EFEK SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG TANJUNG (Mimusopsi cortex) TERHADAP SEL T47D

Transkripsi

1 F02 EFEK SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG TANJUNG (Mimusopsi cortex) TERHADAP SEL T47D Vonna Aulianshah, Poppy Anjelisa Z. Hasibuan dan Aminah Dalimunthe Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara ABSTRAK Kanker payudara merupakan penyebab utama kematian pada wanita setiap tahunnya. Secara sederhana, kanker berarti pertumbuhan sel-sel tubuh yang tidak terkendali atau abnormal. Minat terhadap penggunaan obat tradisional khususnya untuk penyakit kanker akhir-akhir ini cenderung meningkat. Kecenderungan tersebut kemungkinan disebabkan adanya kekhawatiran akan efek samping yang ditimbulkan oleh obat-obat modern. Selain itu, karena obat tradisional mudah didapat dan murah harganya. Tanjung (Mimusops elingi L.) diyakini memiliki potensi antikanker. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui karakteristik simplisia (Mimusopsi cortex) dan menghitung nilai IC 50, serta untuk mengetahui tingkat keaktifan ekstrak etanol kulit batang Tanjung terhadap sel kanker payudara T47D. Ekstrak diperoleh melalui maserasi dengan menggunakan pelarut etanol 96%. Uji aktivitas sitotoksik dilakukan dengan metode MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5 difeniltetrazolium bromida]. Sel T47D dibiakkan dalam media kultur RPMI pada 96-well plate kemudian diberi ekstrak etanol kulit batang Tanjung dengan seri konsentrasi 500 µg/ml, 250 µg/ml, 125 µg/ml, 62,5 µg/ml, dan 31,25 µg/ml. Hasil pengujian dibaca dengan ELISA reader pada panjang gelombang 595 nm. Hasil skrining fitokimia terhadap simplisia dan ekstrak etanol kulit batang Tanjung (Mimusopsi cortex) diperoleh senyawa kimia golongan flavonoid, tanin, saponin, dan steroid/triterpenoid yang berpotensi sebagai antikanker. Hasil pemeriksaan karakteristik simplisia diperoleh kadar air 7,96%, kadar sari larut air 1,5%, kadar sari larut dalam etanol 2,52%, kadar abu total 4,13%, dan kadar abu tidak larut asam 0,12%. Hasil pengujian aktivitas sitotoksik ekstrak etanol kulit batang Tanjung terhadap sel kanker T47D menunjukkan nilai IC 50 sebesar 112,800 µg/ml. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol kulit batang Tanjung memiliki efek sitotoksik yang kurang poten terhadap sel kanker payudara T47D. Kata Kunci: sitotoksik, Mimusopsi cortex, sel T47D, MTT. PENDAHULUAN Kanker ditandai dengan pertumbuhan sel-sel tubuh yang tidak terkendali atau abnormal dan jika menyerang suatu organ tubuh, sel kanker akan berkembang biak dan merusak sel-sel tubuh yang normal dengan sangat cepat (Saputra, dkk., 2000; Corwin, 2007). Menurut WHO, setiap tahun lebih dari kasus baru kanker payudara terdiagnosa di Eropa dan kurang lebih di Amerika Serikat. Tahun 2000 diperkirakan 1,2 juta wanita terdiagnosis kanker payudara dan lebih dari meninggal karenanya (National Cancer Institute, 2011). Antikanker yang ideal seharusnya memliliki toksisitas selektif artinya menghancurkan sel kanker tanpa merusak sel ISBN

2 jaringan normal. Antikanker yang ada sekarang pada umumnya menekan pertumbuhan atau proliferasi sel dan menimbulkan toksisitas karena menghambat pembelahan sel normal yang proliferasinya cepat antara lain sumsum tulang, mukosa saluran cerna, folikel rambut dan jaringan limfosit. Minat terhadap penggunaan obat tradisional khususnya untuk penyakit kanker akhir-akhir ini cenderung meningkat. Kecenderungan tersebut disebabkan kekhawatiran efek samping yang ditimbulkan oleh obat modern, selain itu alasan obat tradisional mudah didapat dan murah harganya (Kurnijasanti, 2008; Wiryowidagdo, 2008). Tanjung (Mimusops elingi L.) adalah sejenis pohon yang berasal dari India, Sri Lanka dan Burma. Air rebusan kulit batangnya dimanfaatkan sebagai obat demam, obat sakit gigi dan penyegar nafas, serta pencuci luka (Ganu, 2010). Namun masih ada potensi lain dari kulit batang pohon ini, yaitu sebagai antioksidan dan antikanker. Hasil penelitian (Ganu, et al., 2010) menyimpulkan bahwa ekstrak metanol dari kulit batang Tanjung (Mimusopsi cortex) mempunyai aktivitas antioksidan yang dapat mencegah penyakit degeneratif sel seperti diabetes. Selain itu, (Chaitali, dkk., 2010) telah meneliti ekstrak etanol kulit batang Tanjung (Mimusopsi cortex) menggunakan Brine-Shrimp Lethality Bioassay (BST) terhadap larva Artemia salina, diperoleh bahwa ekstrak etanol kulit batang Tanjung memiliki aktivitas sitotoksik. Peneliti tertarik untuk melihat efek ekstrak kulit batang tanjung terhadap kanker payudara, oleh karena itu maka perlu dilakukan pengujian pendahuluan untuk membuktikan efek sitotoksiknya secara langsung terhadap sel kanker payudara yaitu T47D. METODOLOGI Pembuatan ekstrak etanol kulit batang Tanjung(EEKBT) Bagian kulit batang yang masih segar dicuci, ditiriskan, dipotong-potong lalu ditimbang, selanjutnya dikeringkan di lemari pengering suhu. Setelah kering, kulit batang diserbuk hingga halus. Sebanyak 200 g serbuk simplisia dibuat ekstrak secara maserasi dengan pelarut etanol 96%. Maserat yang diperoleh dikumpulkan dan dipekatkan dengan alat rotary evaporator. Kultur sel epitel payudara Sel yang digunakan pada penelitian ini adalah sel T47D koleksi laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada yang dirawat dan ditumbuhkan pada medium RPMI (Gibco) dengan 10% FBS (Gibco) dan 2% Penicillin-Streptomycin (Gibco). Uji Sitotoksik Sel T47D ditanam pada microplate 96 sumuran sehingga diperoleh kepadatan ISBN

3 sel/sumuran dan diinkubasi selama 24 jam untuk mendapatkan pertumbuhan yang baik. Setelah 24 jam medium diganti dengan yang baru kemudian ditambahkan larutan uji dengan berbagai konsentrasi menggunakan cosolvent DMSO dan diinkubasi pada suhu 37ºC dalam inkubator CO 2 5% selama 24 jam. Pada akhir inkubasi, media dan larutan uji dibuang kemudian sel dicuci dengan PBS. Pada masing-masing sumuran, ditambahkan 100μL media kultur dan 10μL MTT 5 mg/ml. Untuk mengamati viabilitasnya, sel diinkubasi kembali selama 4-6 jam dalam inkubator CO 2 5% pada suhu 37 o C. Reaksi MTT dihentikan dengan reagen stopper (SDS 10% dalam HCl 0,1 N), lalu plate dibungkus dengan alumunium foil agar tidak tembus cahaya pada suhu kamar dan dibiarkan selama satu malam. Sel yang hidup bereaksi dengan MTT membentuk warna ungu. Hasil pengujian dibaca dengan ELISA reader pada panjang gelombang 595 nm. Analisis hasil Data absorbansi yang diperoleh dari uji sitotoksik sel dikonversi ke dalam persen sel hidup. Persen sel hidup dihitung menggunakan rumus: Aktivitas sitotoksik dinyatakan dalam IC 50 (konsentrasi yang menyebabkan kematian 50% populasi sel) yang dianalisis dengan analisis probit menggunakan SPSS HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil pengamatan dengan menggunakan mikroskop inverted dengan perbesaran 10x10 menunjukkan adanya perbedaan morfologi antara sel T47D kontrol dan sel T47D yang diberi perlakuan ekstrak. Sel T47D kontrol yang hidup tampak seperti pecahan kaca lonjong, saling berdempet dengan sel lain yang berada disekitarnya dan menempel di dasar sumuran (Gambar 4.1). Sedangkan sel T47D yang mati karena perlakuan pemberian ekstrak tampak bulat dengan bagian tengah berwarna hitam, cenderung tersebar dan mengapung (Gambar 4.2). Warna gelap dan berserabut yang nampak pada pengamatan (Gambar 4.3) merupakan kristal formazan setelah pemberian MTT. Kristal-kristal formazan tersebut dapat menembus membran sel dan terakumulasi di dalam sel sehat. Jumlah produk formazan secara langsung proposional dengan jumlah sel hidup. Semakin banyak sel hidup maka semakin banyak sel yang aktif melakukan metabolisme sehingga jumlah produk formazan yang terbentuk juga semakin banyak. Semakin banyak produk formazan yang terakumulasi ini menyebabkan intensitas warna ungu meningkat dalam plate. Sel yang mati tidak dapat terwarnai oleh garam MTT sehingga tidak membentuk warna ungu seperti pada sel hidup. Akibatnya pada sel mati tidak terbentuk formazan yang berwarna ungu, tetapi warnanya tetap kuning seperti medium (gambar 4.4) ISBN

4 . Gambar 4.1 Kontrol Sel T47D Gambar 4.2 Sel T47D Setelah Pemberian Ekstrak Gambar 4.3 Kristal Formazan Hasil pengukuran dengan menggunakan ELISA reader menunjukkan bahwa persentase sel T47D yang hidup terus menurun berbanding terbalik dengan kenaikan konsentrasi ekstrak yang diberikan. Dimana artinya semakin besar konsentrasi ekstrak yang diberikan maka persentase. Gambar 4.4 Perbedaan warna media berisi sel T47D dan larutan uji setelah pemberian MTT (3 x pengulangan). kematian sel T47D semakin meningkat. Persentase sel hidup terbesar terdapat pada pemberian konsentrasi ekstrak 31,25 µg/ml yaitu sebesar 79,88%, sedangkan pada pada pemberian konsentrasi 500 µg/ml persentase sel hidup hanya sebesar 24,59% ISBN

5 Gambar 4.5 Grafik Hubungan Konsentrasi Larutan Uji Terhadap Jumlah % Sel T47D Hidup Perhitungan nilai IC 50 ditentukan dengan menggunakan analisis probit pada program SPSS Windows 17. IC 50 digunakan sebagai parameter untuk mengevaluasi potensi sitotoksisitas EEKBT terhadap sel T47D. Suatu ekstrak dikatakan berpotensi menghambat pertumbuhan sel kanker jika memiliki nilai IC µg/ml (Kamuhabwa, et al., 2000). Semakin kecil nilai IC 50 berarti semakin tinggi nilai aktivitas sitotoksiknya (Winarno, et al., 2010). Karena harga IC 50 dari EEKBT adalah 112,800 µg/ml, maka dapat dikatakan bahwa EEKBT mempunyai aktivitas sitotoksik yang kurang poten terhadap sel kanker payudara T47D. Dikarenakan sampel uji masih dalam bentuk crude ekstrak, maka diperlukan upaya fraksinasi dan isolasi senyawa bioaktifnya agar kulit batang Tanjung memiliki nilai IC 50 yang lebih poten daripada ekstrak etanolnya. Menurut (Andriyani dan Udin, 2010) bukan berarti dengan nilai IC 50 yang sangat kecil, ekstrak tersebut semakin berpotensi. Hal tersebut dikarenakan kekhawatiran dari sifat toksisitas yang berlebih akan menyebabkan kematian pada jaringan yang lain, sehingga ekstrak tersebut bukan hanya menghambat pertumbuhan sel kanker tetapi juga sel normal. KESIMPULAN Ekstrak etanol kulit batang Tanjung (Mimusopsi cortex) memiliki sifat sitotoksik terhadap sel T47D dengan nilai IC 50 sebesar 112,800 µg/ml. Meskipun aktivitas sitotoksiknya kurang poten tetapi cukup memungkinkan untuk dikembangkan sebagai agen kemopreventif. DAFTAR PUSTAKA Andriyani, R., Udin, Z. (2010). Studi Potensi Ekstrak Brucea javanica Sebagai Bioaktif Antikanker Payudara Terhadap Sel T47D. JKTI. 12(1): ISBN

6 Chaitali, H.V., More, S.N., Bharate, S.S., dan Bharate, B.S. (2010). Cytotoxicity Screening of Selected Indian Medicinal Plants Using Brine- Shrimp Lethality Bioassay. Advances in Natural and Applied Sciences Journal. 4(3): Corwin, E.J., (2008). Handbook of Pathophysiology. 3rd edition. Lippincot Williams & Wilkins, USA. Ganu, G.P., Jadhav, S.S., dan Desphande, A.D. (2010). Antioxidant and antihyperglycemic potential of methanolic extract of bark of Mimusops elengi L. In mice. International Journal of Phytomedicine. 2(2): Kamuhabwa, A., Nshimo, C. & de Witte, P. (2000). Cytotoxicity of Some Medicinal Plant Extracts Used in Tanzanian Tradisional Medicine. J. Ethnopharmacol. 70(4): Kurnijasanti, R., Hamid, S.I, dan Rahmawati, K. (2008). Efek Sitotoksik In Vitro dari Ekstrak Buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa) Terhadap Kultur Sel Kanker Mieloma. Media Eksakta. 7(1): NCI (2011). Report to nation finds continued declines in many cancer rates. National Cancer Institute At the National Institute of Health. Diunduh pada 16Agustus ov/newscenter/pressreleases Winarno, K.E., Mazda, R., Hindra, dan Winarno, H. (2010). Pengaruh Iradiasi Gamma Pada Aktivitas Sitotoksik daging Buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa) (Scheff) Boerl. Jurnal Sains Dan Teknologi Nuklir Indonesia. II(2): 72. Wiryowidagdo, S. (2008). Kimia dan Farmakologi Bahan Alam. Edisi 2. Jakarta: EGC Penerbit Buku Kedokteran. Hal: ISBN