SITOTOKSISITAS EKSTRAK LERAK (Sapindus rarak DC) TERHADAP SEL FIBROBLAS SEBAGAI BAHAN IRIGASI SALURAN AKAR SECARA IN VITRO

Transkripsi

1 SITOTOKSISITAS EKSTRAK LERAK (Sapindus rarak DC) TERHADAP SEL FIBROBLAS SEBAGAI BAHAN IRIGASI SALURAN AKAR SECARA IN VITRO SKRIPSI Diajukan untuk memenuhi tugas dan melengkapi syarat guna memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Gigi Oleh : SITI NURSANI SIREGAR NIM : FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN 2011

2 Fakultas Kedokteran Gigi Departemen Konservasi Gigi Tahun 2011 Siti Nursani Siregar Sitotoksisitas Ekstrak Lerak (Sapindus rarak DC) Terhadap Sel Fibroblas Sebagai Bahan Irigasi Saluran Akar Secara In Vitro xiv + 62 halaman Tindakan irigasi sebagai chemomechanical cleansing dilakukan selama dan sesudah pembersihan dan pembentukan saluran akar. NaOCl 5% sebagai bahan irigasi saluran akar yang dianggap paling baik digunakan ternyata memiliki beberapa kelemahan. Diantaranya bersifat toksik. Berdasarkan keputusan JAKSTRA tentang penggunaan tanaman tradisional dipilih buah lerak (Sapindus rarak DC). Untuk mengembangkan ekstrak lerak sebagai alternatif bahan irigasi saluran akar yang lebih baik dan memenuhi syarat sebagai bahan irigasi, maka diperlukan pengujian sitotoksisitas sebagai langkah awal dalam penggunaan bahan alami yang biokompatibel. Ekstrak lerak dengan konsentrasi 40%, 20%, 10%, 5%, 2,5%, 1,25%, 0,62% dan 0,31% (8 sampel) dilarutkan dengan media RPMI 1640 untuk dilakukan uji sitotoksisitas menggunakan metode MTT assay pada kultur cell lines fibroblas (BHK- 21). Kelompok uji dibagi atas kelompok perlakuan masing-masing konsentrasi ekstrak lerak 9 sampel. Kontrol sel sebagai kontrol positif 6 sampel dan kontrol media (media RPMI ekstrak lerak) sebagai kontrol negatif masing-masing

3 konsentrasi 3 sampel. Absorbansi dari perubahan garam MTT (kuning) menjadi biru formazan oleh enzim reduktase dengan menggunakan ELISA reader pada panjang gelombang 620 nm menunjukkan jumlah sel yang hidup. Hasil uji ANOVA menunjukkan ekstrak lerak pada pengamatan 24 jam memberikan pengaruh yang bermakna terhadap kehidupan sel fibroblas (BHK-21) (p<0,05). Dengan hasil uji masing-masing konsentrasi 40% (88,12% + 0, ), 20%(67,16% + 0, ), 10% (60,19% + 0, ), 5% (67,51% + 0, ), 2,5% (59,83% + 0, ), 1,25% (52,15% + 0, ), 0,62% (51,08% + 0, ) dan 0,31% (56,10% + 0, ). Hasil uji LSD ekstrak lerak pada pengamatan 24 jam menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan antara semua kelompok perlakuan, kelompok kontrol sel dan kelompok kontrol media terhadap kehidupan sel fibroblas (BHK-21) (p<0,05) tetapi tidak pada kelompok perlakuan dengan konsentrasi 1,25%, 0,62%, 0,31%. Dari hasil penelitian diperoleh nilai LC 50 ekstrak lerak yaitu pada konsentrasi 1,25% dengan rerata kehidupan sel (52,15% + 0, ). Artinya ekstrak lerak memiliki batas konsentrasi yang biokompatibel dan dapat digunakan sebagai alternatif bahan irigasi saluran akar. Daftar rujukan: 30 ( ).

4 SITOTOKSISITAS EKSTRAK LERAK (Sapindus rarak DC) TERHADAP SEL FIBROBLAS SEBAGAI BAHAN IRIGASI SALURAN AKAR SECARA IN VITRO SKRIPSI Diajukan untuk memenuhi tugas dan melengkapi syarat guna memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Gigi Oleh : SITI NURSANI SIREGAR NIM : FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN 2011

5 LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI INI TELAH DISETUJUI UNTUK DISEMINARKAN PADA TANGGAL 30 JUNI 2011 OLEH : Pembimbing Nevi Yanti, drg., M.Kes NIP : Mengetahui Ketua Departemen Ilmu konservasi Gigi Fakultas Kedokteran Gigi Cut Nurliza, drg., M.Kes NIP :

6 PERNYATAAN PERSETUJUAN Skripsi berjudul SITOTOKSISITAS EKSTRAK LERAK (Sapindus rarak DC) TERHADAP SEL FIBROBLAS SEBAGAI BAHAN IRIGASI SALURAN AKAR SECARA IN VITRO Yang dipersiapkan dan disusun oleh : SITI NURSANI SIREGAR NIM : Telah dipertahankan didepan tim penguji pada tanggal 30 Juni 2011 dan dinyatakan telah memenuhi syarat untuk diterima Susunan Tim Penguji Skripsi Ketua Penguji Nevi Yanti, drg., M.Kes NIP : Anggota tim penguji lain Prof. Dr. Rasinta Tarigan, drg., Sp.KG(K) Cut Nurliza, drg., M.Kes NIP : NIP : Medan, 30 Juni 2011 Fakultas Kedokteran Gigi Departemen Ilmu Konservasi Gigi Ketua, Cut Nurliza, drg., M.Kes NIP :

7 KATA PENGANTAR Puji dan syukur kehadirat Allah SWT yang Maha Pengasih lagi Maha Penyayang atas segala rahmat dan karunia-nya sehingga skripsi ini dapat diselesaikan sebagai salah satu syarat untuk mendapatkan gelar Sarjana Kedokteran Gigi di Fakultas kedokteran Gigi. Shalawat beriring salam kepada Nabi Muhammad SAW yang telah membawa kita ke zaman yang penuh dengan ilmu pengetahuan ini. Skripsi ini didedikasikan untuk kedua orang tua, Bapak Muchlis Siregar dan Ibu Masnilawati Simamora tercinta sebagai tanda hormat, rasa sayang dan terima kasih yang tiada terhingga atas kasih sayang, perhatian, dukungan, semangat, dan doanya selama ini. Juga untuk Bang Dedi, Bang Dedek, Bang Baim, Kak Eni, Kak Dewi, Cinta, Dhuha dan seluruh keluarga Oppung Parlindungan dan Oppung Jamiul. Dalam penulisan skripsi ini, banyak mendapat bimbingan dan bantuan dari berbagai pihak. Untuk itu, dengan segala kerendahan hati dan penghargaan yang tulus, disampaikan rasa terima kasih kepada: 1. Prof. H. Nazruddin, drg., C. Ort., Sp.Ort., Ph.D selaku Dekan Fakultas Kedokteran Gigi. 2. Cut Nurliza, drg., M.Kes, selaku Ketua Departemen Ilmu Konservasi Gigi, Fakultas Kedokteran Gigi,, yang telah membantu dalam kelancaran skripsi ini.

8 3. Nevi Yanti, drg., M.Kes selaku dosen pembimbing yang telah meluangkan waktu, tenaga, dan pikiran serta dengan sabar memberikan bimbingan, arahan, motivasi, nasihat, dan semangat selama penulisan skripsi ini. 4. Seluruh staf pengajar Departemen Ilmu Konservasi Gigi, Fakultas Kedokteran Gigi,, yang telah memberikan saran dan masukan dalam penyelesaian skripsi ini. 5. Sayuti Hasibuan, drg, Sp. PM, selaku dosen pembimbing akademik di Fakultas Kedokteran Gigi,. 6. Seluruh staf pengajar di Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Sumatera Utara, yang telah mendidik, membimbing dan membantu selama menuntut ilmu di masa pendidikan. 7. Wahyu Hidayatiningsih, S.Si., M.Kes yang membantu peneliti di Laboratorium Pusat Veterinaria Farma Surabaya yang telah meluangkan waktunya, membimbing, dan membantu pelaksanaan penelitian ini. 8. Drs. Awaluddin Saragih, M.Si., Apt selaku Kepala Laboratorium Obat Tradisional Fakultas Farmasi USU yang telah banyak membagi ilmunya, memberi semangat dan masukan, serta telah meluangkan waktunya untuk berdiskusi. 9. Prof. Trimurni Abidin, drg., M.Kes., Sp.KG(K) yang telah memberikan masukan, serta telah meluangkan waktunya untuk berdiskusi. 10. Drs. Abdul Jalil Amri Arma, M. Kes, yang telah membantu dan meluangkan waktunya untuk berdiskusi tentang analisis data dalam penelitian ini. 11. Ilham Syahputra yang telah memberikan dukungan, semangat dan bantuannya selama penelitian dan penulisan skripsi ini.

9 12. Sahabatku, yaitu: Ina, Maya, Mey, Riri, Suci, Ika, teman-teman seperjuangan skripsi Nunu, Rena, Idel, Yuli, Mitha, serta semua teman-teman angkatan 2007 yang tidak dapat disebutkan namanya satu per satu atas dukungan semangat dan bantuannya selama penelitian dan penulisan skripsi ini. 13. Senior-senior, yaitu: Kak Tari, Kak Tiwi, Kak Ica, Kak Ratih, Kak Mila, KakOza, Kak Ulfa yang telah memberikan bantuan, masukan, dan semangat. Skripsi ini masih belum sempurna disebabkan oleh kelemahan dan keterbatasan ilmu yang dimiliki, tetapi diharapkan skripsi ini dapat memberikan sumbangan pikiran yang berguna bagi fakultas, pengembangan ilmu, dan masyarakat. Medan, 30 Juni 2011 Penulis, (SITI NURSANI SIREGAR) NIM:

10 DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL... HALAMAN PERSETUJUAN HALAMAN TIM PENGUJI SKRIPSI KATA PENGANTAR... DAFTAR ISI... DAFTAR TABEL... DAFTAR GAMBAR... vii ix x DAFTAR LAMPIRAN... xiii BAB 1 PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Rumusan Masalah Tujuan Penelitian Manfaat Penelitian... 4 BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Tindakan Irigasi Saluran Akar Buah Lerak (Sapindus rarak DC) Sitotoksisitas Sel Fibroblas BAB 3 KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN 3.1 Kerangka Konsep Hipotesis Penelitian BAB 4 METODE PENELITIAN 4.1 Rancangan Penelitian Populasi dan Sampel Variabel Penelitian Defenisi Operasional Bahan dan Alat Penelitian Tempat dan Waktu Penelitian... 28

11 4.7 Prosedur Penelitian Analisis Data BAB 5 HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS HASIL PENELITIAN 5.1 Hasil Penelitian Ekstrak Kental Lerak (Sapindus rarak DC) Pengujian Sitotoksisitas Ekstrak Lerak Analisis Hasil Penelitian BAB 6 PEMBAHASAN BAB 7 KESIMPULAN DAN SARAN 7.1 Kesimpulan Saran DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN

12 DAFTAR TABEL Tabel Halaman 1. Nilai OD(Optical density) formazan kelompok uji Hasil uji ANOVA efek sitotoksik ekstrak lerak terhadap kehidupan sel fibroblas (BHK-21) Hasil uji LSD efek sitotoksik ekstrak lerak terhadap sel fibroblas (BHK-21)... 43

13 DAFTAR GAMBAR Gambar Halaman 1. Spuit endodonti Jarum irigasi bengkok dimasukkan sebagian ke dalam saluran akar tanpa terjepit. Larutan irigasi merembes keluar dan diabsorpsi dengan kain kasa steril, untuk memonitor pengambilan debris dari saluran akar EndoVac sistem menggunakan np Tanda panah di atas menunjukkan pohon lerak yang terdapat di Desa Ujung Pasir, Kec.Danau Kerinci, Jambi Buah lerak yang dikeluarkan bijinya Buah lerak yang berasal dari Desa Muara Imat, Kab.Kerinci, Jambi Reaksi Reduksi MTT menjadi Formazan Gambaran sel fibroblas secara mikroskopis Gambaran sel fibroblas secara anatomis well tissue culture plate Microscope inverted Laminar flow hood Inkubator Micropipette Multi channel pipette ELISA reader... 27

14 17. Penimbangan buah lerak Pemotongan daging buah lerak Lemari pengering Potongan lerak di lemari pengering Potongan lerak yang sudah kering Potongan lerak diblender Simplisia lerak Simplisia di dalam perkolator Vacum rotavapor Kultur cell lines BHK-21 dalam media RPMI a. Sel fibroblas didistribusikan kedalam 96- well microplate b. Sel fibroblas dalam 96- well microplate Kontrol sel fibroblas diperiksa dengan microscope inverted Siapkan bahan uji Bahan uji dimasukkan ke dalam sumuran 25 μl/konsentrasi Inkubasi selama 24 jam MTT dilarutkan dalam PBS 5 mg/ml dan ditambahkan langsung pada plate yang berisi sel fibroblas sebanyak 10 μl dan diinkubasi selama 4 jam Hasil uji diperiksa dengan microscope inverted untuk melihat terbentuknya Formazan Seluruh media dan bahan uji dalam sumuran diambil dan ditambah DMSO 50 µl Plate di-shaking dengan plate shaker... 35

15 36. 36a. Plate dimasukkan kedalam alat ELISA reader b. Formazan dibaca absorbansinya pada panjang gelombang 620 nm Ekstrak kental lerak Kontrol sel 24 jam (pembesaran 40x) a. Kristal formazan, b. Sel fibroblas yang hidup, c. Sel fibroblas yang mati (Pembesaran100x) Grafik rerata persentase kehidupan sel fibroblas (BHK-21) setelah kontak selama 24 jam a. Menunjukkan bagian hidrofobik dari protein membran yang diduga akan berikatan dengan bagian hidrofobik dari saponin sehingga protein membran dapat larut, b. Struktur fosfolipid bilayer membran, c. Protein transmembran... 48

16 DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Alur penyiapan bahan coba 2. Alur pengujian sitotoksisitas 3. Alur pikir 4. Hasil uji sitotoksisitas ekstrak lerak terhadap sel fibroblas 5. Hasil uji statistik (ANOVA dan LSD) sitotoksisitas ekstrak lerak terhadap sel fibroblas (BHK-21)