Lampiran 1. Hasil identifikasi Simplisia kulit batang Tanjung(Mimusopsi cortex)

Transkripsi

1 Lampiran 1. Hasil identifikasi Simplisia kulit batang Tanjung(Mimusopsi cortex)

2 Lampiran 2. Gambar Simplisia Kulit Batang Tanjung(Mimusopsi cortex)

3 Lampiran 3. Perhitungan Kadar Air Simplisia Kulit Batang Tanjung(Mimusopsi cortex) No. Berat sampel (g) Volume awal (ml) Volume akhir (ml) 1. 5,003 1,80 2, ,026 2,20 2, ,035 2,60 3,00 volume akhir volume awal % Kadar air = x100% berat sampel 2,20-1,80 1. Kadar air = x100% = 7,99 % 5,003 2,60-2,20 2. Kadar air = x100% = 7,95 % 5,026 3,00-2,60 3. Kadar air = x100% = 7,94 % 5,035 7,99 % + 7,95 % + 7,94 % % Rata-rata kadar air = = 7,96 % 3

4 Lampiran 4. Perhitungan Kadar Sari Larut dalam Air Simplisia Kulit Batang Tanjung(Mimusopsi cortex) No. Berat sampel (g) Berat sari (g) 1. 5,008 0, ,014 0, ,007 0,017 berat sari (g) 100 % Kadar sari larut dalam air = x x 100% berat sampel (g) 20 0, Kadar sari larut dalam air = x x 100% = 1,40% 5, , Kadar sari larut dalam air = x x 100% = 1,40% 5, , Kadar sari larut dalam air = x x 100% = 1,70% 5, ,40% + 1,40% + 1,70% % Rata-rata kadar sari larut dalam air = = 1,50% 3

5 Lampiran 5. Perhitungan Kadar Sari Larut dalam Etanol SimplisiaKulit Batang Tanjung(Mimusopsi cortex) No. Berat sampel (g) Berat sari (g) 1. 5,008 0, ,012 0, ,007 0,031 berat sari (g) 100 % Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% berat sampel (g) 20 0, Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% = 2,29% 5, , Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% = 2,19% 5, Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% = 3,09% 5, ,29% + 2,19% + 3,09% % Rata-rata kadar sari larut dalam etanol = = 2,52% 3

6 Lampiran 6. Perhitungan Kadar Abu Total Simplisia Kulit Batang Tanjung(Mimusopsi cortex) No. Berat sampel (g) Berat abu (g) 1. 2,0062 0, ,0041 0, ,0032 0,0851 berat abu (g) % Kadar abu total = x 100% berat sampel (g) 0, Kadar abu total = x 100% = 3,63% 2,0062 0, Kadar abu total = x 100% = 4,52% 2,0041 0, Kadar abu total = x 100% = 4,24% 2,0032 3,63% + 4,52% + 4,24% % Rata-rata kadar abu total = = 4,13% 3

7 Lampiran 7. Perhitungan Kadar Abu Tidak Larut dalam Asam Simplisia kulit batang Tanjung(Mimusopsi cortex) No. Berat sampel (g) Berat abu (g) 1. 2,0047 0, ,0033 0, ,0109 0,0024 berat abu (g) % Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% berat sampel (g) 0, Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% = 0,13% 2,0062 0, Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% = 0,12% 2,0041 0, Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% = 0,11% 2,0032 % Rata-rata kadar abu tidak larut dalam asam = 0,13% + 0,12% + 0,11% 3 =0,12%

8 Lampiran 8. Rendemen Ekstrak Etanol Kulit Batang Tanjung Berat simplisia kering = 200 g Berat ekstrak Rendemen = =22,683 g BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB xx % = 2222, xx % =11,84%

9 Lampiran 9. Perhitungan Jumlah Sel pada hemositometer Jumlah sel total (A + B + C + D) = 300 sel Jumlah sel/ml : ssssss/mmmm = ssssss AA + ssssss BB + ssssss CC + ssssss DD Volume Panenan Sel : = 75 x 10 4 sel/ml VVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVV = JJJJJJJJJJJJ tttttttttt ssssss yyyyyyyy dddddddddddddddddddd JJJJJJJJJJJJ ssssss tttttttttttttttttt/mmmm = 1,33 ml di tambahkan media kultur hingga 10 ml untuk 1 plate.

10 Lampiran 10. Perhitungan Persen Sel Hidup Dari Berbagai Konsentrasi Larutan Uji Ekstrak Etanol Kulit Batang Tanjung(Mimusopsi cortex) No. Absorbansi Kontrol Sel (a) Absorbansi kontrol Media (b) 1 0,730 0, ,695 0, ,786 0,166 Rata-Rata 0,737 0,161 Rumus Perhitungan Persen Sel Hidup : Kadar Absorbansi (c) Rata-Rata % sel Hidup % sel Hidup (c) Rata-rata 500 0,312 0,276 0,322 0,303 26,79 21,82 25,16 24, ,274 0,292 0,394 0,320 20,14 24,81 36,77 27, ,440 0,368 0,392 0,400 49,21 38,99 36,45 41,55 62,5 0,564 0,457 0,566 0,529 70,93 55,60 64,52 63,68 31,25 0,634 0,624 0,624 0,627 83,19 82,59 73,87 79,88

11 Lampiran 11. Perhitungan nilai IC 50 Ekstrak Etanol Kulit Batang Tanjung (Mimusopsi cortex) menggunakan analisa Probit SPSS 17.0 Data Information Warnings Relative Median Potency Estimates are not displayed because there is no grouping variable in the model. N of Cases Valid 5 Rejected Missing 0 LOG Transform Cannot be Done Number of Responses > Number of Subjects 0 0 Control Group 0 Convergence Information Number of Iterations Optimal Solution Found PROBIT a 10 Yes Parameter Estimates 95% Confidence Interval Parameter Estimate Std. Error Z Sig. Lower Bound Upper Bound PRO konsentrasi ekstrak BIT a Intercept a. PROBIT model: PROBIT(p) = Intercept + BX (Covariates X are transformed using the base logarithm.) Chi-Square Tests Chi-Square df a Sig. PROBIT Pearson Goodness-of-Fit Test b a. Statistics based on individual cases differ from statistics based on aggregated cases. b. Since the significance level is less than.150, a heterogeneity factor is used in the calculation of confidence limits.

12 Cell Counts and Residuals konsentrasi Number of Observed Expected Number ekstrak Subjects Responses Responses Residual Probability PR OBI T Confidence Limits 95% Confidence Limits for konsentrasi ekstrak 95% Confidence Limits for log(konsentrasi ekstrak) b Probability Estimate Lower Bound Upper Bound Estimate Lower Bound Upper Bound PROBIT a

13 a. A heterogeneity factor is used. b. Logarithm base = 10.

14 Lampiran 12. Bagan Kerja Pembuatan Ekstrak Etanol Kulit Batang Tanjung (Mimusopsi cortex) 200 g serbuk simplisia Ditambahkan etanol 96%, biarkan selama 5 hari sambil sesekali diaduk Disaring Maserat Ampas Dicuci kembali dengan etanol 96% Dibiarkan 2 hari ditempat gelap dan Sejuk Dienaptuangkan Disaring Maserat Ampas Dipekatkan dengan rotary evaporator Ekstrak etanol

15 Lampiran 13. Bagan Pembuatan Media RPMI RPMISachet 2 g Hepes 2 g NaHCO 3 Dimasukkan kedalam erlenmeyer Ditambahkan 800 ml aquabidest steril Dihomogenkan dengan menggunakan stirer magnet Diatur ph 7,2 7,4 (HCl 1N atau NaOH 1N) Ditambahkan aquabidest steril samapai 1 l Dilakukan sterilisasi dengan penyaringan Ditampung dalam botol steril Diberi identitas pada botol media Disimpan pada suhu C Media RPMI

16 Lampiran 14. Bagan Pembuatan Media Kultur Lengkap (MK) Fetal Bovine Serum (FBS) (10%) Penisilin- Streptomisin (1%) Fungizone (amphotericin B) (0,5%) RPMI ad 100% Dicampur Diberi identitas pada botol MK Disimpan pada suhu C Media Kultur Lengkap (MK)

17 Lampiran 15. Bagan Penumbuhan Sel T47D Sel T47D Diambil dari tangki nitrogen atau freezer Diambil beberapa tetes Dimasukkan kedalam konikel yg berisi RPMI Disentrifuge 6000 rpm selama 5 menit Dibuang supernatan Ditambahkan 4 ml MK RPMI Di resuspensi hingga homogen Dimasukkan ke dalam flask Ditambahkan 5 ml MK kedalam setiap flask Dihomogenkan Diamati kondisi sel dengan mikroskop inverted Diberi identitas pada flask Sel T47D Disimpan dalam inkubator CO 2

18 Lampiran 16. Bagan Panen Sel T47D Sel T47D, alat, dan bahan Dipersiapkan dan dikondisikan Diamati apakah sel telah konfluen 80% Dibuang MK dari flask dengan mikropipet Dicuci sel 2x dengan PBS Ditambahkan 400 µl trypsine-edta 0,25% Diinkubasi dalam inkubator CO 2 selama 5 menit Ditambahkan 4 ml MK Di resuspensi dengan mikropipet Diamati sel dibawah mikroskop inverted Di resuspensi kembali jika masih ada sel yang menggerombol Ditransfer sel kedalam tabung konikel Sel PanenT47D

19 Lampiran 17. Bagan Penghitungan SelT47D Kultur Sel T47D Diambil 10µl panenan sel Dipipetkan kedalam hemositometer Dihitung jumlah sel dibawah mikroskop Jumlah Sel T47D

20 Lampiran 18. Bagan Pembuatan Larutan Uji Ekstrak etanol Ditimbang sebanyak 5 mg Dimasukkan kedalam polytube Dilarutkan dalam 50 µl DMSO Di vortex Dibuat pengenceran sampai diperoleh konsentrasi 500 µg/ml, 250 µg/ml, 125 µg/ml, 62,5 µg/ml, dan 31,25 µg/ml Larutan Uji

21 Lampiran 19. Bagan Pengujian Sitotoksik Sel T47D Ditanam pada microplate 96 sumuran dengan kepadatan 1 x 10 4 Diinkubasi selama 24 jam Dibuang medium Ditambahkan medium baru Ditambahkan larutan uji Diinkubasi selama 24 jam Dibuang media dan larutan uji setelah 24 jam Dicuci dengan PBS Ditambahkan 100 µl MK dan 10 µl MTT (5 mg/ml) Diinkubasi selama 4-6 jam Ditambahkan SDS (sebagai stopper) Dibungkus dengan aluminium foil Dibiarkan selama 1 malam Dibaca serapan dengan ELISA reader pada λ 595 nm Absorbansi Dihitung % sel hidup Dihitung IC 50 dengan analisa probit menggunakan SPSS 17 Nilai IC 50

22 Lampiran 20. Gambar Sel T47Dyang telah konfluen (dilihat di bawah mikroskop inverted dengan perbesaran 10x10)

23 Lampiran 21. Gambar Sel T47Ddalam kamar hitung (dilihat di bawah mikroskop inverted dengan perbesaran 10x10)

24 Lampiran 22. Gambar morfologi sel kanker (dilihat dengan mikroskop inverted dengan perbesaran 10x10) setelah pemberian ekstrak dari konsentrasi tertinggi hingga terendah Konsentrasi ekstrak 500 µg/ml Konsentrasi ekstrak 250 µg/ml Konsentrasi ekstrak 125 µg/ml Konsentrasi ekstrak 62,5 µg/ml Konsentrasi ekstrak 31,25 µg/ml

25 Lampiran 23. Gambar Microplate -96 sumuran yang berisi sel dan larutan uji

26 Lampiran 24. Gambar Mikroskop Inverted, Elisa Reader, dan Inkubator CO 2 Keterangan : Elisa Reader Keterangan : Mikroskop Inverted Keterangan : Inkubator CO 2

27 Glosarium Analisis Probit Jenisregresidigunakan untuk menganalisisvariabel responbinomial. Apoptosis Mekanisme biologi yang merupakan salah satu jenis kematian sel terprogram. Apoptosis digunakan oleh organisme multisel untuk membuang sel yang sudah tidak diperlukan oleh tubuh. Brine-Shrimp Lethality Bioassay Salah satu metode untuk menguji bahan-bahan yang bersifat sitotoksik. Metode ini menggunakan larva Artemia salina leach sebagai hewan coba. Cell Line (Sel kultur) Sel yang digunakan dalam penelitian yang dikembangkan dan ditumbuhkan/berploriferasi pada media kutur secara in vitro. Sel kultur dapat diambil dari jaringan asal ataupun memperbanyak sel yang sudah ada. Continous Cell Line Sekelompokselmorfologisseragam yangdapat diperbanyaksecara in vitrountukwaktu yang tidak tertentu. FBS(Fetal Serum): Bovine Serum yang umumnya digunakansebagai suplemen untukmedium pertumbuhanbasal dalamkultur sel Hemositometer Perangkat yang awalnya dirancang untuk penghitungan sel darah. Sekarang juga digunakan untuk menghitung jenis sel serta partikel mikroskopis lainnya. Hepes Kanker (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid ) buffer, yang berisi kedua kelompok terionisasi positif dan negatif, dimana kelompok amina sekunder dan tersier memberikan muatan positif dan muatan negatif yang ditawarkan oleh sulfonat dan gugus asam karboksilat. Istilah yang digunakanuntuk penyakitdi manasel-sel abnormalmembelahtanpa kontroldan mampumenyerang jaringan lain. Sel-sel kankerdapat menyebarke bagian lain daritubuh melaluidarah dan sistemgetah bening (National Cancer Institute)

28 Kemoterapi (chemotherapy) Penggunaan zat kimia untuk perawatan penyakit. Dalam penggunaan modernnya, istilah ini hampir merujuk secara eksklusif kepada obat sitostatik yang digunakan untuk merawat kanker Mitokondria Organel tempat berlangsungnya fungsi respirasiselmakhluk hidup, selain fungsi selular lain, seperti metabolisme asam lemak, biosintesispirimidina, homeostasiskalsium, transduksi sinyal selular dan penghasil energi berupa adenosina trifosfat pada lintasankatabolisme PBS(Phospate Saline) Proliferasi Buffer Larutan buffer yang biasa digunakan dalam penelitian biologi. Ini adalah berbasis air garam larutan yang mengandung natrium klorida, natrium fosfat, dan, dalam beberapa formulasi, klorida kalium dan fosfat kalium. Gugus fosfat buffer membantu mempertahankan ph yang konstan. Konsentrasi osmolaritas dan ion dari solusi biasanya cocok dengan tubuh manusia (isotonik). Fase sel saat mengalami pengulangan siklus sel tanpa hambatan Media Roswell Park MemorialInstitute (RPMI) Sel T47D Salah satu media yang banyak digunakan untuk menumbuhkan sel mamalia, terutama sel suspensi, contohnya sel limfosit manusia. Selain itu, media ini juga dapat digunakan untuk menumbuhkan sel hybrid. Media ini berwarna merah karena adanya phenol red sebagai indikator ph untuk mendeteksi terjadinya perubahan ph akibat metabolisme sel. Jika sisa metabolisme sudah terakumulasi di media, maka warna media akan berubah menjadi kuning. Hal ini menandakan bahwa sel harus dikultur di media baru agar sel tidak mati akibat sisa metabolisme tersebut. Selain itu, RPMI 1640 mengandungcacl2,ca(no3)2.4h2o, KCl,MgSOz7H2O, NaCl, NaHCO, Na2HPO4.7H2O, glukosa, Glutathione, phenol red, berbagai asam amino (L-aspargie, L-Cystine, tirosin, valin, dan sebagainya), serta vitamin (biotin, pantotenat, kolin) Continous cell line yang diisolasi dari jaringan tumor duktal payudara seorang wanita berusia 54 tahun.

29 Sitotoksik Subkultur Zat/obat yang merusak dan membunuh sel normal dan sel kanker, serta digunakan untuk menghambat pertumbuhan tumor malignan. Pemindahan sel, jaringan atau organ dari media lama ke media baru, baik media itu sama maupun berlainan dengan media semula, dengan tujuan memperoleh pertumbuhan baru ataupun perkembangan dari inokulum. Uji Sitotoksik Salah satu pengembangan metode untuk memprediksi keberadaan senyawa yang bersifat toksik pada sel. Viabilitas sel Jumlah sel-sel yang mampu berkembang dalam medium kultur.