Pemantapan Mutu Reagen Diagnostik dan Alat Pengukur. 1. Serum kontrol baik precinorm maupun precipat, masing masing ditambah

Transkripsi

1 Lampiran 1 Pemantapan Mutu Reagen Diagnostik dan Alat Pengukur Dilakukan dengan serum kontrol secara enzimatik, dengan cara sebagai berikut : 1. Serum kontrol baik precinorm maupun precipat, masing masing ditambah aqua bidestilata sebanyak ml. 2. Dicampur sampai homogen dengan cara merotasi tabung reaksi selama 30 menit 3. Kemudian digunakan untuk penetapan mutu reagen diagnostik dan alat pengukur 4. Kadar kolesterol total, trigliserida dan kolesterol HDL masing masing serum kontrol ditentukan secara enzimatis. Nilai serum kontrol yang diperkenankan adalah : Kolesterol Normal : mg/dl, didapatkan hasil 96 mg/dl Patologis : mg/dl, didapatkan hasil 209 mg/dl Trigliserida Normal : mg/dl, didapatkan hasil 108 mg/dl Patologis : mg/dl, didapatkan hasil 221 mg/dl

2 Lampiran 2 Cara Pemeriksaan Kolesterol Total, kolesterol-hdl dan kolesterol-ldl Sebelum dilakukan pemeriksaan, alat dan reagen dilakukan pengendalian mutu dengan menggunakan serum kontrol yang nilainya normal dan abnormal. Apabila nilai kontrol serum yang normal dan abnormal masuk dalam nilai rentang yang diperkenankan, maka reagen dan alat yang akan digunakan dalam penelitian cukup baik. Setelah itu baru dilakukan penetapan kadar kolesterol total, kolesterol- HDL, dan trigliserida pada serum darah menggunakan pereaksi kit dengan metode enzimatik kalorimetri secara CHOD PAP menurut Siedel atau Trinder. Sedangkan untuk penetapan kadar kolesterol-ldl dilakukan dengan cara perhitungan. Pemeriksaan Kolesterol Panjang gelombang : Hg 46 nm Spektrofotometer : 00 nm Kuvet : diameter dalam 1 cm Suhu inkubasi : 37 C Blanko Sampel atau standar Sampel atau standar - 10 μl Aqua bidestilata 10 μl - Reagen 1000 μl 1000 μl Campur, inkubasi selama 10 menit pada suhu 37 C. Baca absorbansi terhadap blanko dalam waktu 1 jam. Kalkulasi Kolesterol ( mg/dl ) = A Sampel x Konsentrasi standar ( mg/dl )

3 A Standar Faktor konversi Kolesterol ( mg/dl ) x 0,0286 = Kolesterol ( mmol/l ) Lampiran 3 Pemeriksaan Kolesterol-HDL Persiapan Sampel Presipitasi dengan cara makro Pipet ke dalam tabung sentrifus Makro Sampel 00 μl Reagen presipitasi HDL 1000 μl Campur dan biarkan selama 10 menit pada suhu kamar dan sentrifugasikan selama 10 menit pada 4000 rpm, atau selama 2 menit pada rpm Prosedur Pemeriksaan Panjang gelombang : Hg 46 nm Spektrofotometer : 00 nm Kuvet : diameter dalam 1 cm Suhu inkubasi : 37 C Pipet ke dalam tabung Blanko Sampel Aqua bidestilata 100 μl - Supernatan HDL μl Larutan Reagen kolesterol 1000 μl 1000 μl Campur dan inkubasikan selama menit pada suhu 37 C, kemudian baca absorbansi sampel ( A sampel ) terhadap blanko dalam waktu 1 jam Kalkulasi HDL ( mg/dl ) = 280 x A Sampel

4 Lampiran 4 Pemeriksaan Kolesterol-LDL dengan cara perhitungan ( indirect ) Dalam mg/ dl LDL Kolesterol = kolesterol total x y Keterangan : X = trigliserida / Y = HDL Dalam mmol/ L LDL kolesterol = kolesterol total x y Keterangan : X = trigliserida / 2,2 Y = HDL

5 Lampiran Cara Pemeriksaan Trigliserida Persiapan Sampel Volume darah yang diambil sekitar 1 ml dimasukkan ke dalam tabung sentrifus yang bersih dan kering, kemudian didiamkan pada suhu kamar ± 30 menit. Selanjutnya disentrifus selama menit dengan kecepatan rpm. Serum yang diperoleh digunakan untuk penentuan kadar trigliserida. Prosedur Pemeriksaan Panjang gelombang : 00 nm, Hg 46 nm Kuvet : 1 cm Temperatur : 37 C Pengukuran terhadap blanko reagen Blanko Sampel atau standar Sampel atau standar - 10 μl Aqua bidestilata 10 μl - Reagen 1000 μl 1000 μl Campur, inkubasi selama 10 menit pada suhu 37 C. Baca absorbansi terhadap blanko dalam waktu 1 jam. Kalkulasi Trigliserida ( mg/ dl ) = A Sampel A Standar x Konsentrasi standar (mg/dl)

6 Faktor konversi Trigliserida ( mg/dl ) x 0,01126 = Trigliserida ( mmol/l ) Lampiran 6 Penjelasan Rumus Perhitungan Anava Rancangan Rambang Lugas Rumus Anava Rancangan Rambang Lugas digunakan untuk membedakan antar perlakuan yang lebih dari dua yang mana setiap kelompok dihitung dengan harga n, ΣX, ΣX², X, kemudian dihitung nilai : N = Jumlah Subjek Seluruhnya = n1 + n2 + n3 + n J = Ji = Jumlah Data Total = ΣX1 + ΣX2 + ΣX3 + ΣX Y²IJ = Jumlah Kuadrat Total = ΣX²1 + ΣX²2 + ΣX²3 + ΣX² J²I = Jumlah Kuadrat dari J = ( ΣX1 + ΣX2 + ΣX3 + ΣX4 +...)² JKT = Jumlah Kuadrat Total = ΣY²IJ - J² / N JKPy = Jumlah Kuadrat Perlakuan JKEy = Jumlah Kuadrat Dalam = ΣJ²I / n - J² / N = JKT JKPy dbt = Derajat Bebas Total = N 1 dbpy = Derajat Bebas Perlakuan = P 1 dbey = Derajat Bebas Dalam = dbt dbpy RJKPy = Rataan Jumlah Kuadrat Perlakuan = JKPy / dbpy RJKEy = Rataan Jumlah Kuadrat Dalam = JKEy / dbey Fr = Fratio = RJKPy / RJKEy

7 Keterangan : n = Jumlah Subjek Dalam Kelompok N = Jumlah Perlakuan Lampiran 7 Perhitungan Anava Kadar Kolesterol Total Tikus pada Hari ke 0 Perlakuan No. K E1 E2 E3 P Jumlah X 6,4 70,4 66, ,6 n 2 JI J²I ΣY²JI P = N = 2 n = db (T) = N 1 = 24 db (Py) = P - 1 = 4

8 db (Ey) = db (T) db (Py) = 24 4 = 20 J = Σ J I = 1704 Σ J² I = Σ Y² I J = JK (T) = Σ Y² I J - J²/ N = 298,36 JK (Py) = Σ J² I / n - J²/ N = 96,6 JK (Ey) = JK (T) JK (Py) = 2888,8 RJK (Py) = JK (Py) / db (Py) = 24,14 RJK (Ey) = JK (Ey) / db (Ey) = 144,44 F hitung = RJK (Py) / RJK (Ey) = 0,1671 Keterangan : K : Kelompok kontrol diberikan PGA 1 ml / 100 gram BB P : Kelompok pembanding diberikan kombinasi simvastatin dan fenofibrat dengan dosis 0,9 mg/kgbb dan 18 mg/kgbb E1 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1 g / Kg BB E2 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1, g / Kg BB E3 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 2 g / Kg BB Anava Kadar Kolesterol Total Tikus pada Hari ke 0 SV JK Db RJK F hitung Perlakuan (Py) 96,6 4 24,14 0,1671 Dalam (Ey) 2888, ,44 Total (T) 298,36 24

9 Kesimpulan : F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,0 adalah 2,87 F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,01 adalah 4,43 Jika F hitung < F Tabel, maka dapat disimpulkan sampel yang digunakan homogen. Lampiran 8 Perhitungan Anava Kadar Kolesterol Total Tikus pada Hari ke 1 Perlakuan No. K E1 E2 E3 P Jumlah X 108,4 103,4 102,8 100,6 104 n 2

10 JI J²I ΣY²JI P = N = 2 n = db (T) = N 1 = 24 db (Py) = P - 1 = 4 db (Ey) = db (T) db (Py) = 24 4 = 20 J = Σ J I = 296 Σ J² I = Σ Y² I J = JK (T) = Σ Y² I J - J²/ N = 911,36 JK (Py) = Σ J² I / n - J²/ N = 162,96 JK (Ey) = JK (T) JK (Py) = 748,4 RJK (Py) = JK (Py) / db (Py) = 40,74 RJK (Ey) = JK (Ey) / db (Ey) = 37,42 F hitung = RJK (Py) / RJK (Ey) = 1,0887 Keterangan : K : Kelompok kontrol diberikan PGA 1 ml / 100 gram BB P : Kelompok pembanding diberikan kombinasi simvastatin dan fenofibrat dengan dosis 0,9 mg/kgbb dan 18 mg/kgbb E1 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1 g / Kg BB E2 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1, g / Kg BB

11 E3 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 2 g / Kg BB Anava Kadar Kolesterol Total Tikus pada Hari ke 1 SV JK Db RJK F hitung Perlakuan (Py) 162, ,74 1,0887 Dalam (Ey) 748, ,42 Total (T) 911,36 24 Kesimpulan : F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,0 adalah 2,87 F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,01 adalah 4,43 Jika F hitung < F Tabel, maka tidak ada perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan. Perhitungan Anava Kadar Kolesterol Total Tikus pada Hari ke 30 Lampiran 9 Perlakuan No. K E1 E2 E3 P Jumlah

12 X n JI J²I ΣY²JI P = , , , , , N = 2 n = db (T) = N 1 = 24 db (Py) = P - 1 = 4 db (Ey) = db (T) db (Py) = 24 4 = 20 J = Σ J I = 233 Σ J² I = Σ Y² I J = JK (T) = Σ Y² I J - J²/ N = 2470,64 JK (Py) = Σ J² I / n - J²/ N = 183,44 JK (Ey) = JK (T) JK (Py) = 63,2 RJK (Py) = JK (Py) / db (Py) = 48,86 RJK (Ey) = JK (Ey) / db (Ey) = 31,76 F hitung = RJK (Py) / RJK (Ey) = 14,4477 Keterangan :

13 K : Kelompok kontrol diberikan PGA 1 ml / 100 gram BB P : Kelompok pembanding diberikan kombinasi simvastatin dan fenofibrat dengan dosis 0,9 mg/kgbb dan 18 mg/kgbb E1 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1 g / Kg BB E2 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1, g / Kg BB E3 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 2 g / Kg BB Anava Kadar Kolesterol Total Tikus pada Hari ke 30 SV JK Db RJK F hitung Perlakuan (Py) 183, ,86 14,4477 Dalam (Ey) 63, ,76 Total (T) 2470,64 24 Kesimpulan : F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,0 adalah 2,87 F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,01 adalah 4,43 Jika F hitung F Tabel, maka ada perbedaan yang sangat bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan. Lampiran 10

14 Uji HSD Kadar Kolesterol Total Tikus Hari ke 30 Mean K E1 E2 E3 P 104,2 100,4 9,8 90,6 79,6 104,2 0 3,8 8,4 13,6 24,6 100,4 0 4,6 9,8 20,8 9,8 0,2 16,2 90, ,6 0 Hasil Perhitungan Uji HSD Kadar Kolesterol Total Tikus pada Hari ke 30 No. Perlakuan Mean HSD % HSD 1 % Kesimpulan 1. K Vs E1 3,8 10, TB 2. K Vs E2 8,4 10, TB 3. K Vs E3 13,6 10, ,332 SB 4. K Vs P 24,6 10, ,332 SB. E1 Vs E2 4,6 10, TB 6. E1 Vs E3 9,8 10, TB 7. E1 Vs P 20,8 10, ,332 SB 8. E2 Vs E3,2 10, TB 9. E2 Vs P 16,2 10, ,332 SB 10. E3 Vs P 11 10, ,332 B

15 HSD % = q ( 0,0; p; dbey ) RJKEy / n = 4,23 31,76/ = 10,6609 HSD 1 % = q ( 0,01; p; dbey ) RJKEy / n =,29 31,76/ = 13,332 Lampiran 11 Perhitungan Persamaan Regresi Persen Penurunan Kadar Kolesterol Total Rata rata Perhitungan Persamaan Regresi Kadar Kolesterol Total Rata rata X Y XY X² Y² 1 1, 2 2,9014 6,8093 9,9404 2, , , ,2 4 8, , ,8116 Jumlah 4, 19,611 32,9961 7,2 13,963 Keterangan : X : Dosis ekstrak daun murbei Y : Persen penurunan kadar kolesterol total r = NΣXY ( Σ X ) ( Σ Y ) N Σ X² - ( Σ X )² N Σ Y² - ( Σ Y )² r hitung = 0,9979

16 r tabel (p 0,0) = 0,997 Perhitungan Anava Kadar Trigliserida Tikus pada Hari ke 0 Lampiran 12 Perlakuan No. K E1 E2 E3 P Jumlah X n JI J²I ΣY²JI P = 64, , , ,

17 N = 2 n = db (T) = N 1 = 24 db (Py) = P - 1 = 4 db (Ey) = db (T) db (Py) = 24 4 = 20 J = Σ J I = 113 Σ J² I = Σ Y² I J = JK (T) = Σ Y² I J - J²/ N = 8876,24 JK (Py) = Σ J² I / n - J²/ N = 249,84 JK (Ey) = JK (T) JK (Py) = 8626,4 RJK (Py) = JK (Py) / db (Py) = 62,46 RJK (Ey) = JK (Ey) / db (Ey) = 431,32 F hitung = RJK (Py) / RJK (Ey) = 0,1448 Keterangan : K : Kelompok kontrol diberikan PGA 1 ml / 100 gram BB P : Kelompok pembanding diberikan kombinasi simvastatin dan fenofibrat dengan dosis 0,9 mg/kgbb dan 18 mg/kgbb E1 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1 g / Kg BB E2 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1, g / Kg BB E3 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 2 g / Kg BB Anava Kadar Trigliserida Tikus pada Hari ke 0

18 SV JK Db RJK F hitung Perlakuan (Py) 249, ,46 0,1448 Dalam (Ey) 8626, ,32 Total (T) 8876,24 24 Kesimpulan : F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,0 adalah 2,87 F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,01 adalah 4,43 Jika F hitung < F Tabel, maka dapat disimpulkan sampel yang digunakan homogen. Perhitungan Anava Kadar Trigliserida Tikus pada Hari ke 1 Lampiran 13 Perlakuan No. K E1 E2 E3 P Jumlah

19 X n JI J²I ΣY²JI P = 102, , , N = 2 n = db (T) = N 1 = 24 db (Py) = P - 1 = 4 db (Ey) = db (T) db (Py) = 24 4 = 20 J = Σ J I = 293 Σ J² I = Σ Y² I J = JK (T) = Σ Y² I J - J²/ N = 97,04 JK (Py) = Σ J² I / n - J²/ N = 33,84 JK (Ey) = JK (T) JK (Py) = 63,2 RJK (Py) = JK (Py) / db (Py) = 8,46 RJK (Ey) = JK (Ey) / db (Ey) = 28,16 F hitung = RJK (Py) / RJK (Ey) = 0,3004 Keterangan : K : Kelompok kontrol diberikan PGA 1 ml / 100 gram BB P : Kelompok pembanding diberikan kombinasi simvastatin dan fenofibrat dengan dosis 0,9 mg/kgbb dan 18 mg/kgbb E1 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1 g / Kg BB E2 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1, g / Kg BB

20 E3 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 2 g / Kg BB Anava Kadar Trigliserida Tikus pada Hari ke 1 SV JK Db RJK F hitung Perlakuan (Py) 33,84 4 8,46 0,3004 Dalam (Ey) 63, ,16 Total (T) 97,04 24 Kesimpulan : F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,0 adalah 2,87 F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,01 adalah 4,43 Jika F hitung < F Tabel, maka tidak ada perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan. Perhitungan Anava Kadar Trigliserida Tikus pada Hari ke 30 Lampiran 14

21 Perlakuan No. K E1 E2 E3 P Jumlah X n JI J²I ΣY²JI P = N = 2 n = 103, db (T) = N 1 = 24 db (Py) = P - 1 = 4 100, db (Ey) = db (T) db (Py) = 24 4 = 20 J = Σ J I = 2442 Σ J² I = Σ Y² I J = JK (T) = Σ Y² I J - J²/ N = 10,44 JK (Py) = Σ J² I / n - J²/ N = 613,84 JK (Ey) = JK (T) JK (Py) = 441,6 RJK (Py) = JK (Py) / db (Py) = 13,46 RJK (Ey) = JK (Ey) / db (Ey) = 22,08 F hitung = RJK (Py) / RJK (Ey) = 6,902 99, ,

22 Keterangan : K : Kelompok kontrol diberikan PGA 1 ml / 100 gram BB P : Kelompok pembanding diberikan kombinasi simvastatin dan fenofibrat dengan dosis 0,9 mg/kgbb dan 18 mg/kgbb E1 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1 g / Kg BB E2 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1, g / Kg BB E3 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 2 g / Kg BB Anava Kadar Trigliserida Tikus pada Hari ke 30 SV JK Db RJK F hitung Perlakuan (Py) 613, ,46 6,902 Dalam (Ey) 441, ,08 Total (T) 10,44 24 Kesimpulan : F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,0 adalah 2,87 F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,01 adalah 4,43 Jika F hitung F Tabel, maka ada perbedaan yang sangat bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan.

23 Lampiran 1 Uji HSD Kadar Trigliserida Tikus Hari ke 30 Mean K E1 E2 E3 P 103,2 100,8 99,6 9, ,2 0 2,4 3,6 7,4 14,2 100,8 0 1,2 11,8 99,6 0 3,8 10,6 9,8 0 6, Hasil Perhitungan Uji HSD Kadar Trigliserida Tikus pada Hari ke 30 No. Perlakuan Mean HSD % HSD 1 % Kesimpulan K Vs E1 K Vs E2 K Vs E3 K Vs P E1 Vs E2 E1 Vs E3 E1 Vs P E2 Vs E3 E2 Vs P E3 Vs P 2,4 3,6 7,4 14,2 1,2 11,8 3,8 10,6 6,8 8,8890 8,8890 8,8890 8,8890 8,8890 8,8890 8,8890 8,8890 8,8890 8, , , , TB TB TB SB TB TB SB TB B TB HSD % = q ( 0,0; p; dbey ) RJKEy / n = 4,23 22,08 / = 8,8890 HSD 1 % = q ( 0,01; p; dbey ) RJKEy / n =,29 22,08 / = 11,1166

24 Lampiran 16 Perhitungan Persamaan Regresi Persen Penurunan Kadar Trigliserida Rata rata Perhitungan Persamaan Regresi Kadar Trigliserida Rata rata X Y XY X² Y² 1 1, 2 2,14 4,2308 6,9903 2,14 6, , ,2 4 6, , ,8643 Jumlah 4, 13,736 22,8413 7,2 73,0867 Keterangan : X : Dosis ekstrak daun murbei Y : Persen penurunan kadar trigliserida r = NΣXY ( Σ X ) ( Σ Y ) N Σ X² - ( Σ X )² N Σ Y² - ( Σ Y )² r hitung = 0,9909 r tabel ( p 0,0 ) = 0,997

25 Perhitungan Anava Kadar Kolesterol-HDL Tikus pada Hari ke 0 Lampiran 17 Perlakuan No. K E1 E2 E3 P Jumlah ,7 44,7 29,4 1, ,1 4,3 47,1 37,6 6,3 6 61,4,3 31, 29,6 9, 1,9 1,4 48,2 3,8 71,7 61,1 1,9 18,2 26,8 X n JI J²I ΣY²JI P = N = 2 n = 43, ,78 db (T) = N 1 = 24 db (Py) = P - 1 = 4 47,48 237,4 638, ,76 46,76 233,8 4662, ,46 49,36 246, , ,7 4,94 229,7 2762, , , ,3 8447,89

26 db (Ey) = db (T) db (Py) = 24 4 = 20 J = Σ J I = 116,7 Σ J² I = ,3 Σ Y² I J = 8447,89 JK (T) = Σ Y² I J - J²/ N = 4093,63 JK (Py) = Σ J² I / n - J²/ N = 89,2 JK (Ey) = JK (T) JK (Py) = 4004,38 RJK (Py) = JK (Py) / db (Py) = 22,31 RJK (Ey) = JK (Ey) / db (Ey) = 200,22 F hitung = RJK (Py) / RJK (Ey) = 0,1114 Keterangan : K : Kelompok kontrol diberikan PGA 1 ml / 100 gram BB P : Kelompok pembanding diberikan kombinasi simvastatin dan fenofibrat dengan dosis 0,9 mg/kgbb dan 18 mg/kgbb E1 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1 g / Kg BB E2 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1, g / Kg BB E3 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 2 g / Kg BB Anava Kadar Kolesterol-HDL Tikus pada Hari ke 0 SV JK Db RJK F hitung Perlakuan (Py) 89,2 4 22,31 0,1114 Dalam (Ey) 4004, ,22 Total (T) 4093,63 24

27 Kesimpulan : F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,0 adalah 2,87 F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,01 adalah 4,43 Jika F hitung < F Tabel, maka dapat disimpulkan sampel yang digunakan homogen. Perhitungan Anava Kadar Kolesterol-HDL Tikus pada Hari ke 1 Lampiran 18 Perlakuan No. K E1 E2 E3 P Jumlah , 42,2 3,1 43,1 34,9 38, ,8 36,2 31,3 48,2 38,3 41,7 30,6 30,1 47,9 3 34,1 46,2 29,8 4,9 48,3 41,8 31, 34,1 X n JI J²I ΣY²JI P = N = 2 n = 38,96 194, , ,72 39,88 199, , ,98 37,78 188,9 3683, ,39 38, ,7 40,32 201, , , , ,79

28 db (T) = N 1 = 24 db (Py) = P - 1 = 4 db (Ey) = db (T) db (Py) = 24 4 = 20 J = Σ J I = 977,7 Σ J² I = ,17 Σ Y² I J = 39207,79 JK (T) = Σ Y² I J - J²/ N = 971,89 JK (Py) = Σ J² I / n - J²/ N = 20,4 JK (Ey) = JK (T) JK (Py) = 91,3 RJK (Py) = JK (Py) / db (Py) =,14 RJK (Ey) = JK (Ey) / db (Ey) = 47,7 F hitung = RJK (Py) / RJK (Ey) = 0,1081 Keterangan : K : Kelompok kontrol diberikan PGA 1 ml / 100 gram BB P : Kelompok pembanding diberikan kombinasi simvastatin dan fenofibrat dengan dosis 0,9 mg/kgbb dan 18 mg/kgbb E1 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1 g / Kg BB E2 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1, g / Kg BB E3 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 2 g / Kg BB Anava Kadar Kolesterol-HDL Tikus pada Hari ke 1 SV JK Db RJK F hitung Perlakuan (Py) 20,4 4,14 0,1081 Dalam (Ey) 91, ,7

29 Total (T) 971,89 24 Kesimpulan : F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,0 adalah 2,87 F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,01 adalah 4,43 Jika F hitung < F Tabel, maka tidak ada perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan. Perhitungan Anava Kadar Kolesterol-HDL Tikus pada Hari ke 30 Lampiran 19 Perlakuan No. K E1 E2 E3 P Jumlah ,7 41, 34, ,2 39, 4,1 48, ,4 47,6 36,2 46,3 37,3 38,1 2,2 46,1 36,9 4 39,8,3 4,1 0,4 47,8 49 X n JI J²I ΣY²JI P = 37,4 187,7 3231, ,67 41,06 20, ,09 863,71 41,1 20, 42230,2 862, ,7 1,32 26,6 6843, , , , ,77

30 N = 2 n = db (T) = N 1 = 24 db (Py) = P - 1 = 4 db (Ey) = db (T) db (Py) = 24 4 = 20 J = Σ J I = 107,1 Σ J² I = 23383,19 Σ Y² I J = 47241,77 JK (T) = Σ Y² I J - J²/ N = 1008,17 JK (Py) = Σ J² I / n - J²/ N = 37,04 JK (Ey) = JK (T) JK (Py) = 471,13 RJK (Py) = JK (Py) / db (Py) = 134,26 RJK (Ey) = JK (Ey) / db (Ey) = 23,6 F hitung = RJK (Py) / RJK (Ey) =,6986 Keterangan : K : Kelompok kontrol diberikan PGA 1 ml / 100 gram BB P : Kelompok pembanding diberikan kombinasi simvastatin dan fenofibrat dengan dosis 0,9 mg/kgbb dan 18 mg/kgbb E1 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1 g / Kg BB E2 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1, g / Kg BB E3 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 2 g / Kg BB Anava Kadar Kolesterol-HDL Tikus pada Hari ke 30 SV JK Db RJK F hitung

31 Perlakuan (Py) 37, ,26,6986 Dalam (Ey) 471, ,6 Total (T) 1008,17 24 Kesimpulan : F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,0 adalah 2,87 F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,01 adalah 4,43 Jika F hitung F Tabel, maka ada perbedaan yang sangat bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan. Lampiran 20 Uji HSD Kadar Kolesterol-HDL Tikus Hari ke 30 Mean K E1 E2 E3 P 37,4 41,06 41,1 44 1,32 37,4 0 3,2 3,6 6,46 13,78 41,06 0 0,04 2,94 10,26 41,1 0 2,9 10,22

32 44 1,32 0 7,32 0 Hasil Perhitungan Uji HSD Kadar Kolesterol-HDL Tikus pada Hari ke 30 No. Perlakuan Mean HSD % HSD 1 % Kesimpulan 1. K Vs E1 3,2 9, TB 2. K Vs E2 3,6 9, TB 3. K Vs E3 6,46 9, TB 4. K Vs P 13,78 9, ,4831 SB. E1 Vs E2 0,04 9, TB 6. E1 Vs E3 2,94 9, TB 7. E1 Vs P 10,26 9, ,4831 SB 8. E2 Vs E3 2,9 9, TB 9. E2 Vs P 10,22 9, ,4831 SB 10. E3 Vs P 7,32 9, TB HSD % = q ( 0,0; p; dbey ) RJKEy / n = 4,23 23,6 / = 9,1821 HSD 1 % = q ( 0,01; p; dbey ) RJKEy / n =,29 23,6 / = 11,4831

33 Lampiran 21 Perhitungan Persamaan Regresi Persen Peningkatan Kadar Kolesterol-HDL Rata rata Perhitungan Persamaan Regresi Kadar Kolesterol-HDL Rata rata X Y XY X² Y² 1 1, 2 2,989 8, ,9896 2,989 13, , ,2 4 8,71 77, ,709 Jumlah 4. 2, ,1197 7,2 281,497 Keterangan : X : Dosis ekstrak daun murbei Y : Persen penurunan kadar kolesterol-hdl r = NΣXY ( Σ X ) ( Σ Y ) N Σ X² - ( Σ X )² N Σ Y² - ( Σ Y )² r = 0,9989 r tabel ( p 0,0 ) = 0,997

34 Perhitungan Anava Kadar Kolesterol-LDL Tikus pada Hari ke 0 Lampiran 22 Perlakuan No. K E1 E2 E3 P Jumlah ,3 41,2 18,8 18,9 19,2 22,2 21,1 37, 26,1 20,7 19,2 21,3 19,8 39,1 17,8 24, ,1 22,3 13,7 2,7 23,8 26, 20,3 X n JI J²I ΣY²JI P = N = 2 n = 23,84 119, ,64 324,8 db (T) = N 1 = 24 db (Py) = P - 1 = 4 2,22 126,1 1901, ,1 db (Ey) = db (T) db (Py) = 24 4 = 20 J = Σ J I = 88,2 Σ J² I = 6937,7 24,02 120, , ,67 22,6 112, ,84 283, , ,2 6937, ,06

35 Σ Y² I J = 14933,06 JK (T) = Σ Y² I J - J²/ N = 1093,89 JK (Py) = Σ J² I / n - J²/ N = 32,37 JK (Ey) = JK (T) JK (Py) = 1061,2 RJK (Py) = JK (Py) / db (Py) = 8,09 RJK (Ey) = JK (Ey) / db (Ey) = 3,08 F hitung = RJK (Py) / RJK (Ey) = 0,124 Keterangan : K : Kelompok kontrol diberikan PGA 1 ml / 100 gram BB P : Kelompok pembanding diberikan kombinasi simvastatin dan fenofibrat dengan dosis 0,9 mg/kgbb dan 18 mg/kgbb E1 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1 g / Kg BB E2 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1, g / Kg BB E3 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 2 g / Kg BB Anava Kadar Kolesterol-LDL Tikus pada Hari ke 0 SV JK Db RJK F hitung Perlakuan (Py) 32,37 4 8,09 0,124 Dalam (Ey) 1061,2 20 3,08 Total (T) 1093,89 24 Kesimpulan : F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,0 adalah 2,87 F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,01 adalah 4,43

36 Jika F hitung < F Tabel, maka dapat disimpulkan sampel yang digunakan homogen. Perhitungan Anava Kadar Kolesterol-LDL Tikus pada Hari ke 1 Lampiran 23 Perlakuan No. K E1 E2 E3 P Jumlah ,8 41,7 4,8 39,2,3 39,9 36,6 32,7 44, 4,1 31,4 48,9 42,4 49,2 43,2 33,1 0,3 40,9 30,8 1 34, 36, 36,8,8 40,8 X n JI J²I ΣY²JI P = N = 2 n = 4,76 228,8 2349, , db (T) = N 1 = 24 db (Py) = P - 1 = 4 41,6 207, , ,92 db (Ey) = db (T) db (Py) = 24 4 = 20 43,02 21, , ,81 41,22 206, , ,1 40,88 204, ,36 86, , , ,4

37 J = Σ J I = 1062,2 Σ J² I = 22604,86 Σ Y² I J = 46494,4 JK (T) = Σ Y² I J - J²/ N = 1363,6 JK (Py) = Σ J² I / n - J²/ N = 80,22 JK (Ey) = JK (T) JK (Py) = 1283,43 RJK (Py) = JK (Py) / db (Py) = 20,06 RJK (Ey) = JK (Ey) / db (Ey) = 64,17 F hitung = RJK (Py) / RJK (Ey) = 0,3126 Keterangan : K : Kelompok kontrol diberikan PGA 1 ml / 100 gram BB P : Kelompok pembanding diberikan kombinasi simvastatin dan fenofibrat dengan dosis 0,9 mg/kgbb dan 18 mg/kgbb E1 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1 g / Kg BB E2 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1, g / Kg BB E3 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 2 g / Kg BB Anava Kadar Kolesterol-LDL Tikus pada Hari ke 1 SV JK Db RJK F hitung Perlakuan (Py) 80, ,06 0,3126 Dalam (Ey) 1283, ,17 Total (T) 1363,6 24 Kesimpulan :

38 F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,0 adalah 2,87 F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,01 adalah 4,43 Jika F hitung < F Tabel, maka tidak ada perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan. Perhitungan Anava Kadar Kolesterol-LDL Tikus pada Hari ke 30 Lampiran 24 Perlakuan No. K E1 E2 E3 P Jumlah , 39,7 47, 36,6 49,4 36, 38, 28,4 42,6 49,6 28,2 46, 3,2 39,4 33,2 2 34, 32,1 2,8 3,8 17,2 21,2 20, 2,8 19,8 X n JI J²I ΣY²JI P = N = 2 n = 44,4 222,7 499, ,1 db (T) = N 1 = 24 39,12 19,6 3829,36 789,98 36, 182, 33306,2 681,13 30,64 13, , ,9 20,9 104, 10920,2 2223, , 11, ,73

39 db (Py) = P - 1 = 4 db (Ey) = db (T) db (Py) = 24 4 = 20 J = Σ J I = 88, Σ J² I = 11,39 Σ Y² I J = 3182,73 JK (T) = Σ Y² I J - J²/ N = 2344,84 JK (Py) = Σ J² I / n - J²/ N = 1629,39 JK (Ey) = JK (T) JK (Py) = 71,4 RJK (Py) = JK (Py) / db (Py) = 407,3 RJK (Ey) = JK (Ey) / db (Ey) = 3,77 F hitung = RJK (Py) / RJK (Ey ) = 11,3880 Keterangan : K : Kelompok kontrol diberikan PGA 1 ml / 100 gram BB P : Kelompok pembanding diberikan kombinasi simvastatin dan fenofibrat dengan dosis 0,9 mg/kgbb dan 18 mg/kgbb E1 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1 g / Kg BB E2 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 1, g / Kg BB E3 : Kelompok tikus putih yang diberikan ekstrak daun murbei 2 g / Kg BB Anava Kadar Kolesterol-LDL Tikus pada Hari ke 30 SV JK Db RJK F hitung Perlakuan (Py) 1629, ,3 11,3880 Dalam (Ey) 71,4 20 3,77 Total (T) 2344,84 24

40 Kesimpulan : F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,0 adalah 2,87 F Tabel ( 4; 20 ) pada p = 0,01 adalah 4,43 Jika F hitung F Tabel, maka ada perbedaan yang sangat bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan. Lampiran 2 Uji HSD Kadar Kolesterol-LDL Tikus Hari ke 30 Mean K E1 E2 E3 P 44,4 39,12 36, 30,64 20,9 44,4 0,42 8,04 13,9 23,64 39,12 0 2,62 8,48 18,22 36, 0,86 1,6 30,64 0 9,74 20,9 0

41 Hasil Perhitungan Uji HSD Kadar Kolesterol- LDL Tikus pada Hari ke 30 No. Perlakuan Mean HSD % HSD 1 % Kesimpulan 1. K Vs E1,42 11, TB 2. K Vs E2 8,04 11, TB 3. K Vs E3 13,9 11, ,1491 B 4. K Vs P 23,64 11, ,1491 SB. E1 Vs E2 2,62 11, TB 6. E1 Vs E3 8,48 11, TB 7. E1 Vs P 18,22 11, ,1491 SB 8. E2 Vs E3,86 11, TB 9. E2 Vs P 1,6 11, ,1491 SB 10. E3 Vs P 9,74 11, TB HSD % = q ( 0,0; p; dbey ) RJKEy / n = 4,23 3,77 / = 11,4477 HSD 1 % = q ( 0,01; p; dbey ) RJKEy / n =,29 3,77 / = 14,1491 Lampiran 26

42 Perhitungan Persamaan Regresi Persen Penurunan Kadar Kolesterol- LDL Rata rata Perhitungan Persamaan Regresi Kadar Kolesterol-LDL Rata - rata X Y XY X² Y² 1 1, 2,8710 1,17 2,6672, ,7336 1, ,2 4 34, ,692 68,802 Jumlah 4, 46, ,939 7,2 922,969 Keterangan : X : Dosis ekstrak daun murbei Y : Persen penurunan kadar kolesterol-ldl r = NΣXY ( Σ X ) ( Σ Y ) N Σ X² - ( Σ X )² N Σ Y² - ( Σ Y )² r = 0,9989 r tabel ( p 0,0 ) = 0,997

43 Lampiran 27 Certi ficate Of Analysis * SIGMA-ALDRICH CertlflcateofAnalysls Page I of Product Name Product Number Product Brand CAS Numb~r Molecula, Form.,l. Molecular Weight Starage Temp Cholesterol, :a91m1 (GC). powder, Ash, free C3292 Sigma C 27 H.. e O S0C TEST APPEARANCE SOLUBILITY IR SPECTRUM RfSIDUE ON IGNITION PURITY BY GAS CHROMATOGRAPHY QC ACCePTANCe OAT!! SPECIFICATION WHITE TO OFF-WHITE POWDER CLEAR COLORLESS SOLUTION AT SOMG/ ML Of CHLOROfORM CONSISTENT WITH STRUCTURE NMT O. lctb MINIMUM 9% LOT 03K301 RE.SULTS WHITE POWDER CONFORMS CONfORMS CONfORMS 99.. MAY 200S Rodney Burbach, SupeMsor Analybcal SeMces Sl louis, Missoun USA

44 Lampiran 28

45 LEMBAGA ILMU PENGETAHUAN INDONES~ (indonesian lnstitue of Sciences) UPT BALAI KONSERVASI TUMBUHAN KEBUN RAYA PURWODADI (purwodadl 80tanlt Carden) JL Raya Surabaya - Malang Km. 6, Purwodadl- Pasuru_n Ttltpon : , , OJ43-61 S033 Fax.: , kriplipl@indo.ntlid SURAT KETERANGAN IDENTIFIKASI No.1fZ;. IIPH.3.04JHMI2007 Kcpata Kebun Rays Purwodadi dcngan ini menerangkan bahwa material tanaman yang dibawa otch : YULI ROSYANA SINAGA. NRP: SO Mahasiswa Fakultas Farmasi Universitas Kalolik Widya Mandala Surabaya, datang di UPT Bal.i Konservasi Tumbuhan Kebun Raya Purwodadi pada tanggal 30 Agustus 2007 berdasarkan bulru Prose. (Plant Resources or Soutb-Ea.t Asia), No.12 (I) karangan L.S. d. Padua, N. Bunyapraphatsa... and R.H.M.I. Lemmens, (1999) hal 3()'364, nama ilmiahnya adalah : Marga Jenis Sinonim : Moros : Morus australis Poir. : Mo",s alb(l L. Adapun menurul buku Tbe Standard Cyclopedia of Horticulture karangan l...r. Bailey jilid I ( 193 ) halaman 24, klasifikasinya odalab sebagoi berikut : mestinya. Divisio Sub Divisio Kelos Qrdo / Bangsa Family / Suku : permatophyta : Angiospermae : Dicotyledoneae : UrticaJes : Moraceae Demikian sural keterangan ini dibuat untuk dapat dipergunakan sebagaimana Purwodadi, 30 Agustus 2007 An. Kepala UPT Balai Konservasi Tumbuhan Kebun Raya Purwodadi O/llt... & Informasi Lampiran 29

46 CV. SRI PANGESTU NGEBEL GEDE RT 07 RW 34 SARDONOHARJO NGAGLIK SLEMAN YOGYAKARTA TELP Yang bertanda tangan dibawah ini : Nama : Budi Pramono Selaku penanggungjawab Pengembangan Hewam Percobaan Menerangkan bahwa Y!!!lgJ!igunakaJLpada-penelitian : Jud;;;-- - : Penga.. uh Pembe.. ian Ekst.. ak Daun Mu.. bei (Mortis (~lb{/ ~}. Te.. hadap Profil Lemak Da.. ah Tikus Putih Jantan H'pe.. hp,denua Peneliti : Yuli R. Sinaga Institusi NIM / NIP : Merupakan hewan uji dengan spesifikasi : Tikus Galur : Wistar Umur : 2-3 bulan Jenis kelamin : Jantan Jumlah : 2 ekor Demikian sura! keterangan ini dibuat untuk dapat digunakan sebaik - baiknya. Lampiran 30

47 Tabel Korelasi (r) DEGREES OF FREEDOM (DF) PERCENT 1 PERCENT DEGREES OF FREEDOM (DF) PERCENT PERCENT Lampiran 31

48 Tabel uji F Baris peltama pad:! ",tiap p.,angan baris adalah uti!< pad a distribusi F untuk aras 0.0; baris I:edua untuk aras 0.0 I!lor. jat kebebasan untuk lataan kuadlat yang lebih bew I ~ $ $ i $ !H $ 3' SO I $$ 2.10 U \ ".34 of. ; $2 3. 4$ 3.3$ $ t $ / U $ U ::i 19 4,3& $ : " ~ UO 4.\ ~ U ' $ 1.84 ~ &. 10 $.if '4.94 U $ $6 1.$ ll!!' 21 4, $ & ~ 8.02 $ , $ 3.$ $8 1.$ U " ~ S 1.81 ) , , I ' I ' $ UI $ $& ~ , U) S c ' ~ 7.88 S ~ ;; ~j I. It 1.74 I.7J " $ $ '" ) " & W " I. 7 ~ 1./ c 7.n! H : ; ~.s i 2.89?I4 1.$ & $ i ~ 7.n.S3 4. 1>1 4. II n 2.66 US 1.$ US Il " u.>c ' , I / II US 2.47 U& '[ 1. ~ ' ;a 3. " / , $ & P $ $ I.n 1.71 I $ S n ~: ? J > UI US _. (bersambung) :t'j

49 Tabel uji F (Ianjutan) Baris pcrtama pada sctiap pasangan baris adalah titik pada distribusif u.tuk aras 0 0' baris kedua u.tuk.ras Derojot k <b<b;.. ii u.tuk rataan kuadrat yang Icbili be';;. I ! II " lw II. Il UI ,, I. 86 I l.l9 1.3' '.' l ~ '1 2.3' I '. 13 J. l~ ' l I I.l ;.29 lol ' II ' I " W l l I UI l.l9 I. ~c Ul ' l.l8 l.3 l. 18 l.o' ' l ' 2.00 I. 9.( 1.90 I. B7 :::i l8 u '. 10 l I I. ~ I. il I. W 7. 3 l.l7 U..21 U. J.86 Ul J.' J.ll 3. 1 J B ll ,s "" ".0 '0 ' l 2.8' Ul 2.l' 2.2 i.is !! 2.0' ' 1.69 I.U I ll JI 3.8l I.l f J ' I. 9i I.8B ~ " ' II J ' ' J. IO U e U "0,.. ' ~ I I '. 26 l.78 3.' ' ' I.7l "" c ' '1 2.l " S 2.00 I I I to '. 2' " J. 21 C JO I J 1.0' I : "", '8 ' " l '1 I.7' , C l.08 U2 3. 7~, ' \ c 0 ' l6 2.' II ! 1.1 I. ' l.06 UO UI " 1.3' , u ~,.0 II ' l la 2. II 2.0l ~ I. 93 I UI '. 16 l. ~ J ll '3 2.3l ll , "".~ ~ ' ,, ' I : l ' E '1 1.7, l l.ll ' 1. ll ' : t 1... I I. ' 1 1.l l ' ' l I. 90 I!.S l.l l ' 2.l0 1.3l l.ll 1. 1' I , I." 7 I I.3l 7.01 ' l.ll ("I 2.77 ') 67 2!O 'l ll ' l.l '81 80 J II I. I~ 11.0: I :1. ~ : I.3B 1.31 I.ll 6.96 '.88 ' III " " 2.03 I. 94 I Sumber: Schefler (1987). Lampiran 32

50 TABEL UJI HSD % QX i2@ S ;&.-64 " : SM 1 J..M I.s.. t.$:20 l~ '.1 U.. : $.,11 t:j 3-M 1 ~ 14 '.f}~ IS 30tH It ),00 t' ~ '~ #;97 19 ~ 2e US lm ~ ~.~.2..& &0 ~.u t2d : U9 ~ ~_n.eo $"U $ $ 4.M +aq ~.",.. t ~6 4&; 4.JJ 4,,- ~ 17 $.. S;~ ~tr'u "~16 I.. ft,a OJ... 4.:gl 1St 4.26 "'$7 <4.82 $.TI~ i.lf1 i..$1 '',is ~1'S 4.4t u;-, 79 ~11 4-.,it 4..~ 1m ""Q3 U7 4.#9!I.e ;f.;i) 4.M ~ $.'$$ ~u 4~ U~ "~l f'-...!8 «9 ~:1J,.1 "'t.~.7 $.-!B.sa 4.. -t.4: US 3M ;J.n.u-1 ~ ~ ~J:Q ' -uo "'~~,,,,79 'fm..~ J,.o ~ S~14 'lsi 4.1.'$ 3' l.ft 4.10 '..$1 AS 1M -tas e.n. 6.$~ j;.9~'.12 i..i~.6: ~.G ~. $..24 $~-ts i_l~ $~... $.- ~.;2Q i30.1l ~ i-~oo +.73 U. lb.''''...so U 7 U~ 4:M ' ~'? r'n 4.$ ~46 'fad -t.39 i...t "';$1 4..4'.of!4t.:M "'l7'.~ 8 9 If " ?'~1' 6..$2: ' :11 ~Ji9 s.~~g S~ ~.2:1 s..~fi ~1.3 b.oi,..os & -4~ f.flo.tu 4.7~ 4~63,...,~.~41' G.39 ~ M'.14 S.!1,SA ~..12 -~49 ~ L ~S, ",,.$1 ~.ft. S.4'! S;<U fi~6.20 ~1..1 ~.. t ~.2l ~01 ~.,n 1M.14 6.(U..11 ~ f.,uj, ~~ 4.n 4M ,, "-&f... +'7 4$$ Swnber. &hefler (1931). $ '

51 Lampiran 33 TABEL UJI HSD 1% "2,.4] - 6 7' 8. ~g 1(1 U ~.10 ~ :.8,..( ,U'" ", to.2. lo.~8 6 ~. t ,,0, 1~ 737.~~, 8.' g.so '1. -4:,9 $.~ (l.s'f 1~OI 1;S1 f68 'l9i all 8.3' 8.SS 8; 4,1~ :.~ i~2& - 6.~ 6.~ 13'" ",41 1~. ' alli LO' 9 ~.60 S~'" $36 6.,S. 6~~ S,~ ~6 \0. t.. S.21,77. ~tt. 6.'" 6,67 ~.a7 7.~ '1.!J 1~ -- n S< ~M ~ $.t 6.99 '1~ IS 12 4.~ J1 S.U ~ 6. to 6~ 6~' $ ( ~.96 S S.~ ~ ~ $~32 $.9.s~8$ ~,08 6~6 a.... l ~M 6.60 U -t.. l7 4.~ ~..2,S $$6 Jro t6 6.' ' l~ ".!.!. ~1g 3.19, $... 9 S.?! S~~ (i.<o$ 6.t: fj"~ -6:,l\l i~h $.-(3. 66 ' ~8 6.Q{ t)pt 6,,27 6.3e t&.' -t.q1 <J,70,,09. $8.60,.19- ~9f, 6.0l 6.2tl Ct ~9 ".0 ".67.,,()..3' -.. 7' S _... ~ ",... ZO: ' >4Jt! 1'.M ~ 'o.! CM. ~ 3.3! 1\0' ~.&t!~97 6.D9 6. 1~.,.... " 24, ~,l;11.11 s~1' S~ A..69 '.3l ~,! 30 ~~ 4.( 89.s, S~4.6 -."; '~8! ' ,.".U ~.!6.39.3& $ ~ ,,1~ 4.2,8 "l,f!1.. ~~,",,99!L13 $~..36 ~).-is. :t.} "!.70 4:.~a.!a "'7" ~ ~-'O ~-'8 OQ ; 3. ",~ 4.. It ~.. 4&. i60 -t."ffl ".n ,.~ 34