar seharusnya Kadar Terukur Perolehan kembali (%) Kesalahan Acak (%) ng/ml 1 0.5 ng/ml Mean ± SE 0.9 90 0.93 93 94.67±1.89 6 1.01 101 0.4 80 0.46 92 88±2.31 12 0.46 92 manusia
Kesimpulan Metode penetapan kadar 9 metoksikantin 6 one pada darah manusia selektif, sensitif, akurat, dan presisi dengan nilai α = 1,383, recovery 88-94,67%, HORRAT (0,75) <2 Dapat digunakansebagai metode penetapan kadar pada darah manusia pada farmakokinetik herbal